植物激素的检测方法
植物激素免疫测定指南
植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。
由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。
目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。
植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式（见下图），一种是在固相载体上直接包被抗体（直接法，先包被二抗，再加一抗），另一种是包被抗原（间接法）。
直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。
间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。
间接法的原理可用下式表示：Ab+H+HP=AbH+AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。
根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H 量的多少。
材料、试剂及设备1 材料各种新鲜植物材料2 仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。
3 试剂(1) 包被缓冲液：称取１.５g Na2CO3, 2.93g NaHCO3, 0.2g NaN3（可不加）, 用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为9.6.(2) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4 , 2.96g Na2HPO4 ·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。
植物激素的测定方法
植物激素的测定方法植物激素是一类由植物自身合成并参与生长发育调控的活性物质，对植物的生长发育起着重要作用。
因此，准确测定植物激素的含量对于研究植物生长发育调控机制具有重要意义。
本文将介绍几种常用的植物激素测定方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前应用最广泛的植物激素测定方法之一。
该方法基于植物激素在高效液相色谱柱上的保留时间和峰面积，通过与已知浓度的标准品比较，可以计算出待测样品中植物激素的含量。
高效液相色谱法具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，但需要专用的仪器设备，操作较为复杂。
二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的植物激素测定方法。
该方法通过将待测样品中的植物激素转化为易挥发的衍生物，然后在气相色谱柱上进行分离和定量分析。
气相色谱法具有测定灵敏度高、分离效果好的特点，但需要对样品进行预处理，并且对仪器的稳定性要求较高。
三、酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种常用的免疫学测定方法，也可以用于测定植物激素的含量。
该方法通过将植物激素与特异性抗体结合，然后再用酶标记的二抗进行检测，最后通过比色反应或发光反应来测定植物激素的含量。
酶联免疫吸附法具有操作简便、成本较低的优点，但需要特异性较好的抗体。
四、放射免疫测定法（RIA）放射免疫测定法是一种使用放射性同位素标记的植物激素进行测定的方法。
该方法通过将放射性同位素标记的植物激素与待测样品中的植物激素结合，然后通过放射性计数来测定植物激素的含量。
放射免疫测定法具有灵敏度高、测定范围广的特点，但需要使用放射性同位素，存在辐射危险。
五、质谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度的分析方法，可以用于测定微量的植物激素。
该方法通过将待测样品中的植物激素通过质谱仪进行分子质量分析，从而测定植物激素的含量。
质谱法具有高灵敏度、高分辨率的特点，但需要专用的仪器设备和较高的技术水平。
植物激素测定方法有高效液相色谱法、气相色谱法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法和质谱法等。
