植物组织培养-外植体的选择与建立
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（3）、双子叶植物中：茄科（Solanacea）；秋海棠 科（Begoniaceae）；景天科（Crassulaceae）； 苦苣苔科（Gesneriaceae）；十字花科（Cruciferae） 再生力特强；郁金香（Tulip）再生力较弱。
（4）、同一种植物中：活体（in vivo）再生力强者， 离体（in vitro）再生力也强。
污染量=100X78.4%=79 获得量= 100X（60%）3= 21 4 个材料/容器： 获得量= 100X（60%）4=13 5 个材料/容器： 获得量= 100X（60%）5=8 • 防止污染的对策： 小容器、多数量、尽量分散、相 互隔离
污染量=100X62%=62
来自百度文库
获得量=100-62=48
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第二节 外植体（培养物）的选择
4、根据外植体的大小选择：
外
植
外
体 大
立
植 体
小
建
外植体大小与外植体建立
整理课件
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第二节 外植体（培养物）的选择
整理课件
18
第三节 外植体（培养物）的建立
4、污染（Infection）
能否有效地控制微生物污染是植物离体培养是否成功的关键技术 之一。对于离体培养的探索性研究实验，污染会导致实验失败； 对于大规模的离体繁殖生产来说，污染使生产成本大大增加。 因此，无论是科研机构还是生产厂家都十分重视微生物污染问 题。
整理课件
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第二节 外植体（培养物）的选择
3、根据时间和季节取材
生 长 物 质 含 量
时间或季节
抑 制 物 质 含 量
时间或季节
整理课件
10
第二节 外植体（培养物）的选择
3、根据时间和季节取材
取取材材时时间间
物 质 含 量
抑制物质 生长物质
时间或季节
整理课件
11
第二节 外植体（培养物）的选择
4、根据母株位置选择：
整理课件
3
第二节 外植体（培养物）的选择
杜鹃花 ‘Rhodoendron’
整理课件
4
第二节 外植体（培养物）的选择
2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择：
年龄
生长
开花
童年期
转变年期 阶段发育
成年期
整理课件
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第二节 外植体（培养物）的选择
2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择：
整理课件
植株的生长与发育
的研究进展较快。
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第三节 外植体（培养物）的建立
（1）、产生污染的因素：
①外植体：通常多年生的木本材料比一二年生的草本材料带菌多； 老的材料比幼嫩的带菌多；田间生长的材料比温室的带菌多； 带泥土的材料比清洁的带菌多。一年中以雨季的材料带菌多， 一天中以中午阳光最强时的材料带菌少。
②培养基：高压蒸汽灭菌的温度、压力、时间和正确使用情况， 以及过滤灭菌中过滤膜孔径、过滤灭菌器械的灭菌处理、过滤 灭菌操作等均影响培养基的灭菌效果。
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第二节 外植体（培养物）的选择
2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择：
年
程 度
龄 或 幼
化
外
立
植 体
建
阶
段
发 育
外
立
植 体
建
母株年龄和幼化程度与外植体建立
母株阶段发育与外植体建立
整理课件
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第二节 外植体（培养物）的选择
杜鹃花 ‘van Weerden Poelman’
整理课件
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第二节 外植体（培养物）的选择
整理课件
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第三节 外植体（培养物）的建立
（4）、附生菌控制：
• 采用化学杀菌剂可以有效地杀死附生菌，但是一些较特殊的外植体材料，如密披绒 毛的叶片或幼果、花芽或带苞片的叶芽，附生菌可能潜伏在外植体上，无法彻底清 除。这时，必须采取一些特殊的措施，才能有效控制附生菌。
取材来源：
• 从保护条件下生长的植株上取材，可有效地控制微生物污染。保护条件指温室、培 养箱、生长室等。从温室、培养箱里取材，可有效减少附生菌的群体数量。从栽培 于温室中的植株上取材和从露地取材相比，前者污染率更低。
③操作环节：接种室是否清洁、干燥、密闭，是否经常用紫外线 灯照射、甲醛熏蒸、70％酒精喷雾杀菌等，操作是否等熟练。
④培养环境：培养室要求清洁、密闭。每天用70％酒精喷雾除菌、
降尘，每周用少量甲醛熏蒸灭菌。如有空气过滤装置效果更好。
培养室相对湿度太高时，污染整理加课件重。
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第三节 外植体（培养物）的建立
植物离体培养中的污染可分为外植体、培养基、无菌操作和培养
环境四个方面。其中培养基和无菌操作方面的污染，目前已得
到十分有效的控制。外植体方面污染最复杂，也最难控制，其
