肿瘤病理诊断新技术免疫组化技术免疫组化技术现已广泛应用于

肿瘤病理诊断新技术

一、免疫组化技术

免疫组化技术现已广泛应用于病理诊断，不仅在解决疑难病例诊断方面起着重要作用，随着人们医疗风险意识的增强，许多普通的病例也常常需要免疫组化进一步证实，因此成为病理科医生常规工作中不可缺少的重要工作、常规手段。

在小活检病理检查中免疫组化技术能明确地显示癌细胞的存在（如胃粘膜活检中的印戒细胞癌），可使微小癌、微小转移灶（淋巴结及骨髓）、甚至不易察觉的病变得以确诊。

通过乳腺癌激素受体（ER、PR）的检测，免疫组化技术在指导临床治疗方面已起到了重要的作用。通过检测针对肿瘤基因产物（C-erbB2、P53、ALK、CD117等）的抗体还将进一步为分子靶向治疗提供重要的参考依据。细胞增殖核抗原（Ki-67）等免疫组化染色可为肿瘤的预后提供依据。

免疫组化技术的局限性：至今无绝对特异的抗体！相当多的肿瘤缺乏特异的抗原表达；同一种抗原常常可在多种肿瘤中表达，不少肿瘤又由于分化太差或细胞分子结构改变而不表达相关的抗原。不同抗体滴度有不同的阳性结果；内源性生物素造成假阳性，如肝细胞癌等；缺乏免疫组化的标准化（同一实验室及不同实验室间结果的一致性）；定量结果的判断等还存在不少的问题尚待解决，如ER受体，有的实验室只要有阳性肿瘤细胞就视为阳性，而有的实验室则要至少20％细胞阳性才视为阳性，阳性标准往往是随意确定的，未经临床病理研究证实。

如何正确应用免疫组化呢? 要得到正确、有价值的免疫组化结果，免疫组化实验室规范、合适的技术操作（包括组织固定、抗原修复、检测系统、各类试剂的质量保证、染色技术等）是最重要的基础保证，但病理科医生在组织块的选择、抗体的选择、结果的判断等方面也起着不容忽视的作用。

二分子病理学

这是继电镜、免疫组化之后的第三个浪潮。其优点是反应特异、敏感，检测靶信号本质上不同，DNA检测温度固定影响小。采用的方法包括PCR、滤膜杂交（斑点、印迹转移），原位杂交、荧光原位杂交（FISH）、显微切割技术、比较基因组杂交、生物芯片（基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片）等。

分子病理学检测内容包括肿瘤基因(癌基因、抑癌基因/原癌基因)、点突变、染色体重排（易位、倒转—过表达/新的杂合基因）、基因扩增和缺失等。分子病理学检测为肿瘤定性、分类、预后判断可起到重要的帮助。

显微切割技术是90年代出现的一项新技术，这项技术对肿瘤、细胞生物学及分子生物学研究有巨大的推动作用。该技术能够在显微镜下，从组织切片上切下小片组织或单个细胞，用这些切下的材料进行PCR扩增，能够得到同类细胞，甚至单个细胞的基因，这样研究结果更为准确。

组织芯片又称组织微阵列（tissue microarray）, 是1998年在cDNA微阵列的基础上发明的一种特殊的生物芯片，是继基因芯片和蛋白芯片之后生物芯片家族的又一新成员。

组织芯片的原理是根据不同需要，利用特殊的仪器，将多个（病例）小组织片高密度的、整齐的排列固定在某一固相载体上（载玻片、硅片、聚丙烯或尼龙膜等），而制成微缩的组织切片。其最大潜在作用是将基因、蛋白水平的研究与组织形态学相结合，使应用同一实验指标，同时快速研究大量不同组织样本（高通量、多样本）的设想成为现实，减少了实验误差，几十倍、上百倍的提高组织病理学研究的效率，节约实验材料和试剂，同时使实验结果有更可靠的可比性；对于原始病理资料的保存和大量样本的回顾性研究具重要的意义。

组织芯片的应用范围：研究目的基因在不同病变（肿瘤）间的表达差异；寻找疾病新基因，疾病（肿瘤）中新基因、突变体与基因多态性的检测，药物的筛选；疾病的病理诊断；质量控制等。

