药品微生物检验基础知识课件
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药品微生物检验基础知识 ppt课件
险较小 · 保存期比较短， · 反复传代有引 · 比较容易掌握 起变异的可能；
A：甘油冷冻管保藏法
保藏温度
缺点：操作相对复杂，成本较高。 操作简便， 斜面低温 4℃左右 1～3个月 · · 成本低， 保藏法 B：斜面低温保藏法
· 铜绿假单胞菌 保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜 不宜用本法保 用本法保存。
ppt课件
17
2白色念珠菌 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人 口腔，上呼吸道，肠道及阴 道，是医学全身性真菌感染 病的重要途径，可以引起心 膜炎、肺炎、尿布疹、鹅口 疮、阴道炎、脑膜炎、及败 血症。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
ppt课件 3
一、微生物基本介绍
3、微生物的特点
体形微小；
结构简单；
生长繁殖快；
种类繁多，分布广，适应性强。
包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、 支原体和病毒等。
ppt课件 4
一、微生物基本介绍 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有
1大肠埃希菌
ppt课件 25
二、培养基
4、培养的再融化方式 水浴加热 微波炉 电热炉加热 注意： 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次 融化的培养基应置于45℃～50℃的水浴中，不得超过8小时
ppt课件 26
二、培养基 5、培养基的性能评估
所有购回的、配制好的培养基均应进行质量控制试验（培养 基适应性检查） 理化指标（P55） 微生物学指标（P55）
ppt课件
45
四、微生物限度检查法
1、定义
A：甘油冷冻管保藏法
保藏温度
缺点：操作相对复杂，成本较高。 操作简便， 斜面低温 4℃左右 1～3个月 · · 成本低， 保藏法 B：斜面低温保藏法
· 铜绿假单胞菌 保藏温度4℃左右，保藏时间1～3个月，但铜绿假单胞菌不宜 不宜用本法保 用本法保存。
ppt课件
17
2白色念珠菌 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人 口腔，上呼吸道，肠道及阴 道，是医学全身性真菌感染 病的重要途径，可以引起心 膜炎、肺炎、尿布疹、鹅口 疮、阴道炎、脑膜炎、及败 血症。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
ppt课件 3
一、微生物基本介绍
3、微生物的特点
体形微小；
结构简单；
生长繁殖快；
种类繁多，分布广，适应性强。
包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、 支原体和病毒等。
ppt课件 4
一、微生物基本介绍 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有
1大肠埃希菌
ppt课件 25
二、培养基
4、培养的再融化方式 水浴加热 微波炉 电热炉加热 注意： 固体培养基灭菌后的再融化只允许一次 融化的培养基应置于45℃～50℃的水浴中，不得超过8小时
ppt课件 26
二、培养基 5、培养基的性能评估
所有购回的、配制好的培养基均应进行质量控制试验（培养 基适应性检查） 理化指标（P55） 微生物学指标（P55）
ppt课件
45
四、微生物限度检查法
1、定义
《微生物检验基础知识》PPT
采样
根据检验目的和要求，选择适当的采 样方法和采样点，确保采集的样品具 有代表性。
计数与测定
对目标微生物进行计数和测定，得到 样品中微生物的数量和活性等指标。
01
02
样品处理
对采集的样品进行预处理，包括稀释、 均质化等，以便后续的检验操作。
03
微生物分离与纯化
通过培养基和培养条件的选择，将目 标微生物从样品中分离出来并进行纯 化，得到单一物进行快速检测和鉴定。
微生物检验技术的发展趋势
自动化与智能化
随着技术的发展，微生物检验将越来 越依赖于自动化和智能化的设备和技 术，提高检验效率和准确性。
快速检测技术
发展快速、简便的检测方法，缩短检 验时间，提高检验效率。
高通量检测技术
采用高通量技术，一次处理大量样品， 提高检测的通量和效率。
《微生物检验基础知识》
目录
• 微生物检验概述 • 微生物基本知识 • 微生物检验技术 • 微生物检验在食品安全中的应用 • 微生物检验在医疗领域的应用 • 微生物检验的注意事项与伦理规
范
01
微生物检验概述
微生物检验的定义和目的
微生物检验的定义
微生物检验是对微生物进行观察、分析和检测，以获得有关微生物种类、数量、 形态、生化特性等方面的数据，从而判断其与人类健康、环境安全等方面的关 系。
按照应用领域分类
微生物检验可以根据应用领域的不同，分为医学微生物检验、食品 微生物检验、环境微生物检验等。
微生物检验的应用领域
医学领域
食品工业
微生物检验在医学领域中有着广泛的应用 ，如诊断疾病、监测传染病、研究病原菌 的特性等。
微生物检验在食品工业中是必不可少的环 节，通过对食品中的微生物进行检测，可 以确保食品的安全性和卫生质量。
药品微生物限度检测技术PPT课件
检
喷雾剂供
查
试品
1.4.2供试品检查
非
无 菌
① 平皿法
平皿法包括倾注法和涂布法
产
品 微 生 物 限 度 检 查
除另有规定外， 取规定量供试 品，按方法适 用性试验确认 的方法进行供 试液制备和菌 数测定，每稀