可能是细菌引起的，也可能是真菌引起的；微生物可能是附生
性的，也可能是内生性的。近年来，国外较重视各种微生物的
鉴定，并根据不同的微生物种类采取相应的控制措施，这方面
（2）、污染的防止： • 母株保护：保持母株清洁，减少喷
灌。温室种植，喷施杀菌（虫）剂， 减少病原菌含量。 • 材料选择：选取生长发育健壮，病 虫危害少的材料。 • 严格清洗、消毒与无菌操作。 • 小容器、分散接种。
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第三节 外植体（培养物）的建立
（3）、污染估算及对策：
• 污染估算：首次接种通常污染 率40—60%
具原基结构的外植体：茎尖、 侧芽、原球茎、鳞芽、分生 组织
不具原基结构的外植体：根、 茎、叶、花、果等器官，需要 脱分化。
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第二节 外植体（培养物）的选择
整理课件
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第二节 外植体（培养物）的选择
整理课件
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第二节 外植体（培养物）的选择
整理课件
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第二节 外植体（培养物）的选择
整理课件
根据细胞全能性学说，植物体的每一个细胞 都含有全部的遗传信息，都能再生出一个 新植株。但是，要使每个细胞的全能性都 表现出来，在目前还是不易做到的事。因 而，外植体（初始培养物）的选择非常重 要。
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2
第二节 外植体（培养物）的选择
1、基因型：
再生能力
（1）、双子叶>单子叶；
（2）、被子植物>裸子植物；
第三节 外植体（培养物）的建立
1、主要任务：成功的将外植
体建立在试管中。
2、主要技术环节：
（1）、外植体的选择 （2）、外植体的消毒 （3）、培养基的选择、配制 （4）、外植体消毒与接种
3、关键问题：
（1）、污染（Infection） （2）、褐变（Browning）
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第二节 外植体（培养物）的选择
按40%计：接种100个材料 1个材料/容器：
污染量=100X40%=40 获得量=100-40=60。 2个材料/容器： 2污染：1X40%X40%=16% 1污染：2X40%X40%=32% 弃掉 2未污染：60%X60%=36% 污染率=100-36=62%
3 个材料/容器： 污染率=100-（60%）3=78.4%
（4）、同一种植物中：活体（in vivo）再生力强者， 离体（in vitro）再生力也强。
污染量=100X78.4%=79 获得量= 100X（60%）3= 21 4 个材料/容器： 获得量= 100X（60%）4=13 5 个材料/容器： 获得量= 100X（60%）5=8 • 防止污染的对策： 小容器、多数量、尽量分散、相 互隔离
污染量=100X62%=62
来自百度文库
获得量=100-62=48
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第二节 外植体（培养物）的选择
4、根据外植体的大小选择：
外
植
外
体 大
立
植 体
小
建
外植体大小与外植体建立
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第二节 外植体（培养物）的选择
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第三节 外植体（培养物）的建立
4、污染（Infection）
能否有效地控制微生物污染是植物离体培养是否成功的关键技术 之一。对于离体培养的探索性研究实验，污染会导致实验失败； 对于大规模的离体繁殖生产来说，污染使生产成本大大增加。 因此，无论是科研机构还是生产厂家都十分重视微生物污染问 题。
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第二节 外植体（培养物）的选择
3、根据时间和季节取材
生 长 物 质 含 量
时间或季节
抑 制 物 质 含 量
时间或季节
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第二节 外植体（培养物）的选择
3、根据时间和季节取材
取取材材时时间间
物 质 含 量
抑制物质 生长物质
时间或季节
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第二节 外植体（培养物）的选择
4、根据母株位置选择：
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第二节 外植体（培养物）的选择
杜鹃花 ‘Rhodoendron’
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第二节 外植体（培养物）的选择
2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择：
年龄
生长
开花
童年期
转变年期 阶段发育
成年期
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第二节 外植体（培养物）的选择
2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择：
