银杏叶中有效成分的提取及性质研究_杨小青

用同样方法可测得各提取液样品的吸光度值，准确吸取样 品溶液 5 mL 置于 10 mL 具塞试管中，空白取蒸馏水 5 mL，以 下操作同标准曲线制作。由对应的吸光度标准曲线查出相应浓 度，并计算提取液样品总黄酮含量。
1. 4 银杏叶中提取物对绿豆幼苗的萌发和生长的性 能的测定
1. 4. 1 种子处理 实验所选绿豆种子购买于汉中佳福购物广场，使用前先将
Abstract： The extiaction technology of flavonoids in Ginkgo leaves of Hanzhong area by the method of organic solvent extra was studied，with ginkgo leaves as the raw material. The effect of the different extraction temperature，extraction concentration，extraction times，ultrasound waves of Ginkgo leaf flavonoid，one of the significant factors affecting the orthogonal experiment to continue was explored. The conditions were the extraction temperature 70 ℃ ，extraction concentration 70% ，extraction times was 3 times as the best extraction condition，and performance of flavonoids played an important role of bean seedlings.
1. 3 实验方法
1. 3. 1 银杏叶总黄酮提取率计算方法
银杏叶总黄酮提取率
=
提取液所含黄酮质量（ 银杏叶的质量（ g）
g）
× 100%
1. 3. 2 影响银杏叶总黄酮提取的主要因素
* 基金项目： 陕西理工 2013 “大学生创新创业训练计划项目” （ UIＲP13046） 。 作者简介： 杨小青，陕西理工学院化学与环境科学学院 2011 级学生。 通讯作者： 唐志华，男，副教授，系主任，研究方向： 无机化学。
2. 6 正交实验结果的测量
由正交试验结果可知，与单因素实验结果一致，说明此方 法可行。
试验号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2 K3
表 2 正交Baidu Nhomakorabea验结果
因素
温度 /℃
乙醇浓度 /%
60
60
60
70
60
80
70
60
70
70
70
80
80
60
80
70
80
80
2. 7919
2 结果与讨论
2. 1 乙醇浓度对浸提效果的影响
采用不同浓度的乙醇溶液提取，液固比为 1∶50，分别用
图 2 提取温度对提取率的影响
2. 3 提取次数对浸提效果的影响
以 70% 的乙醇溶液，于 70 ℃ 条件下浸提 4 h，分别提取 1、2、3 次。结果如图 3 所示，提取率在两次提取率最高。当 乙醇的温度和浓度一定时，随着次数的增大，提取率在一直增 大，但是由直线的斜率可以看出在提取两次时斜率最大，故黄 酮提取率在 两 次 时 提 取 率 最 大，但 是 当 提 取 次 数 增 加 到 一 定 时，提取率基本保持不变。故考虑许多因素，将提取三次作为 最佳提取次数［5］。
2. 5 超声波的功率的影响
超声技术应用于天然活性产物的提取，具有速度快、提取 率高、节省溶剂、节约能耗、不破坏有效成分的特点。王延峰 等研究了银杏叶黄酮的超声提取法［8］，得出了其最佳操作条件 为超声波频率 40 kHz 处理时间 10 min、静置时间 12 h。郭国瑞 等以水为介质，在较低温度下，对银杏叶进行了超声处理提取 黄酮苷［9］。本实验依 照 以 水 为 介 质 采 用 超 声 波 处 理 提 取 黄 铜 ， 结果表明： 超声波能够提高水浸提黄酮效率 （ 其值等于常规水 浸提取效率的 3 倍左右） ，可达到省时、高效、节能的目的。
