紫锥菊中菊苣酸提取纯化工艺研究
超声波法提取紫锥菊中菊苣酸的工艺优化研究
紫锥菊中菊苣酸的提取工艺和含量测定
紫锥菊提取菊苣酸的工艺与含量测定研究紫锥菊中菊苣酸的提取一般采用水、甲醇、乙醇和超临界萃取，但是由于：水提取温度高，容易造成菊苣酸的氧化；甲醇提取容易造成有机溶剂残留，降低产品的质量并带来不安全因素，因此不适合工业化；超临界萃取由于成本较高，收率低，尚未完成工业化研究。
因此本试验采用乙醇作为工业化提取溶剂，并且对所提菊苣酸含量进行测定实验研究，旨在为紫锥菊提取菊苣酸的深入研究和市场开发提供依据：一、紫锥菊提取菊苣酸工艺与含量测定实验仪器与材料准备Agilent 1100 高效液相色谱仪；G1313A自动进样器；G1315B DAD二极管阵列检测器；UV-2450紫外-可见分光光度计；AG285分析天平；Milli-Q超纯水仪；DZ-2BC型真空干燥箱紫锥菊药材地上部分→自然干燥→粉碎；菊苣酸对照品，供含量测定用；色谱测定用水为超纯水；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
二、紫锥菊提取菊苣酸的提取方法与结果（一）紫锥菊中菊苣酸的提取1. 紫锥菊提取溶剂的选择分别称取10g紫锥菊药材地上部分8份，以10倍质量的0.20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%乙醇水溶液加热回流提取2h→所得滤液浓缩后蒸干→采用HPLC测定菊苣酸的含量→计算其得率。
结果见图1:由上图可见，随着乙醇体积分数的增加，菊苣酸的逐渐升高（得率=出膏率x干膏中菊苣酸的质量分数），当乙醇溶液的体积分数为60%时，得率最高。
随后，菊苣酸的得率随乙醇体积分数的增加而降低。
因此选择60%乙醇作为提取溶剂。
2. 正交试验设计在预实验的基础上，选择溶剂体积(A)、提取时间(B)、提取次数(C)作为3因素，进行L9（34）的正交试验。
分别称取10g紫锥菊药材→按L9(34)正交表所列条件加入60%乙醇回流加热→滤过→滤液浓缩后置已干燥至恒重的蒸发皿中水浴蒸干后→于70℃干燥12h→置干燥器中冷却30min →迅速称重并密闭保存。
采用出膏率及菊苣酸得率作为提取工艺的评价指标，用加权综合评分，按照出膏率和菊苣酸得率的权重比(4：6) 计算，并对实验结果进行分析，结果见表表1，2，3：（二）紫锥菊提取菊苣酸结果与分析从表2和表3可以看出，3因素的影响大小依次为A>C>B，溶剂体积对出膏率和菊苣酸的得率影响最大。
紫锥菊中菊苣酸的萃取工艺研究
紫锥菊中菊苣酸的萃取工艺研究作者：高莹慧岳鑫滢周扬张瑶迟羽淳扬敏张天锡李峰来源：《云南中医中药杂志》2022年第02期摘要：目的提高乙酸乙酯對菊苣酸的萃取效率，优化一套经济高效适于工业放大生产的萃取工艺。
方法以菊苣酸的萃取率和纯度为评价指标，通过单因素实验考察药液浓度、药液pH值、萃取次数、萃取剂用量、萃取时间、萃取搅拌时间、萃取搅拌转速对萃取工艺的影响。
