微生物试题及其答案

一、请把下列英文词汇翻译成中文
Aerobic bacteria: 好氧菌
Coliform: 大肠菌－－大肠菌群
Escherichia coli: 大肠杆菌
Gram stain : 革兰氏染色法
Listeria : 李斯特菌
MPN : 大肠杆菌最可能数－最大可能数
Salmonella spp.: 鼠伤寒沙门氏菌－－沙门氏菌（属）
Staphylococcus aureus : 金黄色葡萄球菌
Vibrio: 弧菌
二、简答题
1、什么是革兰氏染色法？主要步骤是什么？
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。

细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的
可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。

为观察方
便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。

阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。

有芽胞的杆菌
和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌
都呈现负反应。

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。

现在一般认为革兰
氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性
菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。

另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易
脱去，阴性菌则相反。

所以染色时的条件要严格控制。

例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料
都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。

此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也
不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。

所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，
具体操作方法是：
１）涂片固定。

２）草酸铵结晶紫染1分钟。

３）自来水冲洗。

４）加碘液覆盖涂面染1分钟。

５）水洗，用吸水纸吸去水分。

６）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。

此为关键步骤：主要是脱色程度，脱色过度则阳性菌被误认为阴性菌，而脱色不够的话阴性菌被误认为阳性
菌。

７）蕃红梁色液（稀）染1分钟后，自来水冲洗。

干燥，镜检。

染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

2、简述一下干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的原理和特点。

利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。

高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发
生变性而失活，从而起灭菌作用，低温通常起抑菌作用。

1。

干热灭菌法:
a.灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧死。

此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有
限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等的灭菌。

b.干热空气灭菌法：这是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160°C
，恒温1小时即可。

此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。

2高压蒸汽灭菌法：这是发酵工业、医疗保健、食品检测和微生物学实验室中最常用的一种灭菌方法。

它适用于
各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服等物品的灭菌。

高压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的，以大量蒸汽使其中压力升高。

由于蒸汽压的上升，水的沸点也随之提高。

在蒸汽压达到1.055公斤/厘米2时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达
到121°C。

在这种情况下，微生物（包括芽孢）在15~20分钟便会被杀死，而达到灭菌目的。

如灭菌的对象是砂
土、石蜡油等面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时间。

在加压蒸汽灭菌中，要引起注意的一个问题是，在恒压之前，一定要排尽灭菌锅中的冷空气，否则表上的
蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。

3、从环境、设备、操作等方面简述，在微生物检验操作中怎样保证无菌操作。

无菌操作
培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌
苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。

在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。

实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。

光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于
培养皿内平板的厚度保持一致。

在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。

为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。

空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量短。

用于接种的
器具必须经干热或火焰等灭菌。

接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一
边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用
它来挑取含菌材料
或菌体，迅速地接种到新的培养基上。

（图３－４）然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。

不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。

平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的
盖打开一小部分进行接种。

在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口
应倾斜一下在火焰上通过。

4、简述大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的区别和联系。

大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧、在32℃~37℃、48h内能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

根据进一步的生化试验，可分为大肠艾希氏菌（大肠杆菌）、枸橼酸菌、克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。

大肠菌群的来源分粪便来源和非粪便来源。

在44.5℃仍能生长的大肠菌群，称为粪大肠菌群，在欧洲叫做“耐热大肠菌群”。

大肠杆菌必须符合大肠菌群和粪大肠菌群的定义。

三者是评价食品卫生质量的重要指标。

这些菌群主要来源于人及温血动物粪便，一般多用来作为食品中粪便污染指标。

5、简述出口食品中致病微生物（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌）的危害及其主要来源？
大肠杆菌主要栖息于人及动物的肠道内，致泻性大肠杆菌又可细分为：肠致病性、肠产毒性、肠出血性大肠杆菌，肠出血性大肠杆菌可引起程度不同腹泻、出血性结肠炎、肾溶血性尿毒综合征、血栓性血小板减少性紫癜等，其中肾溶血性尿毒症易遭成畸形肾衰竭乃至死亡。

