肠道致病菌检测

（四）沙门氏菌的分类地位及定义
1、地位：是肠杆菌科、沙门氏菌属中的细菌 2、定义 是肠杆菌科中形态和培养特征，生化反应及抗 原结构相似，被O1 噬菌体裂解的一群革兰氏阴 性杆菌。
二、生物学特性
（一）、形态与染色： 革兰氏染色阴性，无荚膜，无芽胞，多数有 鞭毛，有动力，短小杆菌。 （二）、培养特性 1 、 需 氧 或 兼 性 厌 氧 ， 最 适 温 度 37℃ ， PH7.2~7.4。
生 化 特 性 甘露醇 － + 鸟氨酸 脱羧酶 -
鲍 氏 菌 宋内氏菌
C D
+ +
＋
葡萄糖+
甘露醇甘露醇+
靛基质-
靛基质+
乳糖-
乳糖+
靛基质-
靛基质+
靛基质-
痢疾志贺 氏菌1、3、 4、5、6、 9、10型
痢疾志 贺氏菌 2、7、 8型
福氏6型， 鲍氏1、2、 3、4、5、 6、8、10、 12、14型
（二）、易引起沙门氏菌中毒的食品 肉、蛋、乳类食品
行业关注：美国两种花生酱含沙门氏菌
(三)、中毒原因
1、食用病畜禽的肉制品食品 2、病畜禽、带菌人和动物使食品受污染 3、用不洁净水外理食品
（四）、临床病状（所致病菌）
1、肠热病：伤寒与副伤寒病，为慢性发热的菌血病。 由伤寒与副伤寒菌引起，潜伏期7~20天 2、急性肠胃类：主要症状：头痛、发热、恶心、呕吐、 腹泻、出冷汗、及全身不适，病程2~3天 3、败血病：高烧、寒战、厌食、局部发炎、由猪霍乱 沙门氏菌等引起
四、微生物检验
（一）、基本步骤（程序） 检样→增菌（前增菌）→分离培养→生化试 验初步鉴定→血清学反应最后鉴定→报告
1、前增菌：用无选择性的培养基使处于濒死状态 的M恢复活力; 2、选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖，基它细菌 变到抑制; 3、选择性平板分离培养：分离出所需的细菌; 4、生化试验：鉴定分离出来的细菌是否符合所检 项目的细菌; 5、血清学鉴定：进一步鉴定。
（一）检验步骤（程序） 检 样 → 样 品 处 理 → 增 菌 培 养 → SS 、 EMB平板分离培养→初步生化鉴定→最后 血清学鉴定→报告
（二）检验操作要点
志贺氏菌在常温中生存的时间较短，应尽快进行 试验。 如24h内不能检验，样品应在冰箱内 长时间不能检验，放在低温冰箱内。
1、增菌培养
第一节 概述
一、食品中常见的肠道致病菌
沙门氏菌 志贺氏菌 大肠艾希氏菌

二、生物学特性
1、形态与染色 均为革兰氏阴性杆菌，中等大小，无芽胞，多数具有周身鞭毛能运动， 志贺氏菌属无鞭毛无动力。 2、培养和生化反应 （1）、需氧或兼性厌氧，菌落中等大小，表面光滑，液体培养基混浊 生长。 （2）、肠道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多能分解乳糖、葡萄 糖产酸或产酸产气。 （3）、可还原硝酸盐为亚硝酸盐。
（四）、抗原结构 主要两种： A、O抗原 B、H抗原 C、表面抗原（K抗原） D、菌毛抗原
2 、O抗原 （1） O抗原的表示方法 共有58种，用字母O和阿拉伯数字标记：O1 、O2 、 O3、 O4 如： 伤寒杆菌： O9 、O12
（2）沙门氏菌的分群及表示方法 用大写字母及相关符号表示： A、B、C、D、E、F ……Z、 O51 ~O63、 O65~ O67
3、H抗原（鞭毛抗原）
耐热性差：60℃15′或酒精处理可破坏 沙门氏H抗原有两种： 第 1 相 ： 特 异 相 ， 用 英 文 小 写 字 母 表 示 a 、 b 、 c……z z1~z55 第2相：非特异相，用阿拉伯数字表示1、2、3……其中也 有用小写字母a、n、x等表示。
4、表面抗原：
沙门氏菌有三种：Vi、M、5抗原、K抗原
5、血清学试验（最后鉴定）
（1）、沙门氏菌诊断血清的种类： 10种组合血清：主要用于伤寒和副伤寒沙门氏菌鉴定 26种组合血清：常见致病菌的定群与分型 57种组合血清：常见定型，初步鉴定A—F群以外的菌 型 144种组合血清：全套装
（2）、血清学检验步骤

