牛羊胚胎移植研究进展

提供一定的技术参考。
关键词：胚胎移植；反刍家畜；研究进展
中图分类号：S814.8
文献标识码：A
文章编号：1672-9692(2019)05-0051-08
Studies of Embryo Tran sfer Tech no logy in Livestock
Huang Chengjun, Zhang Wenjun, Li Ning
阿依努尔•亚森等比‘
PG+PMSG；CIDR+PGF
丁威等126】
CIDR
陆明海等〔2门
CIDR+FSH
CIDR+PMSG
张果平等皿
CIDR+Folligon
陈永昌等⑷］
CIDR+FSH+PG
张秀陶等审】
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现代畜牧兽医
2019年第5期
发情上目前还没有十分准确的办法，一般都是配合 人工检查以确保同期发情的进度。
3胚胎来源
3. 1体内胚主要针对人工授精后体内胚胎的收 集。胚胎的采集要考虑配种的时间、排卵的时间、 胚胎发育的过程及其运行的速度等因素，这样才能 得到较高的采集率，获得更多的理想合子(如表2)。 其方法主要有手术法和非手术法两种，手术法又有输 卵管法、子宫角法和内窥镜法。超排发情后6〜8 d
采出的奶牛胚胎较同一时间的绵羊胚胎发育缓慢， 采胚时应根据畜种的不同、胚胎位置的不同以及釆 胚方法的不同来确定版〕，这样才能提高采胚率。 3.1.1羊的体内胚苏和等阴和赵霞悶运用此法对 不同处理条件下的绵羊进行采胚，其成功率在15%〜 40%；李杰等网借助开腔器和人用子宫钳用带导管 的探针对绵羊进行非手术法采胚，其子宫颈通过率、 采胚率和受胎率分别为89%、16. 5%和2. 86%,且头 均采胚数2. 96枚。可以看出羊的非手术法采胚技术 困难很大，还不成熟，还有待人们的进一步研究及 完善。丁红*51用手术法、小挑法和腹腔镜法采集的 胚胎分别进行移植，其妊娠率分别为47.6%、6& 4% 和71.4%,差异显著(P<0.05)。由于在羊上使用腹 腔镜法能得到很好的移植效果及受胎率，且术后创 伤小，因此此方法可以作为未来的一个发展方向， 但目前仍以手术法采胚与取卵为主。 3.1.2牛的体内胚桑润滋等悶用子宫角冲胚法对 204只波尔山羊冲卵，结果采胚成功率为92. 16% (188/204),头均获胚胎16. 68 ±7. 89枚；张果平 等沏在对杜泊羊超数排卵的研究中发现，从输卵管 平均回收胚胎数要显著多于从子宫角平均回收的胚 胎数(10. 57 vs 8. 41)(P<0.05)。1972 年 Sugie 设 计成功牛非手术采集胚胎的方法，经过不断改进日趋 完善，但其只适用于牛马等大家畜，一般在配种后6 ~8 d进行〔57-5% 王军等画运用二通路法对340 mg (n=9)、 300 mg(n=9)和260 的 mg(n=7) Folltropin-v 超排下的利木赞供体母牛进行胚胎的采集研究，结 果获得的可用胚胎总数分别为7. 22 ±2. 63枚、
PG FSH +PGF2a+LH
王素梅等［36】 刘建斌等⑵： 雷有鹏等3 马占峰等剛
CIDR+PMSG/FSH
CIDR+V(ADE)+PMSG、V(ADE)
FSH +PGF2a+LH
张举兴等⑶】 李春彦等”0】
赵霞等
FSH+LH
PG
吕礼良等⑷】
CIDR+PMSG+FSH+LH
CIDR+PMSG+FSH
(Center of development service for agricultural in Liaoning province, Liaoning Shenyang 110032)
Abstract: As one of the important breeding methods, embryo transfer has become an indispens able basic technology in large and medium-sized farms. A comprehensive system was described at here about the application of technology in the livestock, including sympathy estrus, superovula tion, embryo collection and embryo transplants, etc in recent years. And some current problems of the technology were summarized as well as the future trends to provide a convenient reference for the majority of researchers.