金黄色葡萄球菌是人类化脓性感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓性感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、肾盂肾炎、心包炎等多系统的化脓性感染；还可引起败血症、脓毒症等全身性感染，感染食品后，在适宜的条件下可产生肠毒素，人使用后可引起事物中毒。

金黄色葡萄球菌主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人皮肤上和肠道中也经常有金葡菌存在。

沙门氏菌能引起人类患病和食物中毒，如能引起伤寒、败血症、急性胃肠炎等疾病。

人往往会出现病后或健康带菌状况。

沙门氏菌广泛存在，主要寄生于各种动物以及人体内，也常存在于水、蛋品、肉类以及其他食品中。

6、某公司生产的m(EC)肉汤干粉培养基，用法如下：称36.7gm(EC)肉汤干粉培养基溶解于1000mL蒸馏水中，分装225mL于500mL增菌用瓶子中，121℃灭菌15分钟，冷至室温，临用前加入20mg/mL无菌新生霉素母液，使增菌液中新生霉素终浓度为20ug/mL，现要检测28个样品中大肠杆菌O157,如何配制实验所需m(EC)肉汤，请详细描述？
新生霉素终浓度为20ng/mL=20X10^(-6)mg/mL
225mL(EC)肉汤所需新生霉素为：225mL X 20X10^(-6)mg/mL=45X10^(-4)mg
所以每一瓶(EC)肉汤所需无菌新生霉素母液为：2.25X10^(-4)mL
配制实验所需m(EC)肉汤过程如下：
分别称7份36.7mg(EC)肉汤干粉培养基，每份分别溶解于1000mL蒸馏水中，分装225mL 于500mL增菌用瓶子中，共28瓶，121℃灭菌15分钟，冷至室温，临用前无菌加入
2.25X10^(-4)mL浓度为20mg/mL无菌新生霉素母液，使增菌液中新生霉素终浓度为20ug/mL。

7、有四种细菌，分别属于大肠杆菌、沙门氏菌、出血性大肠杆菌O157和金黄葡萄球菌。

置于冷藏冰箱中，斜面保存法保存三个月后发现以上菌种的标签不慎失落，需要重新鉴别，简要叙述这四种细菌的判别方法。

首先做好标识，然后无菌操作各挑取少许培养物于各管营养肉汤中于36℃适当增菌，简便的办法是用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌快速检测片先把金黄色葡萄球菌和沙门氏菌鉴别出来，最后用8小时快速检测大肠杆菌O157的方法把大肠杆菌和大肠杆菌O157区分开来。

8、肠炎沙门氏菌是一种重要的食源性条件致病菌，请叙述如何用传统方法证实冷冻鸡肉中是否含有肠炎沙门氏菌？
无菌操作取25g鸡肉剪碎，加225mL缓冲蛋白胨水置36℃±1℃培养4小时进行前增菌，然后吸10mL转入100mLTTB中36℃±1℃培养18~20小时进行增菌，划线接种于SS琼脂平板和HE琼脂平板上，在SS上的典型菌落是透明或半透明中间有黑心，在HE上的典型菌落是蓝绿色中间有黑心，挑取可疑菌落2~4个分别接种三糖铁和尿素酶，如果尿素酶阴性（不变色或变浅），三糖铁斜面产碱（变红），底层产酸（变黄），产气、产H2S（大多数产H2S），接着做生化试验：吲哚、赖氨酸脱羧酶、丙二酸钠、卫矛醇（氢化钾现在买不到，省了），同时做血清凝集试验，如果血清凝集，以上生化试验又符合沙门氏菌属特性，再做分型试验：用肠炎沙门氏菌O抗原做血清凝集，如果其中某抗原发生凝集，就证明该冻鸡肉中含有肠炎沙门氏菌。