植物激素生物测定

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1、水稻幼苗叶鞘伸长“点滴”法
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2、大麦胚乳法
大麦种子吸水萌动后，胚中产生的赤霉素 将胚乳最外的糊粉层中的α -淀粉酶激活。 无胚的大麦半粒种子不能产生赤霉，因此 没有α -淀粉酶活性。它被成功地应用于 赤霉素类物质的测定。
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2、大麦胚乳法
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3、矮生玉米叶鞘法
以赤霉素浓度的对数为横坐标,叶鞘长度的 对数为纵坐标。
赤霉素的生理效应 促进器官的伸长，打破休眼，促进发芽、 开花，对矮生型作物伸长生长，赤霉素效 果尤其明显
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二、赤霉素的生物测定方法
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1、水稻幼苗叶鞘伸长“点滴”法
此法的原理是赤霉素可促进幼嫩植物节间 伸长，在一定的浓度范围内（0.11000mg/L，叶鞘的伸长与赤霉素浓度成正 比。
植物激素的生物测定
植物激素(plant hormones,phytohormones) 是指在植物体内合成的、通常从合成部位 运往作用部位、对植物的生长发育产生显 著调节作用的微量小分子有机质。 植物体内激素的含量甚微，7000～10000株 玉米幼苗顶端只含有1μ g生长素；1kg向日 葵鲜叶中的玉米素(一种细胞分裂素)约为 5～9μ g。
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2、苋红素合成法
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2、苋红素合成法
注意： 1、尾穗苋黄化苗对光十分敏感，整个试 验需在暗室内进行。 2、尾穗苋种子有较长的休眠期，新收获 的种子不能发芽。可放在冰箱中经2-3个 的低温处理后发芽使用。
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3、组织培养鉴定法
经典方法之一。 大豆愈伤组织、烟草茎的髓部、胡萝卜根 韧皮部等都对细胞分裂素有较高敏感性。 此法专一性强，缺点是需时较长。
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第五章：植物激素的生物测定
由于植物体内植物激素含量很少，难以提 取，无法大规模在农业生产上应用。随着 研究的深入，人们合成(或从微生物中提 取)了多种与植物激素有相似生理作用的 物质，称为植物生长调节剂(plant growth regulators)。
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第五章：植物激素的生物测定
五大类植物激素是：生长素类、赤霉素类 （见下图）、细胞分裂素类、脱落酸和乙烯。
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2、小麦胚芽鞘伸长法
生长素具有促进细胞伸长的作用, 将小麦胚 芽鞘伸长部分切成段, 漂浮在溶液麦面上, 一定时间后观察切段的伸长。此法具有较高 的灵敏度, 操作简便, 实验数值偏差小，且 与人工合成生长素也能起反应, 所以特别适 用于伸长生长的机理研究。
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2、小麦胚芽鞘伸长法
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3、绿豆生根法
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1、萝卜子叶增重法
细胞分裂素有促进萝卜子叶增大的效应， 其主要原因是促进了细胞的分裂和扩大。 在一定浓度范围内（激动素为2-25mg/L）， 子叶增重与浓度呈线性关系。
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1、萝Байду номын сангаас子叶增重法
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2、苋红素合成法
原理：尾穗苋（Amaranthus caudatus） 在光照下由幼苗合成一种红色色素-苋红 素（Amaranthin或Betacyanin）。在暗中 发芽的尾穗苋子叶不能合成苋红素，子叶 呈白色。但如供给细胞分裂素和酪氨酸， 暗中萌发的尾穗苋子叶就能合成苋红素。 在激动素浓度为0.01-3mg/L范围内，色素 的量与激动素浓度增加成比例。
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本章重点
生长素的生测方法有哪些; 赤霉素的生测方法有哪些; 细胞分裂素的生测方法有哪些.
