(上课用)特殊染色和组织化学分析
组织学技术特殊染色
组织学技术特殊染色组织学技术是研究生物学和医学中的一门重要学科，它主要研究各种生物组织的结构、形态和功能。
组织学技术中的特殊染色技术是一种重要的方法，可以帮助科学家们更好地观察和分析组织中的微细结构。
本文将介绍几种常见的组织学技术特殊染色方法。
PAS染色PAS（Periodic Acid-Schiff）染色是一种广泛应用的组织学技术特殊染色方法。
通过对组织样本进行一系列处理，使得组织中的多糖物质、甘油脂和一些蛋白质能够被染色剂染色。
PAS染色对于检测肝细胞内糖原、胆囊内黏液和肾小管内基底膜等有重要意义。
Silver染色Silver染色是一种用于染色神经元轴突和树突的特殊染色方法。
Silver染色通过将组织中的银离子还原为固态银，使得神经元的轴突和树突得以显现。
这种染色方法在神经科学研究中有广泛的应用，可以帮助科学家们观察神经元的形态和连接方式。
Giemsa染色Giemsa染色是一种用于染色细胞核和染色体的特殊染色方法。
Giemsa染色可以使得染色体在显微镜下呈现出黑色、灰色和蓝色的带状条纹，有助于研究染色体的形态和结构。
这种染色方法也常用于检测血液细胞的形态和数量，是临床血液学和病理学中常用的染色方法之一。
Masson染色Masson染色是一种用于染色胶原纤维的特殊染色方法。
Masson染色通过在组织中染色三种颜色的染料，将组织中的胶原纤维、细胞核和细胞质进行区分染色。
这种染色方法在研究纤维组织中的胶原纤维含量和排列方式时，特别有用。
以上介绍了几种常见的组织学技术特殊染色方法，它们在生物学和医学研究中起着重要的作用。
通过这些特殊染色方法，科学家们可以更全面地了解组织结构和功能，为疾病诊断和治疗提供有力的支持。
病理特殊染色和组织化学技术病理特殊染色和组织化学技术
Masson三色法 心肌
肌纤维 红色
Masson三色法 心肌
胶原纤维 蓝色
肌纤维 红色
氢氧化银氨液浸染法 淋巴肉瘤
网状纤维 黑色
硝酸银法 成骨肉瘤
钙盐 黑色
硝酸银法 胰腺
胰岛a细胞 棕黑色
曲菌 黑褐色
六胺银法 心包膜
横纹肌纤维 蓝色
磷钨酸苏木素法 大鼠舌
横纹肌纤维 蓝色
胶原纤维 红色
醛品红法 交感神经节
脂褐素 深紫色
醛品红—橙黄G法 神经纤维瘤
肥大细胞 深紫色
亚铁氰化钾ห้องสมุดไป่ตู้ 肺郁血
含铁血黄素 蓝色
PAS三色法 脑垂体
嗜酸细胞 橙黄色
嗜碱细胞 紫红色
嫌色细胞 浅灰蓝或无色
爱先蓝（PH2.5）法 结肠
组织学技术特殊染色课堂上课
学习课堂
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3、染色程序 （1）新鲜组织10%甲醛固定，石蜡切片，
常规脱蜡入水；
（2）入高锰酸钾溶液中5min，水洗1min； （3）入草酸溶液中漂白2min，水洗2min； （4）硫酸铁中媒染2min，水洗1min；
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（5）银氨溶液中处理1-5min（25 ℃）， 蒸馏水洗2次，各2min；
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甲苯胺蓝染色显示肥大细胞
肥大细胞内含粗大的嗜碱性、异染性的水溶性颗粒， 颗粒内含有组胺、肝素等活性物质， 这些物质含有高分子的多硫酸脂和硫酸黏多糖类，能够与 甲苯胺蓝、美篮、中性红、硫堇等染料结合。
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1、取材 皮下组织
2、固定 Carnoy液 或 10%中性福尔马林液 皮下组织铺于干净的载玻片上，自然晾干后固定， 或石蜡切片，冰冻切片更好
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疏松结缔组织各种成分显示方法：
疏松结缔组织中含有： 胶原纤维、弹性纤维、网状纤维； 巨噬细胞、肥大细胞。
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一、 网状纤维
分布：肝、肾、脾、淋巴结等器官内。
纤维直径0.2-2.0µm，分支多，交织 成网。
网状纤维主要由Ⅲ型胶原蛋白组成，表 面被覆糖蛋白，在镀银切片呈黑色称为 嗜银纤维。
（5）1%醋酸水溶液： 冰醋酸 1ml ，蒸馏水 99ml。
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4、染色步骤
（1）石蜡切片脱蜡下行至蒸馏水。
（2）Weigert 铁苏木精染色，10-20min。
（3）流水冲洗，10min，光镜下查看。也可用 1%盐酸乙醇（70%）分色。流水冲洗，5min， 蒸馏水浸洗。
《组织化学染色》课件
科学研究
通过染色技术，研究人员可 以观察和研究细胞的结构和 功能。
药物开发
