甜蜜素测定方法

甜蜜素测定方法

1实验原理

气象色谱法测定甜蜜素是国标中的第一法，测定原理，是用亚硝酸钠分解食品中的甜蜜素，产生的环己醇在硫酸的介质中与亚硝酸钠作用，生成环己醇亚硝酸酯，该物质在氢火焰中有良好的响应值，以保留时间定性，峰面积定量。

2实验步骤

取样品2克左右，需要提取打碎成粉末或者最大程度的剪碎，加入蒸馏水25ml在30摄氏度水浴中超声提取甜蜜素45mins，同时做空白实验、对照实验（加入甜蜜素标准品）和回收率实验（炒货样品最好每个都做回收，蜜饯样品可使用一个回收率进行计算），45mins 结束后，加入5ml浓度为100g/L的硫酸在30°中稳定10mins，取出置于4摄氏度冰水浴中5mins，随后加入5ml正己烷（4℃）封住液面，防止而后产生的衍生物环己基氨基磺酸酯挥发，再加入5ml浓度为50g/L的亚硝酸钠，封管，缓慢摇动，放入冰水浴中，反应开始前10mins内不要剧烈摇动，后20mins内，每5mins左右漩涡震荡一次，冰水浴的时间总共30mins，从冰水浴中取出后，加入氯化钠饱和溶液2.5ml，离心，取上清，上机分析。

3工作曲线制作

分别加入取配置好的实验室级别标准溶液于50ml离心管中，加入量参考表1，定溶到同一刻度，标准溶液浓度为5mg/ml，按上述方法进行操作，得到工作曲线。由于平时日检的产品的甜蜜素含量基本在1mg/g到5mg/g这个区间，尤其在1mg/g到2mg/g的产品居多，所以，我们有针对性的将这两个区间的点加入的相对密集，以便于准确的得到产品的甜蜜素含量。如表1所示，标准溶液配制时间为20140505，标准溶液浓度为5.2340mg/ml。

表1 2014年5月5日标准工作曲线

No. 标准溶液加入量（ml ）

甜蜜素（mg ）

Area(L)

2 0.8 4.1872 396

3 1.0 5.2340 511

4 1.2 6.2808 620

5 1.5 7.8510 76

6 6 1.8 9.4212 925

7 2

10.4680 1035 8 2.5 13.0850 1294 9 3 15.7020 1552 10 3.5

18.3190

1842

此工作曲线定期校正，由于色谱柱的柱效会一直下降，因此每次做出的标准曲线的斜率

会有所差异。

4 结果和计算

上机分析后，得到色谱峰面积，带入工作曲线，得到甜蜜素含量M，单位mg，带入以下公式计算：

X：为样品中甜蜜素含量；单位：g/kg

M：由工作曲线得出的甜蜜素含量；单位：mg

m：样品的质量；单位：g；

P：为加标回收率；F’：为计算换算系数0.8908；

注：加标回收率主要使用生产级别的甜蜜素，浓度5mg/ml，向样品中加入2ml，计算回收率；计算换算系数，主要是用于将环己基氨基磺酸钠换算为环己基氨基磺酸。

实验要素：

1、样品尽量打碎，超声提取时间不宜超过45mins；

2、硫酸、正己烷和亚硝酸钠的添加顺序有严格要求，不可混乱顺序；

3、添加正己烷的移液枪要精确，至少系统误差是一样的；

4、冰浴时间不宜超过30mins，冰浴后应尽快上机；

5、计算回收率时，参考标准品的峰面积变化，前后两次实验标准品的峰面积之比应为

0.90~1.10，否则说明标准品已经降解，不宜用作计算回收率。

6、定期校准标准工作曲线。