组织石蜡切片制作
石蜡切片制作流程
石蜡切片制作流程以石蜡切片制作流程为标题，写一篇文章。
石蜡切片制作是一项常见的实验技术，在生物学、医学和材料科学等领域广泛应用。
石蜡切片可以用于显微镜下的观察和分析，能够提供关于细胞和组织结构的详细信息。
下面将介绍一下石蜡切片的制作流程。
1. 组织固定：首先，需要从感兴趣的样本中取得组织样本，并将其进行固定。
固定是为了保持组织的形态结构和化学成分，常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。
固定过程中，需要确保样本完全浸泡在固定液中，通常需要数小时至数天的时间，以确保组织被充分固定。
2. 脱水：固定后的组织样本需要进行脱水处理，以去除其中的水分。
脱水是将样本中的水分逐渐替代为有机溶剂，常用的有乙醇、丙酮等。
通常采用递增浓度的有机溶剂，从低浓度逐渐提高到高浓度。
每个浓度的脱水液中，样本需要浸泡一定的时间，以确保脱水彻底。
3. 渗透：脱水后的组织样本需要进行渗透处理，以使其与石蜡更好地结合。
渗透剂通常为石蜡溶液，可以将样本浸泡在石蜡溶液中，以使其逐渐渗透进入组织内部。
渗透过程中，需要注意控制温度和时间，以确保渗透均匀。
4. 包埋：渗透后的组织样本需要进行包埋处理，即将其嵌入到石蜡中。
首先，将组织样本放置在石蜡模具中，并加入适量的石蜡。
然后，将模具放入石蜡包埋机中，利用加热和真空等处理，使石蜡与组织样本充分结合。
包埋过程中需要严格控制温度和时间，以确保石蜡固化完全。
5. 切片：包埋后的组织样本需要进行切片处理，以获取薄片供观察。
首先，使用切片机将石蜡块切割成薄片。
然后，将薄片置于载玻片上，并加热使其与载玻片结合。
最后，使用刮片等工具将石蜡薄片修整成所需的形状和大小。
6. 然后，对切片进行染色处理，以增强对组织结构的观察。
常用的染色方法有血液学染色、免疫组化染色等。
染色后，可以使用显微镜观察和分析切片中的细胞和组织结构。
总结起来，石蜡切片制作流程包括组织固定、脱水、渗透、包埋、切片和染色等步骤。
每个步骤都需要严格控制条件和时间，以确保制作出高质量的石蜡切片。
植物组织切片制作以及注意事项
植物组织石蜡切片的制作以及注意事项1 植物组织石蜡切片的制作方法⑴固定：用50%或70% FAA固定液（50%或70%酒精：甲醛：冰乙酸=18:1:1; 幼嫩材料用50 % FAA；老的材料用70%的FAA），置于4℃固定24 h。
配方:福尔马林(38%甲醛) 5 ml冰醋酸5ml70%酒精90 ml5 ml甘油(丙三醇)⑵脱水：将固定液倒去，加入50%乙醇，室温静置30 min；重复一次，室温静置20 min。
换成1%番红O溶液(用70%酒精配制)，室温脱水染色过夜。
次日继续脱水，酒精浓度梯度和时间依次为：80% 乙醇1h、95% 乙醇1h、无水乙醇1h、40min（2次）。
⑶透明：1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h，纯二甲苯1h、40 min（2次）。
最后加入少量二甲苯（浸没材料即可）和碎蜡，放入38℃温箱中过夜。
⑷浸蜡：将温箱温度调至56℃，计时1h；换成二级蜡1h；三级蜡（3次）各1h、1h、40min（从温度上升到56℃开始计时）。
⑸包埋：将带有材料的液体蜡倒入叠好的纸槽中，迅速放入冰水中使蜡凝固，防止气泡产生，以及凝蜡不匀。
⑹切片：修整蜡块，用Lica RM2126切片机切片，厚度5-10 μm。
⑺贴片: 在载玻片上涂少许粘片剂，将切好的蜡带放入温水中，捞至载玻片上，最后置于37℃恒温箱过夜烤片。
⑻脱蜡及染色：①番红-固绿对染ⅰ脱蜡：二甲苯60min，二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、1%番红室温过夜。
ⅱ染色：80%乙醇5 min，1%固绿（用95%酒精配制）迅速蘸一下，大约10s，直接放到95%乙醇5min 、无水乙醇5min、无水乙醇5min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5min、二甲苯5 min（2次）。
②甲苯胺蓝染色ⅰ脱蜡：二甲苯60 min、二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、70%乙醇5 min、50%乙醇5 min 、30%乙醇5 min、蒸馏水5 min。
小鼠部分组织的石蜡切片制作
小鼠部分组织的石蜡切片制作一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。
用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其组织结构。
二、材料与用具1．材料：小鼠肝脏、脾脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
三、实验内容与步骤1．取材及固定取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组织块。
用先用0.85％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。
脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。
脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。