结果最佳萃取条件为药液菊苣酸浓度为15 mg·mL-1，药液pH=2，乙酸乙酯用量与药液体积分数比例为1∶1，萃取2次，每次萃取时间为40 min（搅拌15 min、静置25 min），搅拌转速为100 r·min-1。
在此条件下，菊苣酸纯度为41.4 %，纯度提高了13.0 %，萃取率为98.4 %。
结论该工艺稳定可靠，操作简便，适用于工业生产，可为紫锥菊中菊苣酸的工业萃取提供参考。
关键词：紫锥菊;菊苣酸;萃取率;纯度;单因素中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2022）02-0075-06紫锥菊（Echinacea pupurea（L.）Moench）为菊科紫锥菊属多年生草本植物[1]，主要含咖啡酸衍生物、多糖和糖蛋白及烷酰胺类化合物等[2]。
菊苣酸作为咖啡酸衍生物中重要的、具代表性的化合物[3-4]，广泛应用于药品、营养补充剂和保健食品。
本课题组前期研究发现紫锥菊提取物菊苣酸抗RSV疗效显著，在抗RSV新型候选药物的开发中具有广阔的前景。
为菊苣酸抗RSV制剂生产提供高纯度的原料来源，本实验以紫锥菊醇提物为原料，以菊苣酸的纯度及萃取率为指标，探究菊苣酸的乙酸乙酯萃取工艺，旨在优化出一套环保经济、简便高效适用于工业化的萃取工艺方案。
1 材料与仪器1.1 药材紫锥菊购自青州市康达中药材种植专业合作社（批号：20190630），经山东中医药大学药学院李峰教授鉴定为菊科植物紫锥菊属紫锥菊（Echinacea pupurea（L.）Moench）的干燥地上部分。
紫锥菊中有效成分的分离提取工艺研究
云 南 民族 大 学 学 报 （ 自然科 学版 ）
Ｊｕｎ ｌｏ ｕ ｎｎ Ｕ ｉ ｒｉ ｆＮ ｔ ｎｌｉｓ Ｎ ｔｒ ｃ ｎｅ ｄｔ ｎ ｏｒａ ｆＹ ｎ ａ ｎｖ ｓｙ ｏ ａｉ ａ ｔ （ ａ ａ Ｓ ｉ ｃｓＥ ｉｏ ） ｅ ｔ ｏ ｉｅ ｕｌ ｅ ｉ
（． １ 云南民族大学 化学与生物技术学院， 云南 昆明 ６０ ３ ；． ５ ０ １２ 重庆大学 生物１ 程学院 ， ＝ 重庆 ４０ ４ ； ０ ０４
３ 云 南 省玉 溪 一 中 ， 南 玉 溪 ６３ ０ ） ． 云 ５ １０
摘 要 ：以 国外流行 的草药 紫锥 菊为研 究对 象， 以紫锥 菊 中的 有效成 分 菊苣酸 为 主要 测试标 准 ， 应 用正交设计 实验 对紫锥 菊 中多糖 、 总酚 、 菊苣酸 ３种 有 效成 分进 行提 取 分 离及 含 量 分析 ． 而确 从
Ｚ ＨＡＮＧ Ｇｕ ｎ — ｉ Ｗ ＡＮＧ Ｙａ ｚ ｏ ＹＵ ｎ ～ ｕ Ｗ ＡＮＧ Ｂ — ｈ ａ ｇ ｑｕ ， —ｈ ｕ ， ＡＮ Ｙｏ ｇ ｈ ａ ， ｏｃ ｕ
（ ．ｃｏｌ ｆ ｈ ｍｓ ａｄＢｏ ｃｎｌ ｙ Ｙ ｎ ａ ｎ ｅｓｙｏ Ｎ ｔ ｎｌｉ ， ｕ ｍｎ ５０ ， ｈ ａ １ Ｓｈｏ ｏ Ｃ ｅ ｉ￣ ｎ ｉｅｈｏｏ ， ｕ ｎｎＵ ｉ ｒｔ ｆ ａｉ ａ ｔｓＫ ｎ ｉｇ ０ ３ Ｃ ｉ ； ｔ ｔ ｇ ｖ ｉ ｏ ｉｅ ６ １ ｎ
