细胞工程实验室组成及无菌操作技术

玻璃漏斗式滤器
微孔滤膜滤器
干热灭菌箱/烘箱
电热灭菌器
2.培养仪器设备
培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。
3.细胞学观察设备
应备有普通显微镜和倒置显微镜。
4. 化学实验常规设备
主要用于试剂保存与称量、培养基配制与 分装和水处理等，根据实际需要予以配置。
冰箱、天平、酸度计、离心机、加热器、 纯水器、分装设备等。
操作的场所。 要求：封闭性好，干燥清洁明亮，防止空气
对流。外应设缓冲室、更衣室 。
基本的设备：超净工作台（接种箱）、电热灭菌器、喷雾
消毒器、紫外灯、酒精灯等。
③培养室 功能：是对接种到培养瓶的离体材料进行控制培养的 场所。 要求：是要能控制光照和温度，应保持干燥和清洁， 防止微生物感染。
培养室基本设备：培养架、摇床、光照培养箱、通 风设施、时间过程控制器、空调机、加湿器、除湿 机及温度感应器等。
▪ 灭菌(sterilization)：是指用物理或化学的方法， 杀灭或清除传播媒介上的所有微生物，使之达到无 菌程度。
▪ 消毒（disinfection）：是指杀死、消除或充分抑 制部分微生物，使之不再发生危害作用。经过消毒， 许多细菌芽孢、霉菌的厚垣孢子等不会完全杀死， 即消毒后的环境里、物品上还有活着的微生物。
4、滤 器
▪ 玻璃滤器：与玻璃器皿清洗相同。无论是水 浸泡还是酸浸泡，都可用抽滤法。
▪ 不锈钢滤器：使用后弃去石棉滤膜，金属部 分刷洗干净，最后用蒸馏水漂洗2～3次，晾 干备用。
▪ 微孔滤膜滤器：使用后弃去微孔滤膜，滤器 用清水充分冲洗，最后用蒸馏水漂洗，晾干 备用。
二、灭菌和消毒方法
灭菌和消毒是组织培养重要的工作之一 。
第二节、无菌操作技术
一、实验器皿及洗涤 二、灭菌和消毒的方法 三、植物无菌操作的一般程序
一、实验器皿及洗涤
1、玻璃器皿
常用的各种规格的培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。
①浸泡： 清水、5%稀盐酸 ②刷洗：软毛刷蘸洗涤剂 ③酸洗：铬酸洗涤液 ④冲洗：自来水冲洗、蒸馏水漂洗
2、塑料器皿
主要有多孔培养板、培养皿及培养瓶等。
5.其它仪器设备
光温控制设备、生化分析设备、细胞流失 仪、细胞融合仪、显微操作仪、摄影器材、温
室设备等。
三、培养器皿及实验用具
1、培养器皿：
➢ 试管— 适合于用少量培养基及试验各种不同配方 时选用。
➢ 三角瓶— 适用于各种培养。 ➢ L形管和T形管— 为专用的旋转式液体培养试管。 ➢ 培养皿— 适于固体平板培养、胚和花药培养和无
1.无菌操作设备 2.培养仪器设备 3.细胞学观察设备 4.化学实验常规设备 5.其它仪器设备
1.无菌操作设备
（1）无菌接种设备：超净工作台、接种箱
水平送风
垂直送风
（2）灭菌设备： 高压蒸汽灭菌锅、过滤灭菌装置、干热灭菌 烘箱/消毒柜、喷雾消毒器、紫外灯等。
高压蒸汽灭菌锅
过滤灭菌装置
不锈钢过滤器
1、灭菌和消毒方法
物理方法 化学方法
①干热灭菌法： ②湿热灭菌法： ③过滤除菌法： ④紫外射线消毒法： ⑤灼烧灭菌： ⑥熏蒸消毒法： ⑦消毒药剂消毒法： ⑧抗菌素抑菌法：
以上方法要根据不同材料、不同目的适当的选用。
①干热灭菌法：利用烘箱进行烘烤灭菌的方 法，适于玻璃器皿和金属器械的灭菌。
一般器皿：150℃，40min，或120℃，2h 可达灭菌效果。
菌发芽。 ➢ 角形培养瓶和圆形培养瓶— 适用于单细胞和原生
质体的浅层液体培养。 ➢ 果酱瓶— 常用作试管苗大量繁殖。
2、计量器皿：吸管、量筒、容量瓶、移液器（刻 度移液管、微量移液器）等
3、盛装器皿：烧杯、试剂瓶等 4、接种工具：镊子、剪刀、解剖刀、接种针、酒
精灯等。 5、新型材料器皿：塑料培养瓶、封口膜等 6、分注器
第一节 、细胞工程实验室组成
一、实验室组成 二、基本设备及使用 三、培养器皿及实验用具
一、实验室组成
细胞工程实验室应满足三个最基本的需要：
➢实验准备； ➢无菌操作； ➢控制培养。
此外，根据实验目的进行观察、分析和操作等其它配套。
一、实验室组成
1．基本实验室 ①准备室/化学实验室 ②接种室/无菌操作室 ③培养室
2．辅助实验室 根据具体的实ห้องสมุดไป่ตู้需求而定。
细胞学实验室 生化分析室
3.移栽设施/温室 驯化室、 温室：主要用于试管苗炼苗与移栽， 面积大小视生产规模而定。
要求：配置人工光源并且能够控制室内温度，为 试管苗的正常生长提供适宜的环境。
实验室布局的基本要求是：
便于隔离、便于操作、便于灭菌、 便于观察。
二、基本设备及使用
细菌芽孢：160℃ ，持续90～120min。
②湿热灭菌法： 利用高压蒸汽锅进行的灭菌方法。常用于培养基、
蒸馏水的灭菌，也适用于各种玻璃器皿、棉塞、滤纸、 金属用具等。可有效缩短灭菌时间，灭菌效果好。
一般设定为： 压力：0.1Mpa （ 1.0～1.1kg/cm2 ） 温度：121℃ 时间：维持20～30min。
自来水浸泡冲洗、晾干，再用3% HCl或 2% NaOH溶液浸泡过夜，用自来水充分冲 洗后用蒸馏水冲洗3次以上，晾干备用。
3、金属器材
主要为镊子、剪刀、解剖刀等解剖、取材、 剪切组织及接种材料等的工具。
新的金属器材：先用纸擦去表面的油脂，再用洗衣 粉溶液煮沸，或用1%NaHCO3煮沸15 min，擦干 后再用95%酒精纱布擦干，包装或置铝盒内于 121℃高压蒸汽灭菌20 min。 已用过的金属器材：灼烧消毒或高压蒸汽灭菌消毒。
2．辅助实验室 细胞学实验室 生化分析室 摄影室及暗室
3. 移栽设施/温室
1．基本实验室
①准备室/化学实验室: 功能： 就是进行一切与实验有关的准备工作。 要求： 宽敞明亮，通风条件好 ，地面便于清洁并 应防滑处理。
基本的设备：工作台、药品柜、冰箱等、培养基分装
器、蒸汽压力灭菌锅等。
②接种室/无菌操作室： 功能：是进行接种、继代、细胞融合等无菌
培养基一般用湿热灭菌法：
培养基在制备后的24小时内完成灭菌工序。
灭菌后的培养基储藏在4～10℃的条件下，2周内 可使用。
培养基高压蒸汽灭菌所必需的最少时间
容器体积(mL)
121℃灭菌所需最少时间(min)
20-50
15
75-150
20
250-500
25
1000
30