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第五章：植物激素的生物测定
植物激素的测定分析采用薄层层析(thin layer chromatography,TLC)、气相色谱 (gas chromatography,GC)、高效液相层 析(high performance liquid chromatography,HPLC)和质谱分析(mass spectrography,MS)等，其原理大都是基 于不同物质在不同介质中有不同的分配系 数。
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三、细胞分裂素的生物测定法
细胞分裂素(cytokinins)是植物体内普遍存 在的一类激素，其生理作用主要是促进细胞 分裂和扩大，延迟叶片衰老。 细胞分裂素生物测定依据： A：细胞分裂，细胞数目增加或组织增重； B：细胞扩大，即体积的增加； C：延迟叶片衰老，即叶绿素的降解延缓； D：诱导素的合成，即苋红素的合成。
燕麦种子在黑暗中萌发,当根达到2mm时,将幼苗固定 在支柱上,使其在水培条件下生长。选择直的幼苗切 去胚芽鞘顶端, 将切下的胚芽鞘尖放在琼脂薄片上, 使其中的生长素扩散到琼脂中。24h 后移开鞘尖, 将琼脂切成1mm3的小块。约3h后将切去尖端的胚芽 鞘（内有第一片叶)再切去4mm尖端(这是因为切去后 还会产生新的顶端), 用镊子轻轻地将第一片叶向上 提一下。将含有生长素的琼脂块轻放在去尖胚芽鞘 的一侧靠近叶片的部位。经过一段时间(90-110min) 进行投影(shadowgraph),测量弯曲角度。在一定浓 度范围内，弯曲度与生长素浓度成直线关系。
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3、组织培养鉴定法
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4、小麦叶片保绿法
离体叶片在黑暗中有自然衰老的趋势，叶 片变黄，用激动素溶液处理离体叶片，则 能延缓衰老，叶绿素的分解比对照慢。因 此，以叶绿素为指标，可鉴定出激动素的 浓度。 除小麦外，苍耳、大麦、萝卜、烟草等叶 片都可供鉴定使用，最好是用快要衰老的 或已成熟的叶片，一般是剪去后放在黑暗 中使其进一步衰老后才可使用。
绿豆生根试验法是基于插条不定根生长的数 量与生长素浓度间的关系而设计的。在一定 的生长素范围内，不定根数量与生长素浓度 成正比。 用标准生长素溶液作对照，就可测出某一类 生长素物质的效价或某一提取液中内源生长 素的浓度。 此法效果灵敏、操作简便。
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3、绿豆生根法
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二、赤霉素的生物测定方法
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第五章：植物激素的生物测定
免疫分析法被用来定性、定量测定各种植物激 素，它是基于动物体对进入其血液的外来物质 的免疫性。抗原通常是蛋白质，植物激素如生 长素不是抗原，但只要把它们化学结合到蛋白 质分子上(如人血清蛋白)，就可转化成抗原分 子，当将此抗原注射到兔子中，几十天后便会 形成对生长素的专一抗体。
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2、棉花外植体脱落法
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五、乙烯的生物测定法
乙烯是一种气体植物激素。 乙烯可抑制黄化豌豆幼苗下胚轴的伸长； 使下胚轴细胞横向扩大，下胚轴短粗；偏 向上生长，从而使下胚轴横向生长。 黄化幼苗对乙烯的这三种反应被称为“三 重反应”
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六、油菜素内酯的生物测定法
油菜素内酯（芸苔素内酯，云大120）是 一种较新的内源植物生长促进剂，属甾醇 类植物激素。 水稻叶片倾角法是目前最灵敏、最专一的 一种测定方法。 其原理是油菜素内酯能增加水稻叶片与叶 鞘之间的夹角，在一定浓度范围内两者呈 线性关系。
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四、脱落酸的生物测定
1、小麦胚芽伸长法 与生长素的测定方法完全相同，只是脱落 酸的作用是抑制小麦胚芽鞘的伸长。与对 照相比，脱落酸处理组的小麦胚芽鞘伸长 少，脱落酸浓度愈高，胚芽鞘的伸长愈少。
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2、棉花外植体脱落法
脱落酸能诱导离区细胞中纤维素酶和果胶 酶的生物合成，从而促进植物离层的形成， 导致器官脱落。叶柄对外源脱落酸很敏感， 在一定的浓度范围内，脱落率与浓度成正 比，脱落时间与脱落酸浓度成反比。
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一、生长素的生物测定方法
生长素的生物测定技术最早是基于生长素 对细胞伸长的促进作用, 所用材料为燕麦 或小麦胚芽鞘、豌豆茎和番茄下胚轴等。 由于生长素也能促进细胞分裂和分化, 所 以又发展出菊芋块根称重法和绿豆根法。
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一、生长素的生物测定方法
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一、生长素的生物测定方法
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1、燕麦弯曲法
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第五章：植物激素的生物测定
生物测定法是通过测定激素作用于植株或 离体器官后所产生的生理生化效应的强度， 从而推算植物激素含量的方法。
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第五章：植物激素的生物测定
植物激素的生物测定法要求有较强的专一 性, 较高的灵敏性和较短的实验周期, 尤 其是对粗提物的未知激素的粗筛, 常可得 到定性定量的相对结果。测定时, 对环境 条件和植物材料都有较严格的要求。