ｒ ｔｄ ｆ ｍ ｃ ｉ ａ ｅ ｕｐ ｒ ａ ｂ ｈ ｒｈ ｇ ｎ ｌｅ ｐ ｒ ｎ ｔ ｏ ｅ ｐ ｃ ｉｅｙ， ｎ ｈ ｉ ｃ ｎｅ ｔ ｗ ｒ ｎ ｌｚ ｄ ａｅ ｒ Ｅ ｈ ｎ ｃａ ｐ ｒ ｕ ｅ ｙ ｔ ｅ ｏｔ ｏ ｏ ａ ｘ ｅ ｉ ｔ ｏ ｍｅ ｍｅｈ ｄ ｒ ｓ ｅ ｔ ｌ ａ ｄ ｔ ｅｒ ｏ ｔ ｎ ｓ ｅ ｅ ａ ａｙ ｅ ． ｖ
引种紫锥菊有效成分菊苣酸含量研究
紫锥菊植物不同生长期及部位的紫锥菊菊苣酸含量研究常用紫锥菊植物原产于美国和加拿大南部，近几年我国的北京、南京和上海等地也已成功引种栽培。
紫锥菊提取物主要可用于治疗感冒和促进免疫力提高，自九十年代后期以来，紫锥菊提取物及其制剂销售额一直稳居美国医药保健品市场前五名。
本次实验，源森生物实验室以我国北京引种栽培的紫锥菊植物为例，对其不同部位在不同时期的有效成分菊苣酸含量进行研究测定：一、紫锥菊植物样品及有效成分提取紫锥菊植物样品为北京栽培引种自加拿大，于去年7月采收新鲜紫锥菊植物花期前后的地上部分和根、根茎。
紫锥菊植物地上部分自然阴干，根及根茎在60℃以下烘干，分别装袋备用。
将各袋不同生长期、不同药用部位的植物粉碎→用稀乙醇热回流提取→将提取液浓缩回收乙醇→在浓缩液密度约为1. 05时，用稀盐酸调溶液pH<5→除去产生的沉渣→继续浓缩至稠膏→在60℃真空度为0. 08MPa下烘干→即制得紫锥菊提取物供试样品。
二、紫锥菊提取物样品中有效成分菊苣酸的含量测定（一）紫锥菊提取物样品有效成分含量的仪器与试药：LC-10AT高效液相色谱仪；菊苣酸对照品；乙腈为色谱纯；其余试验均为分析纯。
（二）供试溶液的制备：分别精密称取对照品、供试样品适量，用甲醇溶解、定容，供含量测定用。
（三）色谱条件与含量测定：采用InertsilRODS-3色谱柱，以乙腈-甲醇-水-磷酸(10:25:65:0. 1)为流动相，分别注入对照品及样品溶液10μL，在330 nm处记录色谱图，按一点外标法计算含量。
（四）紫锥菊提取物样品中有效成分菊苣酸的测定结果：紫锥菊药用植物主要含咖啡酸衍生物、多糖和糖蛋白及烷酰胺类化合物等。
菊苣酸是咖啡酸衍生物中重要的、具代表性的化合物。
我们选用菊苣酸作为检测药物的标志化合物来衡量紫锥菊植物和提取物的质量标准，对北京地区引种的紫锥菊不同生长期及不同部位菊苣酸含量测定结果见表1。
由表1可知紫锥菊有效成分菊苣酸含量在盛花期前后最高，紫锥菊提取物收率也最高，此时正是紫锥菊植物作为药用的最佳采收期。
紫锥菊根中菊苣酸的提取分离及其分子印迹聚合物的制备
ｃａｆｆｅｉｃ ａｃｉｄ （ Ｂ）
１ 材料与方法
１．１ 试验仪器和试验材料 Ｗａｔｅｒｓ １５２５ ＨＰＬＣ 系统（ 包 括 二 元 高 压 梯 度 泵、自动 进 样 器、 柱 温 箱、２９９８ 二 极 管 阵 列 检 测 器），超声清洗仪（ 宁波新芝生物科技股份有限公 司） ，旋转蒸发器（ 上海亚荣生化仪器厂），冷冻干燥 机（北京松源华兴科技有限公司），ＴＤＬ－６０Ｂ 低速离 心机（上海安亭科学仪器厂），ＩＳＯ－９００１ 电子天平（北 京赛多利斯仪器系统有限公司），ＴＴＬ⁃ＤＣ 型多功能 氮吹仪（ 北京同泰联科技发展有限公司） 。 菊苣 酸 对 照 品， 批 号 ＭＵＳＴ － １６０１０７１０， 购 自 成都曼思特生物科技有限公司中国科学院成都生 物研究所；乙腈、甲醇（ 色谱纯） 均购自德国默克公 司；磷酸、二 甲 基 亚 砜 （ ＤＭＳＯ） 均 为 分 析 纯， 紫 锥 菊根细 粉 （ ８０ 目） ，均 购 自 北 京 绿 源 生 物 有 限 公 司；偶氮二 异 丁 腈 购 自 天 津 市 科 密 欧 化 学 试 剂 有