脱水所用的酒精浓度及过程如下：30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精（小于70％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过0.5立方厘米的组织块脱水时间为6～12 hr，在高浓度酒精中（大于70％）脱水时间为3 hr 左右。
石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤：
1. 准备样品：选择需要切片的样品，如组织样本、细胞样品等，并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤，以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。
2. 材料准备：准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料，并进行清洁和消毒处理，以避免污染和交叉感染。
3. 石蜡浸透：将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。
首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂（如正己烷）中，以去除组织内水分和其他溶质，然后置于石蜡中进行浸透。
4. 切片制备：将石蜡浸透的样品固定于切片盒中，将石蜡块剪碎成适当大小，并放置在切片刀的刀脊上。
调整切片机参数（如温度、角度、速度等），并逐个切割出薄片。
5. 切片贴片：将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法，如电离子器、热平台等，以使切片展平并附着于载玻片上。
6. 干燥固定：将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理，以去除水分并保持切片的形态稳定。
7. 切片染色：根据实验需求，对切片进行适当的染色处理（如组织学染色、免疫组化染色等），以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。
8. 封片封装：将切片封装至封片盖玻片上，使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片，并尽量排除气泡、保证封片质量。
9. 切片质控：对制备好的切片进行质量控制，使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。
最后，制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。
需要注意的是，在整个制备过程中，应遵循标准实验操作规程、注意安全，以及依据实验要求进行相应的优化和调整。
病理制片技术――组织石蜡切片
病理制片技术――组织石蜡切片组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程为石蜡切片法。
石蜡切片法现使用的切片机有平推式切片机、轮转式切片机两种。
一、平推式切片机石蜡切片法1．切片前的准备：清洗过的载物片(或免清洗的)，毛笔，铅笔，小竹片，水槽，雾化器，摊片器，切片刀，刀架。
2．切片制作步骤：刀架的粗削部放在头端，在切片机刀架部夹紧。
组织蜡块装在切片机蜡块固定器上夹紧。
右手握切片机刀头运动手柄，左手转动切片机蜡块运动旋钮。
先转动此钮，后平拉刀架运动手柄，进行粗削，直至组织切全。
停止，将刀架移到细削部，轻轻转动蜡块运动旋钮，后拉刀架手柄进行细削。
削至组织光滑发亮，右手拿毛笔扫净刀架及蜡块上的蜡屑，组织屑，放下毛笔，再用右手握住刀架运动手柄。
左手拿小竹片，用竹片头蘸一下水槽中的水。
左手中指搬动薄切钮，雾化器的喷头对准蜡块。
右手拉刀架运动手柄。
左手中的小竹片在蜡块空白处等待切片刀切起蜡片一端挑起粘住，随切片刀移动，完整的蜡片切出后，粘在竹片上，移入水槽中，捞片，放在摊片器上摊片5 min后，装在染色篮上，放入75℃烤箱烤片。
3．注意事项(1)无冷台的病理科可以将包埋好的组织蜡块放到冰箱内，但如放置时间过久温度太低切片时蜡块会产生热涨，切片会厚，要多切几张，后面的片子就会薄一些。
(2)雾化器是去除静电的，但也有增加切片厚度的缺陷。
尤其雾气大时，使蜡块热涨，厚度增加更明显。
为了保证切片厚度，一定要控制好风力、雾力。
雾化器使用自来水，水位控制在30刻度。
(3)切片机使用前一定要检查各部位情况。
先检查固定器是否固定在你所要的厚度上。
切片机刀架角度与蜡块呈90。
从蜡块右上角进刀。
二、轮转式切片机石蜡切片法1．切片前的准备：清洗过的载玻片、毛笔、铅笔、盛有30％乙醇的小烧杯、牙科镊、展片槽、切片机、一次性刀片及刀架。
检查轮转式切片机切片厚度的钮是否固定于你所要切的厚度刻度上。
2．切片制作步骤：将放在－5℃冷台上的组织蜡块装在切片机固定器上夹紧，空白蜡多的一端在上。
植物组织石蜡切片制作
植物组织石蜡切片的制作一、实验目的1．熟练掌握石蜡切片的方法。
2．掌握永久制片的制作过程，为研究植物的内部结构奠定基础。
3．学会植物内部结构的比较研究方法。
二、实验器具与试剂1．器具石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。