植物激素检测方法
植物激素检测方法一、什么是植物激素？植物激素是植物体内合成的一系列痕量有机化合物，它在植物的某一部位产生，运输到另一个或一些部位，在极低的浓度下便可引发生理反应，几乎参与了调控植物从种子休眠、萌发、营养、生长和分化到生殖、成熟和衰老的每个生命过程，既可调控植物自身的生长发育，又通过与植物所生存的外部环境互相作用调节其对环境的适应。
通过调控如细胞分裂素、油菜素内酯和生长素等植物激素的代谢可显著地改良作物的株型结构和产量构成，从而大幅度提高作物产量和品质。
植物激素主要包括生长素(auxin)、赤霉素(gibberellin，GA)、细胞分裂素(cytokinin，CTK)、脱落酸(abscisic acid，ABA)、油菜素甾醇类(brassinosteroids，BRs)、茉莉酸(jasmonic acid，JA)及其甲酯(MeJA)、水杨酸类(salicylic acids，SA)、乙烯(ethylene)和多肽激素(peptide hormones)等。
二、检测方法科标生物检测中心可以提供各种植物样品检测服务，中心是通过权威认证的第三方机构，检测后出具权威检测报告。
三、主要分析技术1、生物鉴定法是一类经典的植物激素检测方法，它利用激素作用于植物的组织或器官时产生的特异性反应对植物激素进行测定。
2、免疫检测技术是测定植物激素的常用方法。
该方法是基于抗原和抗体的特异性结合，因此有较好的专一性。
采用放射性元素标记的方法，即放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)，其检测灵敏度高，重复性好，但对实验条件的要求较高。
3、气相色谱火焰离子化检测法(GC-FID)和气相色谱质谱法(GC-MS)能够对所分析样品进行准确、高灵敏度测量，但由于气相色谱对样品的特殊要求，使得待测组分需具有一定挥发性，因此在植物激素样品的前处理过程中需对样品进行衍生化。
4、高效液相色谱紫外检测法(HPLC-UV)、高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FL)和高效液相色谱质谱检测法(HPLC-MS)也大量用于植物激素的纯化及定量分析，其中MS因为具有良好的选择性和灵敏度，并且能够给出化合物的结构信息，在实际检测中得到了更普遍的运用。
植物激素(Plant_hormones)
2．物理和化学方法 植物激素的测定分析采用薄层层析、气相
色谱（gas chromatography，GC）、高效液相层析（high liquid performance chromatography，HPLC）、质谱分析（mass spectrography，MS）等，其原理大都是基于不同物质在不同介质中 的分配系数。测定生长素含量可以达到10-12g的水平。如GC测定乙 烯含量；气质联谱（GC-MS）分析赤霉素。
二、植物激素的种类及相互之间的作用 目前公认的植物激素有五大类： 生长素类、赤霉素类、细胞分裂素类、乙烯、脱落酸。 植物体内存在油菜甾体类（BR）、多胺（PA）、茉莉酸 （MJ）、水杨酸（SA）、寡糖素等也具有近似激素的特性。 我国科学家发现玉米赤烯酮等 起初人们认为某一种植物生理作用具有专一性。例如生长素 促进细胞体积扩大；赤霉素促进茎伸长生长；细胞分裂素促 进细胞分裂；脱落酸促进休眠以及乙烯促进果实成熟等。后 来发现上述每一种生理现象的控制因素极为复杂，不是一种 激素起一种作用，是各种激素之间相互作用的综合表现。
2.
不同激素间的拮抗作用
不同激素间的拮抗作用，生长素与细胞分裂素对植物顶端优势有 相反的效应，生长素与乙烯对叶片脱落也有相反的作用，脱落酸对生 长素、赤霉素或细胞分裂素的生理作用也有分别的拮抗作用。
3. 某种激素通过影响其它激素的合成、运输及代谢而改 变后者浓度。
生长素提高乙烯：较高浓度的生长素对植物体内乙烯合成有显著的 促进作用，生长素提高乙烯合成效率，乙烯抑制生长素在植物体内运 输并影响生长素的代谢。 GA与生长素：GA抑制生长素结合态的形成及氧化酶的活性，从而提 高生长素的浓度；赤霉素则能促进生长素的生物合成作用。
激素特点： ①产生于植物体内特定部位，是植物正常生长发育过程中或特殊环境下 的代谢产物；
植物激素的hplc测定标准曲线的制作
植物激素的hplc测定标准曲线的制作
制作植物激素的HPLC测定标准曲线主要包括以下步骤：
