幽门螺杆菌检测

弥漫性胃癌
萎缩性胃炎
环境因素
宿主因素 感染
胃粘膜肠上皮化生
高CagA+-HP滴度 的H.pylori菌株
肠型早期胃癌
进展期胃癌
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3.HP的毒力作用
取决于 ① 定植能力 ② 菌株的基因型 ③ 细菌的圆球体样型态 ④ 对抗菌药物的敏感性
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第二节 幽门螺杆菌感染的检测
侵入性检测方法
快速尿素酶试验 病理切片染色 培养 黏膜涂片革兰氏染色 基因方法: PCR等
幽门螺杆菌感染的实验诊断
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讲课内容
1 第一节 幽门螺杆菌特点 2 第二节 幽门螺杆菌感染的检测方法 3 第三节 幽门螺杆菌检测方法的临床应用
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第一节 幽门螺杆菌特点
幽门螺杆菌（Helicobacter pylori 简称HP），呈 弧形或S形，有1—2个微小弯曲，属微需氧菌，在pH值 为6—8时繁殖最为活跃，该菌具有丰富的尿素酶，可 分解食物中的尿素产生氨，该菌生长于胃粘液深层， 胃粘膜表面，多在胃窦部以胃小凹、上皮皱褶的内折 及腺腔内为多。
原理与方法
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第三节 幽门螺杆菌检测方法的临床应用
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小结：几种HP检测方法的比较
方法 用途 样本
粪便HP抗 原检测 粪便HP 抗原检测
粪便
快速尿素酶试 组织培养 验
胃粘膜活组织 检查胃粘 中HP 引起的 膜活组织 尿素酶活性化 中的HP
胃或十二指肠 胃或十二
活检组织
指肠活检
组织
银染法
血清抗体检 C-尿素呼 吸试验
检查胃粘膜 组织切片中 的HP
胃或十二指 肠Hale Waihona Puke Baidu检组织
检测血清或 检测HP 的 血浆中HP 感 尿素酶活 染引起的IgG 性
血清或血浆 口服13C尿素
方法
酶免疫法 PH 值变化
设备或 技
要求
实验技师 胃肠专家
结果判 光谱法 定
灵敏度、 94% 特异性 97%
胃镜取材
肉眼观察 81-95. 7% 65. 7-92%
原理与方法
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注：HP的基因分型（HP菌属亚群）及致病性
分布比例 VacA基因 CacA基因
致病性
Ⅰ型
56%
+
+
胃炎、十二指肠溃疡、胃癌
Ⅱ型
16%
-
-
胃炎
中间表达型 28%
+/-
+/-
VacA基因表达空泡毒素87KD CagA基因表达细胞毒素相关蛋白128KD CagA基因仅出现于VacA产生细胞毒效应时，是VacA产 生效果的标志
直接镜检
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（三）细菌培养
1.在胃镜取胃粘膜放在转 运培养基中。
2. 接种于Hp牛脑浸液培 养基，分区划线。
3. 置5-12％CO2培养箱 35-37℃，3-5d形成小的 半透明灰色菌落，有微弱 的溶血环。
诊断Hp最可靠的方法，可 作为验证其他诊断性试验 的“金标准”。 一般用于药敏试验和科研。
培养过程
检测结果受试剂 pH值、取材部 位、组织大小、 细菌量、观察时 间、环境温度等 因素影响
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（二）组织学检查
胃镜检查胃黏膜取材, 直接涂片革兰氏染色， 也可包埋切片，常规HE 染色或银染，直接镜检 观察Hp。
1.免疫组化染色特异性 高。
2.HE染色可同时作病理 诊断；
3.荧光原位杂交（ FISH） 具有较高敏感性
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H. Pylori感染和十二指肠溃疡
H. Pylori感染 D/G细胞功能改变
遗传易感性
↑壁细胞总体增加
B型慢性胃窦炎 ↑ 胃泌素
胃酸分泌量
H. Pylori的迁移
十二指肠粘膜胃上皮化生
十二指肠球炎
十二指肠球溃疡
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H. Pylori感染和胃癌的关系
正常胃粘膜
浅表性胃炎 基因损伤
H. Pylori感染
组织培养
厌氧培养 条件和技 术 肉眼观察
82. 9% 96. 3%
组织切片染 色法 胃肠专家胃 镜取材和判 断经验
显微镜观察
87. 5% 89. 7%
酶免疫法
实验技师 静脉穿刺
光谱法或肉 眼观察 50% 70.4%
气相色谱/ 质谱 气相色谱 质谱仪
质谱法
78.1% 91. 4%
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1.易于操作；可反映全 胃Hp感染状况。
2.检测前一个周内应停 用抗生素、铋剂、质子 泵抑制剂等药。
3.孕妇、哺乳期妇女及 儿童不宜做。
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（二）幽门螺杆菌粪便抗原检测
多采用ELISA双抗体夹 心法，或胶体金试条法。 留取晨粪便，用稀释液 稀释，再加入试条或微 孔板检测。
1.粪便抗原检测灵敏度 高、准确性好，HP死亡 但抗原成分仍保留下来， 故在治疗前后都可用。
非侵入性检测方法
13C-或14C-尿素呼气试验 Hp粪便抗原试验 Hp血清抗体试验
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一、创伤性检查 （一）快速尿素酶试验RUT
试验原理
HP能产生丰富 尿素酶，将尿素 分解、产生2个 分子的氨，使培 养基变为碱性， 酚红呈粉红色。
操作过程
注意事项
活检同时取2块 组织进行检测
（胃窦和胃体各 1块），标本放 置于试剂后观察 颜色变化。
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（四） 聚合酶链反应试验(PCR检测技术)
幽门螺杆菌的尿素酶(A、B、 C、D)基因、16S-rDNA基因、 VacA及CagA基因均已克隆成功， 根据幽门螺杆菌不同的耙基因， 设计不同的引物，从而建立不 同的PCR系统，扩增产物可经 凝胶电泳分析.
1.与细菌培养和组织学染色镜检比较 无明显优越性。 2.现在可收集胃液PCR检测幽门螺杆 菌敏感性高，但可能与口腔和胃内其 它尿素酶阳性菌丛起交叉反应
2.适用于所有年龄和类 型的患者（儿童）。
原理与方法
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（三）幽门螺杆菌血清抗体检测
多采用ELISA双抗原夹 心法，或胶体金试条法。 可快速检测人血清、血 浆或全血中幽门螺杆菌 抗体。
1.检测的抗体是IgG，反 映一段时间内Hp感染情 况，部分试剂盒可同时 检测CagA和VacA抗体。
2.主要适用于流行病学 调查。
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二、非创伤性检查
（一）13C-或14C-尿素呼气试验
原理和过程
特点和注意事项
HP能产生丰富尿素酶，能分解胃 中的尿素，当整粒摄入含同位素 碳-13的尿素胶囊后，碳-13尿素 在尿素酶作用下，分解为氨和碳13—二氧化碳，碳-13—二氧化碳 被小肠上段吸收后，进入血循环， 并随呼气排出，分析呼气中的碳13就可诊断该细菌的存在