2．试剂10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
三、实验材料幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。
四、实验内容与方法石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。
它是把材料封埋在石蜡里面，用旋转切片机切片，可以切出很薄的切片。
凡是精细的工结构，大都用石蜡切片。
全都过程如下：1．固定 2．洗涤 3．脱水与硬化 4．脱酒精 2．封埋 6．切片7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．胶封（一）固定1．固定的意义：固定就是用药品把细胞杀死，使细胞的原生质凝固，死后不发生变化，尽可能保持原来的结构以供我们观察。
良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。
2．固定液的种类：固定液的种类很多，根据配制成分可划分为：(1) 简单固定液：以一种化学药品配制的固定液。
常用的简单固定液有：A．酒精即乙醇，用作固定液，常用纯酒精或95％酒精。
酒精穿透力强，固定时间常在1小时以内。
高浓度酒精有使材料收缩的作用。
70％的酒精可作保存液。
配制低度酒精必需要用普通酒精即95％的酒精，绝不可用纯酒精。
酒精为还原剂，不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。
酒精可使核酸，蛋白质及肝醣等发生沉淀，但能溶解脂肪及拟脂。
B．福尔马林即甲醛，具强烈刺激性的气味，纯净的甲醛，为无色透明液体。
固定用的浓度为4-10％甲醛也是强还原剂。
不能与铬酸、锇酸等氧化剂配合。
经固定后，材料变硬，通常不引起皱缩，但随后经过他种药剂处理时，就每每出现皱缩。
组织切片制作步骤
植物组织石蜡切片技术是农学学生需要掌握的基本实验操作技术。
工具/原材料药物：石蜡，酒精，二甲苯，藏红花/快速绿色染色溶液，胶，明胶，甲醛等仪器：石蜡切片机，组织脱水器，载玻片台，培养箱，染料桶，载玻片，盖玻片，烧杯，量筒等方法/步骤1.取材确定材料的来源和位置，纵向还是横向；应尽快取走材料以防止进一步变化，并且材料量应适当。
下图显示了植物芽的实际采样。
石蜡切片的制备步骤（附图）石蜡切片的制备步骤（附图）2.固定（1）固定剂的选择最常用的固定剂是FAA。
该方法的优点是材料的固定时间不受限制。
固定时间可以短至几个小时，也可以长达几个月或几年。
（可用作材料保存溶液）配方：50％或70％酒精90ml冰醋酸5毫升福尔马林5毫升（含50％酒精的软质材料，含70％酒精的硬质材料）（2）固定后材料的处理洗涤或漂洗：固定后，应彻底清洗组织以去除固定溶液和残留在组织中的晶体沉淀，否则会影响染色效果。
（如果固定后该材料暂时无法进行下一步操作，则可以将其存储在70％的酒精溶液中或直接用FAA固定溶液在4℃的冰箱中存储。
）下图显示了浸泡在固定液中的组织切片。
石蜡切片的制备步骤（附图）3.脱水目的：水和透明剂不能互溶，只有除去水后，透明剂才能进入。
试剂：梯度酒精溶液工艺：70％--- 85％--- 95％-100％--- 100％。
每个步骤约为1h-2h。
注意：确保脱水梯度和脱水时间的每一步，都应将水彻底清除，但不要过度脱水（时间过长会使组织变脆和收缩，这时您可以根据自己的实验进行探索，不需要完全遵循此操作）。
下图显示了适用于大量样品脱水的自动组织脱水器。
如果物料体积和样品体积较小，则可以将小烧杯用作逐步脱水的容器。
石蜡切片的制备步骤（附图）4.透明度目的：纯酒精不能与石蜡溶解，但需要用能与酒精和石蜡溶解的溶剂代替组织中的酒精。
（二甲苯是最常用的透明剂，可以与石蜡很好地混溶）工艺：等体积的二甲苯和乙醇的混合物1H ---纯二甲苯1H ---纯二甲苯1H。
【大学实验】动物组织石蜡切片制作-PPT课件
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（二）石蜡切片制作
• 用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切 片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚 度为一般4~6μ m。 【切片前的准备】 1、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的石 蜡，一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留 得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则 影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却 一定时间。 2、切片用品准备 （1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一 次性切片。 （2）载物片：载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。 （3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。 （4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。