培养和计数 ：除另有规定外， 胰酪大豆胨琼脂培养基平板 在30～35℃培养3天，沙氏葡 萄糖琼脂培养基平板在20～ 25℃培养5 天，观察菌落生 长情况，点计平板上生长的 所有菌落数，必要时可适当 延长培养时间至7 天进行菌落
微
生
1.3.3计数方法适用性试验
物
限
度
检
查
非 无
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
菌 1.3.1菌液制备及使用
产 品
菌种
微
试验用菌株的传代次数不得超过5
生
代（从菌种保藏中心获得的干燥菌
物
限
种为第0代），并采用适宜的菌种
度
保藏技术进行保存，以保证试验菌
检 查
株的生物学特性
检
查
非
② 薄膜过滤法
无
除另有规定外，按计数方法适用性试
菌
验确认的方法进行供试液制备。取相
产
当于1g、1ml 或10 cm²供试品的供试 液，若供试品所含的菌数较多时，可
品
取适宜稀释级的供试液，照方法适用
微
性试验确认的方法加至适量稀释液中， 立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜， 培养和计数：培养条件
生
菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基 和计数方法同平皿计数
值报告菌数
非
③ MPN 法
无
药品生物检定的基础知识 洁净区的微生物检查(药品生物检定技术课件)
微生物生长繁殖的控制—防腐
使用同一种化学药品在低浓度时常为防腐剂， 在高浓度时为消毒剂。防腐作为一种防止或抑 制细菌生长繁殖的方法，在药品生产中得到广 泛应用。例如，非无菌药品处方中添加防腐剂。 防腐剂与消毒剂在本质上没有区别，只是浓度 不同而已。有时统称为消毒（防腐）剂。
微生物生长繁殖的控制—消毒
第三部分 药品生产中的微生物生态学分布
微生物生长繁殖的速度是十分惊人的，生态分 布是十分广泛的，这里有一组数字，可以给参 与药品生产的人们一个启迪：
每克新鲜植物叶子表面附生着大约100万个 微生物。
药品生产中的微生物生态学分布
人的皮肤上平均每平方厘米含有10万个细菌，而且 繁殖速度惊人，刚洗过的皮肤，在几小时之内细菌 就可恢复到原来的数量。人的肠道内聚集有100万 亿左右的微生物，粪便中细菌大约占粪便干重的 1/3。这就告诉人们，为什么要便后洗手，而无菌 药品车间的操作工为什么不能裸手操作。
2、制药用水中的微生物
水中的微生物种类较多见的有：假单胞菌属、产碱杆 菌属、产黄菌属、产色细菌属和沙雷菌属等。
在饮用水标准中，大肠杆菌（又称大肠埃希菌）的含 量是判断饮用水水质污染程度的指标。
大肠埃希菌 2-3 μm
2、制药用水中的微生物
垃圾和工业废液污染的水源中约98%含有革兰 阴性细菌、微球菌属、噬细胞菌属，此外还有 酵母菌、类酵母菌和放线菌。
4、人体的微生物和微粒
人体不同部位所带细菌数量
部位
细菌数量
手部
100-1000/c㎡
前额
1000-100000/c㎡
头皮
约100万/c㎡
腋窝
约1000万/c㎡
鼻腔分泌物
约1000万/g
唾液
药物制剂的微生物学检查ppt课件
特殊注射剂的无菌检查
❖ １、油剂性药物的检测 ❖ 油剂性药物因难于和培养基充分混合，往往影
响检出结果。如果加入吐温－80，与油剂性药物混 合乳化，再用培养基稀释，可以使药品均匀分布在 培养基中。 ❖ 对照：吐温－80 。
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 检测时先把一定量药均经增菌后转种到选 择鉴别培养基——麦康凯平板或伊红美兰平 板（EMB平板）。
❖ 培养后挑取可疑菌落作革兰染色及生化反应。 生化反应包括 IMViC试验和乳糖发酵试验。 大肠杆菌IMViC试验结果为+、+、—、—
一般注射剂的无菌检查
❖ 直接接种法
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 需氧菌和厌氧菌的培养已全部采用硫乙醇酸 钠培养基检查。在同一培养基中，需氧菌在 培养基表面生长，而厌氧菌在培养基内生长。
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 如检测结果为革兰阴性杆菌，乳糖发酵 阳性及IMViC试验符合，则可判断每克 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 一般选取菌落数在30-300之间的平板计数。
❖ １、油剂性药物的检测 ❖ 油剂性药物因难于和培养基充分混合，往往影
响检出结果。如果加入吐温－80，与油剂性药物混 合乳化，再用培养基稀释，可以使药品均匀分布在 培养基中。 ❖ 对照：吐温－80 。
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 检测时先把一定量药均经增菌后转种到选 择鉴别培养基——麦康凯平板或伊红美兰平 板（EMB平板）。
❖ 培养后挑取可疑菌落作革兰染色及生化反应。 生化反应包括 IMViC试验和乳糖发酵试验。 大肠杆菌IMViC试验结果为+、+、—、—
一般注射剂的无菌检查
❖ 直接接种法
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 需氧菌和厌氧菌的培养已全部采用硫乙醇酸 钠培养基检查。在同一培养基中，需氧菌在 培养基表面生长，而厌氧菌在培养基内生长。
资金是运动的价值，资金的价值是随 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 如检测结果为革兰阴性杆菌，乳糖发酵 阳性及IMViC试验符合，则可判断每克 时间变 化而变 化的， 是时间 的函数 ，随时 间的推 移而增 值，其 增值的 这部分 资金就 是原有 资金的 时间价 值