酸、丁香酸、 阿 魏 酸、 香 草 酸、 咖 啡 奎 尼 酸、 洋 蓟 酸 等［４］ 。 近年来，对菊苣酸的药理 学 研 究 显 示 其 具 有抗炎［５－６］ 、抗病毒［７］ 、抗氧化［８］ 、抗菌［９］ 、抗结肠 癌［１０］ 及缓解记忆减退［１１］ 等功效。 随着对菊苣酸药理学的研究深入，研究者也 在进行菊苣酸提取工艺的深入研究。 目前对紫锥 菊中菊苣酸的提取纯化多应用喷雾提取［１２］ 、高速 逆流色谱［１３］ 及制备色谱［１４］ ，此技术所得化合物纯 度高，但设备和操作的较为繁杂。 近年来，分子印 迹聚合物（ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒ，ＭＩＰ） 由于 其特异 性 识 别 的 性 能 引 起 国 内 外 广 泛 学 者 的 关 注。 ＭＩＰ 的制 备 过 程 分 为 ３ 个 步 骤：首 先 是 由 特 定印迹分子为模板与功能单体通过共价键或非共 价键结合，再加入交联剂在 ＭＩＰ 周围形成刚性聚 合物，最后再将印迹分子洗脱下来。 由此，在聚合 物分子内留下了符合印迹分子结构的立体空穴，
紫锥菊中菊苣酸提取纯化工艺研究
紫锥菊提取物中菊苣酸的提取纯化研究菊苣酸是紫锥菊提取物中极为重要的免疫活性成分之一，具有增强人体免疫力和抗炎作用。
现有的高纯度菊苣酸制备工艺对生产设备要求高、不易放大，且目前只能生产对照品，这在很大程度上限制了紫锥菊提取菊苣酸生产的高效率、低成本化发展。
因此，西安源森生物实验室将紫锥菊中提取纯化菊苣酸成分的工艺作为本次实验主题进行研究：一、源森生物紫锥菊提取菊苣酸准备仪器与材料高效液相色谱仪；L—7420紫外检测器；RE—52A旋转蒸发器；DZ—2BC型真空干燥箱；紫锥菊根→自然干燥→粉碎；菊苣酸对照品；纯度94%;AB-8树脂。
二、源森生物紫锥菊提取纯化菊苣酸的方法与结果（一）HPLC法测定紫锥菊提取物中菊苣酸的含量1. 色谱条件：色谱柱:A lltima C18(250 mm×4. 6mm, 5μm)；流动相:乙腈-1. 8%冰醋酸(25∶75)；体积流量: 1. 0mL /m in；检测波长: 327 nm；柱温: 35℃；进样量: 5μL。
2. 标准曲线的制备：精密称取菊苣酸对照品5. 05mg→置10mL量瓶中→用70%乙醇溶解并加至刻度→精密吸取对照品溶液0. 5、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0、6. 0μL注入液相色谱仪中→测定峰面积。