功館性黄休期:一肠生贾贰期•••
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孕激素同期发情处理原理
自然熒体期：一 新生黄体期：・・・・ 人工黄体期：一
对照动物的卵泡期:—
激亲处理后卵泡期
图2同期发情原理
Fig.2 Synchronous estrus theory
2019年第5期
modern journal of animal husbandry and veterinary medicine
收稿日期:2019-03-05 作者简介:黄承俊(1988-),男，硕士研究生，助理畜牧师，研究方向为反刍动物胚胎工程。
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现代畜牧兽医
Two-cell
Four-cell
Eight-cell
CD O CID
Morula
2019年第5期
Blastocyst
图1胚胎2细胞至附值前阶段发育示意图（用于表示母体RNA的降解和胚胎基因组的激活） Fig.1 Schematic representation of preimplantation embryo development from the 2-cell stage
手术法移植能获得很高的移植效果顷，而有些研究 却表明该方法效果并不佳旧。类似的问题也在其他 家畜胚胎移植研究中出现⑺8〕。这些差异都是生产中 重要的技术指标，直接影响着移植体系的建立与繁 育工作的实施。因而一个全面的技术体系分析与对 比，有利于相关人员的参考与研究方案的制定。
1供受体的选择
1. 1供体的选择供体的选择决定着胚胎的数量与 质量，囊胚期前的胚胎发育主要靠母系遗传物质来 维持，只有当受精卵运用自己的基因组而不再是母 系遗传物质时才能够进入囊胚发育期阶段(如图1)。 在对供体的选择时，首先要考虑其能否提供优质的 卵母细胞，这样才能获得优质的早期胚胎，提高母 系遗传物质与受体之间建立信号通路的成功率，进 而提高后期的着床率。未性成熟个体的卵母细胞与
虽然羊的超排模式基本一致，但其效果仍然受 多方因素影响。在激素剂量上，波尔山羊的FSH建 议量为40〜42 IU［33］；在激素来源上，进口 FSH明显 好于国产FSH〔29〕；在激素有效时效上，长效GnRH (19. 46± 10. 60)比短效 GnRH(14. 68 ± 7. 44)效果更 佳画。此外秋(7. 92土6. 52)、冬(&28 + 6. 15)季超 排效果优于春季(5. 17 + 8. 43)⑷］,经产羊的超排效 果好于青年羊［48-49］o 2.2牛的同期发情目前牛的同期发情主要采用一 次PG法、二次PG法与CIDR+PG法，不同处理方法效 果差异不大，且技术路线十分成熟。在超排上主要 采用 FSH+PG 法、FSH+PG+GnRH 法和 FSH+PG+CIDR + GnRH法。董文听等⑹］用该三种方案对放牧条件下西 门塔尔牛进行超排处理，结果以FSH+PG+CIDR+GnRH 法最好，FSH+PG+GnRH法次之，FSH+PG法效果最差， 但国产FSH与进口 FSH超排效果差异不大。家畜的超 排影响因素很多，有许多相同的研究结论却相差很 大"9,501,还需人们进行多方面的论证，以期获得一 个统一完整的高效率方案。
表1羊的同期发情技术 Table 1 Estrus synchronization and donors* superovulated of Sheep
供体的超数排卵
供受体的同期发情
文献作者
CIDR+FSH+LH+PG
王建国等⑶】
CIDR+FSH+PG CIDR+FSH+PG
CIDR+PMSG+PG；PG CIDR+FSH:CIDR+FSH+PG:PG+CIDR+FSH:PG
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2同期发情技术
同期发情技术作为胚胎移植的关键技术而倍受 关注。自1969年L. E. A. Rowson等成功地将PGF2a 应用于供受体牛的同期发情，这一技术开始广泛地 被人们研究，并成功地运用于生产实践中。这一技 术包括供受体的同期发情和供体的超数排卵，不同 的家畜其同期发情的方法与效果存在很大的差别， 但其技术的基础都一样，都是建立在生殖内分泌上。 基本原理是如图2。
1.2受体的选择受体的选择决定着母体对胚胎信 号的反应速率及胎儿的营养状况。自着床起胚胎就 开始与受体建立营养联系，在发育早期胚胎需要的 营养比较少，这时所选择的受体表现出来的差异很 小；但随着胚胎的发育，对营养的需求越来越大, 这时所选择的受体对胎儿发育表现出明显的影响。 在胚胎移植后到着床这一阶段，是胚胎移植能否成 功的关键阶段，其胚胎妊娠失败率占有比高达30%〜 70%[181,其中许多的原因目前尚未阐明。受体与移 植妊娠率、产子初生重等指标有直接的关联〔卩2口。