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方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
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步骤 （1） （2） （3） （4） （5） （6） （7） （8） （9） （10） （11） （12）
操作项目 60%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 95%乙醇Ⅰ 95%乙醇Ⅱ 无水乙醇Ⅰ 无水乙醇Ⅱ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ 石蜡Ⅰ 石蜡Ⅱ
小鼠 15min 15min 20min 20min 20min 20min 20min 20min 5min 3min 10min 20min
大鼠 20min 20min 30min 30min 30min 20min 30min 30min 8min 5min 15min 25min
家兔 30min 30min 40min 40min 40min 30min 40min 40min 10min 5min 20min 30min
组织切片石蜡切片过程
石蜡切片过程一、石蜡包埋:1.脱水：组织水洗后便可酒精脱水，70% →80% →90% →95%→100%酒精（无水乙醇）→100%酒精，各级酒精脱水时间30-45 min。
（注意：80%酒精内组织可留之较久，当天如果来不及做完就可以暂时保存一晚上，次日再继续做下去。
70%的酒精可作为更久的保存剂。
）2.透蜡：脱水后组织：50%酒精+50%二甲苯30 - 45min.二甲苯（组织透明即可停止) 15min.50%二甲苯+50%石蜡20-30min.纯石蜡1 45min.纯石蜡2 45min.（透腊之前做好准备工作：准备腊杯，烘箱温度保持55—60℃左右，使石腊熔化，温度不宜过高，以免使组织发脆。
）3.包埋：a.折好纸盒，准备小镊子、酒精灯、解剖针、冷水等。
b.用温热吸管吸取石蜡注入纸盒。
等待底稍微凝固，温镊子夹住样品放入盒子中央，面朝底(可以将蜡一次倒入纸盒，然后待蜡表面起膜后，用温镊子夹住样品放入蜡中，待冷却即可，整个操作过程中，切勿让蜡中起气泡)。
c.两手拿着两端，入冷水一半，吹气，使表面石蜡形成移较厚腊层，然后急速全部进入冷水中3分钟。
d.修正蜡块（上下两个面一定要平行并且光滑）e.固着蜡块二、切片1.切片（切片时，可以在刀片以及刀片周围涂上一点甘油）2.贴片烤片（甘油蛋白=1/2甘油+1/2鸡蛋清）（在贴片时，用细吸管取一点点甘油蛋白（越少越好）于载玻片上，然后用手抹匀，手一定要干净。
将切片放在载玻片（光亮面朝向下），然后滴几滴冷水使切片悬于水上。
接着将载玻片放在37℃上烘烤。
常见问题分析：1.切片分离不能形成蜡带：☞室温过低，蜡过硬。
2.蜡带弯曲：☞蜡块口下面不平行，或蜡块不与刀刃平行所致。
3.切片厚薄不一: ☞切片刀或蜡块未固定紧。
4.切成片后，组织与蜡块脱离：☞脱水不干净等。
5.蜡片易粘在切片上或蜡片萎缩：☞室温太高或蜡太软或刀的角度太小。
6.切片破裂：☞浸蜡不足或浸蜡温度过高，或在脱水剂、透明剂中时间过长，引起组织发脆或有杂质，材料脱钙不完全，此种无法补救。
实验-石蜡组织切片的制作
实验-石蜡组织切片的制作
组织石蜡切片制作
实验准备
实验仪器
口罩，手套，记号笔，移液枪，取样瓶，取样工具盒（镊子，剪刀，手术刀，手术刀片，酒精棉球），脱脂棉球或纱布，黑色遮挡物实验药品
蒸馏水，无水乙醇，福尔马林固定液
溶液剂配置方法
福尔马林溶液（1000m L）：
将4g 磷酸二氢钠与13g 无水磷酸氢二钠溶于900m L 蒸馏水中，充分溶解，加入37%甲醛（100m L），充分混匀，用HCL 调节溶液的PH至7。
苏木精染液（1000m L）：
将苏木精(2g)溶于无水乙醇(250m L)，硫酸铝钾(17g)溶于蒸馏水(750m L)中，随后将两个溶液混合，充分搅拌均匀后，加入碘酸钠(0.3g)，苏木精氧化成紫红色（过夜）。
乙酸性伊红液配制（100m L）：
将伊红Y(2g)溶于90%酒精（100m L）中，用玻璃棒搅拌使其溶解后，每100m L 加冰醋酸一滴。
盐酸酒精分化液配制（100m L）：
将1m L浓盐酸溶于99m L 的75%酒精中，充分混合。
30%硝酸（200m L）：
将92.3mL 的65%硝酸缓缓加入到107.7mL 蒸馏水中，充分混匀。
1、石蜡切片的制作
（1）、取材及固定
取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小为1.5cm×1.5cm×0.2cm，材料取下后迅速用福尔马林固定；部分柔软
的组织可采用重新固定法(取大块组织于固定液内，2~3h后取出分割小块放入新的固定液中重新固定) ，以保持其原有的结构。
福尔马林的用量与组织块体积之比最小为20：1。
注意不能使组织块贴于容器壁上（可在容器底部垫几层纱布或脱脂棉）。
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色实验报告
实验目的，通过石蜡切片制作和HE染色实验，观察组织结构和
细胞形态，学习并掌握组织学技术操作方法。
