(上课用)特殊染色和组织化学分析

1.虽然形成了许多显示细胞化学的方法及 一些特殊染色。但发展的速度比较缓馒。这是 因为每一种方法都有自己不相同的试剂、底物 和方法，在发展上既没有系统的经验可以遵循， 在学习使用上也比较困难。 2.自从免疫组织化学问世以来．几乎所有 的组织化学成分都可以用免疫组织化学方法检 测，所以组织细胞化学的许多方法大多数被免 疫组织化学所代替。 3.有些组织化学方法定性准确，方法简单、 使用方便或因试剂便宜，至今沿用不衰。
1、化学方法 根据其化学反应的原理，在 组织切片上生成沉淀，显示定位。 2、类化学方法 有少数方法的染色反应有特 殊性，但机制不明。 3、物理方法 应用物质的物理学特性，如 苏丹、油红染料易溶于脂类而使脂类染色。
七、操作掌握的要点
1．组织材料及时切片与染色，才能保持组织细 胞良好的形态结构。 2．染色切片的判断，应把病变的形态、部位及 相应的理论一起进行综合分析，可借助阴性及 阳性对照，正确分析实验结果。 3．生成的反应产物必须在原位沉淀，着色深， 且不溶，为细小沉淀或小结晶。能保证定位的 精确性及稳定性，便于反复观察。
第二节
糖原和粘液物质染色
Leabharlann Baidu
一、糖原 糖原在肝细胞、心肌细胞、骨胳肌细胞内含量最 多，其次是毛囊、子宫腺体、阴道上皮、脐带等处均 有少量糖原存在。 糖原易溶于水，在酶的作用下容易分解为葡萄糖。 葡萄糖更易溶于水，故机体死亡后糖原易受到破坏， 其含量发生明显变化甚至完全消失。用常规HE染色观 察不到糖原的形态，用显示糖原的特殊染色也难以观 察到糖原的形态及分布。所以为了观察和研究组织内 糖原的含量及分布、必须选取新鲜标本，用能保存糖 原的固定液及时固定，再经特殊染色后才能将糖原显 示出来。
五、组织化学的基本概念
组织化学是在形态学基础上研究细胞 或组织中物质的化学组成、定位、定量及 代谢状态的学科，是组织学与生物学及生 物化学等的边缘科学，其目的是联系形态， 化学成分和功能来了解组织或细胞的代谢 变化。 目前有许多组织化学方法已划入特殊 染色，划分特殊染色和组织化学无绝对界 限。
六、方法和种类
四、染色的分类
(一)普通染色
最广泛应用于常规制片的苏木素和伊
红染色，又称为常规染色。
(二)特殊染色
1．定义 专门用于显示某些特定目的物的染色 方法称为“特殊染色”，它又可以理解为 “选择性染色”。 特殊染色对目的物的选择性是相对的。有 些方法具有相对的特异性，如油红O等脂质 染色，显阳性者可以肯定为脂质；有些则显 示的是一类物质，如PAS呈阳性反应者有糖 原、粘蛋白、网织纤维、软骨、阿米巴原虫、 霉菌等许多物质和组织结构，并不能确定是 哪一种具体成分。
(一)固定方法及注意事项
1)尽可能选取小块新鲜组织并及时固定。 2)多次更换乙醇混合固定液，在4℃左右内固定与保 存。这是针对糖原的性质和避免糖原溶于水而采取的相应 措施。乙醇虽然是保持糖原的较好固定剂，但是用单一的 乙醇尤其是用无水乙醇固定肝、肌肉等实质性组织时，固 定作用迅速而穿透力弱，组织表面会很决凝固变硬。这样 由于固定不透和不均，糖原同样不能得到较好的保存，易 出现糖原颗粒趋于细胞一端的极化现象。 目前固定与保存糖原的固定液，以乙醇为溶剂配制含 甲醛、冰醋酸及苦味酸等混合固定液为好：此类固定液利 用乙醇防止糖原溶解于水；利用冰醋酸和苦味酸的膨胀及 软化作用，抵消乙醇对组织的收缩硬脆；利用甲醛对组织 固定的渗透力强、固定均匀等优点。其固定原理是使与糖 原相结合的蛋白质凝固。
3.特殊染色的命名
对于特染的命名至今尚无统一的规定，
多数均按发明者的姓名命名，如van Geison 染色等；有的则按所用染色剂命名，如甲基绿 一派若宁染色、苏丹Ⅲ染色等；有的按目的物 命名，如网织纤维染色；还有的采用混合命名，
如试剂十人名等。
4．特殊染色的意义
1)显示在常规HE染色切片中不明显的目的物,如病变 中霉菌数量较少时，应用Gridley染色就容易发现
二、染色目的
未加染色的任何组织切片在镜下只能
辨认细胞和胞核的轮廓，看不清楚其他任 何结构。染色的目的就是将组织切片浸入 染色剂内，经过一定的时间，将组织或细 胞及其他异常成分染上不同深浅的颜色， 便于在光学显微镜下进行观察。
三、染色原理
染色过程是染色剂和组织细胞相结合的过程。其 机理尚未完全清楚。 1、有学者认为从物理学角度看，染色剂和组 织细胞的结合是“溶解”或“吸收”。例如苏丹类 染色剂使脂质着色，就是利用染色剂在脂质中的溶 解度大于在酒精等溶剂中的溶解度这一特性。有些 染色剂是染色剂分子通过渗透和毛细血管作用而被 吸收或沉淀到组织、细胞的小孔中去而着色的‘这 种机制的染色是很少的。
2、另有学者认为染色是染色剂与组织、细胞之间 的化学性结合。如显示含铁血黄素的普鲁士反 应是最典型的例子。
但是，大量染色的化学反应并不象铁反应 那样明确。大多数染色的原理至今仍未搞清楚， 有些可能是物理性的，有些可能是化学性的， 有些则可能2种机制都起作用。正因为人们对染 色的原理还没有完全掌握，所以还不能很好地 运用原理来控制它，在相当程度上需凭工作经 验。

所谓特殊染色的相对性，就是一种方 法可以显示多种目的物，一种目的物 可以用多种方法显示，其中有些方法 可能呈阳性，而有些方法则呈阴性， 这就需要我们拿捏多种方法，因为有 时只有依靠多种方法才能确定所要确 认的目标。
2.特殊染色的分类
特殊染色方法按照所染目的物进行
分类，有结缔组织、肌肉组织、神经组织、 脂类物质、糖类、色素、病理的内源性沉 着物、病原微生物、内分泌物质、骨、血 液及造血组织、核酸、酶类等。
特殊染色及组织化学
赣南医学院病理学教研室
第一节 特殊染色及组织化学的基本知识
一、染色方法
1863年由waldeyer率先倡导用苏木素染 液染细胞核，后来Mallory、Mayer等也阐述过 苏木素的应用。近年来特殊染色和组织化学方 法也屡有创新。Shikata(1973)，Tanka等 (1981年)分别介绍了用地依红和维多利亚蓝混 合液显示乙型肝炎表面抗原的方法；1987年 Crocker J等推出了核仁组成区嗜银蛋白染色 的技术方法以及1991年进行的乳腺肿瘤核仁组 成区的研究方法等。
2)可以区别胶原纤维和平滑肌，苏丹染色可区别脑浆 内的脂肪变和水样变。 3)可以显示某些HE染色中不能看到的目的物。如网织 纤维、星形细胞的突起、结核杆菌、螺旋杆菌等， 都可用相应的特殊染色法显示。 因此，特殊染色是常规染色的必要补允，也是染色 技术中不可缺少的组成部分。它在病理诊断中起着 辅助作用。