蒲公英有效成分及含量的测定方法

蒲公英有效成分及含量的测定方法
发表时间：2011-11-08T10:25:27.023Z 来源：《中外健康文摘》2011年第25期供稿作者：惠秋沙[导读] 蒲公英药理作用广泛，普遍应用于临床。

惠秋沙（山东中医药大学山东济南 250014）【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）25-0103-03 【摘要】蒲公英药理作用广泛，普遍应用于临床。

近年来，许多学者致力于其有效成分及含量测定方法的研究，笔者简要概之，为以后蒲公英的研究奠定基础。

【关键词】蒲公英有效成分提取含量测定Research of Taraxaci’s Effective Compositions and Content Determination Methods 【Abstract】 The pharmacological functions of Taraxaci and clinical applications is extensive.In recent years, many scientists have an analisation to effective compositions and research on content determination method. This paper mainly has a generalization for the development of this field, which can lay a foundation for the future research. 【Key words】Taraxaci effective compositions extraction content determination 蒲公英为菊科植物蒲公英(Taraxacum mongolicum-HandMazz)、碱地蒲公英 (Taraxacum inicum Kitag)或同属数种植物的干燥全草。

蒲公英在临床上应用很广，被誉为“天然抗生素”，有广谱抗菌作用。

另外，该药还具清热解毒，消肿散结，利胆利尿的功效。

本文就对蒲公英的有效成分分析及各成分含量测定方法进行综述。

1 有效成分研究
许多学者通过大量研究表明蒲公英中含有多种有效成分，其主要成分为咖啡酸、绿原酸、齐墩果酸、蒲公英甾醇、黄酮类、香豆素类及多糖、氨基酸、维生素、矿物质、果胶等，其中木樨草素及其糖苷类含量最多。

吕海涛[1]分别采用乙醇浸提、回流、索氏提取、微波萃取等方法提取蒲公英中的有效成分，通过优化提取条件得出最佳提取方法为用40%乙醇微波萃取60s，蒲公英中绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸和槲皮素等5 种有效成分的高效液相色谱测定条件选用 Eclipse XDB2C18色谱柱(150mm×416mm，5um)，以甲醇21%乙酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱，柱温为30℃，流速为110mL•min-1分别在最大吸收波长下进行检测。

该法提取时间短，效率高，测定方法灵敏、准确、重现性好，为蒲公英中有效成分的确定提供了依据。

2 有效成分含量测定方法研究 2.1 高效液相色谱法
近年来，许多学者通过高效液相色谱法对蒲公英中有效成分含量进行测定，通过总结得出，该研究方法一般通过以下几个步骤：色谱条件与系统适用性试验、对照品储备溶液的制备、供试品溶液的制备、线性关系考查、精密度试验、重复性试验、样品溶液稳定性试验、加样回收率试验、样品含量测定等。

2.1.1 木犀草素的含量测定
姜宁[2]等人采用酸水解的方法，使木犀草素糖苷转化成苷元来测定木犀草素的含量。

他们通过考察游离木犀草素提取方法和木犀草素糖苷水解方法，得出如下结论：以甲醇超声提取游离木樨草素得率最高，超声30min可提取完全，以18：7配比的甲醇-25%盐酸经过3.5小时水解后测得总木樨草素含量最高。

采用TI ANHE C18反相色谱柱(4.6mm×250mm, 5um)，以甲醇-水-醋酸(50：50∶1)为流动相，流速1.0 ml/min，通过全波长扫描后，选定检测波长350 nm，柱温30℃。

彭章明[3]等人用同样的方法测定了宜宾地区蒲公英中木樨草素的含量，优化了提取和色谱条件：采用5%甲酸的乙醇溶液超声提取30min，采用krornasil C18柱（200mm×4.6mm），以甲醇为溶剂，已腈-0.1%磷酸溶液（28:72）为流动相，在349nm波长处检测，流速采用1.0 ml/min。

2.1.2 绿原酸的含量测定
凌云[4]等人首次利用该法测定了蒲公英中绿原酸的含量。

杨斌 [5]采用 C18柱(250mm×4.6mm ,5μm)以乙腈—20.1%磷酸(11：89)为流动相，在328nm波长下，以1.0mL·min-1为流速，结果测得绿原酸的线性范围为0.04～0.4 ug/ml (r= 0.9997)；绿原酸测定的平均回收率为100.4%(RSD 为0.8%)。

