山竹提取物有效成分测定及其多糖组成分析

山竹提取物有效成分测定及其多糖组成分析作者：杨青赵丽君周大江高瑞希杨光忠李竣

来源：《中国医药导报》2014年第21期

[摘要] 目的研究山竹果肉提取物中多糖、蛋白质含量及多糖中单糖组成和山竹果皮提取物中总黄酮的含量。方法取山竹果皮用95%乙醇回流提取，减压浓缩得到山竹果皮提取物；山竹果肉分别用95%乙醇，蒸馏水回流提取，合并蒸馏水提取液减压浓缩得到山竹果肉提取物。采用可见-紫外分光光度法以苯酚-硫酸、考马斯亮蓝显色分别测定山竹果肉提取物多糖和蛋白质的含量；亚硝酸钠-硝酸铝显色测定山竹果皮提取物总黄酮的含量；果肉提取物多糖水解产物进行甲基化反应，以气相色谱检测多糖水解产物。结果分别采用上述方法能够分别准确测定出山竹果皮提取物中总黄酮含量为6.30%，果肉提取物中多糖和蛋白质含量分别为84.99%和1.64%，确定果肉提取物多糖水解产物中的4种单糖分别为：D-葡萄糖，D-果糖，D-阿拉伯糖，D-木糖，其摩尔比为1.34∶1.66∶1.00∶40.06。结论本研究建立的含量测定方法操作简单，重复性好，结果可靠，可用于山竹提取物的质量控制。

[关键词] 山竹；抗氧化活性；多糖；蛋白质；黄酮；含量测定

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）07（c）-0085-05

山竹（Garcinia mangostana L.）为藤黄科（Guttirae）山竹子属药食两用水果，广泛分布于马来西亚、缅甸、泰国等东南亚国家，现已有大量栽培。山竹果中富含黄酮、多糖、蛋白质和脂类等化合物，是我国傣族及东南亚国家常用的传统药用植物。山竹果实主要化学成分为呫吨酮化合物[1]，现代药理学表明山竹果实具有抗炎、抗菌、抗氧化等多种生物活性[2]，山竹果皮中存在的氧杂蒽酮类化合物具有对脂肪酸合酶（FAS）全反应的抑制作用[3]。杨连珍[4]发现山竹果（7周成熟期）中3种含异戊二烯基均含有一种对人类癌细胞具有一定抗性的成分。有研究发现山竹能够加速豚鼠的皮肤创面愈合，重造创面上皮化[5]。山竹对烧伤的创面有一定的抑菌作用，同时减轻表面液体渗出，促进伤口愈合的作用[6-8]。研究表明山竹子根乙醇提取物对细胞分泌HBsAg、HBeAg有抑制作用[9]。通过对岭南山竹子药用的研究发现，岭南山竹子对小鼠热板致痛、辐射热甩尾反应和化学致痛有明显的抑制作用，可明显减少小鼠自主活动；对二甲苯所致小鼠耳部肿胀以及对大鼠蛋清性足肿胀和棉球肉芽肿有明显的抑制作用[10]。对山竹子根皮进行抗寄生虫活性成分研究表明，发现其具有中等抗恶性疟原虫与布氏锥虫的活性，显示较强的选择性抗寄生虫活性和细胞毒性[11]。山竹果皮提取的总黄酮对羟自由基、超氧阴离子自由基具有清除作用，并能有效地清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺的合成，清除体内亚硝酸盐和阻断亚硝胺的合成是防治癌症的有效途径[12]。戴聪杰等[13]采用化学分析方法对山竹的水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪、水解氨基酸和碳水化合物等成分的含量进行测定，研究显示山竹的营养非常丰富，是很有发展前途的营养食品资源。同时研究显示山竹提取物具有很好的美白、保湿、抗衰老的功效[14]。为了更好地使用和开发山竹药用价值，本研究测定了

山竹新鲜果肉提取物中的多糖、蛋白质含量及果品提取物中总黄酮的含量，分析了果肉中多糖的组成成分，为山竹的产业化开发提供一定的理论依据。

1 仪器与试药

1.1 试剂

牛血清蛋白及考马斯亮蓝G-250（超级纯，广州微佳科技有限公司），D-葡萄糖

（98.0%，Aladdin industrial Corporation），芦丁（中国药品生物制品检定所，批号10080-200707），标准单糖（Sigma公司），三甲基氯硅烷，六甲基二硅醚烷，吡啶，三氟乙酸，硼氢化钠，氢氧化钠，95%乙醇（工业），浓硫酸、苯酚、亚硝酸钠、硝酸铝等所用试剂均为分析纯。