1. 准备工作
- 购买合适纯品植物激素标准品，例如植物生长素（IAA）、生长素酸（IAA）、脱落酸（ABA）等。
- 找到合适的溶剂用于制备标准品的浓度梯度溶液。
一般情
况下，可以选择高纯度的有机溶剂，如甲醇、乙酸乙酯等。
2. 制备标准品溶液
- 使用分析天平称量适量的纯品植物激素到不同容量的瓶中。
- 使用溶剂逐一溶解不同容量瓶中的植物激素，制备出一系
列浓度梯度的标准品溶液。
3. 准备HPLC流动相
- 根据HPLC仪器说明书的要求，配置合适的流动相。
一般
情况下，可以选择有机溶剂和缓冲溶液的混合物作为流动相。
4. 进行HPLC分析
- 调整HPLC仪器的参数，如流速、柱温、检测波长等。
- 依次注入不同浓度的标准品溶液到HPLC仪器中，记录各
自的保留时间和峰面积。
5. 绘制标准曲线
- 将标准品溶液的浓度与相应的峰面积进行线性回归分析。
- 通过线性回归方程计算植物激素在样品中的浓度。
需要特别注意的是，在制作植物激素的HPLC测定标准曲线时，应保证各个工序的操作的高度准确和可重复性。
同时，应注意选择适用的HPLC仪器和柱以及合适的检测波长。
不同的植物激素可能需要不同的分析条件，所以在制作标准曲线之前最好先进行一些预实验以确定最佳的分析条件。
植物激素的提取和纯化
植物激素测定的方法
1、生物测定法
生物测定法是通过测定激素作用于植株或离体器官后所产生的生 理生化效应的强度，从而推算植物激素含量的方法。
特点：简单易操作，但是其灵敏度及专一性均不够高 。
2、物理和化学方法
薄层层析、气相色谱(GC)、高效液相层析(HPLC)和质谱分析(MS)、 色质联谱(GC-MS)可以更为精确地检测多种激素 。
实验步骤
• 1、植物激素的提取：
分次加入3ml 80%甲醇 称样（0.5g） 10000g 倒入离心管 10min 离心
研磨 倒出上清液
• 2、激素的纯化：过C18柱法
5ml针筒接在C18柱上 5ml 100%甲醇 5ml 70%甲醇
5ml乙醚
加样ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 3、取出300μl氮气吹干备用。
实验5 植物激素的提取和纯化
一般激素在植物中的含量极低，性质又不稳定，加 之细胞中其他化合物的干扰，故测定的方法必须 十分灵敏和专一。通常首先用合适的有机溶剂来 提取，既要避免许多干扰物质，又要防止破坏激 素本身。其次采用各种过柱、萃取或层析步骤， 使激素得到部分提纯。然后再用生物的、物理的 或化学的方法测定其含量。
特点：灵敏度和选择性高，重复性好，但对前处理要求较高 。
3、免疫分析法
放射免疫检测法(RIA)和酶联免疫吸附检测法(ELISA)是当前常用的两 种激素定量技术。
特点：高专一性，高灵敏性，操作简便，样品往往只需初步纯 化。
实验材料、试剂和仪器
• 1、实验材料：新鲜采集的叶片或其他部分； • 2、试剂：80%甲醇； • 3、仪器：研钵、移液抢、塑料离心管、高速低温 离心机、Sep-Pak C18柱、吹氮气装置。
植物激素的测定方法-精品文档
二、免疫球蛋白的分子结构
免疫球蛋白的基本结构
• 四肽链结构 ，链间二硫键连接 • 两条重链（H）和两条轻链（L） • 氨基端和羧基端。
可变区与恒定区
• 根据氨基酸排列顺序的不同分为： 可变区（V）和恒定区（C） • 可变区（V区）：氨基酸组成、排列顺序变化较 大 • 恒定区（C区）：氨基酸数量、种类、排列顺序 及 含糖量都比较稳定
注意事项 ：
（ 1 ）微量加液器应注意保养并定期校正，否则结果误差 较大，同时加样时不可出现气泡，以免反应物间不能充分 混匀反应。 （ 2 ）洗涤时力求次数足够，且避免形成气泡，否则洗涤 不完全。 （3）温育时要力求受热均匀，同时避免液体蒸发。 （ 4 ）比色时反应管内不能留有气泡，管底不能存有水滴， 否则出现较大误差。
测定标准物各浓度和各样品490nm
处的OD值。
数据分析
在波长 450nm 处分别读取各标准孔和样本孔 OD 值， 以 OD值为横坐标，“标样激素含量的对数”为纵坐
用酶标仪进行比色，以0 ng/ml标准孔为空白孔，
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ标，在半对数坐标纸上画出标准曲线，以测定孔的
利用反对数求得ABA的绝对含量。
OD值在标准曲线上查出待测样品的 ABA含量的对数。
植物激素的酶连免疫分析法
几种酶标分析仪
