紫外可见分光光度计
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程一、仪器准备1.打开紫外可见分光光度计，等待它进行自检。
2.检查仪器是否正常，包括光源、检测器、单色器等。
如有故障，请及时修复或更换。
3.将样品室清洁干净，并检查透射池是否干净。
如有污染，请用纯水和无尘纸擦拭。
二、仪器校准1.对紫外可见分光光度计进行校准。
校准包括零点校准和波长校准。
2.零点校准：使用纯溶剂（例如纯水或纯乙醇）进行零点校准。
在选定的波长下，将溶剂放入透射池中，点击“零点校准”按钮进行校准。
3.波长校准：使用已知浓度且吸收峰位清晰的标准品进行波长校准。
在选定的波长下，将标准品放入透射池中，点击“波长校准”按钮进行校准。
三、样品测试1.取出已经准备好的样品，在样品室中放入透射池。
2.选择合适的波长范围和波长值。
根据样品的吸收峰位和浓度范围，选择一个适当的波长范围。
四、测量样品吸光度1.点击“开始”按钮进行测量。
仪器将在选定的波长下自动扫描，显示吸光度曲线。
2.观察吸光度曲线，确定样品的吸收峰位和吸光度值。
五、数据处理和结果记录1.根据吸光度曲线，确定样品的吸光度值。
可以选择峰值吸光度或在特定波长下的吸光度值。
2.如果需要，可以进行数据处理，例如计算吸光度差、构建标准曲线等。
3.记录测量结果，包括样品名称、浓度、波长范围、吸光度值等信息。
六、仪器维护1.测量完毕后，及时清洁透射池和样品室，避免样品残留。
2.关闭紫外可见分光光度计，并将仪器盖上，以防尘埃进入。
3.定期维护仪器，例如清洁光源、调整灯泡亮度等。
七、注意事项1.在操作过程中，避免直接接触光源和检测器，以免引起损坏。
2.使用纯净溶剂进行校准，避免杂质对测量结果的影响。
3.在进行波长校准时，选择已知浓度且吸收峰位清晰的标准品，以确保测量结果的准确性。
4.在清洁透射池时，使用纯净水和无尘纸进行擦拭，避免使用有机溶剂和粗糙材质。
5.操作过程中避免碰撞和震动仪器，以免影响测量结果。
6.长时间不使用时，及时关闭仪器，以延长仪器寿命。
紫外可见光分光光度计原理
紫外可见光分光光度计原理紫外可见光分光光度计是一种常见的光谱分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境、材料等领域。
它的工作原理基于光的吸收与发射现象，通过测量样品对不同波长光的吸收或发射强度，来分析样品的组成、浓度等信息。
紫外可见光分光光度计的基本结构包括光源、光栅、样品室、光电二极管和检测器等。
光源是产生连续谱的装置，常用的有氘灯和钨灯。
光栅是分光光度计的核心部件，它可以将入射的连续谱光分散成不同波长的光线。
样品室是放置待测样品的容器，通常使用石英或玻璃材料制成，以透过紫外和可见光。
光电二极管是将光信号转换为电信号的装置，通过测量电信号的强度来得到样品的光吸收或发射强度。
检测器是转换电信号为可视信号的装置，通常使用电子放大器和计数器。
在使用紫外可见光分光光度计时，首先要进行仪器的校准和调试。
校准是为了确保仪器的准确性和可靠性，常用标准溶液进行校准，例如使用已知浓度的溶液来测量吸光度，然后根据光的强度与浓度之间的关系建立标准曲线。
调试是为了优化仪器的工作状态，例如调节光源的亮度、选择合适的光栅和检测器等。
在实际测量中，样品溶液被放置在样品室中，光通过样品时会与样品中的分子发生相互作用，部分光被样品吸收，部分光通过样品。
根据琴斯定律，溶液中溶质的吸光度与溶液的浓度成正比。
因此，测量样品吸光度的变化可以间接地得到样品中溶质的浓度信息。
紫外可见光分光光度计通常可以测量200-800nm范围内的光谱。
在紫外区域，通常用来测量具有紫外吸收特性的样品，例如有机化合物、药物、蛋白质等。
在可见区域，通常用来测量具有可见光吸收特性的样品，例如金属离子、染料等。
除了吸收光谱，紫外可见光分光光度计还可以测量样品的发射光谱。
当样品处于激发态时，部分激发态的分子会向基态跃迁，并发射出特定波长的光。
通过测量样品发射光的强度和波长，可以得到样品的发射光谱信息。
紫外可见光分光光度计利用光的吸收和发射现象，通过测量样品对不同波长光的吸收或发射强度，来分析样品的组成、浓度等信息。
紫外可见分光光度计的作用
紫外可见分光光度计的作用紫外可见分光光度计是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的实验仪器，它的作用十分重要。
本文将从多个角度来探讨紫外可见分光光度计的作用。
一、测定物质的吸光度紫外可见分光光度计主要用于测定物质的吸光度。
通过测量物质在紫外和可见光波段的吸收情况，可以得到物质在不同波长下的吸光度谱。
这对于研究物质的结构、浓度、反应动力学等都具有重要意义。
例如，可以通过测定DNA或蛋白质样品在不同波长下的吸光度，来研究其浓度、纯度以及构象的变化。
二、定量分析物质浓度紫外可见分光光度计可以利用比尔－朗伯定律，根据样品溶液的吸光度与溶液中物质的摩尔浓度之间的线性关系，来定量分析物质的浓度。
这种方法被广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。
例如，可以利用紫外可见分光光度计测定水中重金属离子的浓度，从而判断水质的安全性。
三、反应动力学研究紫外可见分光光度计在反应动力学研究中也发挥着重要作用。
通过监测反应体系吸光度的变化，可以研究反应的速率、反应机理等。
例如，可以利用紫外可见分光光度计测定酶催化反应体系中底物浓度的变化，来研究酶的催化机制。
四、质量控制和质量保证紫外可见分光光度计在药物生产、食品加工等领域中，被广泛应用于质量控制和质量保证。