实验原理，石蜡切片制作是将组织标本固定、脱水、透明化、
浸渍石蜡、包埋、切片、贴片、脱蜡、染色、脱水、透明化、封片
的过程。
HE染色是一种常用的组织学染色方法，用于观察组织结构
和细胞形态的染色技术。
实验步骤：
1. 组织标本固定，取得组织标本后，进行快速固定。
2. 脱水，将固定后的组织标本置于不同浓度的乙醇中逐步脱水。
3. 透明化，将脱水后的组织标本置于透明剂中进行透明化处理。
4. 浸渍石蜡，将透明化后的组织标本浸渍熔化的石蜡中。
5. 包埋，将浸渍石蜡后的组织标本置于包埋模具中，倒入石蜡
进行包埋。
6. 切片，用切片机将包埋后的标本切成薄片。
7. 贴片，将切好的薄片贴在载玻片上。
8. 脱蜡，将贴片后的载玻片置于脱蜡剂中进行脱蜡处理。
9. 染色，将脱蜡后的载玻片进行HE染色处理。
10. 脱水，将染色后的载玻片进行脱水处理。
11. 透明化，将脱水后的载玻片进行透明化处理。
12. 封片，将透明化后的载玻片盖上盖玻片封好。
实验结果，通过实验操作，成功制作了石蜡切片并进行了HE染色。
观察下来，组织结构清晰，细胞形态明显，染色效果良好。
实验结论，通过本次实验，我学习并掌握了石蜡切片制作和HE 染色的操作方法，对组织学技术有了更深入的了解。
同时，我也意
识到实验操作中的细节和步骤对结果的影响，需要在以后的实验中更加细心和认真。
石蜡切片制作实验报告(一)
石蜡切片制作实验报告(一)石蜡切片制作实验报告概述本次实验是制备组织学切片中使用的石蜡切片。
石蜡切片是组织学研究中常用的一种切片制备方法，通过将组织固定、脱水、浸蜡以及切片等一系列步骤使组织固定在切片上，以供观察。
实验流程本次实验按照以下流程进行：1.取出组织标本，进行固定处理；2.固定后的组织在不断升级的酒精浓度溶液中脱水处理；3.使用排除气泡的炉子将组织浸泡至石蜡中，使其渐渐浸润；4.开始制作切片，将浸润的石蜡切片头制作成适当的角度，再使用切片机器进行切割即可。
具体步骤如下：固定处理1.取出标本，大小适中，保证可以在容器中完全浸润。
2.采用福尔马林-10%缓冲液进行固定，时间不宜过久。
3.在80%乙醇、95%乙醇、100%乙醇各中脱水15min，最后再脱水30min。
石蜡浸渗1.将组织标本放入去离子水中洗涤；2.放入甲醇2小时，2次更换甲醇；3.放入Pure-Lab99嵌入剂：甲醇(2:1、1:1、1:2)中渗透2小时，每次更换的比例变化，最后放在纯浸润剂中浸润15h以上。
4.上蜡，10min90℃，2h60℃接着重复2次10min90℃，最后重复最后一次的操作3次。
制作石蜡切片1.根据需要顺序排布组织标本，并将其固定在切片支架上。
2.制作切片头，可用吹软机将石蜡制软。
3.使用切片机器对浸润好的石蜡进行切割，厚度一般为5-8μm。
实验结果经过以上步骤，我们制得的石蜡切片呈现出清晰、平整、稳定的状态，对组织结构的观察达到了预期目的。
总结本次实验是比较基础的组织学实验，对于相关领域的学习和研究有很大的帮助。
在实验过程中，需要注意每一个步骤的顺序和时间，并根据实际情况做出适当的调整。
同时，在实验结束后需要及时清理相关设备和处理化学废品，保持实验室的安全和整洁。
参考文献•Junqueira, L. C., Bignolas, G., & Brentani, R. R. (1979).Picrosirius staining plus polarization microscopy, aspecific method for collagen detection in tissuesections. The Histochemical Journal, 11(4), 447-455. •Kohno, Y., & Ohtani, S. (1996). Aging of the adrenal glands: microarchitectural changes and cellproliferation in the rat adrenal cortex underadrenocorticotropic hormone stimulation. Archives ofHistology and Cytology, 59(4), 411-422.•Stearns, M. E. (1989). Histology and histochemistry of human prostate. The Prostate, 14(4), 303-317.致谢在实验过程中，我们受到了教师和同学们的悉心指导和帮助，在此谨向他们致以最诚挚的感谢。
动物组织石蜡切片制作流程
2min 95 1:1无水乙醇、二甲苯（）
5min二甲苯Ⅰ
5min
二甲苯Ⅱ
..
.
..
15min无水乙醇2min95乙醇2min85乙醇2min70乙醇2min50乙醇2min蒸馏水2min苏木精15min蒸馏水洗去多余染液1盐酸分色60sec自来水蓝化20min蒸馏水2min50乙醇2min70乙醇2min85乙醇2min伊红2min95乙醇2min无水乙醇2min无水乙醇2min无水乙醇二甲苯1
.
动物组织石蜡切片制作流程
1.固定：10％福尔马林浸泡24h
2.洗涤：自来水冲洗24h
3.脱水、透明
5％乙45min
1.5h7％乙1.5h％乙81h9％乙醇30min无水乙醇Ⅰ
30min无水乙醇Ⅱ20min 1:1无水乙醇、二甲苯（）30min二甲苯Ⅰ
30min二甲苯Ⅱ℃的石蜡）浸蜡（4.58-60 30min二甲苯、石蜡（1:1）30min石蜡Ⅰ30min石蜡Ⅱ