DNM-9602G酶标分析仪
DNM-9602A酶标分析仪
DNM-9602 标配酶标分析仪
操作步骤
包被---温育---洗涤---竞争--温育---洗涤---加二抗---温育--
-洗涤---显色---比色---计算
包 被
• 每小孔中加入100μl包被缓冲液，然后
植物激素的测定方法？
生物活性法 气相色谱（气-质联机） 液相色谱（液-质联机） 酶连免疫法（ ELISA 法）
酶联免疫法(ELISA)测定植物激素含量
酶联免疫法（ELISA）测定植物激素含量姓名：李希东专业：植物学学号：200808201 日期：09.5.10 成绩：一、实验目的：掌握间接法测定植物激素的原理和方法；了解逆境对玉米根系ABA和IAA含量的影响。
二、实验原理：酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbert assay，简称ELISA)是在免疫酶技术(immuno enzymite technique)的基础上发展起来免疫测定技术。
其建立在两个重要的生物化学反应基础之上的，即①抗原抗体反应的高度专一性和敏感性；②酶的高效催化特性。
ELISA把这二者有机地结合在一起，即被分析物先与其相应的抗体或抗原反应，然后再检测抗体或抗原上酶标记物的活性，从而达到定性或定量测定的目的。
间接法是将过量的与蛋白质连接的待测植物激素(实验前将该激素与牛血清白蛋白等蛋白质连接成[激素一蛋白质复合物])吸附在固相支持物上，然后加入待测植物激素和相应抗体，使抗体与待测植物激素及激素蛋白质复合物结合，再加入酶标抗体(标记酶与非特异第二抗体的复合物)，就形成〔蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物〕，加入底物后就生成有色产物，测定其吸光率，可计算待测抗原的量。
如果抗体、激素一蛋白质复合物和酶标抗体的量一定，并且[激素·蛋白质复合物]和待测激素的总量超过抗体的量，那么生成的[蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物]的量就受待测激素含量的限制，因此待测抗原的量将与吸光率成反比。
图A表示间接酶联免疫方法的基本原理：A.间接酶联免疫原理示意图示反应板（固相载体）示激素特异抗体（一抗）示激素（抗原）示非特异二抗示蛋白质·激素复合物示标记酶本实验所采取的方法，则是利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体的竞争性结合反应，它的原理可用下式表示:Ab十H十HP=AbH十AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素一蛋白质复合物。
植物激素类检测
植物激素类检测植物激素是由植物自身代谢产生的一类有机物质，会从产生部位移动到作用部位，在极低浓度下就有明显生理效应的微量物质，也称为植物天然激素或植物内源激素。
它是植物细胞接受特定环境信号诱导产生的、低浓度时可调节植物生理反应的活性物质。
在细胞分裂与伸长、组织与器官分化、开花与结实、成熟与衰老、休眠与萌发以及离体组织培养等方面，分别或相互协调地调控植物的生长发育与分化。
常见的植物激素有五类，生长素类、赤霉素类(GAs)、细胞分裂素类(CTKs)、乙烯(ETH)和脱落酸(ABA)。
前三类都是促进生长发育的物质，脱落酸是一种抑制生长发育的物质，而乙烯则主要是一种促进器官成熟的物质。
植物激素的离子色谱图植物激素的二级全扫描质谱图迪信泰检测平台采用液质联用(HPLC-MS或LC-MS/MS)的方法，常用Thermo Scientific的U3000快速液相色谱对样品进行分离，随后采用Thermo Scientific™ Q Exactive™对样品进行鉴定，可以高效、精准的检测植物激素的含量变化。
目前可检测的植物激素包括吲哚乙酸(IAA)、玉米素（ZR）、赤霉素（GA3)、脱落酸（ABA)等。
对于常见激素或以上激素的同类物质，可结合标样进行检测，对于稀有的激素分子，如提供标准样品，迪信泰检测平台可提供定制检测。
此外，我们还提供HPLC测定植物激素的服务，以及植物激素系列检测试剂盒产品，以满足您的不同需求。