通过测定样品的吸光度，可以判断样品的成分是否符合要求，从而保证产品的质量。
例如，药品生产中可以利用紫外可见分光光度计测定药物样品中的杂质含量，确保药品的安全性和有效性。
五、教学和科研紫外可见分光光度计在教学和科研中也扮演着重要角色。
它是化学、生物等专业学生进行实验的常用仪器，通过实验操作可以帮助学生更好地理解光谱学原理和测量方法。
同时，紫外可见分光光度计也是科研人员进行实验研究的重要工具，为他们提供了可靠的数据支持。
紫外可见分光光度计在化学、生物、医药等领域中具有广泛的应用。
它可以用于测定物质的吸光度、定量分析物质浓度、研究反应动力学、质量控制和质量保证，同时也在教学和科研中发挥着重要作用。
紫外可见分光光度计范围
紫外可见分光光度计范围紫外可见分光光度计是一种常用的光谱分析仪器，用于测量物质在紫外可见光波段的吸收和透过性质。
它能够提供物质吸收光谱的信息，帮助我们了解物质的组成和结构。
本文将介绍紫外可见分光光度计的基本原理、应用范围以及其在科学研究和工业生产中的重要意义。
一、紫外可见分光光度计的基本原理紫外可见分光光度计的基本原理是利用物质对特定波长光的吸收和透过性质来测量其浓度或含量。
它通过光源产生的连续光束，经过样品后，被光电传感器接收并转换为电信号。
根据样品的吸收特性，我们可以得到样品的吸光度，从而推算出其浓度或含量。
二、紫外可见分光光度计的应用范围紫外可见分光光度计广泛应用于医药、化学、生物、环境科学等领域。
它可以用于测定药品的纯度和含量，监测水质和空气质量，分析生物样品中的成分等。
以下是几个具体的应用范例：1.药物分析：紫外可见分光光度计可用于测定药物的纯度、含量和稳定性。
通过测量药物在特定波长下的吸收光谱，我们可以判断药物的质量，并及时调整生产工艺，确保药品的安全性和有效性。
2.环境监测：紫外可见分光光度计可用于监测水体和大气中的污染物含量。
例如，我们可以通过测量水体中溶解有机物的吸光度来评估水质状况，或者通过测量大气中气体的吸光度来监测空气污染物的浓度。
3.生物分析：紫外可见分光光度计可用于测定生物样品中的蛋白质、核酸和其他生物分子的浓度。
通过测量这些分子在紫外可见光波段的吸收光谱，我们可以了解其结构和功能，并进一步研究生物过程和疾病机制。
4.食品安全：紫外可见分光光度计可用于检测食品中的添加剂、污染物和有害物质。
例如，我们可以通过测量食品中色素的吸光度来判断其是否合格，或者通过测量食品中残留农药的吸光度来评估其安全性。
三、紫外可见分光光度计的重要意义紫外可见分光光度计在科学研究和工业生产中具有重要的意义。
它不仅为我们提供了分析物质的工具，还为我们研究物质的性质和反应机制提供了重要的信息。
以下是紫外可见分光光度计的几个重要意义：1.质量控制：紫外可见分光光度计可以用于药品、食品、化妆品等产品的质量控制。
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程
《紫外可见分光光度计操作规程》
一、工作准备
1. 开机前检查：清洁光栅、检查光源和探测器是否正常。
2. 准备标准溶液：根据实验需要准备好待测溶液和标准溶液并进行标定。
3. 准备样品：将待测溶液转移至透明的玻璃试管或石英比色皿中。
二、仪器调节
1. 打开光度计：按照仪器说明书操作，打开光度计，等待仪器预热。
2. 调节参比通道：选择适当的参比波长，并将参比通道调至零点。
3. 调节样品通道：选择待测波长，并将样品通道调至零点。
三、测量操作
1. 测量样品：将待测溶液装入样品比色皿中，放入光度计样品槽内。
2. 执行测量：按照操作说明，进行测量并记录数据。
3. 清洗仪器：测量完成后，及时清洗样品比色皿和样品槽。
四、数据处理
1. 计算浓度：根据测量数据和标定曲线，计算样品的浓度。
2. 记录结果：将浓度及测量数据记录在实验记录表中。
五、仪器关闭
1. 关闭光度计：根据操作说明，正确关闭光度计。
2. 清洁仪器：清洁光度计表面和槽口，保持仪器干净整洁。
通过以上操作规程，能够正确、准确地操作紫外可见分光光度计，为实验数据的获取和分析提供可靠的支持。
同时，也能够保护和延长仪器的使用寿命。
紫外可见分光光度计的用途
紫外可见分光光度计的用途紫外可见分光光度计，听起来有点高大上对吧？其实它可不是那么神秘，咱们可以把它想象成一个超级聪明的侦探。
它的工作就是分析那些看不见的光，帮我们识别各种物质的特性。
就像一位耐心的老师，透过不同的光波，教我们认识身边的化学朋友和它们的秘密。
这个小家伙在化学实验室里可是个明星，很多实验室都少不了它的身影。
你想啊，做实验的时候，往往需要知道一些物质的浓度。
要是浓度不对，实验结果就像泡沫一样，轻轻一碰就破了。
而紫外可见分光光度计的用处就在这里，它可以帮我们快速测量样品的浓度，真是解铃还须系铃人。
只要把样品放进它的“肚子里”，然后一按按钮，数据就出来了，省时省力，还不用像过山车一样东奔西跑。
说到它的应用，不得不提到生物领域。
很多科学家都喜欢用它来研究DNA、蛋白质这些神秘的生命分子。
要知道，DNA就像个千年老妖，藏着很多秘密，光靠肉眼是看不见的。
紫外可见分光光度计一上场，立马把这些秘密都照得透透的。
科学家们通过测量吸光度，能判断出分子的浓度、纯度，甚至还可以预测它们的行为，简直就像超能力一样。
再来聊聊环境监测。
大家都知道，污染问题越来越严重，水质、空气质量都受到关注。
紫外可见分光光度计在这方面也大显身手。
用它来检测水中的重金属、农药残留，简直就是环保卫士。
科学家们可以很快地知道水质是否达标，是否安全，确保我们的生活环境没有隐患。
想象一下，如果没有它，咱们喝水时可得小心翼翼，生怕喝下去的水里藏着“狼”，可就不太妙了。
