肾性高血压模型复制的方法与常见问题浅析

肾性高血压模型复制的方法与常见问题浅析

白庆云徐颖姚珠星刘树民※

黑龙江中医药大学150040

E-mail:baiqingyun525@

摘要:目的：探讨肾性高血压大鼠模型复制的方法和常见问题并对实验过程中出现的问题以及其他文献有关本方法存在的问题进行分析。方法：取雄性Wister大鼠,80只，体重200-220g，用二肾一夹(2K1C)法造模。观察记录各组大鼠的一般情况和术后2、4、6、8周的血压。结果：术后手术组大鼠较术前毛色光泽度下降，体重增长缓慢甚至减轻，舌色紫绛或有瘀斑瘀点。其中3只大鼠出现半身不遂症状。其血压在术后2周开始明显上升，6周达最高峰并保持稳定。结论：本方法制作高血压大鼠模型成功率高，与相关文献报道相近[2]血压稳定，易于操作。

关键词:二肾一夹肾性高血压模型方法与问题分析

1.引言：有关高血压大鼠模型的复制方法有多种，但均存在种种弊端。目前最为广泛应用的方法是狭窄肾血管造成高血压模型。本文采用二肾一夹法复制高血压大鼠模型，不仅对实验过程进行了详细的记录，并对实验过程中出现的问题以及其他文献有关本方法存在的问题进行探讨,总结了一定的实践经验和心得体会.实验结果表明:本方法复制高血压大鼠模型再现性好,方法简单,经济实用。

2.材料与方法

2.1实验材料常规小动物手术无菌包，包括眼科镊、止血钳、剪刀、手术刀、刀柄、手术针、手术线、纱布、托盘，注射器，手术台，剃须刀，孔巾，手套，口罩，手术服，以上物品均经无菌处理。另有手术无影灯，酒精、碘伏棉球，0.1％新洁尔灭，青霉素粉针剂，葡萄糖注射液，生理盐水注射液，0.5％戊巴比妥钠。BESN-IL动物无创测压系统多通道血压测定仪

银夹：根据文献〔1〕自制，将白银碾成0.1mm厚的薄片，用剪刀剪成宽0.5cm，长1cm 的矩形，用直径为0.25mm的针灸针做直径围成小环，如图所示

1cm

0.5cm

2.2实验方法取雄性Wister大鼠,80只，体重200-220g（黑龙江中医药大学实验动物中心提供），分为3组，手术组、假手术组和正常组（不手术）。正常喂养一周适应实验室环境。手术前一天将实验室用0.1％新洁尔灭喷雾消毒。

作者简介:白庆云,女，硕士研究生

※通讯作者:刘树民,男，博士研究生导师

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2.2.1大鼠的麻醉用0.5％戊巴比妥钠腹腔注射，30mg/kg.

2.2.2手术视野的准备备皮：将麻醉的大鼠仰卧在手术台上，固定四肢。剪除腹部野毛，以胸骨下2.5-3cm处为中心，范围约6*4cm，用肥皂水浸湿绒毛后，用剃须刀剃净。消毒：用碘伏在手术部位行常规手术消毒3次，盖上孔巾，暴露手术部位。

2.2.3实施手术在胸骨下约0.7cm处用刀尖刺破皮肤沿腹正中线依次切开皮肤、肌肉，切口约2cm，用止血钳钳住两侧肌肉，分置两侧。用沾有生理盐水的纱布推开肠组织，找到肾脏及肾动静脉后，穿破腹膜，钝性剥离肾动静脉周围的脂肪组织，用眼科镊小心分离肾动脉，在确认无误后放置银夹，用止血钳关闭银夹。去除纱布，复位肠组织，在腹腔内滴2滴青霉素溶液，用圆针缝合肌肉层，再滴2滴青霉素溶液，用角针缝合皮肤。然后用碘伏擦拭2次，除去孔巾，解除固定，将大鼠放回笼内，单笼单只。假手术组的手术操作步骤与手术组相同，只是不狭窄肾动脉。

3.实验结果

共行手术60例（手术组40例，假手术组20例）存活59例（其中一例因误伤肾动脉出血致死），手术组血压成功上升32例(以收缩压＞160mmHg为造模成功)，成功率80％.