植物激素类检测项目玉米素（ZA）检测赤霉素（GA）检测吲哚乙酸（IAA）检测脱落酸（ABA）检测水杨酸（SA）检测茉莉酸（JA）检测生长素（Auxin）/植物生长激素检测细胞分裂素（CTK）检测玉米素核苷（ZR）/反式玉米素核苷（TZR）检测吲哚丁酸（IBA）/吲哚-3-丁酸检测6-苄氨基腺嘌呤/6-苄氨基嘌呤（6-BA）检测激动素（KT）检测萘乙酸（NAA）检测异戊烯基腺嘌呤（IP/2ip）检测异戊烯基腺嘌呤核苷（IPA/2ipr）检测结合吲哚乙酸检测结合脱落酸检测水杨酸甲酯（MESA）检测茉莉酸甲酯（MeJA）检测油菜素内酯/芸苔素/油菜素甾醇（BR/BL）检测独角金内酯（SLs）检测褪黑素(MT)/褪黑激素/褪黑色素检测样品制备激素提取方法（此部分涉及到公司的核心工艺，以下提供常规的提取工艺）1）称量约0.5 g的新鲜植物样品；2）液氮研磨至粉碎；3）加入5 mL异丙醇/盐酸缓冲液，4℃震荡30 min；4）加入10 mL二氯甲烷，4℃震荡30 min；5）4℃，13000 rpm离心5 min，取下层有机相；6）避光，氮气吹干有机相，用250 μL-500 μL甲醇(0.1%甲酸)溶解；7）0.45 μm的微孔滤膜过滤，用HPLC-MS/MS检测。
高效液相色谱法快速分析植物内源性激素
高效液相色谱法快速分析植物内源性激素植物内源性激素在植物生长和发育过程中起着重要的调节作用。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种先进的分析技术，被广泛地用于植物内源性激素的定量分析和研究。
通过快速、准确地分析植物内源性激素，我们可以深入了解植物的生长和发育调控机制，为农业生产和植物育种提供重要的理论指导和实践应用。
一、植物内源性激素的概述植物内源性激素是一类在植物体内合成和调节生长发育的化合物，包括生长素、赤霉素、脱落酸、激素酮、保护素和亚硫酸氨基酸等。
它们在调节植物生长和发育过程中发挥着不可或缺的作用，如控制细胞分裂和伸长、调节根系和茎的形态发育、调控开花和果实发育等。
了解植物内源性激素的合成、分布和调控机制对于揭示植物的生长发育规律具有重要意义。
二、高效液相色谱法在植物内源性激素分析中的优势高效液相色谱法是一种在液相中进行分离和测定的分析技术，具有分离能力强、选择性好、分析速度快以及样品处理简单等优点，因此被广泛应用于植物内源性激素的定量分析中。
与传统的色谱方法相比，高效液相色谱法具有以下几个优势：1.分离能力强：高效液相色谱法能够有效地将混合样品中的激素物质分离出来，得到高纯度的化合物。
这一点对于复杂的植物组织和生理液体样品分析尤为重要。
2.选择性好：高效液相色谱法能够通过调整色谱柱、流动相和检测器等条件，实现对不同内源性激素的选择性分离和测定，从而提高了分析的准确性和可靠性。
3.分析速度快：高效液相色谱法具有快速分析的特点，一般可以在几分钟到几十分钟内完成一次分析，提高了实验效率。
4.样品处理简单：高效液相色谱法在样品处理时通常只需简单的提取和净化步骤，可以大大简化实验过程，提高了实验效率。
三、高效液相色谱法快速分析植物内源性激素的方法高效液相色谱法快速分析植物内源性激素的方法主要包括激素提取、净化和检测。
根据不同植物内源性激素的特性和含量，可以选择不同的样品处理方法和色谱条件。
植物激素检测方法
植物激素检测⽅法植物激素是植物体内合成的⽤于调控植物⽣成发育的⼩分⼦化合物。
⽬前，被公认的植物激素有6⼤类：细胞分裂素类（CK）、⾚霉素类（GAs）、⽣长素类（Auxins）、脱落酸类（ABA）、⼄烯和油菜素甾醇类（BRs）。
以下介绍⼏种常⽤的植物激素检测⽅法。
1. ⽣物检测法利⽤植物激素作⽤于植物组织或离体器官后产⽣的特异性反应，从⽽间接对植物激素的含量进⾏检测。
然⽽，不同结构的⾚霉素、⽣长素或激动素对不同⽣物检测法的响应有差异，因此有时可能⽆法测出。
由于⽣物检测法可以检测植物激素的活性，常⽤于植物激素的定性分析，也常与其他检测⽅法结合使⽤。
2. ⽓相⾊谱法通过与标准样品共⾊层分离来鉴定样品中植物激素的含量，但由于⽆法排除杂质与标准品的共⾊层分离，所以不能准确检测植物激素含量。
待测样品必须形成易挥发的甲基化和三甲基硅烷化衍⽣物才可以运⽤⽓相⾊谱法检测，所以在⼄烯的测定种，⽓相⾊谱法⽐较常⽤。
3. 酶联免疫法（ELISA法）将抗原或抗体与酶结合形成酶标抗原或抗体，加⼊酶反应的底物后，底物被酶催化⽣成有⾊产物，通过颜⾊反应的深浅来进⾏定性或定量分析。
酶联免疫吸附法的主要缺点在于抗体的制备复杂，且检测中难以排除交叉反应，⽆法保证植物激素检测的准确性。
4. ⾼效液相⾊谱法⾼效液相⾊谱法与不同检测器结合，能直接分析多种植物激素，是⽬前应⽤较⼴泛的植物激素检测⽅法之⼀。