30min
石蜡Ⅲ5.包埋、切片、展片、贴片6.染色
10min石蜡
2min石蜡5min无水乙醇、二甲苯1:12min无水乙醇
2min％乙醇952min 85％乙醇
2min 70％乙醇2min 50％乙醇2min蒸馏水
15min
苏木精
洗去多余染液蒸馏水
60sec％盐酸分色1
20min自来水蓝化
2min蒸馏水2min 50％乙醇2min％乙醇70
石蜡切片的操作方法
石蜡切片的操作方法石蜡切片是一种常用的组织切片制备方法，用于细胞学和组织学的研究。
下面是石蜡切片的操作方法：1. 收集样本：选择要制备切片的组织样本或细胞样本。
样本可以是动物组织、植物组织或细胞培养物。
2. 选择合适的浸渍剂：石蜡切片需要将样本浸渍在石蜡之中，以固定和保护样本。
常用的浸渍剂包括甲醇、乙醇和二甲苯。
3. 固定样本：将样本固定在固定剂（如甲醛）中，以保持其形态结构。
固定时间根据样本的类型和大小而定，一般在4C下静置数小时或过夜。
4. 脱水：在一系列浓度逐渐增加的乙醇溶液中，将固定的样本从水中脱水，使其逐渐转移到纯度较高的乙醇中。
5. 渗透：将脱水的样本浸渍在二甲苯或其他有机溶剂中，使其渗透并置换乙醇。
浸渍时间根据样本的大小和组织特性而定，一般在一到数小时之间。
6. 包埋：将渗透后的样本置于石蜡中，使其完全浸润。
石蜡块可以预先加热至液态，然后将样本放入其中，或者将样本以及适量的石蜡放入模具中，然后通过加热使其固化。
7. 切片：将制备好的石蜡块放入石蜡切片机中，使用旋转切片刀将其切成薄片。
切片厚度一般为4-10微米。
8. 取片：用切片刀或镊子将切好的石蜡切片取出，并放置在清洁的显微镜载玻片或切片架上。
9. 脱脂：将石蜡切片置于加热的二甲苯或其他脱蜡剂中，使其脱去石蜡。
10. 染色：根据需要，可对石蜡切片进行染色，例如常用的血液和组织标本染色方法如伊红染色(H&E染色)。
11. 干燥：将染色的切片在室温下晾干或在加热台上加热至干燥。
最后，将切片用显微镜载玻片覆盖，并封口保存。
以上就是石蜡切片的一般操作方法，每个实验室可能会根据具体需求进行微调。
在操作过程中要注意安全，避免接触有毒溶剂和使用锋利的刀片时的切割操作。
组织石蜡切片制作
实验前准备
• 思想上重视，考虑到每一步都不能出错。 • 时间上准备，充足的时间做实验。 • 技术上准备，考虑材料的特点对各个步骤的改进，
生搬硬套其它组织的过程会出问题。 • 实验条件的准备，设备和药品，溶液配制等等是
否齐备。
4 具体步骤及注意事项
4.1 取材
• 根据不同的目的、组织特征代表性取材。 • 取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。
• 5．包埋
（1）步骤 ①准备包埋蜡：一般应用硬蜡（56~58℃或60~62℃）为好，所用的石蜡要求透明无杂质，新 的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性，可以加一些蜂蜡。蜡的熔点应与组织的硬度相适应。 包埋用过的石蜡可以反复使用。 ②准备包埋框：可以用金属的，也可以用硬纸摺叠。 ③点燃酒精灯，准备好无齿尖镊子，需作标记应先写好标签。 ④在金属框中倒入硬蜡，然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中，置好方向。可室温下冷却。 ⑤包埋框或纸盒内的蜡逐渐凝结，若表面已凝结形成一层固体状，即可放入冷水中，加速其 凝固。
9 材料发生裂隙破碎或脱落
原 因：
补救办法：
1．脱水不干净
1．无法弥补
2．有透明剂残留
2．增加浸蜡时间，重新包埋
3．石蜡透入时，温度过高或 3．无法补救
时间过长
4．用正丁醇、叔丁醇和二氧
4．由于脱水剂和透明剂的影 六环等进行脱水和透明
响，使组织变硬发脆
5．在蜡块表面涂一薄层火棉
5．材料太硬或太粗
胶溶液
（3）用于组织中特定基因mRNA的定位表达分析
原位杂交；荧光原位杂交
2 主要设备
• 1 瓷盘；刀片；记号笔；通风橱； • 2 石蜡；电炉；酒精灯；玻璃吸管；纸槽（需要
提前折叠好）；大平皿；染色缸； 吸水纸；镊子 （至少2把） • 3 切片用刀片；毛笔；玻片盒；切片机；预处理 的玻片；展片52度恒温水；吸水纸；铅笔；恒温箱
植物组织石蜡切片的制作
第23页，共23页。
苯酚 2克
乙液：甲醛 4毫升
蒸馏水 100毫升
第18页，共23页。
8. 脱蜡及复水
干燥后的切片需脱蜡及复水才能在水溶性染液行染色。用二 甲苯脱蜡，再逐级经梯度酒精复水。
• 脱蜡（溶蜡）：将切片上的石蜡溶去。一般都用二甲苯溶脱 蜡。如果脱蜡不彻底，材料的染色就困难。
• 复水：脱蜡后的材料从高浓度的酒精溶液（100%）开 始，逐级进入低浓度的酒精溶液，最后一级通常是 30%酒精或水，使材料中的水分逐渐增加。如果不经 过复水，材料脱蜡后直接进入染色剂中，材料将会严 重变形，甚至难以染色。
夏季采用熔点较高的石蜡（56,58）,冬季宜选用熔 点较低的石蜡（52,54）。
第12页，共23页。
• 石蜡的处理： 新蜡应溶一次，增加密度。
并用滤纸过滤去除杂质。
加5%～10%的蜂蜡(工蜂腹部下面四对蜡腺分泌物质 ),增
加石蜡的韧性。 ➢ 反复溶的旧蜡包埋效果更好。
• 程序：在溶蜡箱中进行，55-60℃，恒温。 • 浸蜡：二甲苯透明后的组织块在二甲苯︰石蜡（1 ︰ 1）
固定组织时应注意： ①保持组织新鲜，勿使其干燥，尽快固定处理。
②组织块不易过大过厚，厚度必须控制在0.3cm以内。 ③固定液必须有足够的量，一般大于组织20倍以上。