在食品行业，紫外可见分光光度计也在大展身手。
食品的安全性越来越受到重视，大家都希望能吃到健康的食品。
通过使用这个仪器，可以快速检测食品中的色素、添加剂等成分。
比如说，咱们最爱的果汁，里面的维生素C含量如何？这下就有答案了。
有了这个工具，生产厂家也能确保自己生产的食品是合格的，消费者吃得也放心，不会像猫吃鱼一样心虚。
紫外可见分光光度计的应用不止这些。
制药行业也离不开它的帮忙，药品的研发、质量控制都需要依靠这个“光明使者”。
紫外可见分光光度计范围
紫外可见分光光度计范围紫外可见分光光度计是一种常见的实验仪器，广泛应用于生化分析、环境监测、医学研究等领域。
它能够测量样品在紫外和可见光波段的吸光度，通过测量吸光度的变化，可以得到样品的浓度、反应动力学等重要信息。
紫外可见分光光度计的工作原理是基于光的吸收现象，下面我们来详细了解一下它的工作原理和应用范围。
紫外可见分光光度计的工作原理是基于比尔-朗伯定律，即吸光度与溶液中物质的浓度成正比。
当光通过样品时，样品中的物质会吸收一部分光，剩下的光通过样品溶液。
光度计会测量通过的光的强度，通过计算吸光度与浓度的关系，可以得到样品中物质的浓度。
紫外可见分光光度计的主要组成部分包括光源、样品室、光栅和光电传感器等。
紫外可见分光光度计的应用范围非常广泛。
在生化分析中，紫外可见分光光度计可以用于测量蛋白质、核酸、糖类等生物大分子的浓度。
通过测量吸光度的变化，可以得到样品中生物大分子的浓度，从而实现对生物大分子的定量分析。
在环境监测中，紫外可见分光光度计可以用于测量水中的污染物浓度。
通过测量水样的吸光度，可以判断水中是否含有有害物质，并对水质进行评估。
在医学研究中，紫外可见分光光度计可以用于测量药物的浓度。
通过测量药物的吸光度，可以监控药物在体内的代谢过程，从而指导药物的使用。
除了测量样品的浓度，紫外可见分光光度计还可以用于研究样品的光学性质。
在材料科学中，紫外可见分光光度计可以用于研究材料的光学吸收、反射和透射等性质。
通过测量材料在不同波长下的吸光度，可以得到材料的光学带隙、能带结构等重要参数。
在化学反应动力学研究中，紫外可见分光光度计可以用于测量化学反应的速率。
通过测量反应物或产物的吸光度随时间的变化，可以得到反应的速率常数和反应级数等信息。
总结一下，紫外可见分光光度计是一种常见的实验仪器，广泛应用于生化分析、环境监测、医学研究等领域。
它通过测量样品在紫外和可见光波段的吸光度，可以得到样品的浓度、反应动力学等重要信息。
紫外可见分光光度计的作用
紫外可见分光光度计的作用一、什么是紫外可见分光光度计？分光光度计是一种用于测量物质对光的吸收或透射性能的仪器。
其中，紫外可见分光光度计是应用于紫外光和可见光波段范围内的分光光度计。
它可以测量物质在不同波长下的吸收光强，从而得到吸收光谱和透射光谱，进一步分析样品的特性和成分。
二、紫外可见分光光度计的原理紫外可见分光光度计的原理基于比尔-朗伯定律。
根据这个定律，物质溶液中所吸收的光强与物质浓度成正比，也与光程和物质的摩尔吸光度相关。
通过调节不同波长的入射光，获得样品在不同波长下的吸光度值，可以得到样品吸收光谱。
三、紫外可见分光光度计的工作原理紫外可见分光光度计由光源、光栅、样品室、检测器和计算机组成。
具体工作原理如下：1. 光源光源产生连续的光谱，通常使用氘灯或钨灯作为光源。
紫外光区域使用氘灯，可见光区域使用钨灯。
2. 光栅光栅是紫外可见分光光度计的核心部件，它可以分散光线，使不同波长的光分开。
具体来说，光线经过光栅后，会被分成不同颜色的光，形成连续的光谱。
3. 样品室样品室用于放置待测样品。
样品室透光窗口的材料可以根据不同实验需要选择，例如石英或玻璃。
通过调节样品室中的路径长度，可以改变样品对光的吸收程度。
4. 检测器检测器接收样品室中透射或反射的光，并将光信号转换为电信号。
常用的检测器包括光电二极管（photodiode）和光电倍增管（photomultiplier tube）。
5. 计算机计算机用于控制光源、记录检测器输出和进行数据处理。
通过计算机软件，可以实时显示吸收光谱，并进行数据分析和处理。
四、紫外可见分光光度计的应用紫外可见分光光度计具有广泛的应用范围，以下列举了几个常见的应用领域：1. 生物化学和分子生物学在生物化学和分子生物学中，紫外可见分光光度计可以用于测量DNA和蛋白质的浓度。
通过测量样品在260纳米波长处的吸收光强，可以确定DNA的浓度。
同时，通过测量样品在280纳米波长处的吸收光强，可以确定蛋白质的浓度。
紫外可见分光光度计范围
紫外可见分光光度计范围紫外可见分光光度计是一种常用的实验室仪器，用于测量物质在紫外和可见光区域的吸收和透射能力。
它可以帮助科学家和研究人员分析和确定物质的结构、浓度和反应性质。
本文将介绍紫外可见分光光度计的原理、应用范围和使用注意事项。
一、原理紫外可见分光光度计基于物质对不同波长光的吸收能力不同的原理。
当物质受到光的照射时，会吸收特定波长的光，使其能级发生跃迁。
通过测量物质对光的吸收程度，可以得到物质的吸收光谱。
紫外可见分光光度计利用光源发出连续的光，经过样品后，光会被检测器检测到，产生一个光谱图。
根据光谱图上的吸收峰值的强度和波长，可以推断出物质的浓度和化学结构。
二、应用范围紫外可见分光光度计广泛应用于各个领域的科研和实验室工作中。
以下是一些常见的应用范围：1. 化学分析：紫外可见分光光度计可以用于测定溶液中金属离子、有机物和其他化合物的浓度。
通过测量吸收峰值的强度，可以快速准确地确定样品中物质的含量。
2. 生物医学研究：紫外可见分光光度计可以用于测量DNA、蛋白质和其他生物大分子的浓度和纯度。
