温度对酶活性的影响

5滴 滴
5滴 滴
90~100℃(水浴 ℃ 水浴 水浴)
2、每管各加入脲酶1滴，立即混匀并继续在各指定 温度下保温10分钟，然后将第2管及第3管用流动 的自来水冷却至室温，再放入冰水中泠却。 3、于上述3管内，各加钠氏试剂2滴，混匀后，观察 各管颜色的深浅。
四、实验结果
指出哪一温度对酶的活性最适合。 注意事项 奈斯勒试剂是含有大量汞盐的强碱性溶液， 所以，它是具有腐蚀的剧毒试剂。实验时必须严 格遵守操作规程，谨防中毒。此外，作酶学实验 时所用的玻璃仪器等一切器皿必须洁净，以除去 能抑制酶活性的杂质。因此，用奈斯勒试剂作完 实验后，必须将它所沾污的试管等一切器皿充分 洗涤干净。
植物或微生物体内 存在的酶，其最适温度 在 50℃ 左 右 ， 如 温 度 高 至 80℃ 时 ， 除 极 少 数 酶 外，酶的活性几乎完全 丧失。
脲酶(urease )的最适温度约在45℃左右，此时 很容易将尿素分解成氨，后者能与奈氏（Nessler） 试剂作用生成橙黄色物质。生成的氨愈多，颜色 亦愈深，表示酶的活性愈大。由颜色深浅，可判 断反应进行的程度。
一般在比较低温的范围内（例如0～40℃），温度对酶 蛋白变性的影响不大，故酶的活性随温度的上升而增加， 若超过此温度范围，则由于酶蛋白加速变性，可使酶的活 性急剧下降甚至完全不可逆的丧失其活性（见图）。因此， 每种酶都有它的最适温度(optimum temperature)，在这个 温度下，酶表现出最高的活力。
三、方法和步骤
1、取小试管3支，编号，按下表加入各种试剂并将 各管在指定的温度下预先保温5分钟。
表1.温度对脲酶活性的影响
试 剂 管号 1 0.1%尿素液 尿素液 pH6.6缓冲液 缓冲液
温度
5滴 滴
5滴 滴
0~5℃(水浴 ℃ 水浴 水浴)
2
5滴 滴
5滴 滴40~50℃(水浴 ℃水浴 水浴)3实验十一
温度对酶活性的影响
Exp. 11 Effect of Changes in Temperature on Enzyme Activity
一、实验原理
升高温度能使一切化学反应加速进行，对酶 的催化反应也不例外。 在低温时，酶的催化反应速度一般很低；温 度升高，催化反应速度也随之升高，但酶是蛋白 质，升高温度引起蛋白变性，使酶的活性降低。 所以温度对酶的活性有两种相反的影响，一 方面遵从温度升高可加速化学反应的普遍规律， 一方面又随着温度的升高而使酶蛋白变性的程度 逐渐加大，前者使酶的活性增加，后者可使酶的 活性降低甚至丧失。
五、思考题
1.什么是酶反应的最适温度？ 什么是酶反应的最适温度？ 如何测定一个酶的最适温度? 2.如何测定一个酶的最适温度?它是否是酶的特征性 常数? 常数? 哪些因素对酶的最适温度有影响? 3.哪些因素对酶的最适温度有影响?
NH2 脲酶 C=O + H2O → NH2
Hg NH3 + 2(HgI2.2KI) + NaOH →O< > < >NH2 I+ 4KI + 2H2O + 3NaI Hg 奈氏试剂 碘化双汞铵 橙黄色） （橙黄色）
2NH3 + CO2
二、实验用品
1、材料 脲酶提取液：取黄豆粉6克，加30%乙醇250毫升，振 荡10分钟，过滤，可保存1-2星期。 2、试剂 （1）pH6.6缓冲液 （2）0.1%尿素液 （3）奈斯勒（Nessler）试剂：称取5克碘化钾，溶于5毫升 蒸馏水中，加入饱和氯化汞溶液（100毫升约溶解5.7克氯 化汞），并不断搅拌。直至产生的朱红沉淀不再溶解时， 再加40毫升50%氢氧化钠溶液，稀释至100毫升，混匀，静 置过夜，倾出清液存于棕色瓶中。 3、仪器设备 小试管及试管架、滴管、水浴、温度计