以菊苣酸质量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，得方程:Y= 401 209X+ 23 809，r= 0. 999 5，线性范围:0. 25～3. 03μg。
3. 供试品溶液的制备：精密称取各提取物、纯化物、萃取物样品适量→置10mL量瓶中→用70%乙醇溶解→超声提取10 m in→加70%乙醇至刻度→过0. 45μm滤膜，即得。
4. 测定：采用外标法进行测定。
（二）紫锥菊植物中提取菊苣酸1. 提取溶剂的选择：从紫锥菊植物中提取菊苣酸一般采取乙醇、甲醇或它们的水溶液。
考虑到试剂价格和工业化生产的可行性，西安源森生物本实验选择乙醇作为提取溶剂。
中药提取设备离心萃取机提取菊科植物紫锥菊中有效成分
中药提取设备离心萃取机提取菊科植物紫锥菊中有效成分紫锥菊提取物主要成份菊苣酸是使用最广泛的药用植物，一般用于感冒，牙疼，毒蛇咬伤和其它外伤。
美国多年以来应用其作为增强免疫系统和清血的替代医药，特别是在季节变化和感冒咳嗽多发季节。
紫锥菊的主要活性成分，多酚，咖啡酸衍生物和多糖有以下功能：1.免疫刺激作用菊糖：通过增加粒细胞与白细胞的数目而发挥作用，提高单核细胞与中性病毒的趋药性而产生溶菌作用。
多糖：T淋巴细胞与巨噬细胞表面的碳氢化合物受体产生免疫刺激作用，能增加巨噬细胞的吞噬能力，并且刺激巨噬细胞增加肿瘤坏死因子、干扰素、白细胞介数的数目，能破坏肿瘤细胞。
烷基胺与咖啡酸衍生物：亲脂性烷基胺能增加巨噬细胞吞噬能力。
紫锥菊：提高非特异性T细胞的活性，产生干扰素，促进淋巴细胞的分泌，减少T-辅助细胞，降低T-辅助细胞与抑制因子比值。
2.组织更新与抗感染作用抑制玻璃酸酶（透明质酸酶），能刺激纤维母细胞的增长与葡萄糖胺酶的合成，产生皮质酮类作用，促进肾上腺皮质激素的分泌。
多糖有抗感染的作用。
3.抗菌作用紫锥菊苷与咖啡酸衍生物有弱抗菌活性。
4. 抗病毒作用能抑制流感，疱疹及起泡病毒，抗病毒活性归功于透明质酸酶的抑制作用，能阻碍细胞表面的病毒受体。
5.毒副反应用量过多肯导致发低烧，敏感人群可能出现皮炎。
紫锥菊药用适用范围：紫锥菊及其提取物用于普通的感染或创伤、感冒或者流感、念珠病毒、念珠菌喉炎、葡萄球菌感染、尿路感染、骨盆炎症（P.I.D）、扁桃体发炎、上呼吸道感染、伤口发炎、牙痛或者口腔感染、蚊虫、动物或蛇叮咬、血液食物中毒、疖子、脓肿、湿疹等等。
改善急、慢性咽炎所致的咽喉肿痛，干燥灼热，声音嘶哑；增强免疫系统，预防流感，缩短伤风感冒，减轻咽喉肿痛、中轻度感染、感冒、咳嗽、流感及其它上呼吸道不适症状。
促进蛋白质合成以及参与合成和免疫有关酶的方面均起重要作用。
润养骨髓、提高免疫。
有效改善复发性口腔溃疡、呼吸道及消化道感染等症状。
2010紫锥菊中有效成分的分离提取工艺研究
收稿日期 : 2009 - 11 - 23. 作者简介 :张广求 (1979 - )男 ,讲师. 主要研究方向 :天然药物研究与开发.
第 2期 张广求 ,王亚洲 ,袁永华 ,等 :紫锥菊中有效成分的分离提取工艺研究
151
酸 3种有效物质进行含量分析 ,从而确定紫锥菊提 取工艺的较佳工艺参数.
