机能实验设计

茶多酚对SD大鼠降血糖机制的研究

【立项依据】

1、研究背景：

茶文化起源久远，历史悠久，文化底蕴深厚。全世界有一百多个国家和地区的居民都喜爱品茗，而我国民间就有泡饮粗老茶治疗糖尿病的历史。研究初步证实，茶多糖是粗老茶叶降血糖的有效成分之一[1]，对于茶叶中的主要成分——

茶多酚的降糖作用，目前的研究报道很多，但许多研究者人员持有不同意见[2,3]，但其作用机制更是知之甚少。

茶多酚是以茶叶为原料经提取而成的, 以儿茶素为主体的多酚类化合物(约

含30余种酚类化合物)。茶多酚(tea polyphenol)又叫茶单宁、茶鞣质，是茶叶

中多酚类物质及其衍生物的总称，约占茶叶干重的20%—30%，它由30余种多酚

类物质组成，其主要成分为黄烷醇(主要是儿茶素)、花色素(包括茶黄素、茶红

素等)，黄酮及黄酮醇、酚酸及缩合酚酸4类化合物，其中属黄烷醇类的儿茶素占茶多酚总量的60%—80%，其主要的组成成分为表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯，茶多酚作为茶叶中一种重要的生理活性成分，现代生物学和医学研究证明其具有抗癌防癌"抗氧化"抗突变多种生物学功效。

近年来，随着科技的发展和人们饮食习惯的改变，2型糖尿病患者的数量急

剧增加，预计到2025 年全世界2 型糖尿病患者的数量可能会达到3亿人。糖尿病的预防和治疗日益引起人们的关注，而在中国"日本和印度民间验方中均有饮泡

茶以预防和治疗糖尿病的记载#现代研究表明, 茶多酚具有抗病毒活性、抗菌、

抑菌、防龋齿、改善肾功能、降脂、降压、保护心血管系统、抗癌、增强免疫力及延缓衰老的作用。近年来, 随着人们生活水平的提高, 糖尿病的发病率有增

高趋势, 并以极快的速度增加。因此, 开发研制具有降血糖作用的药品及保健品, 具有较好的社会效益和经济效益。

茶多酚是茶叶中一种重要的生理活性成分。具有抗癌、抗氧化、抗突变、抗菌、降血脂等多种生物学功能"因而成为研究的热点。近几十年来，随着糖尿病

患病人数的急剧增加，茶多酚对血糖的调节作用逐渐引起研究者的关注[4]。

虽然大多数研究者认为茶叶浸提液具有一定的降糖作用，但由于茶叶浸提液中生物成分复杂，茶叶中具体的降糖成分并未最终确定，但是大多数研究者认为：茶叶浸提液中的茶多糖和茶多酚可能是其中主要的降糖成分。因此研究者对茶叶中提取出的茶多酚，特别是其中的主成分儿茶素可能具有的降糖作用进行了深入的研究。他们对茶多酚可能具有的降血糖作用进行了大量的报道动物实验的研究发现，同时给予正常大鼠葡萄糖和TP，能明显抑制大鼠血糖升高；给予四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠适量的茶多酚，也可以降低其血糖水平。

2、研究目的：

本研究旨在探讨茶多酚的降低血糖的功能及其机制,主要从茶多酚是否抑制相关消化酶活性、是否提高胰岛素的量和活性几个方面参与研究，确认并初步了解茶多酚降血糖的机制。

3、主要参考文献：

[1] 刘强. 茶的保健功能与药用便方[M]. 北京；金盾出版社,1990；31

[2] 汤圣兴, 陈月平. 茶多酚对链脲佐链菌素诱发糖尿病大鼠降糖作用的

实验研究[J]. 中药药理与临床, 2001, 17(3):17—19.

[3] 李清钊. 茶多酚对糖尿病大鼠的保护作用[J]. 环境与职业医学, 2003, 20(3): 233—235.

[4]陈士军、竹剑平. 茶多酚降血糖作用临床观察[J].现代中西医结合杂志,2006，15(10),1309—1310

[5] 曹建明, 谢作叙, 周铁丽. 改良的淀粉酶测定法[J]. 陕西医学检验, 2001, 16(3): 63.

[6] 许梓荣, 李卫芬, 孙建义. 猪胃肠道黏膜二糖酶的性质[J]. 动物学报, 2002, 48(2): 202~207.

[7] 刘星, 陈大为. 福林-酚法测定蜂毒口服结肠定位释药微丸含量[J]. 沈阳药科大学学报, 2003, 20(1): 17~18, 69.

【研究内容与方法】

1.实验对象与分组：大鼠9只、体重100g左右、雄性、健康状况良好。

按血糖值、体重随机分成3 组，设正常组（A 组），糖尿病组（对照组，B 组），糖尿病茶多酚组（C 组）。

2.实验器材和药品：大鼠饲料、茶多酚、四氧嘧啶、Folin-酚试剂，血糖试剂盒，胰岛素试剂盒，牛血清白蛋白（BSA），肝素钠，其它试剂为分析纯。

3.实验方法和步骤：

SD 大鼠进入实验室先适应性喂养1—2 d，然后7:00 禁食，14:00 腹腔注射四氧嘧啶生理盐水液，按150 mg/kg·BW 剂量腹腔注射，第二天按同样的方法注射140 mg/kgBW。72 h 后测定空腹血糖，取血糖值在11.1mmol/L 以上的大鼠进入本实验。正常组的大鼠只注射生理盐水。茶多酚按2.5％浓度拌入基础饲料，正常和对照组给予基础饲料。实验期3周。

4.测定指标及方法

（1）每天记录各组大鼠的体重变化及摄食量。

（2）空腹血糖及葡萄糖耐量测定：血糖测定：禁食7 h 后，从大鼠尾部采血约100μl 至肝素钠预先处理的毛细玻璃管，及时封口后离心取血浆，用GOD-POP 法（血糖试剂盒）测定。糖耐量测定：实验末期空腹腹腔注射葡萄糖，按1 g/kg·BW 注射，体积控制在1~2 ml，在注射葡萄糖的0、0.5、1、2 h 采血测定血糖浓度。

（3）空腹血胰岛素测定和小肠内各种糖降解酶活性的测定：血胰岛素测定：按照血胰岛素试剂盒方法进行测定，测定的原理为酶联免疫夹心法。待测酶液制备：用刀片刮下小肠内囊，并用浓度为0.05 mol/L、pH 7.4 的磷酸缓冲液溶解至一定浓度，匀浆机搅匀，分装于小离心管中（每管约1.5 ml），冷冻备用。待测液酶活性的测定：淀粉酶活性的测定参照曹建明等人的碘显色法，蔗糖酶盒麦芽糖酶活性测定参照许梓荣等人的葡萄糖生成量测定法。酶活力单位定义：淀粉酶在40℃下和底物淀粉作用30 min，水解10 mg淀粉为1 个淀粉酶活性。双糖酶每分钟分解 1.0 μmol/L 底物为一个双糖酶活力单位。另外，由于小肠内囊所配制的酶待测液是随机溶解的，为了更好的比较各个酶的活性，本实验采取单位蛋白质的酶活力进行比较，其中蛋白质的测定用Lowry 法（Folin-酚法）。