这对于研究细胞生物学、遗传学和药物研发等领域非常重要。
3. 环境监测：紫外可见分光光度计可以用于监测水和大气中的污染物。
通过测量样品中污染物的吸收能力，可以评估环境质量并制定相应的污染治理措施。
4. 食品安全：紫外可见分光光度计可以用于检测食品中的添加剂、农药残留和重金属等有害物质。
这对于保障食品安全和消费者健康非常重要。
三、使用注意事项在使用紫外可见分光光度计时，需要注意以下事项：1. 样品处理：样品应根据实验要求进行适当的处理，如稀释、过滤和提取等。
这样可以确保测量结果的准确性和可靠性。
2. 光程选择：光程是光通过样品的距离，通常使用1 cm的光程。
如果样品浓度较低，可以选择更长的光程以增加吸光度。
3. 波长选择：根据实验需求选择合适的波长范围进行测量。
紫外光谱通常在200-400 nm范围内进行，可见光谱通常在400-800 nm范围内进行。
紫外-可见分光光度计
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玻璃可吸收紫外光，玻璃棱镜只能用于350 ~ 3200 nm的 波长范围，即只能用于可见光域内。 石英棱镜可使用的波长范围较宽，可从185 ~ 4000nm， 即可用于紫外、可见和近红外三 个光域。
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光栅是利用光的衍射与干涉作用制成的，可用于紫外、 可见及红外光域 在整个波长区具有良好的、几乎均匀一致的分辨能力。 具有色散波长范围宽、分辨本领高、成本低、便于保存 和易于制备等优点。 缺点： 各级光谱会重叠而产生干扰。
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特点： 可测多组份试样、混浊试样、而且可作成导数光谱、 不需参比液(消除了由于参比池的不同和制备空白溶液 等产生的误差)。 克服了电源不稳而产生的误差，灵敏度高。
缺点：
仪器需要装备两个单色器，价格较高，体积较大。
用微机装备的单波长仪器能实现上述双波长仪器的功能。
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双波长光度计光路示意图
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光电管：紫外-可见分光光度计上应用较为广泛。
光电倍增管：检测微弱光最常用的光电元件
特点：灵敏度比一般的光电管要高200倍，因此可使 用较窄的单色器狭缝，对光谱的精细结构有较好的 分辨能力。
缺点：强光照射会引起不可逆损害，不适用于检测
高能量。
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（五）信号指示系统 作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。 常用的信号指示装置有直读检流计、电位调节指零装置 以及数字显示或自动记录装置等。 很多型号的分光光度计装配有微处理机，一方面可对分 光光度计进行操作控制，另一方面可进行数据处理。
①入射狭缝：光源的光由此进入单色器 狭缝在决定单色器性能上起重要作用。狭缝的大小直接 影响单色光纯度，但过小的狭缝又会减弱光强。 ②准直装置：透镜或反射镜，使入射光成为平行光束
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紫外-可见分光光度计工作原理
紫外-可见分光光度计工作原理
紫外-可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是一种用
于测量物质吸光度的仪器。
它的工作原理基于比尔-朗伯定律，即吸光度与溶液中物质浓度之间的线性关系。
下面是紫外-可见分光光度计的工作原理：
1. 光源：紫外-可见分光光度计使用可见光或紫外光作为光源。
这些光源通常是氘灯（白炽灯带有氘灯或钨灯）、氙灯或者LED等Xe光源。
光源发出的宽谱光经过光学系统聚焦形成一
束平行光通过物质样品。
2. 样品室：样品室是光路中的一个空间，用于容纳待测样品。
样品可以是液体、溶液或者固体经过适当的预处理后放置在样品室中。
待测样品能够吸收一定波长范围内的光。
3. 分光器：分光器将平行进入的光束按照不同的波长进行分离。
这通常是通过光栅、光柱或者棱镜等光学元件完成的。
分光器可以调节光束的波长范围。
4. 选择性检测器：分光器将不同波长的光分离后，光束通过选择性检测器进行探测。
可见光范围内常见的检测器包括光电二极管（Photodiode）和光电倍增管（Photomultiplier tube，PMT），紫外光范围内常用的检测器是具有UV增益的PMT。
5. 数据采集和显示：分光光度计通过检测器获取到的光强度信号通过转换电路转换成电信号，然后将其输入数显器、计算机
等数据采集和显示设备。
在数显器上，用户可以观察到吸光度值随波长变化的光谱曲线。
根据比尔-朗伯定律，吸光度与样品中的物质浓度之间有一个线性关系。
因此，通过测量样品的吸光度，可以得到物质在不同波长下的吸光度光谱，从而研究物质的颜色、浓度、变化等信息。
紫外可见分光光度计 原理
紫外可见分光光度计原理
紫外可见分光光度计是一种用于分析物质吸收和发射光的仪器。
它通过测量样品在紫外和可见光范围内吸收或透射的光的强度，来确定样品的化学组成或浓度。
该仪器的工作原理基于比尔—朗伯定律，即光的吸收和透射与物质的浓度成正比。
紫外可见分光光度计由光源、样品室、单色器、光电检测器和信号处理器等组成。