抗原准备→ → A—F多价血清检验（判定是否是沙门 氏菌）→ →群特异性抗体血清（如O2、O4、O3、O7、 O8、O9、O10、O11（判定O群别） → →O单因子血 清检查 → →H因子血清检查（分型）→ →报告
(沙门氏菌（红色）侵入人体细胞
2、对营养要求不高，在普通培养基生长良好， 37 ℃，24h，能形成菌落中等大小，直径2～ 3mm，圆形或卵形，表面光滑湿润，无色半透明， 边缘整齐的菌落 3、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长，无菌膜。
（三）、生化特性 1、发酵GLU，甘露醇，山梨醇产酸产气（伤寒鸡伤寒沙 门氏菌少数不产气） 2、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇 3、多数产生H2S（+），不产靛基质（-），不分解尿素 （-），不产生乙酰甲基甲醇（V—P）（-）， 4、能还原硝酸盐为亚硝酸盐（+） 5、在KCN培养基中生长（-），苯丙氨酸脱氨酸（-）
（3）属外抗原关系： 志贺氏菌与艾希氏菌属的O抗原关系非 常密切，除A群9型和D群宋氏菌与埃氏希菌 的O抗原关系未见报道外，每一个型都与一 定的艾希氏菌的O抗原有关。
4、K抗原对O抗原血清学试验的影响
可阻碍O抗原的血清学凝集试验，煮沸处 理即可。
（五）志贺氏菌的抵抗力

志贺氏菌属在外界环境中的生存力，以宋内氏最强，福氏菌次之，志贺氏 菌最弱。 一般在潮湿土壤中能存活34天，37℃水中存活20天，在粪便内（室 温）存活11天。日光直接照射30分钟，56-60℃10分即被杀死，对高温和 化学消毒剂很敏感，1%石炭酸中15-30分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、 链霉素敏感，但易产生耐药性。
（2）其余四项生化实验
靛基质 PH7.2尿素酶 KCN 赖氨酸脱羧酶
反应序号：A1、A2多见，B1少见
（3）、典型沙门氏菌的五项生化反应及其检验的利用
A、典型五项生化反应：A1 H2S（+） 靛基质（-） PH7.2尿素酶（-） KCN（-） 赖氨酸脱羧E（+）
B、利用五项生化反应鉴定沙门氏菌的最简单方案
（三）、生化反应
1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌 外，均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性， 不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。
（四）、抗原结构
1、抗原构成： O抗原： 群特异性抗原：A、B、C、D K抗原：除B群外，一般有K抗原
不发酵乳糖的肠道菌，可能就是志 贺氏菌
SS平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar)
是沙门氏菌。有黑色中心。 如果没有黑色中心，就很可能 是志贺氏菌了
大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌
麦康凯琼脂平板
EMB平板照片及原理
3、初步生化鉴定
从平板上挑取3—4个可疑菌落，接种于TSI和葡 萄糖半固体培养基各一管，36℃， 18—24h，
五、检验结果的报告
1、凡血清学鉴定与生化反应均符合者，报告发 现沙门氏菌。 经检验，×××食品发现有沙门氏菌 2、凡血清学鉴定与生化反应均不符合者，报告 未发现沙门氏菌。
一、生物学特性 （一）、形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛
第三节、志贺氏菌的检验
2~3um*0.5~0.7um
Vi抗原位于菌体的最表层，包围了O抗原，可阻碍O抗原的血清学凝集试 验。破坏Vi抗原：60℃ 30′，100 ℃ 5′ 含有Vi 抗原的沙门氏菌： 伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌
三、沙门氏菌食物中毒 （一）、引起食物中毒最常见的沙门氏菌：
鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌
DHL上的Leabharlann Baidu落
BS上的菌落
SS上的菌落
3、五项生化试验
H2S、靛基质 、 PH7.2尿素酶、KCN 、 赖 氨酸脱羧酶
（1）三糖铁培养的培养
典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征： 表面（-）粉红色、底层（+）黄色、 H2S （+）底层有黑色、有动力。 在TSI培养基中：表面（+）黄色、 H2S （-）的培养物可排除，其它培养物 均有可能是沙门氏菌。
（二）、所致病疾 1、伤寒和副伤寒 2、食物中毒 3、细菌性痢疾
五、微生物检验的基本程序
检样→处理→增菌培养→分离培养→生 化试验→血清学鉴定→报告
第二节、沙门氏菌检验
一、概况 （一）沙门氏菌的发现与食物中毒 （二）沙门氏菌的命名 根据所致疾病命名 根据菌的发现地区命名 以发现者的名字命名 （三）沙门氏菌的抵抗力 60 ℃ 30′可杀死
二、志贺氏菌的致病性与食物中毒
（一）流行病学
传染源 食物、病人、粪便、苍蝇等
（二）志贺氏菌的致病性
致病因素： 侵袭力、菌体内毒素、外毒素
（二）临床症状
A、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。
三、微生物检验
（二）、检验操作关键点
1、增菌：使待检菌复壮，抑制杂菌生长，提高检出率。 前增菌：用于加工过的食品，37℃，4~8h 或18~24h，长有杂菌。 增菌培养基：增菌液一般用MM和SC两种，如可能是伤寒沙门氏菌用 TTB，用42℃培养。
2、平板分离
选择性培养基：BS、DHL、HE、WS、SS BS中最好，DHL、HE、WS很好，SS最差 一般要用：BS和WS/SS两个平板，BS主要用于 伤寒沙门氏菌的分离
三、抗原类型
O抗原 也称菌体抗原，细胞壁脂肪糖，耐热100℃不被破 坏
H抗原 K抗原
也称鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐热，60℃ 30′可 破坏 也称表面抗原（荚膜抗原），多糖，具有阻抑O抗 原发生凝集的现象，加热60℃30′可消除抑阻作 用
菌毛抗原
四、 致病性
（一）、致病物质 1、内毒素：能引起机体发热，白细胞减少，低血糖，血压 降低，严重者休克。 2、外毒素：对小肠粘膜细胞具有物殊毒害作用，引起腹泻。
培养基：GN增菌液 在36±1℃ 6—8h，当培养液出现 轻微混浊即中止培养。
2、分离培养
强选择性平板：SS或HE、WS 弱选择性平板：EMB或麦康数 在工作中36±1℃培养 18—24h， 菌落特征：无色透明，中等大小，光滑圆形菌落。

