致蓝狐肺炎的犬链球菌WF1株分离鉴定及药敏试验

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液琼脂培养基。37℃培养24h，观察结果。
Байду номын сангаас1离出.2菌的.7基具因1有6S组完D全rRNN溶AA血提基性取因的：序小取列菌血测落液定，琼与接脂比种培对另养一基（血上1）液生长分琼
水稀释，每只肌肉注射1ml(含1头份)；间隔2周加 强免疫一次。断奶后50d免疫狐狸脑炎活疫苗 (CAV-2C株)。当非种用幼龄狐狸体重达到4~5kg 左右时埋植褪黑激素。 1.2.2 蓝狐饲养场发病情况调查 在正常饲养过 程中蓝狐陆续发病，病狐体温升高，食欲下降， 精神沉郁，呼唤不应，呼吸增数，流鼻涕。不愿 运动，有的关节肿大，瘫痪，长时间卧伏。病狐 发育迟缓，逐渐消瘦。病重者衰竭死亡，病程7~ 15d。发病期间投喂青霉素、林可霉素，效果不 显著。发病后1个月，随着天气逐渐凉爽，疫情 停止。发病期间，共死亡当年幼狐359只，死亡 率为8.9 %。未埋植褪黑激素的成年种狐和幼龄种 狐发病较少。 1.2.3 病理变化检查 剖检濒临死亡的蓝狸5 只，可见肺部肿胀，出血，胸腔积液。心、肝和 肾未见明显异常。肠内容物很少，肠管未见明显 出血性变化。 1.2.4 犬瘟热检查 按照林特睿检TM犬瘟热抗原 快速诊断试纸的说明书进行操作，取5只病狐 眼、鼻、口的分泌物，溶于试剂盒的缓冲液中， 然后取4滴缓冲液加入试纸卡的加样孔中，5~10 min内读取结果。 1.2.5 触片、染色、镜检 常规无菌操作采集5 只病狐肺脏，用灭菌镊子夹住肺脏一角，用无菌 手术刀切下一块肺脏，用洁净的玻片在肺脏的新 鲜切面上接触一下，玻片上留下一硬币大小的印 迹。触片干燥后，将玻片通过酒精灯火焰的外焰 3~4次，进行固定。然后用革兰氏染色液染色、
反应体系为： 模板 ， PCR
DNA 1µl 2×Master Mix
15匀件2mm0µ：后iinnl，9。，，4上℃反7120、预应℃00下变结延转游性束伸离引5，1心m物m温i1ni个nm；度，i1n9降µ43后l0℃，至个放变超4循入℃性纯环P，1水Cm；直R1in7仪7至，µ2l℃。取，53反再出℃震延应。荡退伸取混条火
脂培养基，获得纯培养物。将纯培养物用超纯水
洗下后用于提取该细菌的总DNA。按照细菌基因
组DNA提取试剂盒的介绍的操作步骤提取DNA。
GG菌1提6AAS1取TT6CCS的rRCC总rNTARAGGND基GCANCC基A因TG用因C的CA于AP通GC-分3-R用'3，离检'；引设菌测1物计的及54，扩P测1RC2增序7R：F检片：：5'测段引-5A'。-为物AA（G1采G25GA）1用AG4Gb分细TpGT菌。离TT
1.1
发病蓝狐，取自潍坊某养殖场。血液琼脂培 养基购自潍坊天衡医疗器械有限公司。Bairdparker培养基、亚硫酸铋琼脂培养基、营养琼脂 培养基、伊红美兰培养基、孟加拉红培养基均购 自北京路桥技术股份有限公司。药敏纸片购自杭 州滨和微生物试剂有限公司。细菌基因组DNA提 取试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司。 1.2 方法 1.2.1 蓝狐饲养场管理情况调查 山东潍坊某规 模化蓝狐场，饲养蓝狐4000只。蓝狐笼具在进狐 前经碘制剂喷雾消毒。地面撒生石灰，并与表层 土混匀，砸实。笼舍位于遮阳棚下。遮阳棚南北 走向，棚檐高2m，棚顶高2.5m，通风良好，夏季 防止蓝狐被烈日暴晒。蓝狐幼狐出生后，发育正 常。饲喂杂鱼、鸭架、鸡架、鸡蛋、豆粕、玉米 面、麸皮以及多种微量元素和维生素组成的预混 剂等构成的混合日粮，所有饲料煮熟、搅碎后成 糊状饲喂。幼狐断奶后20d免疫犬瘟热活疫苗 (CDV-11株)，按瓶签注明头份，用注射用生理盐
潍项坊目市名称科技：发山东展计部划分项地目区毛，皮项动目物编号肺炎20流14行GX病06学9.调查及防治技术研究
*通讯作者
7
山东畜牧兽医
显微镜油镜检查。
病1.2狐.6肺脏细，菌放的入分灭离菌培的养平皿常。规手无持菌烙操刀作，采先集在5只酒
精灯火焰的外焰烧热至微红，然后放在病肺表面
片烙刀刻捅，一大个约小0.2口m。in。取然灭后菌在的病接肺种被环烙插过入的烙地刀方捅用出
关键词 蓝狐 肺炎 犬链球菌 分离鉴定 药敏试验
中图分类号： 文献标识码： 文章编号： S852.61+1
A
1007-1733(2019)07-0007-03
蓝狐肺炎是蓝狐养殖过程中常见的疾病，主 要90%发，生致于死每率年有的时8~近9月10份%，。发疫病情率暴有发时后高，达相5邻0%的~ 蓝狐场往往先后发病，具有很强的传染性和破坏 性，给广大蓝狐养殖企业带来严重经济损失。 2018年9月，潍坊一蓝狐养殖场发生肺炎后来山 东畜牧兽医职业学院动物医院就诊，现把病原分 离鉴定情况汇报如下： 材料 1 材料与方法
5µL PCR产物用于琼脂糖凝胶电泳。观察有无特
定余测用索序与B的的LP。DPACCNS将RRAT产产测片程物物得序段序送的在出列P上线现C相海进。R同产生行若或物工基有相序生因目似列物序标的在工列片基N程段相C因有似出B序I限现性数列公比，据。司对库则进中将，行搜，剩
1.2.8 分离菌的生化试验 将分离菌的纯培养物
用进革行兰生氏化阳特性点菌检鉴测定。卡按(全梅自里动埃微VI生TE物K鉴2G定P及2药134敏1)
2019 年第 7 期（总第 264 期)
试验研究
致蓝狐肺炎的犬链球菌WF1株分离鉴定及药敏试验
靖吉强 武世珍 郭洪梅* 李 舫 （山东畜牧兽医职业学院 山东 潍坊 ） 261061
摘要 为了有效控制蓝狐肺炎的发生，减少蓝狐肺炎的危害，试验采取现场观察、细菌的分离培 养结和果1表6S明：rRN从A蓝基狐因肺序部列分测离定到与一比株对犬等链方球法菌，，对命潍名坊为一犬蓝链狐球养菌殖W场F发1株生。的说蓝明狐蓝肺狐炎在进通行风了不病良原、学严检重查。热 应激，昼夜温差较大等不利因素的刺激下，抵抗力下降，感染了犬链球菌，导致严重肺炎。通过对犬 一链定球的菌指W导F1意株义药。敏试验，发现该菌耐药性较强，但对美罗培南较为敏感。这对于蓝狐肺炎的防控具有