蛋黄中卵磷脂的提取与 TLC 检测 实验报告

实验申请

实验项目：蛋黄中卵磷脂的提取与 TLC 检测

实验原料：鲜鸡蛋、 纯化卵磷脂

实验试剂： 200ml 丙酮、 150ml 乙醇 、50ml 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇，均

为分析纯试剂.

实验仪器： 旋转蒸发仪、 真空泵、 布氏漏斗、 抽滤瓶、 吹风机、 层析缸、 玻璃板、

电子天平。

辅助器材：毛细管（两支）、玻璃棒、滤纸、100ml 量筒（2个）、烧杯、纱布、镊子、 胶

头滴管圆底烧瓶等。

实验目的：

1. 掌握从动物中提取有效成分的一般原理和方法。

2. 学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法。

3. 巩固抽滤等基本操作。

4. 了解薄层层析色谱法的原理及操作。

实验原理：

卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋黄中含量较高，约10％。可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离得到。吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，

使各成分达到分离。在硅胶薄层板上，样品中的两成分是两种结构近似的染料，在展开剂四氯化碳的作用下。在展开剂和薄层板之间不断地产生吸附、解吸，再吸附，再解吸，由于极性不同从而分离，展开结束以后，会在薄层板上形成斑点，混合物中的成分得以分离。

参考文献： 刘宝全，所给实验资料.

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实验操作

实验操作步骤

实验一卵磷脂的制备与提取

1.取四个煮熟的鸡蛋，分别将其刨壳，把四个鸡蛋的总的蛋壳，蛋白和蛋黄分别称重

并记录数据。

2.将所得蛋黄全部放入烧杯中，用筷子捣碎，取100ml丙酮倒入其中，搅拌30min

成糊状后用6层厚纱布过滤，收集滤渣。

3.将滤渣再次放入烧杯，取100ml丙酮倒入杯中，重复上步操作，收集滤渣。

4.制备乙醇-石油醚混合溶剂。用量筒分别量取50ml石油醚和150ml乙醇，放入烧杯

中混合均匀。

5.取100ml混合液放入盛有滤渣的烧杯中，搅拌30min后用布氏漏斗抽滤，收集滤

液。

6.将抽滤后的滤渣重新放入烧瓶中，再取100ml混合液浸泡搅拌30min，然后抽滤，

将所有滤液收集，倒入圆底烧瓶中进行旋转蒸发，旋转蒸发仪温度设为40摄氏度。

7.蒸发结束后，将烧瓶冷却至室温，称量整个烧瓶的重量。

8.收集产品，进行检测。

实验二TLC检测

展开剂的选择：

各小组分别用不同的展开剂做检测，本小组用的是1:1的三氯甲烷和乙酸乙酯，通过检测结果比较最终选用的展开剂为30:10:4:2的三氯甲烷、甲醇、乙酸、

水，操作如下：

1.用毛细管在层析板距下端7mm处点两个样，自制卵磷脂样品和标准品，样点的

间距问1cm。

2.将展开剂置于层析缸中平衡30min，使溶剂的蒸汽压在层析缸中达到平衡，然后

放入层析板，溶液自下而上在层析板上展开，当展开到距层析板上端7mm处即

可取出，置室温下干燥。

3.将层析板放在碘瓶中显色。

4.观察并测出Rf值。

操作流程图：

显色

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实验结果与分析

实验一 卵磷脂的提去数据结果

本实验小组的实验结果

产率 =

84

.62645

.7%100 = 12.17%

各小组在乙醇-石油醚和氯仿不同溶剂下的产率

实验一 卵磷脂的提取数据分析

1. 组号为单号的实验小组均使用乙醇-石油醚作为提取卵磷脂的有机溶剂，为什么第3,5,7小组的产率在10%左右，而第1小组高达21.36%？组号为双号的实验小组均使用氯仿做为提取卵磷脂的有机溶剂，为什么第4,6小组的产率高达20%左右，而第二组仅有10.7%？ 鸡蛋黄中的成分有脂肪，卵磷脂，蛋黄粉，胆固醇，维生素等。在第一步中用丙酮除油和水的过程中，有机溶剂的PH ，浓度可能使得蛋黄残渣中仍含有脂肪，蛋白。在第二步中用乙醇-石油醚和氯仿分别萃取卵磷脂时可能带有其他脂肪，使得产率偏高。通过实验数据，使用氯仿时的产率大于使用乙醇-石油醚，可能是因为乙醇-石油醚比氯仿更能使蛋白变性，氯仿能溶解残渣中其他脂肪及维生素，使得产率偏高。

实验一 卵磷脂提取的操作分析

1. 用丙酮分多次搅拌蛋黄，更好地清除油和水。

2. 用乙醇-石油醚分两次浸泡搅拌蛋黄残渣，能更好地萃取卵磷脂。

3. 用真空泵抽滤布氏漏斗时，不能用水浸湿滤纸，应为卵磷脂遇水会起泡，滤纸不能太大。抽完后应该先拔掉橡胶管在关真空泵的开关，避免倒吸。

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实验二 TLC 检测结果

1. 展开剂为混合展开剂A （氯仿 ：乙酸乙酯为1:1 ）时显色结果

经过测量，a = 3.5cm, b=3.1. 所以，Rf =

5

.31

.3=0.886.

各种展开剂下的标准卵磷脂显色结果

经过各小组最后显色结果,确定最佳混合展开剂B （氯仿：甲醇：乙酸：水为30:10:4:2）

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组长：谭莹莹 组员：彭芳芳

马嘉 林梦

****************Tel:159****4353QQ ：504762481 指导老师：张艳梅 完成日期：20011-9-21

2. 展开剂B 的显色结果

经过测量 a=3.6cm , b=2.2cm. 所以，Rf =

a b =6

.32.2=0.611

各小组在展开剂B 下的显色结果

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组长：谭莹莹 组员：彭芳芳

马嘉 林梦

****************Tel:159****4353QQ ：504762481 指导老师：张艳梅 完成日期：20011-9-21