发酵乳糖的某种肠杆菌
HE平板原理及反应
不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生 硫化氢，可能是沙门氏菌
福氏痢疾菌 （1、2、3、4、 5型）鲍氏5、 宋氏志 7、9、11、13、 贺氏菌 15型
3、属内外抗原关系
（1）群内抗原关系： A群：2与10型，具有密切关系 C群：1与4和11型，10与11相关 B群：群抗原是B群各型之间的共同抗原 （2）群间抗原关系： C群17型与A群3型相关 C群18型与A群11型相关
a、对于H2S阳性菌，利用五项生化反应试验可判别沙门 氏菌和柠檬酸杆菌。 b、对于H2S阴性菌，查到B1时即： H2S（-） 靛基质（-） PH7.2尿素酶（-） KCN（-） 赖氨 酸脱羧E（+），补做ONPE试验，可判定沙门氏菌属和 埃希氏菌属（ONPE（-）为沙门氏菌，ONPE（+）大 肠艾希氏菌
（3）沙门氏菌中的主要菌群及其群特异性抗原 A群----O2 B群----O4 C群----O6 C1群----O7、 C2群---- O6 O8 、 C3群----O8 、 C4群----O6 O7 O14 D群----O9 F群----O11 E群----O3 E2群----O3、 O10族 E3群----O3、 O15 E4群----O1 、O3 、O19
（二）、培养特性
1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2~7.4 2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑 湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落 3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平， 在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。 4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
2、志贺氏菌的分群与血清型
志贺氏菌分为四群： A群（痢疾志贺氏菌）：1~10型 B群（福氏志贺氏菌）：1~6型+X、Y两个变 种， C群（鲍氏志贺氏菌 ）：1~15型 D群（宋内氏志贺氏菌） ：1个型
志贺氏菌属抗原的分类
菌 名 群 志贺氏菌 福 氏 菌 A B
血 清 分 类 型 1 ～ 10 1～6 1a、1b、2a、 x、y变种 2b、3a、3b 3c、4a、4b 1 ～ 15 1 亚 型