❖ 一般选取菌落数在30-300之间的平板计数。
药品GMP卫生管理与微生物基础知识培训-图文
革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒 类、抗生素、疫苗等。
▪ 2. 微生物的危害 ▪ 微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原
微生物。如人类的许多传染病（感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等） ，均是由病原微生物引起的。
▪ （3）微波 是一种波长为1mm～1m的电磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜及陶瓷等物质，但 不能穿透金属表面。多用于检验室用品、无菌室的用具的消毒。
▪ 病毒没有细胞构造，病毒粒子的主要成分是核酸和蛋白质，在宿主细胞协助下，通过核酸 的复制和核酸蛋白装配的形式进行增殖。病毒的结构通常有螺旋对称型、20面体立体对称 型和复合对称型。
▪ 2. 病毒的增殖
▪ 病毒只有在宿主的活细胞里才能进行增殖。病毒的增殖不是二分裂方式，而是以其基因组 为模板，藉DNA多聚酶或RNA多聚酶以及其它必要因素，经过复杂的生化合成过程，复制 出病毒的基因组。此时宿主细胞的生化合成受到抑制，病毒基因则经过转录、翻译等过程 ，产生大量病毒蛋白质，再经过装配，最终释放出子代病毒。病毒这种以核酸分子为模板 进行增殖的方式称为自我复制。
▪ 2. 细菌的繁殖
▪ 二分裂繁殖是细菌最普遍、最主要的繁殖方式。在分裂前先延长菌体，染色体复制为二 ，然后垂直于长轴分裂，细胞赤道附近的细胞质膜凹陷生长，直至形成横隔膜，同时形成 横隔壁，这样便产生两个子细胞。
▪ 细菌生长速度很快，一般约20min分裂一次。若按此速度计算，细菌群体将庞大到难以想 象的程度。但事实上由于细菌繁殖中营养物质的逐渐消耗，有害代谢产物的逐渐积累，细 菌不可能始终保持高速度的无限繁殖。经过一段时间后，细菌繁殖速度逐渐减慢，死亡菌 数增多，活菌增长率随之下降并趋于停滞。
▪ 2. 微生物的危害 ▪ 微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原
微生物。如人类的许多传染病（感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等） ，均是由病原微生物引起的。
▪ （3）微波 是一种波长为1mm～1m的电磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜及陶瓷等物质，但 不能穿透金属表面。多用于检验室用品、无菌室的用具的消毒。
▪ 病毒没有细胞构造，病毒粒子的主要成分是核酸和蛋白质，在宿主细胞协助下，通过核酸 的复制和核酸蛋白装配的形式进行增殖。病毒的结构通常有螺旋对称型、20面体立体对称 型和复合对称型。
▪ 2. 病毒的增殖
▪ 病毒只有在宿主的活细胞里才能进行增殖。病毒的增殖不是二分裂方式，而是以其基因组 为模板，藉DNA多聚酶或RNA多聚酶以及其它必要因素，经过复杂的生化合成过程，复制 出病毒的基因组。此时宿主细胞的生化合成受到抑制，病毒基因则经过转录、翻译等过程 ，产生大量病毒蛋白质，再经过装配，最终释放出子代病毒。病毒这种以核酸分子为模板 进行增殖的方式称为自我复制。
▪ 2. 细菌的繁殖
▪ 二分裂繁殖是细菌最普遍、最主要的繁殖方式。在分裂前先延长菌体，染色体复制为二 ，然后垂直于长轴分裂，细胞赤道附近的细胞质膜凹陷生长，直至形成横隔膜，同时形成 横隔壁，这样便产生两个子细胞。
▪ 细菌生长速度很快，一般约20min分裂一次。若按此速度计算，细菌群体将庞大到难以想 象的程度。但事实上由于细菌繁殖中营养物质的逐渐消耗，有害代谢产物的逐渐积累，细 菌不可能始终保持高速度的无限繁殖。经过一段时间后，细菌繁殖速度逐渐减慢，死亡菌 数增多，活菌增长率随之下降并趋于停滞。
药物制剂的微生物学检验PPT课件
微生物药敏试验是测定微生物对 各种抗菌药物的敏感程度的方法。
通过药敏试验可以了解致病菌对 抗菌药物的敏感性和耐药性，为
临床合理用药提供依据等。
03
药物制剂的微生物污染 来源与控制
微生物污染来源
生产环境
生产车间、设备、容器具 等可能成为微生物的来源， 污染药物制剂。
常用的微生物计数法有直接计数法、 间接计数法和流式细胞计数法等。
微生物鉴定的方法
微生物鉴定的方法是根据微生 物的形态、生理生化特征等对 其进行分类和识别的技术。
常用的微生物鉴定方法有形态 学鉴定、血清学鉴定、基因型 鉴定等。
微生物鉴定对于确定病原微生 物、研究新发传染病等方面具 有重要意义。
微生物药敏试验
水源传播
生产过程中使用的水源，如清洗用 水、冷却水等，可能含有微生物， 进而污染药物制剂。
微生物污染的控制措施
环境控制
定期清洁和消毒生产环境，保 持车间卫生，降低微生物的滋
生。
人员管理
操作人员需经过培训，严格遵 守卫生规定，定期检查手部卫 生。
原材料控制
对原材料进行质量检查，确保 不携带微生物，并对辅料等进 行灭菌处理。
培养基是微生物生长繁殖的介质，由水、碳源、氮源、无机盐等组成，根据不同微 生物的需求，培养基的成分和配比也有所不同。
微生物培养法常用于分离、纯化特定的微生物，以及测定微生物的生理生化特征。
微生物计数法
微生物计数法是通过一定的技术手段， 对样品中微生物的数量进行计数的方 法。
微生物计数法在药物制剂的微生物限 度检查、环境监测等领域有广泛应用。
原材料
药物制剂的原材料，如药 材、辅料等，可能携带微 生物。
生产人员
操作人员的手部、衣物等 可能成为微生物的来源， 污染药物制剂。
药物制剂微生物检验培训课件
出/ml
