钙离子试剂盒测定说明书

Calcium Colorimetric Assay Kit

钙比色生物试剂盒

(Catalog #K380-250; 250 assays; Store kit at 4°C)

1.钙相关介绍

Calcium is essential for all living organisms, where Ca2+ sequestration and release into and out of the cytoplasm functions as a signal for many cellular processes. 99% of calcium is found in bones and teeth with the remaining 1% found in the blood and soft tissue. Serum calcium levels are tightly controlled (8.4-11.4 mg/dL) and any variation outside this range can have serious effects. Calcium plays a role in mediating the constriction and relaxation of blood vessels, nerve impulse transmission, muscle contraction, and hormone secretion.Calcium ion channels control the migration of calcium ions across cell membranes,permitting the activation and inhibition of a wide variety of enzymes. Causes of low calcium levels include chronic kidney failure, vitamin D deficiency, and low blood magnesium levels that can occur in severe alcoholism. BioVision’s Colorimetric Calcium Assay Kit utilizes the

chromogenic complex(λ=575 nm) formed between calcium ions and

0-cresolphthalein to provide a simple assay in the physiologically important range of calcium concentration 0.4-100 mg/dL (0.1-25 mM).

4℃下避光保存，保质期一年。钙测定缓冲液和显色试剂自己配置，保存在4℃的条件下，升温至室温时使用。

4.钙含量监测方案

A.标准曲线的准备，稀释到钙标准液至5 mM (20 mg/dL)，方法：将浓度500mM的钙标准液10(微升)μl，加到990μl的重水(dH2O)中，混合均匀。分别加0, 2, 4, 6, 8, 10μl的标准液到试剂盒各管中使其各管中含有0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.0 μg钙离子。每管加入重水到50μl体积。

B.样品准备，血清或者尿液样品可以直接应用到这个试剂盒中，将10μl样品加入到含有96孔板的管槽中，对于其他液体样品，加入2—50μl样到单独/个别的管槽中，加重水至50μl体积。样品的测定无需先前的处理。一些MRI造影剂在测试中可能会造成瞬变干扰。

C.附加，分别滴加90μl显色试剂到含有钙标准溶液，样品（或者controls变量）的管槽中，混合均匀。

分别滴加60μl的该测定缓冲液到各个管槽中，混合均匀。

D.在室温避光的条件下使其反应5—10分钟。

D.E.控制光照在575 nm，发色团不稳定，时间超过了会慢慢淡化，所以要在30分钟内读取标准液和样品所得参数。

计算，通过减去所有样品和标准液的读数中零含量的钙控制的派生值来矫正背景（注意：背景读数可能是显著的，而且必须从这些样品读数中减去），绘制标准曲线μg/well vs. O.D. 575 nm读数，将样品读数应用到标准曲线中以得到管槽中样品的钙含量(Sa)，测试样品中钙离子浓度C = Sa/Sv (μg/μl or mg/ml

注：Sa为标准曲线中样品的钙含量，单位μg。

Sv为加入样品管槽中样品的体积，单位μl。

Ca的相对分子质量40.078。

样品中钙浓度可以表达为mg/ml, mg/dL or mM(mmol/liter)。

1 mg/ml = 100 mg/dL; 1 mM = 4 mg/dL.

Fig1.这是标准曲线的绘制

96孔板简介

96孔细胞培养板、皿系列产品选用进口光学透明纯聚苯乙稀制造。采用特殊工艺而成，使细胞达到最佳吸附状态，所有产品均以伽玛射线灭菌处理。

应用

细胞培养系列能促进原生代细胞：如神经细胞传代细胞、如肿瘤细胞等动物与人体细胞生长和繁殖，在国内外众多高校和科研机构、生物工程公司广泛使用。

使用注意事项

和普通细胞培养一样，使用96孔板请注意你的细胞、培养基、用具无菌，尤其注意操作时气流方向，可能带菌的物品、手不要在上风处移动。