④抽气：使固定液尽快渗入材料内部，并排除材料内气泡的干 扰。
第6页，共23页。
组织固定后的处理
①冲洗或漂洗：组织固定后应充分水洗，除去留在组织内 的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。
第19页，共23页。
• 顺序： 二甲苯→1/2 二甲苯+1/2纯酒精→100%酒精→95％ 酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→30％酒精 →水→染色
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般是从左到右，组织切片较小是，可以并列粘贴2~3条蜡带。
7．烤片的温度不宜过高；烤片的时间要合适。
1 石蜡带弯曲不直
原因 1．石蜡块上下两边不平行 2．石蜡块的上下两边不和刀口平行 3．刀口锋利不一，局部产生差异 4．蜡块的一边较另一边为软，或两 边的硬度不一致 补救办法 1．取下台木，将两边修干 2．调节标本台，使两者平行 3．移动刀片，改用新的刀口 4．待蜡块冷却后再切，或重新 包埋
• 再取8%多聚甲醛 50ml ，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸 氢二钠将PH值调至7.2 • PH=7.2的PBS缓冲液 50ml
• 4．Bouin液： 苦味酸饱和水溶液 75ml
36％~40％福尔马林液 25ml
冰醋酸 5m1
5．改良Bouin氏固定液
苦味酸饱和水溶液 45ml 95%酒精 45ml 36％~40％福尔马林液 5ml 冰醋酸 5m1
总结一下
• • • • • • • 取材 固定 水洗 脱水 透明 浸蜡 包埋
• • • • •
切片前准备 切片 展片 烘干 切片储存
4．刀口钝
5 切片纵裂
原 因： 1．刀有缺口 补救办法： 1．可移动刀口
2．石蜡块中含有颗粒、杂质 2．将颗粒拽去 3．刀口留有碎屑或细丝 4．组织太硬 3．清洁刀口 4．让包埋块在水中浸泡
6 切片有横纹
原 因： 1．刀和台木的固定 螺丝太松 2．刀口倾斜度太大 补救办法： 1．旋紧螺旋 2．可放平1—2。后再 切 3．用氯仿拭去
• （二）石蜡切片
1．将切片刀装在刀片机的刀架上并固定紧，固定蜡块底座或蜡块，
调整蜡块与刀至合适位置，刀刃与蜡块表面呈5度角。 2．切片多使用轮转式切片机，切片时，左手执毛笔，右手转切片机 转轮，先修出组织块。 3．调整切片机上的切片厚度为4~7µm，然后切片。 4．切片可以是单张，也可以是连续切片形成蜡带 5．展片和捞片： 直接展片法和温水漂浮法 6．展好的切片在室温下稍微干燥后，放在40℃恒温烤箱中，小片组 织30分钟即可，大的需12~24小时，烤干备用。
4．矫正刀的角度
3 切片卷ห้องสมุดไป่ตู้呈圆筒状
原 因： 补救办法：
1．室温过低
2．石蜡过硬
1．提高室温
2．加软蜡
3．刀口太钝
3用毛笔将蜡片摊开压 住，切2—3 片即成带
4．减小倾角
4．刀的倾角太大
4 切片粘附于切片刀，皱摺在一起
原 因： 1．室温过高 2．石蜡过软 3．刀口上留有一层 石蜡 补救办法： 1．降低室温 2．将蜡块投入凉水中 稍浸耒—增加 3．切片厚度，改用硬 蜡包埋，用二甲苯拭 去刀口的石蜡 4．磨刀或移动刀口
5．材料未居蜡块正中央
6．材料大而形不正
5．用刀片切去部分石蜡，使材
料居中 6．在大的一边切去少许石蜡
2 切片分离、不能连成带状
原 因：
1．室温过低
补救办法：
1．在切片机上方开一电 灯或提高室温 2．在蜡块面加一层45℃ 的软蜡或用手指蜡摩擦 块面
2．石蜡过硬
3．材料边缘留蜡太少 3．重新包埋
4．刀的角度不适合
组织石蜡切片制作
（一）组织固定包埋切片
1 2 3 4 5 用途 主要设备 药品及溶液配制 具体步骤及注意事项 出现问题及解决
1 用途
（1）用于各种组织结构分析（化学染料）
H.E.染色; 染色；等等 PAS染色；苯胺蓝染色；油红O染色；茜素红
（2）用于组织中特定蛋白质的定位表达分析
免疫组化；免疫荧光
织最好多取几块。
• 取材时要注明取材时间、组织器官名称、固定液名 称、组织块的数量、所取组织位于器官的部位等， 以备查。
4.2 固定
固定剂的作用对象主要是蛋白质 （一）固定剂： 1．甲醛：10%甲醛 福尔马林 100ml; 蒸馏水 900ml 注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。 2．10％中性福尔马林钙固定液
3．水洗
• 目的：洗去渗入组织中的固定液，终止固定。以免影响对组织内结构的观察、 分析和研究。
（1）各种以水配制的固定液如甲醛，都必须用流水冲洗，大块组织一般冲
洗24小时，小块组织一般冲洗2—10小时。 （2）固定液为多聚甲醛时，用于免疫组织化学等特殊染色的应将组织投入 PB缓冲液中，每60分钟更新洗涤液一次，累计6小时。 （3）经含有苦味酸的固定液固定的组织块，无论其固定液是水溶性还是酒 精溶性，都应充分冲洗，水溶性固定液固定的组织块一般须冲洗12小时，再 进入70%的酒精溶液洗涤，酒精溶性固定液固定的组织块直接进入70%的酒精
2．减小倾角
9 材料发生裂隙破碎或脱落
原 因： 1．脱水不干净 2．有透明剂残留 补救办法： 1．无法弥补 2．增加浸蜡时间，重新包埋