金黄色葡萄球 菌、铜绿假单 胞菌不得检出
/ml
大肠埃希菌不 得检出/ml
大肠埃希菌不 得检出/ml
大肠菌群<20
cfu /g
药物制剂微生物检验
29
三、控制菌检查－检查项目
（1）阴性对照试验：取稀释液10ml按相应 供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。
（2）阳性对照试验：供试品+10~100CFU 阳 性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。
-
产气杆菌
-
-
+
药物制剂微生物检验
C试验 +
41
三、控制菌检查－大肠埃希菌检查
★大肠埃希菌检查结果报告
MUG阳性:紫外光下 管内培养物呈现 蓝白色荧光
检出大肠 埃希菌
MUG阳性，靛基质阳性 MUG阳性，靛基质阴性，IMViC为－＋－－，G-
MUG阴性，靛基质阳性，IMViC为＋＋－－，G-
药物制剂微生物检验
1.平皿法
10倍递增稀释法
10g/ml 供试品
倒置培养3d
30~35℃ 营养琼脂 培养基
10-1
1.0ml 10-2 1.0ml 10-3
9.0ml
9.0ml
23~28℃
倒置培养5d
玫瑰红钠 琼脂培养 基
稀 9.0ml
释 液
对照
对照 1.0ml
对照 对照
药物制剂微生物检验
14
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
件下能生长。
药物制剂微生物检验
46
三、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查
★铜绿假单胞菌检查意义
铜绿假单胞菌在特殊情
况下可引起皮肤化脓感染、
20
封闭式薄膜过滤器
金黄色葡萄球 菌、铜绿假单 胞菌不得检出
/ml
大肠埃希菌不 得检出/ml
大肠埃希菌不 得检出/ml
大肠菌群<20
cfu /g
药物制剂微生物检验
29
三、控制菌检查－检查项目
（1）阴性对照试验：取稀释液10ml按相应 供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。
（2）阳性对照试验：供试品+10~100CFU 阳 性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。
-
产气杆菌
-
-
+
药物制剂微生物检验
C试验 +
41
三、控制菌检查－大肠埃希菌检查
★大肠埃希菌检查结果报告
MUG阳性:紫外光下 管内培养物呈现 蓝白色荧光
检出大肠 埃希菌
MUG阳性，靛基质阳性 MUG阳性，靛基质阴性，IMViC为－＋－－，G-
MUG阴性，靛基质阳性，IMViC为＋＋－－，G-
药物制剂微生物检验
1.平皿法
10倍递增稀释法
10g/ml 供试品
倒置培养3d
30~35℃ 营养琼脂 培养基
10-1
1.0ml 10-2 1.0ml 10-3
9.0ml
9.0ml
23~28℃
倒置培养5d
玫瑰红钠 琼脂培养 基
稀 9.0ml
释 液
对照
对照 1.0ml
对照 对照
药物制剂微生物检验
14
二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
件下能生长。
药物制剂微生物检验
46
三、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查
★铜绿假单胞菌检查意义
铜绿假单胞菌在特殊情
况下可引起皮肤化脓感染、
20
封闭式薄膜过滤器
微生物检验技术基础知识课件
0＜100Fra bibliotek5—
—
0
0
＜100
6
—
0
0
0
＜10
7
0
0
0
—
＜1
四、微生物限度检查法
5.4.2薄膜过滤法
滤膜孔径不大0于.45μm，直径一般5为0mm，若需要用冲洗 液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量1不00超m，过l 总冲洗量 不得超过1000m。l
?贴膜 菌面朝上于相应的琼脂培养基平板上培养，每 基至少制备一张滤膜。 ?阴性对照试（验不得有菌生长） ?菌落报告规则每张滤膜上的菌落数应不1超00过cf，u 若滤 膜上无菌生长，以1乘＜以稀释倍数的值报告菌数。
? 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果 不再复试；
? 供试品的细菌数、霉菌及酵母菌数其中任何一项不符 种项下的规定，应从同一批样品中随，机独抽立样复试两次 ，以3次结果的平均值报告菌数；
? 若供试品的细菌数、霉菌及酵母菌数、控制菌三项检 均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定，反之 品不符合规定。
四、微生物限度检查法
5.5控制菌检查
供试品的控制菌检查应按已验证的方法进行，增菌培 实际用量同控制菌检查方法的验证。
?阳性对照试验加：菌量为10～100cf，u 阳性对照试验应检 出相应的控制菌。 ?阴性对照试验取：稀释液10m代l 替供试液，阴性对照应无 菌生长。 ?按照不同的给药途径，必检的控制菌不同。
造成过度灭菌； ? 培养基保存前应标上名称和制备日期（或到期日期） ? 琼脂培养基不得0℃在或0℃以下存放； ? 琼脂平板最好现配现用，如置冰箱保存，不超过一周
二、培养基
4、培养的再融化方式 ? 水浴加热 ? 微波炉
第十七章药物制剂的微生物检验课件
微生物检验的目的
微生物检验在药物制剂生产过程 中主要用于控制产品的质量和安 全性，确保产品在使用过程中不 会对使用者造成危害。
微生物检验的分类
01
02
03
按照检验对象分类
可分为原辅料检验、半成 品检验、成品检验以及环 境监测等。
按照检验方法分类
可分为常规微生物检验和 快速检测。