除⼄烯外的其它植物激素均可以采⽤⾼效液相⾊谱法进⾏检测。
5. 质谱法液质联⽤（LC-MS）和⽓质联⽤（GC-MS）克服了⾼效液相⾊谱和⽓相⾊谱的在植物激素定性和定量⽅⾯的局限性，成为普遍接受和认可的植物激素检测⽅法。
GC-MS具有选择性好、专⼀性强、灵敏度⾼等特点，不⾜之处在于对样品的纯化要求很⾼，且样品需要衍⽣化处理。
不同于GC-MS，LC-MS不需要衍⽣化处理，简化了操作步骤，缩短了检测时间。
因此LC-MS更适⽤于植物激素的检测（除⼄烯外）。
植物激素定量分析方法
(2) 固相萃取： 固相萃取(SPE)技术是一个包括液相和固相的物理 萃取过程, 其主要目的是把痕量被测定组分进行浓缩和富集. 固相 萃取柱用以保留目标化合物, 并尽量减少干扰杂质的保留, 选择合 适的溶剂将干扰杂质淋洗掉, 然后再用另一溶剂把感兴趣的分析物 从固定相上洗脱下来; 反之, 也可让目标化合物直接通过固定相而 不被保留, 同时大部分干扰物质被保留在固定相上, 从而得到分离. 与传统的液相萃取技术相比, 固相萃取不需要大量互不相溶的有机 溶剂, 可供选择的固定相种类较多, 具有快速、可靠、消耗试剂少 、易于实现自动化等优点, 能够对复杂基质样品中的目标化合物进 行纯化和富集,满足了人们对处理方法的高效、快捷、简单和低消 耗的要求, 被广泛用于植物激素类样品的处理.
电化学生物传感器利用具有生物活性的物质作为识别元件(识别元件所 用的生物活性物质主要有酶、微生物、动植物组织、抗体和核酸等), 通过特定反应使被测成分消耗或产生相应化学计量数的电活性物质, 电极上流过的电流或电极表面与溶液的电势差会随之发生变化, 从而 实现了特定物质的检测. 李春香等人提出了一种以绿豆芽叶片组织-二茂铁修饰的碳糊电极 (LFMCE)作为测定植物激素IAA 的组织生物传感器. 其基本原理是绿 豆芽叶片组织内含有一定量的IAA 氧化酶, 能够催化IAA 的氧化代谢, 而存在于植物组织内的IAA 氧化酶因原有生理环境, 稳定性较高, 可用 作修饰电极的敏感材料, 利用此修饰电极的氧化峰峰电流的升高来定 量测定IAA, 其中二茂铁起了电子传递媒介体的作用. 近年来, 受到生物科学、信息科学和材料科学发展成果的推动, 生物传 感器技术飞速发展. 其具有灵敏度高、检测速度快、操作简便、可进 行连续动态监测等优点, 但生物传感器的应用也同时受到稳定性、重 现性和使用寿命等诸多因素的限制, 在植物激素分析应用领域中一直 停留在方法学研究的阶段.
植物激素研究的一般方法
植物激素研究的一般方法
1. 激素的提取和分离，研究人员通常会从植物组织中提取激素，并通过化学方法或生物学方法进行分离纯化，以便进行后续的分析
和实验。
2. 生物测定法，生物测定法是研究植物激素活性的重要方法，
包括生物学活性测定、生长调节测定等，常用的方法包括生长曲线
实验、生物测定实验等。
3. 分子生物学方法，利用分子生物学技术对植物激素进行研究，包括克隆激素合成基因、激素受体基因、信号转导途径相关基因等，通过转基因技术和基因敲除技术研究植物激素的功能。
4. 生化分析方法，利用生化分析方法对植物激素进行研究，包
括高效液相色谱法、质谱法、酶联免疫吸附实验等，用于检测和定
量植物激素的含量。
5. 组织培养技术，利用植物组织培养技术研究植物激素的生物
学功能，包括激素的促进生长、诱导愈伤组织等，通过组织培养的
方式研究植物激素的作用机制。
总的来说，植物激素研究的一般方法涉及到多个学科领域的知识和多种实验技术的应用，通过综合运用这些方法，可以全面深入地研究植物激素在植物生长发育中的作用机制和调控网络。
植物激素的测定方法
植物激素的测定方法植物激素是一类在植物生长和发育过程中起调节作用的化合物。
它们能够通过调节细胞分裂、扩展和分化以及调控植物对环境的适应能力，从而影响植物的形态和功能。
为了研究和了解植物激素的作用机制，科学家们发展了多种测定植物激素的方法。
这些方法可以帮助我们准确地测定植物激素的浓度，并进一步揭示植物激素在植物生长和发育中的作用。
一种常用的测定植物激素的方法是高效液相色谱法（HPLC）。
HPLC 是一种基于植物激素在液相中的分离和检测原理的分析方法。
首先，样品中的植物激素会被提取出来，然后通过在柱子中的固定相上进行分离，最后利用紫外光谱仪或质谱仪等设备进行检测和定量。
这种方法具有高分离效果、高灵敏度和高准确性的优点，常用于测定植物激素如生长素、赤霉素、脱落酸等的浓度。