光源产生紫外和可见光，并通过单色器选择所需的波长范围。
选定波长的光线通过样品室，在进入光电检测器之前，与样品相互作用。
样品吸收了特定波长的光，使得进入光电检测器的光强度减弱。
光电检测器将光信号转换为电信号，并传送给信号处理器。
信号处理器接收电信号，并计算出吸收或透射的光强度。
通常使用参比媒介，例如纯溶剂或标准溶液作为比较，以便准确测量样品吸收或透射的光强度。
根据测量的光强度值和比尔—朗伯定律，可以计算出样品的吸光度（Absorbance）。
吸光度与样品的浓度成正比关系，可以
根据已知浓度的标准溶液绘制标准曲线，通过比较样品的吸光度和标准曲线，可以确定样品的浓度。
紫外可见分光光度计在科学研究、制药、环境监测、食品安全和生物化学等领域得到了广泛应用。
它可以快速、准确地测量样品中的化学物质浓度，对于分析和质量控制非常重要。
紫外可见分光光度计介绍
紫外可见分光光度 计可以用于定性分 析，确定物质是否 存在或含量多少。
定性分析可以帮助 研究人员了解物质 的性质、结构、组 成等信息。
定性分析可以应用于 化学、生物、医学、 环境等领域，对物质 进行定性分析。
定性分析还可以用 于检测物质的纯度、 杂质等，确保产品 质量和安全。
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定量分析
电信号经过放大和处理，得 到样品的吸光度。
吸光度与样品浓度之间存在 一定的关系，通过标准曲线
可以计算出样品的浓度。
光路结构
光源：提供紫外可见光 单色器：将光源分解为单色光 样品池：放置待测样品 检测器：接收样品吸收后的光信号 信号处理：将检测到的信号转换为吸光度或透光率 显示与记录：显示测量结果，记录数据
测量方法
光源：提供紫外可 见光，激发样品中
的分子或原子
检测器：检测样品 吸收光后的强度变 化，转化为电信号
单色器：将光源发 出的光分解成单色
光
样品池：放置样品， 吸收单色光
数据处理：将电信 号转化为吸收光谱，
进行分析和计算
结果输出：显示样 品的紫外可见吸收 光谱，提供定量和
定性分析结果
定性分析
定量分析：
1 通过测量吸 光度值，计 算样品浓度
应用领域：
2 化学、生物、 医学、环境 等领域
定量分析方法：
3 标准曲线法、 标准加入法、 内标法等
定量分析特
4 点：准确、 快速、灵敏、 稳定
应用领域
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化学分析：用于分析化学物质，如蛋 02
环境监测：用于监测水质、大气、土
白质、核酸、氨基酸等
壤等环境因素
光源故障：检查光源是否正常， 必要时更换光源
第一章 紫外-可见分光光度计
第一节紫外-可见分光光度计的基本结构一、紫外-可见分光光度计的分类紫外-可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是量度介质对紫外、可见光区波长的单色光吸收程度的分析仪器，按不同的分类标准所做的分类如表1-1目前，国际上一般按紫外-可见分光光度计的仪器结构将其分为单光束、准双光束、双光束和双波长四类。
本节将对这四者之间的主要区别、各自的特点进行简单介绍。
（一）单光束紫外-可见分光光度计1945年美国Beckman公司推出的世界上第一台成熟的紫外-可见分光光度计商品仪器，就是单光束紫外-可见分光光度计。
顾名思义，单光束紫外-可见分光光度计只有一束单色光，一只比色皿，一只光电转换器（又称光接收器）。
其光电转换器通常采用硅光电池、光敏三极管或光电管，其结构简单、价格便宜，但因其杂散光、光源波动、电子学的噪声等都不能抵消，故单光束紫外-可见分光光度计的光度准确度差。
国外的DU70、PU8700等及我国生产的721、722、723、727、751、752、753、754等紫外-可见分光光度计都是单光束仪器，它们属于低档仪器。
单光束紫外-可见分光光度计的技术指标比较差，特别是杂散光、光度噪声、光谱带宽等主要技术指标比较差，分析误差较大，在使用上收到限制。
一般来讲，要求较高的制药行业、质量检验行业、科研行业等不宜使用单光束紫外-可见分光光度计。
单光束紫外-可见分光光度计的组成如图1-1所示。
（二）准双光束紫外-可见分光光度计所谓准双光束紫外-可见分光光度计，就是有两束光，但只有一只比色皿的紫外-可见分光光度计。
其中，一束光通过比色皿，另一束光不通过比色皿。
不通过比色皿的那束光，主要起抵消光源波动对分析误差影响的作用。
准双光束紫外-可见分光光度计有两种类型：一种是两束单色光，一只比色皿，两只光电转换器；另一种是一束单色光，一束复合光，一只比色皿，两只光电转换器。
1.两束单色光的准双光束紫外-可见分光光度计这种准双光束紫外-可见分光光度计比较多，目前国内外市场上或用户正在使用的准双光束紫外-可见分光光度计，基本上都是这种类型的仪器，它属于普及型的常规仪器。
紫外可见分光光度计实验原理
紫外可见分光光度计实验原理光源：光源发出的光经过分光器会被分成不同波长的光。
紫外可见分光光度计中常用的光源有白炽灯、氘灯和钨灯等。
白炽灯的光源范围较宽，适用于可见光范围的分析。
氘灯和钨灯则适用于紫外光区域的分析。
分光器：分光器用于将光源发出的光按照不同的波长进行分离，使得每个波长的光经样品后能分别被检测。
样品室：样品室通常是一根玻璃或石英的试管，它能够容纳样品溶液。
光在样品室中经过样品后，一部分被吸收，一部分被透射。
检测器：检测器用于测量透射光和吸收光的强度。
常用的检测器包括光电二极管（PD）、光电倍增管（PMT）和光电导探测器等。
在实验中，首先要校准光度计。
校准时需要使用可调溶液或基准溶液，其吸光度已经知晓。