原位杂交－是在一定的生物结构基础之上的核酸杂交，这种结构基础可以是一条染色体、一个细菌、更大的结构基础是细胞和组织。故此杂交的共同点是有明确的结构

基础，可反映基因杂交的准确部位。

免疫组化技术在肿瘤病理诊断中的应用

一、免疫组织化学的工作原理

1、已知的特异性抗体或抗原能特异性结合

通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶，金

属离子、同位素等，显示一定的信号（如：颜色）

借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构二、应用范围：

(1)提高病理诊断准确性

(2)对疾病的预后和治疗的意义

(3)对肿瘤增生程度的评价

(4)微小病灶的发现

微小癌，微小病灶（如羊水栓塞）

(5)指导肿瘤的治疗

(6)恶性淋巴瘤及白血病的诊断及分型

(7)病原微生物的检测

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(1)共同的标记物

角蛋白*(cytokeratin/keratin, CK/KER)

*共有20种亚型，高分子量角蛋白见于复层鳞状上皮，低分子量角蛋白见于腺上皮。

桥粒蛋白*(desmoplankin)

*分布于上皮细胞间的连接部位，是一种很好的上皮细胞标记，此外，凡有细胞连接的非上皮细胞也可以表达，如脑膜瘤、尤文肉瘤、颗粒细胞瘤、精原细胞瘤。

(2)存在于大部分上皮细胞内的标记物

上皮膜抗原(epithelial membranous antigen, EMA)*大多数上皮性肿瘤，常与角蛋白联合应用

*腺上皮性肿瘤，浆细胞瘤，大细胞淋巴瘤，浆细胞骨髓瘤，脑膜瘤均有表达。

(3)选择性存在于某些上皮细胞内的标记物

癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)*是内胚层来源的上皮性肿瘤分化标记物，见于腺癌及某些鳞癌，鉴别腺癌(+)与间皮瘤(-)。但血细胞来源的肿瘤(绿色瘤、髓细胞白血病)、恶性纤维组织细胞瘤均呈阳性反应。

甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP) 肝细胞癌，生殖细胞性肿瘤，如内胚窦瘤，睾丸胚胎癌有交叉反应。

前列腺特异性抗原(prostatic specific antigen，PSA) 前列腺上皮及其来源的肿瘤，也可从转移性肿瘤中鉴别出前列腺癌

结肠癌相关抗原(CA19-9) 胃肠道肿瘤，胰腺癌

卵巢癌抗原(CA125) 卵巢、子宫、乳腺癌

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(1)间叶细胞及肿瘤共同标记物

波形蛋白*(vimentin, VIM) 间叶组织、良、恶性肿瘤

*缺乏特异性，配合其他更有鉴别力的标记物仍有价值。

(2)肌细胞，肌上皮及肿瘤标记物

结蛋白(desmin，DM) 肌细胞及其肿瘤(横纹肌肉瘤/平滑肌肉瘤)

肌红蛋白(myoglobin，MG) 横纹肌，心肌细胞及其肿瘤

肌球蛋白(myosin) 横纹肌特异性标记物，但不敏感

肌肉特异性肌动蛋白(ms-actin,MSA,CMA,HHF35) 平滑肌，横纹肌、肌上皮，肌纤维母细胞

平滑肌肌动蛋白(SM-actin/SMA) 对平滑肌较特异

(3)内皮细胞及肿瘤标记物

第Ⅷ因子相关抗原(factor Ⅷ-related antigen, FⅧRAg) 血管内皮细胞及其肿瘤CD31 血管肉瘤上皮样血管内皮瘤特异性较强

CD34 内皮细胞，血管良恶性肿瘤，kapposi肉瘤

*胃肠道间质肿瘤70%病例为CD34阳性 *100%病例CD117阳性

(4)组织细胞标记物

CD68(Kp-1) 全组织细胞标记物，如恶性纤维组织细胞瘤无明确特异性

α-抗糜蛋白酶(α-antichymotrypsin AACT) 具有组织细胞分化的肿瘤，如恶纤组α-抗胰蛋白酶(α-antitrypsin,AAT)* 组织细胞及其肿瘤

*肝细胞癌，具有肝细胞癌分化的生殖细胞肿瘤，如内胚窦瘤，亦标记胶质细胞瘤

溶菌酶(lysazyme，lys) 组织细胞及其肿瘤，其特异性不如AAT

3. 淋巴造血组织标记物

(1) 共同标记物

白细胞共同抗原(leukocyte common antigen, LCA)CD45

全白细胞标记，血白细胞，单核细胞，肥大细胞，各种淋巴瘤；浆细胞及R-S细胞，不表达LCA

(2) T淋巴细胞标记物

CD45RO(UCHL-1)、CD3、CD43 (L60/Leu-27) T细胞淋巴瘤

(3) B淋巴细胞标记物

CD20(L26)、CDW75(LN1)、CD19 B细胞淋巴瘤