除了HPLC，放射免疫测定法（RIA）也是一种常用的测定植物激素的方法。
RIA利用植物激素与标记同位素结合的原理，通过测量放射性同位素的放射线强度来定量植物激素的浓度。
这种方法具有高灵敏度和高特异性的优点，可以测定植物激素如赤霉素、激动素、玉米素等的浓度。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）也是一种常用的测定植物激素的方法。
ELISA利用植物激素与特异性抗体的结合反应，通过测量抗体与酶标记物质之间的酶活性来定量植物激素的浓度。
这种方法具有简单、快速和高灵敏度的优点，常用于测定植物激素如赤霉素、生长素、激动素等的浓度。
除了上述几种常用的测定方法，还有一些新兴的测定植物激素的方法也在不断发展中。
例如，质谱法（MS）是一种基于植物激素分子的质量和质荷比的分析方法，可以精确测定植物激素的结构和浓度。
另外，生物传感器和光谱法等新技术也被应用于植物激素的测定领域，为研究人员提供了更多的选择。
测定植物激素的方法多种多样，各有优劣。
科学家们根据研究目的和需求选择合适的方法来测定植物激素的浓度。
这些测定方法的发展和应用，不仅有助于我们深入了解植物激素的作用机制，还为植物生长和发育的调控提供了重要的理论和实践基础。
植物激素的酶联免疫吸附测定法(ELISA)
植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。
由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。
目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。
植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式（见下图），一种是在固相载体上直接包被抗体（直接法，先包被二抗，再加一抗），另一种是包被抗原（间接法）。
直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。
间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。
间接法的原理可用下式表示：Ab+H+HP=AbH+AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。
根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H量的多少。
材料、试剂及设备1 材料各种新鲜植物材料2 仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。
3 试剂(1) 包被缓冲液：称取１.５g Na2CO3, 2.93g Na HCO3, 0.2g NaN3（可不加）, 用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为9.6(2) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4, 2.96g Na2HPO4·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。
大豆可食部位中植物雌激素的检测
大豆可食部位中植物雌激素的检测近年来，关于大豆与植物雌激素的关系引起了广泛的关注。
植物雌激素是指植物体内含有的类似于人体雌激素的物质，它们能够模拟人体内产生的雌激素的作用，并起到类似于雌激素的调节作用。
而大豆则是植物雌激素的主要来源之一。
与传统的植物雌激素不同的是，大豆中含有的异黄酮具有雌激素相似的作用，但并不会对人体带来负面的影响。
因此，目前对大豆中植物雌激素的检测方法尤为重要。
一、植物雌激素的种类植物雌激素是广泛存在于植物中的一类天然化合物，包括黄烷酮、黄酮、类黄酮和苯环酮等。
其中，黄烷酮是大豆中含量最丰富的一种，黄酮和类黄酮则是其他常见的植物雌激素。
二、大豆中植物雌激素的检测方法目前，大豆中植物雌激素的检测方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法和荧光光谱法等。
（一）高效液相色谱法高效液相色谱法通常用于分离和测定大豆中的异黄酮、黄酮和黄烷酮等植物雌激素，它通常具有灵敏度高、精确度高等优点。