Vol. 19 No. 2 M ar. 2010
紫锥菊中有效成分的分离提取工艺研究
张广求 1 ,王亚洲 2 ,袁永华 3 ,王伯初 2
(1. 云南民族大学 化学与生物技术学院 ,云南 昆明 650031; 2. 重庆大学 生物工程学院 ,重庆 400044; 3. 云南省玉溪一中 ,云南 玉溪 653100)
正交实验设计表如表 3.
6
2
3
1
2
7
3
1
3
2
2 实验结果及分析
实验结果如表 4、表 5.
8
3
9
3
表 4 提取物中总酚和菊苣酸含量及正交分析表
实验号 料液比 时间 / h 浓度 / % 温度 / ℃ 总酚含量 / % 料液比 时间 / h
1
1
1
1
1
2190
1
1
2
1
2
2
2
3106
1
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3
1
33Βιβλιοθήκη 331731
3
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1
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3
3151
2
1
5
2
2
Study on the Extraction and Pur if ica tion Process of Effective Com ponen t in E ch inacea P u rpu rea
一种从紫锥菊中提取高纯度菊苣酸的方法[发明专利]
![一种从紫锥菊中提取高纯度菊苣酸的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/f75c78c3ccbff121dc3683e7.png)
专利名称：一种从紫锥菊中提取高纯度菊苣酸的方法专利类型：发明专利
发明人：孙爱玲,柳仁民
申请号：CN200710165206.X
申请日：20071030
公开号：CN101148410A
公开日：
20080326
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种从紫锥菊中提取高纯度菊苣酸的方法，其中包括下述三个步骤：一、乙醇提取：将粉碎好的紫锥菊根，采用浸泡法或超声提取等方法用乙醇提取，分离提取液和药渣；将药渣再用乙醇提取，所得提取液与第一次提取液合并，分离除去其中的固体杂质，备用；二、大孔吸附树脂柱预分离：将上述乙醇提取法所得提取物回收乙醇后加至大孔吸附树脂柱上，分别用不同浓度的乙醇洗脱，乙醇洗脱液回收溶剂后得到提取物；三、高速逆流色谱法纯化：将上述得到的提取物用高速逆流色谱法进行纯化，即得到99％以上高纯度的菊苣酸。
申请人：聊城大学
地址：252059 山东省聊城市湖南路1号聊城大学化学化工学院
国籍：CN
代理机构：济南信达专利事务所有限公司
代理人：姜明
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紫锥菊提取物中菊苣酸的提取纯化研究
菊苣酸是紫锥菊提取物中极为重要的免疫活性成分之一，具有增强人体免疫力和抗炎作用。
现有的高纯度菊苣酸制备工艺对生产设备要求高、不易放大，且目前只能生产对照品，这在很大程度上限制了紫锥菊提取菊苣酸生产的高效率、低成本化发展。
因此，西安源森生物实验室将紫锥菊中提取纯化菊苣酸成分的工艺作为本次实验主题进行研究：
一、源森生物紫锥菊提取菊苣酸准备仪器与材料
高效液相色谱仪；
L—7420紫外检测器；
RE—52A旋转蒸发器；
DZ—2BC型真空干燥箱；
紫锥菊根→自然干燥→粉碎；