刘凤仙[6]采用该法测定春夏秋三个季节蒲公英中绿原酸的含量，来考察不同季节对蒲公英中绿原酸的而影响，结果表明春秋季节绿原酸含量较夏季含量高，因此夏季不宜采撷。

2.1.3 咖啡酸的含量测定
曾秋华[7]和贝京 [8]用同样的方法对蒲公英颗粒中咖啡酸的含量进行了测定，采用超声进行提取，以 C18柱，磷酸盐缓冲液，流动相甲醇-磷酸盐缓冲液（25:75），检测波长323nm，柱温40℃，流速1.0mL·min-1为色谱条件。

二者所得结果差异较小。

马新原 [9]等人采用该法及标准曲线法来分别测定不同季节蒲公英中咖啡酸和总黄酮的含量来考察不同季节对有效成分的影响。

2.1.4 同时对绿原酸及咖啡酸的含量测定
李喜凤 [10]等人采用反相高效液相色谱法同时测定绿原酸及咖啡酸的含量，选定超声提取(功率250W，频率40kHz) 30min，选用323nm为检测波长，确定甲醇-磷酸二氢钠(pH为4.2)(16∶84)为流动相，流速为0.7mL/min，分离效果良好，咖啡酸、绿原酸分别在9 min、17min左右出峰，分析快速准确，重复性好，回收率高。

刘燕 [11]等人以Waters symmetry shield TM C18柱(250mm×4.6mm，5μm) ，流动相乙腈－0.1%磷酸(10：90)，检测波长328nm，流速1.0ml·min-1色谱条件同时测定绿原酸及咖啡酸的含量。

李文琪 [12]也采用该法测定了蒲公英片中绿原酸及咖啡酸的含量。

他采用色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱 (4.6mm×150mm，5μm)流动相为甲醇-磷酸盐(pH4.2)(23∶77)，检测波长323nm，柱温40℃，流速1ml·min-1同样得到较好的结果。

2.1.5 阿魏酸的含量测定
李喜凤 [13]采用该法测定蒲公英中阿魏酸的含量，他们以1%氢氧化钠溶液作为该样品的提取溶剂，色谱柱为HypersilODS2C18(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-冰乙酸-水(30∶2∶68)，流速为1.0ml/min，柱温为30℃,检测波长为322 nm。

2.1.6 齐墩果酸的含量测定
李喜凤[14]用该法测定蒲公英中齐墩果酸的含量，他们选用三氯甲烷作为提取溶剂，色谱条件采用Hypersil ODS2C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱温30℃，以甲醇-0.5%磷酸(pH=3.5) (90：10)为流动相，流速1.0mL·min-1检测波长210nm，结果显示齐墩果酸在0.872～7.848μg范围内峰面积与进样量有良好的线性关系。

2.2原子分光光度法
2.2.1 微量元素的含量测定
娜吾热克孜•牙库甫 [15]用MC360型原子吸收光谱仪，以空气-乙炔火焰分别测定各元素的含量。

他们用该法测定出蒲公英中的Ca、Fe、Cu、Zn、Na、K、Mg等7种微量元素的含量，并且得出蒲公英的药效除与其有机成分有关外，还与其微量元素的含量有关。

2.3比色法
2.3.1 总黄酮和多糖含量的测定
吴晓丽 [16]等人采用分光光度法测定蒲公英提取物中总黄酮和多糖的含量，他们以芦丁和葡萄糖为对照品，测定波长分别选择510nm 和490nm，稳定性试验显示总黄酮、多糖1h内吸光度基本稳定，精密度和重现性较好回收率在95.73％～102.16％之间，其中总黄酮和多糖的平均含量分别为5.51％、14.91％。

刁海鹏等 [17]人利用三氯化铝与黄酮类化合物作用后生成黄酮的铝盐络合物黄色的深浅与黄酮的含量成一定的比例关系，以芦丁为对照品利用比色法测定太原地区蒲公英花中总黄酮含量。

李喜凤[18]等用此法得出了不同产地蒲公英中的总黄酮含量不同。

2.4高效毛细管电泳法
2.4.1 咖啡酸的含量测定
晏媛 [19]等人采用该法对蒲公英原药材中咖啡酸进行含量测定，条件：石英毛细管柱（5um×60cm），缓冲液为60 mmol·L-1的硼砂溶液(25℃时，PH=9.18);分离电压12KV，真空进样时间为5s，温度25℃，紫外检测波长313nm。

2.4.2 阿魏酸的含量测定
李喜凤 [20]等人采用该法对蒲公英中阿魏酸的含量进行了测定，采用未涂层的弹性石英毛细管柱(75um×57/50 cm)，电解质为20mmol•L-1硼砂溶液(pH9.18)，分离电压18kV，温度25℃，压力进样5 s，检测波长328nm，证实了阿魏酸在0.002～0.012 g•L-1呈良好线性关系。