关键词： 银杏叶； 黄酮； 正交试验； 乙醇； 超声波； 性能
中图分类号： Q946. 91
文献标志码： A
文章编号： 1001 － 9677（ 2014） 014 － 0060 － 03
Effective Components Extraction from Ginkgo Leaves and Ｒesearch of its Quality*
图 1 乙醇浓度对提取率的影响
2. 2 温度对浸提效果的影响
由于乙醇沸点为 78. 4 ℃ ，为了安全和实验设备的简化， 也为工业化生产提供一 条 有 效 的 途 径。故 选 取 常 温、40 ℃ 、 60 ℃ 、70 ℃ 、80 ℃ 五个温度值，分别以 70% 的乙醇溶液浸提 4 h，固液比为 1 ∶50。结果如图 2 所示，当乙醇的浓度一定 时，70 ℃ 时黄酮的提取率最大。温度升高有利于分子扩散、溶 解，而温度过高又会破坏黄酮导致提取率下降。
表 1 芦丁浓度与吸光度的关系
芦丁浓度 C
吸光度 A
0. 0000
0. 003
0. 0100
0. 115
0. 0200
0. 242
0. 0400
0. 455
0. 0600
0. 648
0. 0800
0. 886
乙醇体积分数为 50% ，60% ，70% ，80% ，90% 在 70 ℃ 浸取 4 h［5 － 7］。结果如图 1 所示，在温度一定的条件下，当乙醇的浓 度为 70% 时，总黄酮的提取率最大。乙醇浓度过高或过低都与 黄酮极性不一致，不利于溶出。
试剂： 芦 丁 对 照 品，无 水 乙 醇，丙 酮，乙 醚，乙 醇，NaOH， NaNO2 ，硝酸铝，苯，HCl，无水氯化钙（ 均为分析纯） 。
材料： 银杏叶（ 烘箱中处理 10 h） ； 绿豆，购买于汉中朝阳 路佳福购物广场。
1. 2 实验银杏叶的预处理
采集湿润的自然生长的银杏叶，60 ℃ 下干燥后研磨成小 片，挑选出若干均匀的银杏叶以备实验需要。
YANG Xiao － qing，WANG Xin，LI Ｒui － rui，YUE Yu － fei，GONG Cai － hua，TANG Zhi － hua （ School of Chemical and Environmental Sciences，Shaanxi University of Technology，Shaanxi Hanzhong 723000，China）
第 42 卷第 14 期 2014 年 7 月
广州化工 Guangzhou Chemical Industry
Vol. 42 No. 14 Jul. 2014
银杏叶中有效成分的提取及性质研究*
杨小青，王 新，李瑞瑞，岳宇飞，龚彩华，唐志华
( 陕西理工学院化学与环境科学学院，陕西 汉中 723000)
1 实验部分
1. 1 主要仪器、试剂和材料
仪器： UV － 6 紫外可见分光光度计，上海美谱达仪器有限
公司； FA214 电子天 平，梅 特 勒—托 利 多 仪 器 （ 上 海） 有 限 公 司） ； ＲE2000E 旋 转 蒸 发 器， 上 海 科 升 仪 器 有 限 公 司； KQ500DB 超声波清洗器，上海越众仪器有限公司； YLE － 2000 烘箱，北京科伟永兴有 限 公 司； G70D20CNP － （ S0 ） 20L 微 波 炉，上海新仪微博化学有限科技公司； 玻璃仪器。
摘 要： 以汉中银杏树叶为原料，采用有机溶剂提取法对银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺进行研究，通过单因素实验研
究了不同提取温度，提取液浓度，提取次数，超声波对银杏叶中黄酮提取率的影响，其中对其显著地影响因素采用正交试验作以 继续探究，得到： 在提取温度 70 ℃ ，提取液浓度为 70% ，提取次数为 3 次下为最佳提取条件，并且对黄酮类物质作以性能研究得 到： 黄酮类物质对绿豆幼苗有壮苗作用。
Key words： Ginkgo leaves； flavone； identification experiment； ethanol； ultrasonic； quality