菊苣酸对照品；
纯度94%;AB-8树脂。
二、源森生物紫锥菊提取纯化菊苣酸的方法与结果
（一）HPLC法测定紫锥菊提取物中菊苣酸的含量
1. 色谱条件：
色谱柱:A lltima C18(250 mm×4. 6mm, 5μm)；
流动相:乙腈-1. 8%冰醋酸(25∶75)；
体积流量: 1. 0mL /m in；
检测波长: 327 nm；
柱温: 35℃；
进样量: 5μL。
2. 标准曲线的制备：
精密称取菊苣酸对照品5. 05mg→置10mL量瓶中→用70%乙醇溶解并加至刻度→精密吸取对照品溶液0. 5、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0、6. 0μL注入液相色谱仪中→测定峰面积。
以菊苣酸质量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，得方程:Y= 401 209X+ 23 809，r= 0. 999 5，线性范围:0. 25～3. 03μg。
3. 供试品溶液的制备：
精密称取各提取物、纯化物、萃取物样品适量→置10mL量瓶中→用70%乙醇溶解→超声提取10 m in→加70%乙醇至刻度→过0. 45μm滤膜，即得。
4. 测定：
采用外标法进行测定。
（二）紫锥菊植物中提取菊苣酸
1. 提取溶剂的选择：
从紫锥菊植物中提取菊苣酸一般采取乙醇、甲醇或它们的水溶液。
考虑到试剂价格和工业化生产的可行性，西安源森生物本实验选择乙醇作为提取溶剂。
分别称取20g紫锥菊根7份，以10倍质量的0、20%、40%、55%、70%、85%、100%乙醇水溶液在80℃加热回流提取2h→所得滤液蒸干→得紫锥菊提取物，采用HPLC测定紫锥菊提取物中菊苣酸的含量，并计算菊苣酸的得率。
结果见图1：
由以上图1可以看出，随着乙醇体积分数的增加，紫锥菊提取物汇总菊苣酸的得率逐渐升高，当乙醇溶液的体积分数为40%时，菊苣酸的得率达最大。
随后，紫锥菊提取菊苣酸的得率随乙醇体积分数的增加而降低。
这是因为紫锥菊根中含有多酚氧化酶，乙醇能使多酚氧化酶失活，当直接用水提取时，菊苣酸在几分钟之内迅速被氧化，所以用水提菊苣酸得率较低；
而乙醇体积分数的增加可阻止紫锥菊提取物中菊苣酸被氧化，但乙醇的体积分数过高时，紫锥菊药材组织内的菊苣酸在乙醇溶液中的溶解度降低，导致菊苣酸不能被提取出来。
2. 菊苣酸提取条件的优化：
在预试验的基础上，选择提取温度(A)、溶剂用量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)为因素，各取3个水平，以菊苣酸得率为指标，采用L9(34)正交试验优选，结果见表1、2：
由此可见，紫锥菊提取菊苣酸的最佳组合条件为A3B3C2D3：即温度为90℃、溶剂用量为15倍、提取3次、每次2 h。
按照正交试验得到的最优提取条件，进行3次重复试验，紫锥菊提取物中菊苣酸的质量分数为4. 1%，菊苣酸提取得率为1. 12%。
（三）紫锥菊提取物的树脂法纯化：
紫锥菊提取液浓缩至原来的1/10→回收乙醇→作为大孔吸附树脂的工作液。
通过对AB-8、S-8、H103、NKA-9、X-5、D4020、D3520、NKA-2、D4006大孔吸附树脂进行静态吸附试验，发现AB-8树脂对菊苣酸的饱和吸附容量最高，达56.36mg/g湿树脂。
在解吸试验中，AB-8树脂吸附饱和后，依次用水及10%、30%、50%、70%、90%乙醇溶液进行洗脱，收集各部分洗脱液。
HPLC分析结果表明，水及10%乙醇洗脱液中没有菊苣酸洗脱下来，30%、50%乙醇洗脱液中含有菊苣酸，而70%、90%乙醇溶液中不含菊苣酸。
