4 血涂片及染色操作程序

1. 目的

规范血涂片及染色操作程序，确保检测结果准确度。

2. 标本种类

人体静脉血或末梢血。

3. 适用范围

操作区的血涂片及染色。

4．染色原理

血涂片染色过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。由于血细胞内不同结构所含有的化学成分不同，对瑞氏染料亲和力也不同，涂片经染色后，各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态、特征的目的。

5. 试剂与器材

5. 1 一次性采血针、末梢采血器、棉签、碘酒等。

5. 2 标准级显微镜载玻片、推片、瑞氏染液、OL YMPUS CH20双目显微镜（日本OLYMPUS公司）

6．操作步骤

6.1 薄血膜推片法

取血标本一滴置载玻片的一端1cm处或载玻片一侧的3∕4处。以边缘平滑的推片端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载玻片保持25～30º的平面夹角，平稳地将血向前推动，血液即在载玻片上形成一薄层血膜；将制成的血膜在空气中挥动，使迅速干燥，以免血细胞皱缩。天气寒冷或潮湿时，应置于37℃温箱中保温促干，以免细胞皱缩。最后在载玻片的一端用记号笔编号。

6.2 厚血膜涂片法

取新鲜血液1滴于载玻片的中央，用推片的一角将血滴由内向外旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆形血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干燥后即可染色并用显微镜检查。本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。

6.3染色

平置玻片于染色架上加瑞氏染液3～5滴染色，使其迅速盖满血膜。约1分钟后滴加缓冲液布满，轻轻摇动玻片，使染色液充分混合。5～10分钟后，用水冲去染液，待干。

7. 标本要求

7.1 玻片必须清洁、干燥、中性且无油腻。

7.2 最好使用非抗凝血，也可使用EDTA抗凝血，但必须在采集后4小时内制成血涂片。

7.3 使用抗凝血标本不宜冷藏，用前必须混匀。

8. 注意事项

8.1 推制的涂片应厚薄适宜，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。

8.2 涂片的好坏与血滴大小、推片与载片之间角度、推片时的速度有关，血滴大、角度大、速度快，则血膜厚；反之则血膜薄。

8.3 血膜分布不匀，主要是推片边缘不齐、用力不匀或载玻片不清洁所致。

8.4 瑞氏染液使用后，要迅速盖好，避免挥发。

8.5 血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落，应在1小时内染色。

8.6 染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，冬季室温过低时，染色时间要适当延长。

8.7 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。冲洗时间也不能长。8.8 染色过淡，可复染。染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色。

参考文献

1.中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程（第3版）.南京：东南大学出版社，

2006.

2.江苏省卫生厅.医院检验科建设管理规范（第2版）.南京：东南大学出版社，201

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3.刘成玉,罗春丽.临床检验基础（第5版）.[M]人民卫生出版社，2012.