银杏 （ Ginkgo biloba） 为我国的特产植物，又名白果、公 孙树，是裸子植物［1］。银杏的叶、果、树皮均有很高的药用价 值，其中，银杏叶中的黄酮逐渐引起了越来越多研究人员的重 视。在对银杏黄酮的研究中，银杏黄酮的提取最佳提取工艺及 以其性能研究一直以来都是研究的重点。目前，银杏黄酮的提 取方法有很多，但未采用其中的任何一种方法制订统一的全国 性银杏叶黄酮提取物及其制剂行业质量标准。而且银杏叶黄酮 提取工艺的科研与生产缺乏有机结合，存在许多先进方法仍处 于实验室研究阶段［2］。溶剂种类、溶剂浓度、不同料液比、提 取方法、以及 提 取 次 数 等 因 素 都 会 影 响 到 银 杏 黄 酮 的 提 取 效 果。现阶段有以下几种提取方法： ①有机溶剂提取法； ②超声 波辅助提取法； ③微波辅助提取法； ④水提取法本实验主要采 用有机溶剂提取、超声波辅助法来提取［3］。
图 3 提取次数对提取率的影响
2. 4 溶剂种类的影响
将乙醇溶液换成丙酮分别在温度、提取次数，料液比等条 件不同下做一系列对比实验。可得使用丙酮作溶剂所提取出来 的黄酮的提取率为 14. 96% 稍大于乙醇的 12. 25% 。故可得出结
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广州化工
2014 年 7 月
论溶剂的种类对黄酮的提取率影响不大。
将乙醇溶剂换成丙酮溶剂。 1. 3. 4 标准曲线的制备
量取芦丁标准品 0. 051 25 g，用 30% 乙醇定容至 250 mL， 得到 浓 度 为 0. 200 0 mg / mL 的 标 准 溶 液，取 0. 0、0. 5、1. 0、 2. 0、3. 0、4. 0 mL 芦丁标准溶液，分别置于 6 支 10 mL 具塞比 色管中，各管加 5 mL 30% 乙醇，并加入 0. 3 mL 5% 的 NaNO2 溶液，摇匀； 置 5 min 后，加入 0. 3 mL 10% Al（ NO3 ） 3 溶液，摇 匀，6 min 后，再加入 2. 0 mL 1 mol / L NaOH 溶液，混匀，用 30% 乙醇稀释至刻度，10 min 后，在波长 510 nm 处测其吸光 度。得到回归线方程： C = 0. 0967A － 0. 0002，Ｒ2 = 0. 9987，其 数据如表 1 所示。
种子洗干净并用自来水浸泡 24 h，使种子充分吸水，选取颗粒 饱满，大小相 一 的 种 子。 待 种 子 萌 动 后 采 用 含 银 杏 叶 提 取 物 （ 黄酮） 的水溶液继续进行萌发的后续处理［4］。 1. 4. 2 不同浓度的提取液的水溶液对种子生长的影响
用不同浓度的银杏叶提取物的水溶液浸种 2 天，使种子充 分发芽，然后转移至清水中继续生长 2 天，水层的高度约 1 cm 左右。为了方便对幼苗进行营养方面的测量，可将部分充分吸 水的种子直接置于含不同浓度的银杏叶提取物的水溶液的烧杯 中，并用湿布盖住，使其生长 48 h 后，在转移至不含银杏叶提 取物的水溶液的烧杯中，也用湿布盖住，使其生长 48 h。种子 的萌发和幼苗生长均在黑暗条件中进行，并在种子处理结束后 分别测量各个处理一对照组 （ 用自来水代替银杏黄酮的水溶 液） 的干重、鲜重、苗长和总黄酮含量，计算每 100 颗种子的 发芽率，每组均测量三次，取平均值。
第 42 卷第 14 期
杨小青，等： 银杏叶中有效成分的提取及性质研究
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本实验对影响黄酮的提取率的影响因素有： 溶剂的浓度 （ % ） ： 50、60、70、80、90； 提 取 温 度 （ ℃ ） ： 常 温、40、60、 70、80； 提取次数（ 次） ： 1、2、3； 超声波功率的影响。并且 根据影响条件的显著性分别选取乙醇浓度乙醇浓度（ % ） ： 60、 70、80 和浸取温度（ ℃ ） ： 60、70、80 两因素做正交实验，以 确定银杏叶总黄酮提取的最佳条件。 1. 3. 3 溶剂