3．石蜡透入时，温度过高或 3．无法补救 时间过长 4．用正丁醇、叔丁醇和二氧 4．由于脱水剂和透明剂的影 六环等进行脱水和透明 响，使组织变硬发脆 5．在蜡块表面涂一薄层火棉 5．材料太硬或太粗 胶溶液
实验前准备
• 思想上重视，考虑到每一步都不能出错。 • 时间上准备，充足的时间做实验。 • 技术上准备，考虑材料的特点对各个步骤的改进， 生搬硬套其它组织的过程会出问题。 • 实验条件的准备，设备和药品，溶液配制等等是
否齐备。
4 具体步骤及注意事项
4.1 取材
• 根据不同的目的、组织特征代表性取材。 • 取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。 一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。每个组
⑥较小的组织可在脱水透明时开始用伊红染色
• 6、石蜡切片制备
（一）石蜡切片前的准备 1．切片刀 2．修整蜡块：在组织周围留有约1~2mm的石蜡边，两边必须 平行。 3．蜡块固定 4．载玻片擦洗干净后，在其表面涂上粘附剂（多聚赖氨酸。 5．准备好毛笔、镊子、染色架。 6．调好展片器内水的温度（45℃），有时也可以加些酒精到 水中。
甲醛液 10ml ;蒸馏水 90ml
加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充 分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。
• 3．4%多聚甲醛 • 先配制8%多聚甲醛: • 多聚甲醛 8g; 蒸馏水 100ml 加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1N
NaOH，并不停搅动至液体清明。
温箱中的温度必须严格控制在60℃的范围，不能超过60℃；浸蜡时间不宜过
长。浸蜡温度过高或时间过长使组织收缩过度收缩和脆变。
• 5．包埋
（1）步骤 ①准备包埋蜡：一般应用硬蜡（56~58℃或60~62℃）为好，所用的石蜡要求透明无杂质，新 的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性，可以加一些蜂蜡。蜡的熔点应与组织的硬度相适应。 包埋用过的石蜡可以反复使用。 ②准备包埋框：可以用金属的，也可以用硬纸摺叠。 ③点燃酒精灯，准备好无齿尖镊子，需作标记应先写好标签。 ④在金属框中倒入硬蜡，然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中，置好方向。可室温下冷却。 ⑤包埋框或纸盒内的蜡逐渐凝结，若表面已凝结形成一层固体状，即可放入冷水中，加速其
• 固定时，须注意以下几点： （1）固定剂应有足够的量，一般为组织块体积的 10～15倍。
（2）固定时间依材料大小、固定剂种类而异，可
从1小时到几十小时，有时中间需要更新固定剂。 某些固定剂对组织的硬化作用较强，作用时间应严 加控制，不能过长。 （3）一般固定剂都以新配制的为好，用过的不能
再用。PAF 应放在4度。
• 3.5 透明 • 1．透明的目的 （1）置换组织内的脱水剂，为下一步的浸蜡起到桥梁作用。 （2）使组织呈现不同程度的透明状态，有利于光线的透过。 • 2. 二甲苯是现在应用最广的一种透明剂。 • 3．二甲苯的步骤：两次透明 （1）第一次透明约40分钟 （2）第二次时间不一定，要视透明效果而定 • 4．注意事项 （1）时间不宜过长，否则组织会变脆；
凝固。
⑥待蜡块完全凝固以后，便可拆卸包埋框架， 或拆开纸盒，取出蜡块。
• （2）注意事项
①包埋时夹取组织的镊子，用酒精灯随时烧热，以免石蜡凝结后粘附
在镊子上，造成蜡块凝固不均匀。 ②包埋操作要迅速，组织从浸蜡杯中取出置入包埋框中的时间应尽量 缩短。 ③包埋后的蜡块应呈均质半透明状，如果出现白色混浊状，一般出现 在组织周围或组织的底部，应考虑这样几个方面的问题：a. 脱水不彻 底。b.包埋蜡温度低了，组织进行包埋时，包埋框中的蜡已成凝结状。 c.组织内还残留有较多的透明剂，d.石蜡不纯。 ④包埋箱中的温度必须保持恒定。 ⑤如包埋得不好，可将蜡块溶化，重新浸蜡和包埋。
3．刀口有石蜡屑
7 切片厚薄不匀
原 因： 1．切片机有毛病 2．夹刀不当 3，未旋紧标本台螺旋 4, 石蜡块过硬 补救办法： 1．矫正切片机装置 2．对症治疗 3．旋紧螺旋 4．将石蜡块在水中浸泡
8 每张切片厚薄不匀
原 因： 补救办法：
1．刀口震动，材料过硬
2．刀的倾角太大
1. 在蜡块表面涂一层火棉胶
溶液洗涤，该溶液可以脱掉苦味酸的黄色，但最好从50%酒精开始洗涤。
（4）固定液为酒精或是酒精混合液，一般不需用水冲洗，其组织块的洗涤 应用与固定液浓度相等垢酒精换洗或者直接进行脱水的程序。
3．脱水及透明
• 3.1 脱水的目的 组织内的水不能和支持剂混合，所以必须把组织中的水分彻底脱除。脱水有 利于组织的透明和浸蜡，有利于组织的永久保存。 • 3.2 乙醇可作固定剂，又可脱水剂，但乙醇与水混合时有较剧烈的物理反应。 高浓度的酒精对组织有强烈收缩及脆化的缺点，因此用乙醇脱水不能直接入 纯酒精中脱水，而必须经过由高到低的一系列不同浓度的酒精，逐渐取代组 织中水分，以保证组织脱水彻底，并避免组织过度收缩和硬化。 • 3.3 乙醇脱水过程 50%乙醇 6~8小时 -75%乙醇 6~8小时 -85%乙醇 3~5小时 -95%乙醇 1~2小时 95%乙醇 1~2小时-100%乙醇Ⅰ 1小时-100%乙醇Ⅱ 1小时