但是，这种方法需要提前对样品进行处理，对分离和富集植物雌激素的工作也很繁琐。
（二）气相色谱法气相色谱法通常用于测定大豆中的植物雌激素含量，它是一种基于样品的挥发部分进行分析的方法。
虽然这种方法分离和检测的效果很好，但是基于它并不能准确甄别植物雌激素与其他化合物的区别。
（三）质谱法质谱法通常用于鉴定大豆中的异黄酮结构，它除了能够检测植物雌激素含量以外，还能够针对不同的异黄酮进行分析，帮助鉴定它们的分子结构。
（四）荧光光谱法荧光光谱法可以通过测定大豆中植物雌激素的发射光谱，帮助检测它们的含量。
通过这种方法，可以达到比较理想的检测效果。
三、结语大豆中植物雌激素对人体健康具有重要的作用，在食用过程中也要注意是否合理搭配，避免过多的含有植物雌激素的食品。
如果要检测大豆中植物雌激素的含量，则应该根据具体的情况选择合适的检测方法，并进行合理处理和分析。
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比色谱法是最早应用于生长 素分析的光谱法，但由于该法选 择性差，现很少被应用。荧光分 析法是进行痕量、超痕量甚至分 子水平上分析的重要手段，它具 有选择性好、取样少、灵敏度高 以及简便快速等优点，近年来在 植物激素分析中得到广泛应用。
电化学分析法
电化学分析法相对于气相色谱(GC)、液相色 谱(HPLC)、毛细管电泳(CE)、免疫法等分析方法具 有简单、方便和仪器价廉等特点. 在早期的研究中, 植物激素的电化学分析方法主要是针对脱落酸、赤 霉素、玉米素和激动素等植物激素标准品的电化学 行为进行探讨. 通过研究发现, 植物激素存在的本底 溶液的性质和pH 对测定结果会产生很大影响。
色谱法和光谱法
色谱法
光谱法
色谱学是利用物质在不同介质中的 分配原理进行测定的, 包括纸上层析、薄 层层析( TLC)、气相色谱( GC)、高效相 色谱( HPLC) 以及气质联用( GC-M S) 等, 将分离和测定结合起来是色谱法的基本 特点。根据色谱学理论, 某种化合物在一 定色谱条件下的出峰时间(保留时间) 是 固定的, 这是色谱学定性的依据； 而色 谱峰面积(或峰高) 与物质的含量(或总量) 成正比, 这是色谱学定量的基础。
植物激素 的 检测方法
目录
CONTENTS
01
02
03
04
植物 激素 定义
植物 激素 分类
植物 激素 检测 方法
参考 文献
1
植物激素的定义
植物激素的定义
天然植物激素或内源性植物激素, 是植 物自身代谢产生的一类具有高度生物活 性的有机小分子化合物. 它们一般先在 植物的某一部位合成, 然后再转运到其 他部位去发挥作用。植物激素虽是小分 子, 却调控着几乎整个植物生命周期, 如 种子萌发、茎叶伸长、果实成熟以及脱 落等生理过程。植物激素还能感应植物 所处生存环境的外界刺激, 如水分、光 照、温度和损伤等, 并作出相应的反应。
植物激素的检测方法
植物内源激素对植物体的生长发育具有至关重要的作用， 因此对植物内源激素进行准确的定性定量分析是一项艰巨而意 义重大的任务。然而植物激素具有含量低、性质不稳定的特征， 且在植物体内存在多种其他物质会对激素的定量产生干扰，使 得这项工作极具挑战性。
4
参考文献
参考文献
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生物测试法简便易行, 也 能反映植物激素的生理活性, 但是专一性较差, 且植物体内 含有生长素类似物、拮抗物 等影响测定的结果, 需在前处 理中尽可能纯化所要测定的 组分, 过程复杂, 此外重复性 差, 工作量大。
免疫检测技术
免疫检测技术在检测植物激素方面的应用是19 世纪七八十年代发展 起来的，该方法基于抗原和抗体的特异性结合，因此有较好的专一性。 该类方法主要包括放射免疫测定法(RIA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、 荧光免疫法、化学发光法、免疫细胞化学技术等，其中以放射免疫测定 法(RIA)与酶联免疫吸附测定法(ELISA)最为常用。
2
植物激素的分类
植物激素的分类
茉莉酸类
生长素
赤霉素
水杨酸类
乙烯
脱落酸
3
植物激素的检测方法
植物激素的检测方法
生物测 试法
2
免疫检 测技术
3
色谱和 光谱法
电化学 分析法
生物测试法
生物测试法是最早采用 的植物激素测定方法,它是利 用植物激素的生理活性,通过 某些植物的组织和器官对植 物激素产生的特异性反应进 行测定的。