通过调整光度计的控制器，使得光度计读取到与预期吸光度相等的数值。
然后，将待测溶液放入样品室中，用光度计测量其吸光度。
测量过程中，分光器会分成多个波长的光通过样品室，这些光的强度会被入射到检测器中，检测器通过将强度转化为电信号。
这些信号进一步被放大、数字化并输出到显示器上。
在显示器上，可以看到溶液的吸光度数值。
根据比尔-朗伯定律，吸光度与溶液中溶质的浓度和光程有关。
吸光度越大，表示溶质的浓度越高或光程越短。
基于比尔-朗伯定律的原理，可以借助标准曲线来确定溶质浓度，从而进行定量分析。
总之，紫外可见分光光度计基于光的吸收和透射原理，通过测量样品溶液的吸光度来定量分析样品中的化合物含量。
实验中需要校准光度计，并通过分光器、样品室和检测器等组成部分进行测量。
通过比尔-朗伯定律，可以得到溶质浓度与吸光度之间的关系，并通过标准曲线进行定量分析。
紫外可见分光光度计的介绍
紫外可见分光光度计的介绍紫外可见分光光度计是一种用于分析和测量物质吸收和发射光谱的仪器。
它在化学、生物、医药、环境等领域中被广泛应用。
本文将对紫外可见分光光度计的原理、结构和应用进行介绍。
让我们来了解一下紫外可见分光光度计的原理。
紫外可见分光光度计基于物质与特定波长的光发生吸收或发射的原理。
它通过分析样品吸收或发射的光谱来确定样品的特性。
紫外可见分光光度计可以测量从200纳米到800纳米的波长范围内的光谱。
紫外可见分光光度计的结构通常包括光源、单色器、样品室和光电探测器等部件。
光源可以是氘灯或钨灯，分别用于紫外和可见光区域的光源。
单色器用于将光分离成不同波长的光束，以便进行测量。
样品室是放置样品的地方，通常由透明的玻璃或石英制成，以确保样品与光的相互作用。
光电探测器用于测量样品吸收或发射的光信号，并将其转换为电信号进行分析和记录。
紫外可见分光光度计的应用非常广泛。
在化学领域，它可以用于分析溶液中的化学物质浓度，例如测量药物的含量、监测水质的污染物浓度等。
在生物学和医药领域，它可以用于测量生物样品中的蛋白质浓度、核酸浓度等。
在环境监测中，紫外可见分光光度计可以用于监测大气中的臭氧浓度、水中的有机物浓度等。
紫外可见分光光度计的优点在于其非常灵敏和精确。
它可以测量非常低浓度的物质，并且测量结果准确可靠。
此外，紫外可见分光光度计还具有操作简便、分析速度快和样品消耗少的特点。
然而，紫外可见分光光度计也有一些局限性。
首先，它只能测量物质在紫外和可见光区域的吸收或发射。
对于其他波长范围的光谱分析，需要使用其他类型的光谱仪器。
其次，紫外可见分光光度计对样品的透明度要求较高，对于不透明或浑浊的样品，需要进行前处理才能进行测量。
此外，光源的稳定性也会影响测量结果的准确性。
紫外可见分光光度计是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药和环境等领域。
它通过测量样品吸收或发射的光谱，可以确定样品的特性和浓度。
紫外可见分光光度计具有灵敏、精确、操作简便等优点，但也有一些局限性。
紫外可见分光度计原理
紫外可见分光度计原理
紫外可见分光度计是一种用于测量样品吸收或透射光的仪器，其原理基于光的吸收和透射特性。
在紫外可见分光光度计中，紫外和可见光区域的光谱范围通常为190-1100纳米，这使得它成为一种广泛应用于化学、生物、环境和制药等领域的分析工具。
在紫外可见分光度计中，样品溶液或气体通过样品室时，会与特定波长的光发生相互作用。
当光通过样品时，样品中的分子会吸收特定波长的光，而其余的光则被透射出来。
紫外可见分光度计通过测量透射光和参考光之间的差异来确定样品的吸光度。
这种差异通常通过使用光栅或棱镜将光分散成不同波长的光束，然后使用光电二极管或光电倍增管来检测各个波长的光强度。
在进行测量之前，需要先对分光光度计进行基准校准。
这通常涉及使用标准溶液进行零点校准和斜率校准，以确保仪器能够准确地测量样品的吸光度。
校准后，样品溶液会被置于样品室中，并通过调节波长和光强度来测量其吸光度。
根据比尔-朗伯定律，样品的吸光度与其浓度成正比，因此可以通过吸光度的测量来确定样品的浓度。
紫外可见分光度计的原理是基于分子在特定波长的光下发生吸收的特性。
不同的化合物在不同的波长下会表现出不同的吸光度，这使得紫外可见分光度计成为一种广泛应用于化学分析的工具。
通过测量样品溶液或气体的吸光度，可以确定其化学成分、浓度和反应动力学等信息，从而在化学、生物、环境和制药等领域发挥重要作用。
总之，紫外可见分光度计是一种基于光的吸收和透射原理的分析仪器，通过测量样品在不同波长下的吸光度来确定其化学成分和浓度。
它的广泛应用使得它成为化学分析中不可或缺的工具，为科学研究和工业生产提供了重要的支持。
紫外分光光度计
紫外分光光度计紫外分光光度计，就是依据物质的汲取光谱讨论物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。
物质的汲取光谱就是物质中的分子和原子汲取了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其汲取光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的汲取光谱曲线，可依据汲取光谱上的某些特征波优点的吸光度的高处与低处判别或测定该物质的含量。
目录重要应用校正方法常见类型工作原理产品简介重要应用1检定物质依据汲取光谱图上的一些特征汲取，特别是汲取波长λmax和摩尔汲取系数ε是检定物质的常用物理参数。
这在药物分析上就有着很广泛的应用。
在国内外的药典中，已将浩繁的药物紫外汲取光谱的汲取波长和汲取系数载入其中，为药物分析供给了很好的手段。