2.5薄层色谱扫描法
2.5.1 咖啡酸和绿原酸含量测定
师绘敏[21]选用硅胶G薄层板，氯仿-甲醇-甲酸(16.5∶6∶2)为展开剂，在紫外灯(365nm)下定位，单波长反射法锯齿扫描，扫描波长323nm为测定条件，测定了蒲公英中咖啡酸和绿原酸含量。

该方法的线性、稳定性、精密度、重复性、回收率均良好。

2.5.2 总黄酮含量的测定
王亚娟[22]等人应用双波长薄层色谱扫描法，以芦丁为对照品，测定波长λs =278nm，参比波长λR=356nm，测定了蒲公英中总黄酮的含量。

3 小结
蒲公英成分中含量最多的是木樨草素及其糖苷，其次为绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸和槲皮素等；对于有效成分的含量测定方法，通过比较分析得知高效液相色谱法应用最为广泛，基本上对前面所述有效成分的含量均能进行测定。

微量元素的含量测定采用原子分光光度法能够得到很好的结果。

高效毛细管电泳法和薄层色谱扫描法应用不太广泛，但同样能够得到很好的测定结果。

本论文小结了近年来关于蒲公英研究的文献，旨在为以后学者对蒲公英的研究提供可靠的信息。

参考文献
[1] 吕海涛,邓锐,程伟.蒲公英中有效成分的提取工艺考察[J].中南药学,2008,6(4): 391～394.
[2] 姜宁,宋新波,李彦.HPLC测定蒲公英中木樨草素的含量[J].天津药学,2008,20,(6):1～3.
[3] 彭章明,粟珊,刘燕.HPLC测定宜宾地区蒲公英中木樨草素的含量[J].中国药师,2010,13(10):10.
[4] 凌云,范国强,蔡少青.高效液相色谱法测定蒲公英中绿原酸的含量[D].全国中药研究暨中药房管理学会研讨会论文总编,1998:224～226.
[5] 杨斌. HPLC测定蒲公英中绿原酸的含量[J].西北药学杂志, 2009, 24（3）:182～183.
[6] 刘凤仙,李罡,薛占英.不同季节采撷蒲公英中绿原酸含量的测定[J].中国医院药学杂志,2010,30（1）:91.
[7] 曾秋华,刘文京,唐晓晖. 高效液相色谱法测定蒲公英颗粒中咖啡酸含量[J].药物鉴定,2007,16（3）:26～27.
[8] 贝京,于光福.高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸含量[J].中国野生植物资源,2010,29(3):54～56.
[9] 马欣原,崔璐璐,薛占英. 蒲公英有效成分含量和采撷时间的研究[J].河北中医药学报,2009,29(1):41～42.
[10] 李喜凤,师绘敏,陈随清. HPLC同时测定蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量[J].中成药，2008，30（10）：1553～1555.
[11] 马欣原,崔璐璐,薛占英.蒲公英有效成分含量和采撷时间的研究[J].河北中医药学报，2009，24（1）：41～42.
[12] 李文琪. 高效液相色谱法测定蒲公英片中绿原酸和咖啡酸的含量[J].安徽医药，2005，9(10)：744～745.
[13] 李喜凤,余云辉,郝哲.蒲公英中阿魏酸的含量测定[J].时珍国医国药,2010,21(5):1169～1170.
[14] 李喜凤,郝哲,邱天宝.反相高效液相色谱法测定蒲公英中齐墩果酸的含量[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(5):52～54.
[15] 娜吾热克孜•牙库甫,古丽巴哈尔•沙吾提.喀什市区蒲公英中微量元素含量分析[J].微量元素与健康研究,2006,23(1):28～29.
[16] 吴晓丽,蔡云清.蒲公英提取物中总黄酮和多糖的含量分析[J]. 热带医学杂志,2010,10(2):167～168.
[17] 刁海鹏,吕俊杰,曹晓峰. 蒲公英花中总黄酮含量测定[J]. 山西医科大学学报,2004,35(2):178～179.
[18] 李喜凤,杜云锋,郝哲. 蒲公英中总黄酮的含量测定[J].中华中医药学刊,2009,27（6）:1219～1220.
[19] 晏媛,许重远,陈志良.高效毛细管电泳法测定蒲公英及妇洁灌肠液中咖啡酸的含量[J].第一军医大学学报，2004，24(4)：456～458.
[20] 李喜凤,邱天宝,胡亚楠.高效毛细管电泳法测定蒲公英中阿魏酸的含量[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(16):27～29.
[21] 师绘敏,李喜凤,孟璐. 蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量测定[J]. 河南中医学院学报,2007,22(130):35～36.
[22] 王亚娟,卢敬华,于铃. 双波长薄层色谱扫描法测定蒲公英总黄酮含量[J].数理医药学杂志,2007,20(3):408.。