按照检验项目分类
可分为一般微生物检验和 特殊微生物检验。
。
质量控制标准
制定符合国家或行业标准的质控 标准，如《药品微生物限度检查
指导原则》等。
不合格品的处理
对不符合质控标准的检验结果进 行调查分析，找出原因并采取纠 正措施，同时对不合格品进行处
理并记录。
05 微生物检验的注意事项
实验安全注意事项
实验操作应在无菌环 境下进行，避免微生 物污染。
实验结束后，应按照 规定正确处理废弃物 ，防止对环境造成污 染。
根据国家药品监管部门的规定和指导 原则，制定药物制剂中微生物的限量 标准，以确保药物的安全性和有效性 。
药物制剂的微生物检验方法
培养法
通过培养基培养微生物， 观察微生物的生长情况， 从而确定药物制剂中微生 物的存在和数量。
显微镜检查法
通过显微镜观察药物制剂 中微生物的形态和大小， 以确定微生物的种类和数 量。
药物制剂的微生物污染来源
生产过程中污染
原材料污染
在药物制剂的生产过程中，由于生产环境 、设备、操作等方面的原因，可能导致微 生物的污染。
药物制剂的原材料，如中药材、辅料等， 可能携带微生物，从而在生产过程中污染 药物制剂。
包装材料污染
使用过程中污染
包装材料如果不符合卫生标准或在使用前 未经过严格的消毒处理，也可能成为药物 制剂的微生物污染源。
微生物检验在药物制剂生产过程 中主要用于控制产品的质量和安 全性，确保产品在使用过程中不 会对使用者造成危害。
微生物检验的分类
01
02
03
按照检验对象分类
可分为原辅料检验、半成 品检验、成品检验以及环 境监测等。
按照检验方法分类
可分为常规微生物检验和 快速检测。
按照检验项目分类
可分为一般微生物检验和 特殊微生物检验。
。
质量控制标准
制定符合国家或行业标准的质控 标准，如《药品微生物限度检查
指导原则》等。
不合格品的处理
对不符合质控标准的检验结果进 行调查分析，找出原因并采取纠 正措施，同时对不合格品进行处
理并记录。
05 微生物检验的注意事项
实验安全注意事项
实验操作应在无菌环 境下进行，避免微生 物污染。
实验结束后，应按照 规定正确处理废弃物 ，防止对环境造成污 染。
根据国家药品监管部门的规定和指导 原则，制定药物制剂中微生物的限量 标准，以确保药物的安全性和有效性 。
药物制剂的微生物检验方法
培养法
通过培养基培养微生物， 观察微生物的生长情况， 从而确定药物制剂中微生 物的存在和数量。
显微镜检查法
通过显微镜观察药物制剂 中微生物的形态和大小， 以确定微生物的种类和数 量。
药物制剂的微生物污染来源
生产过程中污染
原材料污染
在药物制剂的生产过程中，由于生产环境 、设备、操作等方面的原因，可能导致微 生物的污染。
药物制剂的原材料，如中药材、辅料等， 可能携带微生物，从而在生产过程中污染 药物制剂。
包装材料污染
使用过程中污染
包装材料如果不符合卫生标准或在使用前 未经过严格的消毒处理，也可能成为药物 制剂的微生物污染源。
微生物检验ppt课件(2024)
涂布分离法
将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2024/1/29
19
革兰氏染色技术
初染
涂片固定后，滴加结晶 紫染色液覆盖涂片，染 色1分钟，然后水洗。
2024/1/29
媒染
脱色
复染
滴加卢戈氏碘液覆盖涂 片，媒染1分钟，然后水
洗。
用95%乙醇脱色30秒至 1分钟，然后水洗。
22
04
定期对实验室环境和设 备进行清洁、消毒和维 护，确保其功能正常
实验人员的素质与技能要求
01
02
03
04
具备微生物学、医学、检验学 等相关专业的背景和知识
熟悉微生物检验的基本原理、 方法和技术
掌握实验室安全知识和操作技 能，如生物安全防护、废弃物
处理等
具备良好的职业道德和团队协 作精神，能够认真负责地完成
及时向上级主管部门或相关方报告实验结果，并提供必 要的技术支持和建议
对实验结果进行客观、准确的评价和解释，避免主观臆 断和误导
对实验过程中出现的问题和异常情况进行及时汇报和处 理，确保实验质量和安全
2024/1/29
25
06
微生物检验的挑战与发展趋势
2024/1/29
26
微生物检验面临的挑战与问题
微生物多样性
微生物种类繁多，形态各异，对检验技术的要求极高。
2024/1/29
检验灵敏度与特异性
传统微生物检验方法灵敏度低，特异性差，难以满足临床和科研 需求。
耐药性问题
随着抗生素的广泛使用，耐药微生物逐渐增多，对检验技术提出 了更高的要求。
27
新技术在微生物检验中的应用与展望
将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2024/1/29
19
革兰氏染色技术
初染
涂片固定后，滴加结晶 紫染色液覆盖涂片，染 色1分钟，然后水洗。
2024/1/29
媒染
脱色
复染
滴加卢戈氏碘液覆盖涂 片，媒染1分钟，然后水
洗。
用95%乙醇脱色30秒至 1分钟，然后水洗。
22
04
定期对实验室环境和设 备进行清洁、消毒和维 护，确保其功能正常
实验人员的素质与技能要求
01
02
03
04
具备微生物学、医学、检验学 等相关专业的背景和知识
熟悉微生物检验的基本原理、 方法和技术
掌握实验室安全知识和操作技 能，如生物安全防护、废弃物
处理等
具备良好的职业道德和团队协 作精神，能够认真负责地完成
及时向上级主管部门或相关方报告实验结果，并提供必 要的技术支持和建议
对实验结果进行客观、准确的评价和解释，避免主观臆 断和误导
对实验过程中出现的问题和异常情况进行及时汇报和处 理，确保实验质量和安全
2024/1/29
25
06
微生物检验的挑战与发展趋势
2024/1/29
26
微生物检验面临的挑战与问题
微生物多样性
微生物种类繁多，形态各异，对检验技术的要求极高。
2024/1/29
检验灵敏度与特异性