3.1一般情况术后手术组大鼠较术前毛色光泽度下降，体重增长缓慢甚至减轻，舌色紫绛或有瘀斑瘀点。其中3只大鼠出现半身不遂症状。

3.2血压变化手术组大鼠术后2周血压开始明显上升，6周达最高峰并保持稳定。用BESN-IL动物无创测压系统多通道血压测定仪在术后2w、4w、6w、8w测量大鼠尾部血压,结果见下表

各组动物血压值（x±s,mmHg）表

手术后

组别手术前

2w4w6w8w 正常组103±2/75±5105±3/76±2104±4/78±3107±6/80±2106±5/79±3假手术组108±4/77±3102±7/80±3107±6/79±2106±6/81±4107±4/75±3手术组104±6/77±4133±5/90±6▲160±7/117±3▲187±4/135±2▲191±8/144±4▲注：▲与正常组、假手术组及手术前比较p<0.01

4.结论

由上表可知手术组大鼠术后2周血压开始明显上升，6周达最高峰并保持稳定。该组第2、4、6、8周的平均血压与正常组、假手术组及手术前比较p<0.01.实验结果表明通过本方法制作高血压大鼠模型成功率高，与相关文献报道相近[2]易于操作，血压稳定。

5.讨论

5.1手术注意在手术过程中一定要注意保持环境温度，如果温度过低，动物容易出现休克。术后给动物喂食葡萄糖注射液，以助动物的清醒与体能的恢复。为防止误夹，在关闭银夹前观察银夹是否有规律性波动，如有，说明夹在了肾动脉上。

5.2手术路径问题有文献报道[3]采用左侧直入路的手术路径，本试验按照此方法造模10只大鼠与腹部手术路径相比较，发现左侧直入路法在寻找肾动静脉和分离动静脉上的难度增加，因为大鼠的背部肌肉（相当于人的腰大肌和竖脊肌）覆盖了主动脉和肾动静脉。再者术

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后由于刀口在后背动物无法自我保护，术后死亡率增加。

5.3金属夹问题本实验用的是自制的纯银银夹，具有直径容易确定质地柔软，可塑性强，容易捏合，制作简单等优点。有文章[4]报道用易拉罐皮代替白银制成金属夹，这种金属夹较硬，不易捏合，需用线系住夹柄才能闭合金属夹，造成不便。而自制的银夹只要用止血钳轻轻一夹就可以使之关闭，非常方便。

5.4金属夹直径问题关于银夹小环的直径，有文献[4]用公式d(mm)=大鼠体重(g)÷1000±0.02来确定，照此200g的大鼠所用小环直径是0.2mm，我们经查阅文献及实践，发现小环直径在0.25-0.3mm最为适宜。因为此造模的时间非常长，一般6-8w，再加上随后的药效学实验及其他实验项目，时间更加长。如果小环直径过小，随着时间的推移和大鼠体重的增加，肾脏供血需求量的增加，肾脏非常容易纤维化而导致后期实验的失败。

参考文献

[1]博继华，陈宇飞，张琪。肾性高血压大鼠试验模型制作改进。中国药科大学学报。1995,26（6）:383-384

[2]曾贵云,赵雅灵,王洪.降压药药效学研究指南；心血管药物审批药效学研究指南.卫生部药物审评办公

室,1989,58-70

[3]王立文,刘光耀,杨成明,等.左侧直入路二肾一夹法复制肾血管性高血压大鼠动物模型.ACTA ACADEMIAE

MEDICINAE MILITARIS TERTIAE,1998,10:394

[4]傅继华,陈宇飞,张琪.肾性高血压大鼠模型制作改进.中国药科大学学报.1995,26(6):383-384

Analysis of establishment and numerous problems of

Renal hypertension

Baiqingyun,xuying,yaozhuxing,liushumin

Heilongjiang university of Chinese medicine

Abstract：Objective:To explore the establishment and numerous problems of Renal hypertension.Methods:80male Wister rats weighing200to220g were selected to make the 2K1C renovascular hypertensive model.Within10weeks after the operation,record the general information and blood pressure.Results:hair color bloss of the rat of operation group come down,weight rise slowly,tongue change purple or have purple blot in it.There rat of them stroke,their blood pressure start to rise evidently ater2weeks,and attain top after6 weeks,held last.Conclusion:the success ratio of renal hypertension is high,the blood pressure holding and easy to operate.

Keywords:2K1C,Renal hypertension,Analysis of establishment and problems

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