实验7大豆分离蛋白的制备

综合实验7大豆分离蛋白的制备

1. 实验目的

蛋白质是人们日常生活中必需的重要营养物质，通常可以从动物的乳汁或天然植物(如花生、大豆等)中提取。大豆（黄豆）是目前植物中蛋白质含量最为丰富的一种，蛋白质含量高达40 %以上，大豆蛋白含有人体必需的8种氨基酸，还含有丰富的不饱和脂肪酸、钙、磷、铁、膳食纤维等，不含胆固醇，具有很高的营养价值。蛋白的提取方法有许多种，例如: 碱提酸沉、酶提酸沉、超声酸沉、酶解提取、膜分离法等。

本实验采用超声波辅助碱提酸沉法提取大豆蛋白，通过粉碎、正己烷低温浸提脱脂、纤维素酶酶解增溶等预处理方法，采用超声波辅助“碱提酸沉法”使蛋白质在等电点状态下析出。通过本实验，掌握超声波、酶解、离心分离、浸提、等电点析出等蛋白质分离手段，了解植物蛋白制备的常用技术。

2. 材料、仪器与设备

2.1实验材料

黄豆，1mol/LNaOH、10%HCl、正己烷、纤维素酶

2.2实验仪器

恒温水浴锅、粉碎机、高速离心机、超声波仪、pH计、烘箱、电子天平、250mL 三角瓶、平皿、大烧杯、玻棒、药匙

3. 实验内容与步骤

3.1实验流程

黄豆粉碎→正己烷低温浸提（脱脂）30min→离心分离→收集沉淀→烘干20min →纤维素酶酶解→离心分离→收集沉淀→碱溶（调pH11）→超声波处理20min→离心分离→收集上清→等电点酸沉析出（调pH4.5）→离心分离→收集沉淀→烘干30min称重→计算蛋白质粗提回收率

3.2实验步骤

（1）黄豆预处理

选择果粒饱满，色泽明亮的黄豆为原料，称取黄豆250g用小型粉碎机粉碎，破碎粉末用60目的不锈钢网筛过筛，去除夹杂物，备用。

（2）溶剂低温浸出法制取脱脂豆粕粉

取250mL三角瓶，加入粉碎后的豆粉20g，100mL正己烷，瓶口用平皿覆盖，恒温水浴60℃浸提30min使大豆中的油脂溶出，5000rpm离心15min后去上清液，将沉淀收集后放烘箱内50℃，20min烘干，得脱脂豆粕粉样品。

以下周四完成

（3）纤维素酶酶解辅助提高大豆蛋白溶出率

取10g 烘干的脱脂豆粕粉，按1:15料液比加入150mL 蒸馏水，用10%HCl 溶液

调至pH5.0，按0.5%(脱脂豆粉)的酶量加入纤维素酶，在恒温水浴锅里加热至48℃，并恒温酶解90min 。酶解结束后，将酶解液以5000rpm 离心15min 除去上清液，收集沉淀。（4）超声辅助碱提酸沉法提取大豆蛋白

收集酶解离心沉淀，按1:15料液比加入150mL 蒸馏水，用1mol/LNaOH 溶液将

pH 调至11，用超声波仪进行辅助提取，超声设置200W 功率，超声时间5s 、间隙5s 、总工作时间20min ；超声结束后静置20min ，以5000rpm 离心15min ，通过离心分离除去浸提液中的细豆渣、淀粉，收集上清液，得澄清的蛋白质水溶液。

采用酸沉工艺，边搅拌边在澄清的蛋白质水溶液中缓慢加入10%的HCl 溶液，

调节溶液的pH 至4.4～4.6，使蛋白质在等电状态下沉淀，此时蛋白质溶液由浅黄色的澄清溶液逐渐变成白色浑浊液。当溶液达到等电点时，立即停止搅拌，静置30min ，使蛋白质能形成较大的颗粒沉淀下来。

将酸沉后溶液得到的沉淀物用离心机5000rpm 离心15min ，弃去清液，收集沉

淀，放烘箱内50℃，30min 烘干，得大豆蛋白粗提物。3.3 计算大豆蛋白提取率 100100%⨯⨯大豆中蛋白的质量分数原料大豆质量提沉淀质量碱提酸沉法获蛋白质粗）＝总蛋白质提取率（%

注意：

由于蛋白质高温下易变性，整个实验操作中有机溶剂脱脂、酶解、干燥等环节均要在60℃以下的低温下进行。参考文献

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