杨军祥等 马保华等［32］
FSH+PG+LH
达来等3
CIDR+PG+FSH FSH+PG
CIDR+PG
武和平等刖 任文军135】
CIDR+PMSG CIDR+FSH；CIDR+FSH +LH；CIDR+PMSG;
CIDR+PMSG+LH CIDR+FSH+PG
FSH+PGF2a
CIDR+PMSG PG;CIDR+PMSG；CIDR+ FSH
随着畜牧科技的快速发展，体外胚、分割胚、 性控胚、嵌合胚、转基因胚以及克隆胚的移植等先 后被运用于生产，为人们在反刍家畜保种育种与扩 繁上的研究提供了广阔的空间。然而随着研究的深 入，一些问题也开始摆在了人们的面前。在牛上， 有研究发现辅助生殖个体初生重比人工授精个体低 24%左右⑴，这与一些学者的研究结果恰相反⑵。有 研究发现超排能明显促进牛的双胎率⑶，而多数研 究表明超排对双胎的作用并不大⑷。有研究发现非
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黄承俊:牛羊胚胎移植研究进展
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牛羊胚胎移植研究进展
黄承俊，张文军，李宁
(辽宁省农业发展服务中心，辽宁沈阳110032)
摘 要：作为重要的畜牧育种手段之一，胚胎移植已成为中大型养殖场不可或缺的基本技术。了解其包括同情
发情、超数排卵、合子的获得与移植在内的不同技术环节，有助于胚胎移植技术体系的建立与优化，同时为相关人员
资料来源：Zhihua Jiang and Troy L. Ott,《Reproductive Genomics in Domestic AnimalsK
成年个体的卵母细胞及邻近卵丘细胞相比，具更少 的RNA转录组〔9-血，且编码的基因数与mRNA产量明 显较少[11H2]o虽然两者的卵母细胞成熟率与受精率 没有太大的差异，但未性成熟个体的卵母细胞的卵 裂延迟且卵裂率与囊胚率都较低山）。据报道，延迟 卵裂的胚胎具更少的H3A〔⑷、H2A和组蛋白甲基转移 酶G9a〔⑸的表达量，这些都与胚胎质量有着直接的 关联，在运用供体卵母细胞时需注意。在体内胚方 面，19%〜38%具有3次以上冲胚经历的供体其所产 的正常形态胚胎受胎率极低或从不受胎，西贝血把 这种在牛胚胎移植中，供体牛生产的形态正常的胚 胎却从不受胎的现象称为供体牛效应。除此之外， 经产供体排出的卵子质量要好于育成供体山」。这些 研究表明卵母细胞质量直接影响着胚胎的后续发育， 不管是体内胚还是体外胚，都必须做好供体选择这 一环节。
2. 1羊的同期发情在试验中人们运用不同的方法 对其进行研究（如表1）,表现出同一品种的不同处理 效果差异显著［26*27］,如杨军祥等画用CIDR法和PGF2 法对波尔山羊进行处理，其同期发情率分别为 95.83%和55. 26%；不同品种的同一处理效果差异显 著，如丁威等必［用波杂一代羊、徐淮白山羊和长江 三角洲白山羊作为受体来研究受体发情同期化对妊 娠率的影响，表现出显著的差异；不同种类的激素 处理效果差异显著匕9）；同时同期发情的效果还与营 养、繁殖季节、年龄等因素有关腕打在家畜的同期
目前，主要依黄体的品质对牛羊受体进行等级分 类，随着黄体品质等级的下降其受胎率呈明显的下降 趋势血-沏。同时卵巢有无弹性也影响着受体的受胎 率⑼〕，试验显示，卵巢有无弹性其受胎率分别为 61. 3%和44. 1%。受体黄体数及小卵泡的有无对胚胎 移植妊娠率没有显著影响滋），但受品种的影响显
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（开始）
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ห้องสมุดไป่ตู้
处理结果
（停止） （与自然发悄比较）
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（处理期间卵泡发育被抑制）
2 ••••• ••••
（卵泡被抑第而萎缩）
3 ••• •
..
（黄体发育被抑制）
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延迟发情 提前发情 提前发情
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前列腺素同期发情处理原理
Key words： Embryo transfer; Ruminant livestock; Research
自1890年胚胎移植技术在兔上获得成功后，其 相继在绵羊、山羊、牛、猪、马等家畜上取得成功。 这一系列研究不仅促使了反刍家畜胚胎移植体系的 形成，还使得人们看到了其在繁殖育种中巨大的价 值。尤其是良种的快速扩繁与育种方面，使该技术 体系成为反刍家畜繁育中不可缺少的重要手段之一。