1.2 材料

山竹于2010年9月购于武汉沙湖水果批发市场，经中南民族大学药学院李竣副教授鉴定为Garcinia mangostana L.的果实，提取物供试品由中南民族大学药学院制备。

1.3 仪器

紫外可见分光光度计（UV-1800UV美谱达），气相色谱仪（6890N Network GC System ，美国Agilent），旋转蒸发器RE-52（上海亚荣生化仪器），真空干燥箱（XMTD-8222型，上海精宏实验设备），恒温干燥箱（上海索谱仪器），超低温冷冻储存箱（中科美菱），低速离心机（TD25型，长沙平凡仪器仪表），冷冻干燥机（FD-1B-50型，北京博医康实验仪器），旋转蒸发仪R-1001M型（郑州长城），循环水式多用真空泵SHB-Ⅲ（郑州长城），恒温水浴锅（郑州长城），超声波清洗器KQ-500E（昆山市超声仪器），硅胶板试剂（青岛海洋化工厂），电子天平AB265-S型，电子天平AR2140型（上海奥豪斯仪器）。

2 方法与结果

2.1 提取工艺流程

取新鲜山竹果皮干燥粉碎后的6.4 kg，用95%乙醇各回流提取3次，每次2 h，合并提取液减压浓缩得到山竹果皮提取物。取新鲜的山竹果肉854 g分别依次用95%乙醇提取1次，蒸馏水回流提取3次，每次2 h，合并蒸馏水提取液，减压浓缩得到山竹果肉提取物。

2.2 山竹果肉提取物多糖含量的测定[15]

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的葡萄糖50 mg，加蒸馏水溶解定容至0.1 mg/mL，即得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备精密称取干燥的山竹果肉提取物适量，至100 mL容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀即得供试品溶液。

2.2.3 苯酚溶液的制备称取苯酚6 g至100 mL容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀即得苯酚试剂。

2.2.4 最大检测波长的选择分别取对照品溶液和供试品溶液1 mL至10 mL具塞玻璃试管中，加苯酚溶液0.5 mL，振摇，迅速加入浓硫酸5 mL，振摇后放置15 min。待冷却后，紫外分光光度计上做全波长扫描，得到最大吸收波长λmax为480 nm，确定480 nm为检测波长。

2.2.5 标准曲线的绘制精密量取对照品溶液1、2、3、4、5 mL，分别加蒸馏水定容至10 mL容量瓶中。摇匀各取1 mL，以下操作按“2.2.4”项下方法显色。在480 nm波长下测定吸光度，求得标准曲线性方程为y = 17.0888x+0.0108，r = 0.9980，提示该溶液在0.01～0.05 mg/mL 范围内线性关系良好。

2.2.6 精密度试验取0.05 mg/mL的对照品溶液按“2.2.4”项下方法显色，结果显示RSD为0.226%（n = 6）。

2.2.7 重复性试验取同一批次供试品溶液，按“2.2.4”项下方法显色，结果显示RSD为

2.85%（n = 6）。

2.2.8 稳定性试验取同一批次供试品溶液，按“2.2.4”项下方法显色，分别在显色0、5、10、20、30、40 min后测定吸光度值，RSD为2.87%，结果表明显色后40 min内测定测定无显著性差异，为保证准确性测定的时间选择在30 min内完成。

2.2.9 回收率试验精密吸取葡萄糖对照品溶液6份，分别加入不同量的已知多糖含量的供试品液，以下操作按“2.2.4”项下方法进行。结果见表1。

2.2.10 供试品含量测定取果肉提取物供试品溶液，按“2.2.4”项下方法进行，山竹果肉提取物中多糖含量，结果见表2。

2.3 山竹果肉提取物蛋白质含量的测定[16]

2.3.1 对照品溶液的制备精密称取250 mg牛血清蛋白（BSA），加生理盐水制成浓度为0.1 mg/mL的溶液，即得对照品溶液；精密称取50 mg考马斯亮蓝G-250至500 mL容量瓶中，加入25 mL 95%乙醇﹑50 mL 85%磷酸，振摇溶解，生理盐水定容得考马斯亮蓝溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备精密称取干燥的山竹果肉提取物适量，至250 mL容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀即得供试品溶液。