2与标准物及标准图谱对比将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见汲取光谱。
若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。
假如没有标样，也可以和现成的标准谱图对比进行比较。
这种方法要求仪器精准，精密度高，且测定条件要相同。
3比较汲取波长汲取系数的一致性4纯度检验5推想化合物的分子结构6氢键强度的测定试验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判定化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。
7络合物构成及稳定常数的测定8反应动力学讨论9在有机分析中的应用有机分析是一门讨论有机化合物的分别、辨别及构成结构测定的科学，它是在有机化学和分析化学的基础上进展起来的综合性学科。
日常维护一、温度和湿度是影响仪器性能的紧要因素。
他们可以引起机械部件的锈蚀，使金属镜面的干净度下降，引起仪器机械部分的误差或性能下降；造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀，产生光能不足、杂散光、噪声等，甚至仪器停止工作，从而影响仪器寿命。
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UV-Vis
350-(500)max-750nm 据光敏材料而定 ibid 190-1100nm
真空光电管（Vacuum phototube） 光电倍增管（Photomultiplier tube） 硅二极管（Silicon diode） 光二极管阵列（Photodiode array, PDA）
2 反应条件选择 显色剂的选择原则： 使配合物吸收系数 最大、配合物稳 定、与配合物吸收波长相差大等。 显色剂用量： 溶液酸度： 配位数与显色剂用量有关 配位数和水解等与 pH 有关。
显色时间、温度、放置时间等。
3 参比液选择 用适当的参比溶液在一定的入射光波长下调节A=0，可 以消除由比色皿、显色剂、溶剂和试剂对待测组分的干扰。 当显色剂、试剂在测定波长下均无吸收时，用纯溶剂(或 H20)作参比溶液，称溶剂空白； 若显色剂和其他试剂无吸收，而共存的其他离子有吸 收，则用不加显色剂的试液为参比溶液，称为“样品空白” ； 当试剂、显色剂有吸收而试液无色时，以不加试液的 试剂、显色剂按照操作步骤配成参比溶液，称为试剂空白。 总之，要求用参比溶液调A=0后，测得被测组分的吸光 度与其浓度的关系符合朗伯—比尔定律。
1．单波长单光束分光光度计 单光束分光光度计只有一条光路，通过变换参比池 和样品池的位置，使它们分别进入光路进行测定。
首先用参比溶液调透光率100％，然后对样品溶液测 量并读数。使用单光束分光光度计时，每换一次波长，要 用参比溶液校正透光率到100％，才能对样品进行测定。 若要做紫外—可见全谱区分析，则很麻烦，并且光源 强度不稳定会引入误差，此时可改用双光束分光光度计。
f 入射狭缝 准直镜 棱镜 物镜 焦面 准直镜
出射狭缝
物镜
f
入射狭缝
光栅 出射狭缝
其中最主要的分光原件为棱镜和光栅。
3、吸收池 除发射光谱外，其它光谱分析都需要吸收池。盛放 试样的吸收池由光透明材料制成。 ①石英或熔融石英： 紫外光区—可见光区—3m； ②玻璃： 可见光区（350-1000nm）； ③透明塑料： 可见光区（350-1000nm）； ④盐窗（NaCl晶体）：红外光区。
1
2 3 平均值
0.157
0.154 0.159 0.1567
0.294
0.298 0.303 0.2983
0.464
0.460 0.467 0.4637
0.577
0.577 0.578 0.5773
0.746
0.740 0.735 0.7403
0.881
0.904 0.890 0.8917
2.银杏内酯标准曲线的制定
表. 加样回收实验 样品号 R0 R1 R2 R3 R4 R5
A318nm
回收率(%)
0.217
/
0.331
97.6
0.459
103.675
0.565
99.117
0.663
95.537
0.845
92.38
平均回收率为97.66%，该法较可靠，测定结果准确度较高。
5、稳定性研究 从标样备用液中取出200μ L定容至10mL，分别于0、 30、60、90、120min测λ max。测定间隙容量瓶密封冷 藏保存。结果见下表。
3．双波长分光光度计
用两种不同的波长的单色光λ 1、λ 2交替照射试液， 并被光电倍增管交替接收，测得的是扣除了背景干扰的 吸光度之差的ΔA0。
双波长测定法不用参比溶液，只用样品溶液即可完 全扣除背景(包括溶液的浑浊、吸收池的误差)，大大提 高了测定的准确度。
第四节、紫外—可见吸收光谱法的定量分析
第二章、紫外-可见分光光度法
本章主要内容ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1、紫外-可见吸收光谱 2、紫外-可见光度计仪器组成 3、吸收光谱的测量-- Lambert-Beer 定律 4、分析条件选择 5、UV-Vis分光光度法的应用
第一节、紫外-可见吸收光谱 UV-Vis方法是分子光谱方法，它利用分子对外来辐射 的选择性吸收特性。 UV-Vis涉及分子外层电子的能级跃迁；光谱区在160 ~780nm。紫外—可见分子吸收光谱测定所用的仪器是紫 外—可见分光光度计，其测定波长范围为200 — 1000nm。 UV-Vis主要用于分子的定量分析，但紫外光谱(UV) 为四大波谱之一，是鉴定许多化合物，尤其是有机化合 物的重要定性工具之一。