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植株的生长与发育
的研究进展较快。
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第三节 外植体（培养物）的建立
（1）、产生污染的因素：
①外植体：通常多年生的木本材料比一二年生的草本材料带菌多； 老的材料比幼嫩的带菌多；田间生长的材料比温室的带菌多； 带泥土的材料比清洁的带菌多。一年中以雨季的材料带菌多， 一天中以中午阳光最强时的材料带菌少。
②培养基：高压蒸汽灭菌的温度、压力、时间和正确使用情况， 以及过滤灭菌中过滤膜孔径、过滤灭菌器械的灭菌处理、过滤 灭菌操作等均影响培养基的灭菌效果。
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第二节 外植体（培养物）的选择
2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择：
年
程 度
龄 或 幼
化
外
立
植 体
建
阶
段
发 育
外
立
植 体
建
母株年龄和幼化程度与外植体建立
母株阶段发育与外植体建立
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第二节 外植体（培养物）的选择
杜鹃花 ‘van Weerden Poelman’
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8
第二节 外植体（培养物）的选择
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第三节 外植体（培养物）的建立
（4）、附生菌控制：
• 采用化学杀菌剂可以有效地杀死附生菌，但是一些较特殊的外植体材料，如密披绒 毛的叶片或幼果、花芽或带苞片的叶芽，附生菌可能潜伏在外植体上，无法彻底清 除。这时，必须采取一些特殊的措施，才能有效控制附生菌。
取材来源：
• 从保护条件下生长的植株上取材，可有效地控制微生物污染。保护条件指温室、培 养箱、生长室等。从温室、培养箱里取材，可有效减少附生菌的群体数量。从栽培 于温室中的植株上取材和从露地取材相比，前者污染率更低。
③操作环节：接种室是否清洁、干燥、密闭，是否经常用紫外线 灯照射、甲醛熏蒸、70％酒精喷雾杀菌等，操作是否等熟练。
④培养环境：培养室要求清洁、密闭。每天用70％酒精喷雾除菌、
降尘，每周用少量甲醛熏蒸灭菌。如有空气过滤装置效果更好。
培养室相对湿度太高时，污染整理加课件重。
20
第三节 外植体（培养物）的建立
植物离体培养中的污染可分为外植体、培养基、无菌操作和培养
环境四个方面。其中培养基和无菌操作方面的污染，目前已得
到十分有效的控制。外植体方面污染最复杂，也最难控制，其
可能是细菌引起的，也可能是真菌引起的；微生物可能是附生
性的，也可能是内生性的。近年来，国外较重视各种微生物的
鉴定，并根据不同的微生物种类采取相应的控制措施，这方面
（2）、污染的防止： • 母株保护：保持母株清洁，减少喷
灌。温室种植，喷施杀菌（虫）剂， 减少病原菌含量。 • 材料选择：选取生长发育健壮，病 虫危害少的材料。 • 严格清洗、消毒与无菌操作。 • 小容器、分散接种。
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21
第三节 外植体（培养物）的建立
（3）、污染估算及对策：
• 污染估算：首次接种通常污染 率40—60%
具原基结构的外植体：茎尖、 侧芽、原球茎、鳞芽、分生 组织
不具原基结构的外植体：根、 茎、叶、花、果等器官，需要 脱分化。
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第二节 外植体（培养物）的选择
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第二节 外植体（培养物）的选择
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14
第二节 外植体（培养物）的选择
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第二节 外植体（培养物）的选择
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根据细胞全能性学说，植物体的每一个细胞 都含有全部的遗传信息，都能再生出一个 新植株。但是，要使每个细胞的全能性都 表现出来，在目前还是不易做到的事。因 而，外植体（初始培养物）的选择非常重 要。
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第二节 外植体（培养物）的选择
1、基因型：
再生能力
（1）、双子叶>单子叶；
（2）、被子植物>裸子植物；
第三节 外植体（培养物）的建立
1、主要任务：成功的将外植
体建立在试管中。
2、主要技术环节：
（1）、外植体的选择 （2）、外植体的消毒 （3）、培养基的选择、配制 （4）、外植体消毒与接种
3、关键问题：
（1）、污染（Infection） （2）、褐变（Browning）
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第二节 外植体（培养物）的选择
按40%计：接种100个材料 1个材料/容器：
污染量=100X40%=40 获得量=100-40=60。 2个材料/容器： 2污染：1X40%X40%=16% 1污染：2X40%X40%=32% 弃掉 2未污染：60%X60%=36% 污染率=100-36=62%
3 个材料/容器： 污染率=100-（60%）3=78.4%