传统微生物检验方法灵敏度低，特异性差，难以满足临床和科研 需求。
耐药性问题
随着抗生素的广泛使用，耐药微生物逐渐增多，对检验技术提出 了更高的要求。
27
新技术在微生物检验中的应用与展望
6.4药品的微生物限度检查教学课件
大肠埃希菌 耐胆盐革兰阴性菌 铜绿假单胞菌 沙门菌 金黄色葡萄球菌 梭菌 白色念珠菌
非全检，检查 种类与剂型、 给药途径、原 料来源等有关
一、药品微生物限度检查总则
（一）检查标准
《中国药典》（2015年版）四部 微生物总数检查参照通则1105；控制菌检查法 参照通则1106。
（二）检查环境
洁净度不低于D级背景下的局部B级环境
100ml 供试液
厌氧,48h
适宜体积的 梭菌增菌培 养液
报
G+杆菌 革兰染色、镜检
告 有/无芽孢
检
出 无气泡, 过氧化氢酶试验
阴性
哥伦比亚 琼脂平板 厌氧,48～72h
有菌落 无菌落
报告 未检出
（七）白色念珠菌检查
又称白色假丝酵母，卵圆形真菌，革兰染色 阳性，有芽生孢子，能形成厚膜孢子和假菌丝。 感染后可引起呼吸系统、消化系统和泌尿生殖 系统的疾病。
（一）耐胆盐革兰阴性菌检查
耐胆盐革兰阴性菌指在胆汁酸中可以存活并 繁殖的革兰阴性菌。
2015年版《中国药典》规定呼吸道吸入给药制 剂、含药材原粉的口服中药制剂、中药提取物、 中药饮片等需检查耐胆盐革兰阴性菌，其数量不 得超过限度标准。
1.耐胆盐革兰阴性菌检查程序
配培养基 和稀释液
供试液 的制备
肠道增 菌肉汤
RV 肉 汤 增菌培 养
无菌落或无特征菌落
最终结 果判断
确证 试验
木糖赖氨酸 脱氧胆酸盐 琼脂划线分 离
有特征 菌落
三糖铁琼 脂培养基 穿刺接种
2.供试品沙门菌检查操作示意图
10g/10ml
供试品
0.1ml
18～24h
18～24h
适宜体积 TSB预培养
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药品微生物检验基础知识
细菌鉴别革兰氏染色
• 格兰仕阳性菌例如：金黄色葡萄球菌，也称“金葡 菌”，细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽 聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫 附着后不被酒精脱色故而呈现紫色
• 革兰氏阴性菌例如:大肠埃希菌的细胞壁肽聚糖层薄、 交联度差，脂类含量高，所以紫色复合物被酒精冲掉 然后附着了沙黄的红色。
水洗，吸去水分。
• 7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，自来水冲洗。干 燥，镜检。
药品微生物检验基础知识
染色结果
。 革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色
药品微生物检验基础知识
染色结果
革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
• 4.2真菌（包括酵母菌和霉菌） 1黑曲霉菌 2白色念珠菌
支原体和病毒等。
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
• 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有 1大肠埃希菌 2金黄色葡萄球菌 3枯草芽孢杆菌 4生孢梭菌 5铜绿假单胞菌
药品微生物检验基础知识
1大肠埃希菌
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）通常被称为大肠杆菌，是 Escherich在1885年发现的，在 相当长的一段时间内一直被当 作正常肠道菌群的组成部分认 为是非致病菌。
2、微生物的分类
微生物的主要分类单位：域、界、门、纲、目、科、 属、种、变种、亚种（小种）、型、菌株（品系）
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
3、微生物的特点 • 体形微小； • 结构简单； • 生长繁殖快； • 种类繁多，分布广，适应性强。 • 包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、
药品微生物检验基础知识
4生孢梭菌
生孢梭菌 （Clostridium sporogenes） 又译产孢梭菌，能够产生孢 子，革兰氏染色阳性，以周 生鞭运动，严格厌氧的梭菌。
药品微生物检验基础知识
5铜绿假单胞菌
• 铜绿假单胞菌的学名是 Pseudomonas aeruginosa，绿 脓假单胞菌属为革兰染色阴性 需氧菌，存在于土壤、尘埃、 水和少数人体肠道中，亦可暂 时寄生于皮肤，主要寄生在肛 门、生殖器部位、腋窝和外耳 道等处。在正常情况下一般不 致病，当机体抵抗力低下时可 致病，还可引起病人死亡。
药品微生物检验基础知识
1黑曲霉菌
黑曲霉，半知菌亚门，丝孢 纲，丝孢目，丛梗孢科，曲 霉属真菌中的一个常见种。 广泛分布于世界各地的粮食、 植物性产品和土壤中。
药品微生物检验基础知识
2白色念珠菌
• 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人口 腔，上呼吸道，肠道及阴道， 是医学全身性真菌感染病的重 要途径，可以引起心膜炎、肺 炎、尿布疹、鹅口疮、阴道炎、 脑膜炎、及败血症。
一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条
件下可引起肠道外感染。某些血清型菌株的致病性强，
引起腹泻，统称致病性大肠杆菌。人体感染致病EHEC
后，会发生严重的痉挛性腹痛和反复发作的出血性腹泻，
同时伴有发热、呕吐等表现，多为EHEC产生的毒素所
致。