第五节、紫外—可见吸收光谱分析实验技术
当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移， 因此需要对其进行校正。
波长标度校正：
使用镨-钕玻璃（可见光区）和钬玻璃（紫外光区）进 行校正。因为二者均有其各自的特征吸收峰。
吸光度标度校正：
采用 K2CrO4 标准液校正（在25°C时，于不同波长处 测定0.04000g/L的 KOH 溶液（0.05mol/L）的吸光度 A， 调整光度计使其A 达到标准吸光度。
多通道转换器
(Multichannel transducer)
电荷转移器件 Charge-transfer device, CTD：
电荷注入器件(Charge-injection device, CID)
UV-Vis
5、信号显示器
由检测器进行光电转换后，信号经适当放大，用记 录仪进行记录或数字显示。 目前国产许多紫外—可见分光光度计的仪器都配置 有工作站和激光打印机，测定信号的记录、处理、打印 操作都可以通过工作站的计算机进行控制，工作较方便。
1 .Lambert-Beer 定律 当强度为I0的入射光束,通过装有均匀待测物的介质时， 该光束将被部分吸收，未被吸收的光将透过待测物溶液。 当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度 和液层厚度成正比，即。
A bc
ε为摩尔吸光系数
2、朗伯—比尔定律
A bc
ε为摩尔吸光系数，仅与入射光的波长、被测组分的性 质和温度有关，在一定条件下是被测物质的特征性常数。 ε值越大，吸光程度越大，定量测定时的灵敏度越高； ε>1.0x104时为强吸收， ε=1.0x103—4为较强吸收， ε< 1.0x102为弱吸收；
1 仪器测量条件 由于光源不稳定性、读数不准等常带来误差。当分析 高浓度的样品时，误差更大。通常可通过调节溶液浓度或 改变光程b来控制A的读数在0.15~1.00范围内。 入射光波长的选择 为使测定有较高的灵敏度，应选择λ max作为入射光， 但要注意λ max所在的波峰不能太尖锐，这样由波长不准 确或非单色光引起偏离朗伯—比尔定律的程度较小，测定 结果较准确。 如果有干扰物质存在，应根据“干扰最小，吸收较大” 的原则选择入射光。
2．单波长双光束分光光度计
与单光束相似，不同的是在单色器与吸收池之间加了 一个斩光器。把均匀的单色光变成频率、强度相同的交替 光，一束通过参比溶液，另一束通过样品溶液，然后由检 测器交替接收参比信号和样品信号，并把它们的差值转变 为电信号，经放大后由显示系统显示出来。
双光束分光光度计适用于在宽的光谱区域内扫描复杂 的吸收光谱图，但对生物样品等复杂的试样不易找到合适 的参比溶液。
第六节、紫外—可见吸收光谱法的定量分析实例 1.银杏内酯最大紫外吸收波长的测定 取银杏内酯标准品100mg，用定容至100mL（1mg/mL）， 从中取出0.20mL用石油醚定容至10 mL(20µ g/mL)。为减少 测定随机性，分别用UV-3000（自动）、UV-754（手动）紫 外扫描，得到银杏内酯紫外扫描曲线，结果见图。并确定 最大吸收波长λ max=318nm。
4 吸光度范围的选择
由计算可知，当透光率T为0.37即吸光度为0.43时，浓 度测量的相对误差最小；当透光率T为0.65—0.15即吸光度 为0.2—0.8时，浓度测量的误差较小，准确度较高。 这可以通过选择不同厚度的吸收池和改变试样的用量 及定容体积等方法进行调节。控制A在此范围内进行测定。 5 配对池的选择 吸收池由于在使用过程中受化学腐蚀或摩擦的程度不 同，因此在相同条件下测定的本底吸光度有差异，差异最 小的同一规格的吸收池称为配对池。 工作时用空气或蒸馏水在一定波长下测定吸光度值， 选择配对池投入使用。
2、分光系统(单色器)
将由不同波长的“复合光”分开为一系列“单一”波长的
“单色光”的器件。 理想的100%的单色光是不可能达到的，实际上只能 获得的是具有一定“纯度”的单色光，即该“单色光具有一 定的宽度（有效带宽）。 有效带宽越小，分析的灵敏度越高、选择性越好、分 析物浓度与光学响应信号的线性相关性也越好。 构成：狭缝、准直镜、棱镜或光栅、会聚透镜 常用的色散元件有棱镜和光栅。商品仪器多选用光 栅，因光栅可在整个波长区提供良好的均匀一致的分辨 能力，而且成本低，便于保存。
b为液层厚度，cm； c为被测组分的浓度。 说明：在一定条件下溶液的吸光度A与被测物质的浓 度和液层厚度的乘积成正比。但必须满足入射光是单色光 、被照射物质是均匀的非散射性物质等条件。
3、 紫外—可见吸收光谱法的定量分析 （1） 单组份定量方法 1）标准曲线法 2）标准对比法：是标准曲线法的简化，即只配制一个 浓度为标准溶液，并测量其吸光度，求出吸收系数k， 然后由Ax=kcx求出cx （2）多组分定量方法 吸光度具有加合性，因此可以在同一试样中测定多个 组份。 （3）双波长法： 当混合物的吸收曲线重迭时，可利用双波长法来测定。
图 .银杏内酯紫外扫描曲线
2.银杏内酯标准曲线的制定 从标样备用液中抽取50μL(5µ g/mL)、100μL、150μL 、200μL、250μL和300μL分别用石油醚定容至10 mL，在 λmax分别测定吸光度值，重复3次，绘制标准曲线。
表. 标准曲线测定值（λ=318nm） 标样取量 50 100 150 200 250 300
第二节、光谱仪器
组成： 1.光源； 2.单色器； 3.样品容器； 4.检测器（光电转换器）； 5.信号显示器（ 电子读出、数据处理及记录）