故树脂吸附饱和后，先用水洗脱至无色，再用50%乙醇洗脱，即可得菊苣酸粗品。
在静态吸附研究的基础上，上AB-8树脂玻璃柱(自制，15 cm×2 cm，树脂床体积为30mL)进行动态穿透试验。
上柱液中菊苣酸质量浓度为3. 30mg /mL，以2BV/h连续上柱，自动部分收集流出液，采用HPLC法测定菊苣酸含量，得到AB-8树脂泄漏曲线，见图2：
可见30mL AB-8树脂可处理6BV(180mL)的物料液量而基本不发生泄漏。
此时树脂床共吸附菊苣酸594mg (6×30×3. 30)，湿态AB-8树脂对菊苣酸的工作吸附量(泄漏前吸附量)可达19. 8mg /mL，达到饱和时可处理14BV (420mL)，饱和吸附量可达46. 2mg /mL。
取120mL含菊苣酸3. 0mg /mL水溶液→上装柱体积为30mL的AB-8树脂柱→上柱完成后→用去离子水把树脂柱洗至无色→后用50%乙醇溶液洗脱→自动部分收集器收集洗脱液→采用HPLC法测定菊苣酸含量→得到AB-8树脂的解吸曲线(图3)：
可见用50%乙醇溶液洗脱,当洗脱液体积达到150mL时，即为床体积的5倍时，基本上能把吸附的菊苣酸洗脱完全。
洗脱液用旋转蒸发器浓缩，得到1. 43 g黄色粉末，HPLC测定纯度为24. 22%，洗脱率为96. 21%。
（四）醋酸乙酯的萃取纯化：
取AB-8树脂处理得到的粉末溶于10倍体积水中→用6mol/LHCl调节至pH 3→水溶液分
别用醋酸乙酯、正丁醇、异戊醇进行萃取→醋酸乙酯萃取液直接减压浓缩。
正丁醇、异戊醇因沸点较高，回收有一定的困难，因而萃取液先用5% NaOH调节至pH 6. 5→后加水反萃→分取水层→减压浓缩得粉末。
结果所得
产品中菊苣酸的质量分数分别为69. 28%、32. 52%、46. 30%，因此醋酸乙酯萃取效果最好，得到的产品纯度最高，选用醋酸乙酯进行萃取。
溶液的pH值对醋酸乙酯萃取的影响的结果见表3。
pH为2～3时，紫锥菊提取中的菊苣酸萃取效果较好，萃取率高，产品纯度高。
这是由于当pH≤3时，菊苣酸由原来的菊苣酸盐变为游离态，从而改变了菊苣酸在水相和有机相中的分配率，因此用醋酸乙酯能很好地把它从水相中萃取出来。
而当溶液的pH 3时，用等体积的醋酸乙酯分别萃取1～4次，紫锥菊提取中菊苣酸的萃取率分别为41. 40%、63. 43%、80. 51%、96. 83%。
即醋酸乙酯萃取4次可以基本萃取完全。
（五）紫锥菊提取菊苣酸产品的检测：
经40%乙醇提取、AB-8树脂吸附、50%乙醇洗脱、醋酸乙酯萃取最终得到产品为浅黄色粉末，纯度达69%以上。
三、西安源森生物实验室紫锥菊提取纯化菊苣酸实验结论
由以上实验可以得出紫锥菊提取物中菊苣酸成分的提取纯化最佳工艺为：取一定量的紫锥菊根粉末→用15倍的40%乙醇溶液于90℃下加热回流提取3次→每次为2h→合并滤液→浓缩至原液体积的1/10→回收乙醇→滤过→得到的水溶液以2BV /h的流速上柱床体积(BV)为30mL的AB-8树脂柱→吸附完成后→用去离子水洗至流出液无色→再用50%乙醇溶液洗脱→乙醇洗脱液浓缩蒸干→可得到菊苣酸粗品。
粗品溶于水→用6mol/L盐酸调pH3→,醋酸乙酯萃取4次→萃取液浓缩蒸干即得产品。
因此利用乙醇水溶液提取、AB-8树脂吸附、醋酸乙酯萃取的方法从紫锥菊根中提取纯化菊苣酸是可行的。
该工艺操作简单、方便、成本低、菊苣酸产品纯度高，适合用于工业化生产。
紫锥菊是目前受到国际普遍重视的一种免疫促进剂和免疫调节剂，紫锥菊提取物及其保健品等制剂销售额居美国医药市场销售排名前5名。
因此低成本、高品质菊苣酸的提取纯化工艺的应用具有极大的发展前景和市场空间。