药品微生物检验基础知识
2金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人类的一种重要病原菌， 隶属于葡萄球菌属有“嗜 肉菌"的别称，是革兰氏阳 性菌的代表，可引起许多 严重感染。
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
（未清洗的手）
（清洗过的手）
药品微生物检验基础知识
二、培养基
1、培养基的制备 • 培养基的配制：
按处方配制，使用按处方生产的符合规定的脱水培养基
药品微生物检验基础知识
二、培养基
配制时注意：
• 不得使用结块或颜色发生改变的脱水培养基； • 常用的溶是纯化水、蒸馏水，避免使用自来水，因其中含有氯等抗菌物质； • 脱水型培养基应完全溶解于水中，再分装灭菌； • 加热助溶，注意不要过度加热； • 如需要添加其它组分，加入后应充分混匀； • 配制用的容器最好用中性玻璃或聚乙烯容器； • 配制培养基一般要在1小时内完成，如果室温高，配制时间过长，易使培养
药品微生物检验基础知识
革兰氏染色
• 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等 四个步骤，具体操作方法是：
• 1）涂片固定。 • 2）草酸铵结晶紫染1分钟。 • 3）自来水冲洗。 • 4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。 • 5）水洗，用吸水纸吸去水分。 • 6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后
微生物检验技术 基础知识
制剂中心药检室
张文
20160225
药品微生物检验基础知识
目录
• 一、微生物基本介绍 • 二、培养基 • 三、菌种 • 四、微生物限度检查法
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
1、微生物的定义 微生物是一些形体微小，以单细胞或简单多细胞、 甚至是没有细胞结构的形式存在的低等生物的统称。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
药品微生物检验基础知识
白色念珠菌
左图：白色念珠菌在该批念 珠菌显色对照培养基表面培 养 24 小时的生长形态；
右图：白色念珠菌在该批念 珠菌显色对照培养基表面培 养 48 小时的生长形态。
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
5、微生物与我们
• 每张人民币带细菌：900万个； • 人体体表及体内存在大量的微生物； • 皮肤表面：平均10万个细菌/平方厘米； • 口腔“细菌种类超过500种； • 肠道：微生物总量达100万亿；
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的 病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺 炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、 脓毒症等全身感染。
药品微生物检验基础知识
2金黄色葡萄球菌
• 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列 成葡萄串状。
药品微生物检验基础知识
3枯草芽孢杆菌
枯草芽胞杆菌，是芽胞杆菌属 的一种。单个细胞0.7～ 0.8×2～3微米，着色均匀。无 荚膜，周生鞭毛，能运动。革 兰氏阳性菌，芽孢0.6～ 0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱 状，位于菌体中央或稍偏，芽 孢形成后菌体不膨大。菌落表 面粗糙不透明，污白色或微黄 色，在液体培养基中生长时， 常形成皱醭。需氧菌。
细菌鉴别革兰氏染色
• 格兰仕阳性菌例如：金黄色葡萄球菌，也称“金葡 菌”，细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽 聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫 附着后不被酒精脱色故而呈现紫色
• 革兰氏阴性菌例如:大肠埃希菌的细胞壁肽聚糖层薄、 交联度差，脂类含量高，所以紫色复合物被酒精冲掉 然后附着了沙黄的红色。
水洗，吸去水分。
• 7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，自来水冲洗。干 燥，镜检。
药品微生物检验基础知识
染色结果
。 革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色
药品微生物检验基础知识
染色结果
革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
• 4.2真菌（包括酵母菌和霉菌） 1黑曲霉菌 2白色念珠菌
支原体和病毒等。
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
• 4.1细菌 药典收录的有代表性的常见细菌有 1大肠埃希菌 2金黄色葡萄球菌 3枯草芽孢杆菌 4生孢梭菌 5铜绿假单胞菌
药品微生物检验基础知识
1大肠埃希菌
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）通常被称为大肠杆菌，是 Escherich在1885年发现的，在 相当长的一段时间内一直被当 作正常肠道菌群的组成部分认 为是非致病菌。
2、微生物的分类
微生物的主要分类单位：域、界、门、纲、目、科、 属、种、变种、亚种（小种）、型、菌株（品系）
“种”是最本的分类单位，例：大肠埃希菌
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
3、微生物的特点 • 体形微小； • 结构简单； • 生长繁殖快； • 种类繁多，分布广，适应性强。 • 包括：细菌、酵母菌、霉菌、放线菌、立克次氏体、
药品微生物检验基础知识
4生孢梭菌
生孢梭菌 （Clostridium sporogenes） 又译产孢梭菌，能够产生孢 子，革兰氏染色阳性，以周 生鞭运动，严格厌氧的梭菌。
药品微生物检验基础知识
5铜绿假单胞菌
• 铜绿假单胞菌的学名是 Pseudomonas aeruginosa，绿 脓假单胞菌属为革兰染色阴性 需氧菌，存在于土壤、尘埃、 水和少数人体肠道中，亦可暂 时寄生于皮肤，主要寄生在肛 门、生殖器部位、腋窝和外耳 道等处。在正常情况下一般不 致病，当机体抵抗力低下时可 致病，还可引起病人死亡。
药品微生物检验基础知识
1黑曲霉菌
黑曲霉，半知菌亚门，丝孢 纲，丝孢目，丛梗孢科，曲 霉属真菌中的一个常见种。 广泛分布于世界各地的粮食、 植物性产品和土壤中。
药品微生物检验基础知识
2白色念珠菌
• 白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一 种真菌，通常存在于正常人口 腔，上呼吸道，肠道及阴道， 是医学全身性真菌感染病的重 要途径，可以引起心膜炎、肺 炎、尿布疹、鹅口疮、阴道炎、 脑膜炎、及败血症。
一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条
件下可引起肠道外感染。某些血清型菌株的致病性强，
引起腹泻，统称致病性大肠杆菌。人体感染致病EHEC
后，会发生严重的痉挛性腹痛和反复发作的出血性腹泻，
同时伴有发热、呕吐等表现，多为EHEC产生的毒素所
致。
药品微生物检验基础知识
2金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人类的一种重要病原菌， 隶属于葡萄球菌属有“嗜 肉菌"的别称，是革兰氏阳 性菌的代表，可引起许多 严重感染。
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
（未清洗的手）
（清洗过的手）
药品微生物检验基础知识
二、培养基
1、培养基的制备 • 培养基的配制：
按处方配制，使用按处方生产的符合规定的脱水培养基
药品微生物检验基础知识
二、培养基
配制时注意：
• 不得使用结块或颜色发生改变的脱水培养基； • 常用的溶是纯化水、蒸馏水，避免使用自来水，因其中含有氯等抗菌物质； • 脱水型培养基应完全溶解于水中，再分装灭菌； • 加热助溶，注意不要过度加热； • 如需要添加其它组分，加入后应充分混匀； • 配制用的容器最好用中性玻璃或聚乙烯容器； • 配制培养基一般要在1小时内完成，如果室温高，配制时间过长，易使培养
药品微生物检验基础知识
革兰氏染色
• 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等 四个步骤，具体操作方法是：
• 1）涂片固定。 • 2）草酸铵结晶紫染1分钟。 • 3）自来水冲洗。 • 4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。 • 5）水洗，用吸水纸吸去水分。 • 6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后
微生物检验技术 基础知识
制剂中心药检室
张文
20160225
药品微生物检验基础知识
目录
• 一、微生物基本介绍 • 二、培养基 • 三、菌种 • 四、微生物限度检查法
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
1、微生物的定义 微生物是一些形体微小，以单细胞或简单多细胞、 甚至是没有细胞结构的形式存在的低等生物的统称。
白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂白色念珠菌
药品微生物检验基础知识
白色念珠菌
左图：白色念珠菌在该批念 珠菌显色对照培养基表面培 养 24 小时的生长形态；
右图：白色念珠菌在该批念 珠菌显色对照培养基表面培 养 48 小时的生长形态。
药品微生物检验基础知识
一、微生物基本介绍
5、微生物与我们
• 每张人民币带细菌：900万个； • 人体体表及体内存在大量的微生物； • 皮肤表面：平均10万个细菌/平方厘米； • 口腔“细菌种类超过500种； • 肠道：微生物总量达100万亿；
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的 病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺 炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、 脓毒症等全身感染。
药品微生物检验基础知识
2金黄色葡萄球菌
• 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列 成葡萄串状。
药品微生物检验基础知识
3枯草芽孢杆菌
枯草芽胞杆菌，是芽胞杆菌属 的一种。单个细胞0.7～ 0.8×2～3微米，着色均匀。无 荚膜，周生鞭毛，能运动。革 兰氏阳性菌，芽孢0.6～ 0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱 状，位于菌体中央或稍偏，芽 孢形成后菌体不膨大。菌落表 面粗糙不透明，污白色或微黄 色，在液体培养基中生长时， 常形成皱醭。需氧菌。