染色技术也可以用于药物开 发过程中的药效评估和分析。
组织化学染色的原理
组织化学染色的原理是利用化学反应将染料分子与组织或细胞结构中的特定 成分结合，从而产生颜色反应。
组织化学染色的步骤
1
标本制备
将组织标本收集、固定和包埋，以便进行 Nhomakorabea一步的染色过程。
2
染料选择
根据需要染色的组织或细胞成分特点选择合适的染料。
3
固定和染色
将标本与染料处理，使染料与目标结合，并增强染色效果。
优点和限制
优点
组织化学染色可以提供直观的视觉信息，用 于研究和诊断。
限制
染色结果可能受到多种因素影响，例如标本 质量和染色剂的稳定性。
常见问题和解决方法
1 染色结果不明显
可能因为染料浓度不足，可以尝试增加染料浓度。
常用的染色方法
1 酸性染料
酸性染料常用于染色细胞核和某些细胞器，例如血液涂片中的噬菌体。
2 碱性染料
碱性染料主要用于染色胞浆和细胞骨架，如组织切片中的嗜酸性细胞。
3 特殊染料
特殊染料用于特定类型的细胞或组织元素，例如肿瘤标志物的染色。
染色技术的应用
医学诊断
组织化学染色在病理学中广 泛应用于疾病的诊断和鉴定。
《组织化学染色》PPT课 件
欢迎来到《组织化学染色》的课程！在本课程中，我们将深入探讨组织化学 染色的基本原理、常用方法以及应用领域。准备好扩展您的知识，并让我们 一起开始这个令人兴奋的旅程吧！
染色的定义和作用
染色是一种在组织学和生物学研究中常用的技术，通过使用染料将细胞和组织的特定结构染色，以显示 其形态、组织类型和功能特点。
特殊染色体及酶组织化学诊断染色体A型
特殊染色体及酶组织化学诊断染色体A型染色体是细胞遗传物质的载体，其结构和数量的异常会导致遗传病和肿瘤的发生。
为了对染色体进行准确的诊断和研究，科学家们研发了各种染色体检测技术。
其中，特殊染色体及酶组织化学诊断染色体A型技术，是一种常用的染色体诊断技术，本文将对其进行详细介绍。
一、特殊染色体技术特殊染色体技术是指利用特殊染色剂或特殊条件进行染色体的染色和显色，以便于对染色体结构和数量的异常进行诊断和研究。
常用的特殊染色剂有吉姆萨染色和R染色，特殊条件包括高分辨率染色和荧光原位杂交技术等。
1. 吉姆萨染色吉姆萨染色是一种常用的染色体染色技术，其原理是利用吉姆萨染料对染色体进行染色，以便于观察染色体结构和数量的异常。
吉姆萨染色可以分为G带染色和R带染色两种。
G带染色是指将细胞处理后，在酸性条件下用吉姆萨染料染色，使染色体呈现出黑白相间的带状结构，从而可以观察到染色体的结构和数量的异常。
R带染色是指将细胞处理后，在碱性条件下用吉姆萨染料染色，使染色体的端部和中心带呈现出黑色，而其他区域呈现出白色，从而可以观察到染色体的结构和数量的异常。
2. 高分辨率染色高分辨率染色是指利用特殊染色剂和条件，使染色体的分辨率达到亚微米级别，从而可以观察到更细微的染色体结构和数量的异常。
常用的高分辨率染色技术有Q带染色和C带染色等。
Q带染色是指在高盐酸性条件下用喜树碱染色，使染色体的G带和R带呈现出更细微的带状结构，从而可以观察到更细微的染色体结构和数量的异常。
C带染色是指用酸性条件下的巴氏染料染色，使染色体的着丝粒区域呈现出黑色，而其他区域呈现出白色，从而可以观察到染色体的数量和结构的异常。
3. 荧光原位杂交技术荧光原位杂交技术是一种利用荧光探针对染色体进行标记，从而可以观察到染色体的结构和数量的异常的技术。
荧光原位杂交技术可以分为FISH技术和SKY技术两种。
FISH技术是指利用荧光标记的DNA探针对染色体进行标记，从而可以观察到染色体的数量和结构的异常。
病理学技术—特殊染色最最全总结
病理学技术—特殊染色最最全总结病理学技术是医学研究领域中的一个重要分支，它利用各种不同的方法和技术，对组织和细胞进行分析和研究。
其中，特殊染色技术是病理学技术中的一个重要组成部分，通过使用不同的染色剂，有助于观察并区分不同的细胞和组织结构，以辅助诊断和研究。
以下是对特殊染色技术的最全总结。
1. PAS染色（Periodic Acid-Schiff染色）：PAS染色可以用于检测细胞和组织中的多糖物质，如糖原、粘多糖和黏多糖等。
PAS染色通过一系列的化学反应，将含有醛基的物质氧化，然后与PAS染料反应生成染色物质。
2. 铁染色：铁染色可用于检测细胞和组织中的铁含量，它可以帮助鉴别铁负荷过多或过少的情况。
常用的铁染色方法包括Perls染色和Prussian blue染色。
3.去脂酸和酶染色：去脂酸和酶染色用于检测细胞和组织中的脂质和酶活性。
去脂酸染色通过将组织切片浸泡在油酸中，然后用溴化黄染色，观察脂质的分布情况。
酶染色通过使用特定的染色剂来观察细胞中的酶活性，如碘化物染色用于检测过氧化物酶活性。
4.免疫组织化学染色：免疫组织化学染色是通过使用特异性抗体来检测细胞和组织中的蛋白质和其他分子。
常见的免疫组织化学染色方法包括免疫荧光染色和酶联免疫组化染色。
这些染色技术可以用于确定特定抗原的存在和定位，从而帮助确定疾病的诊断和预后。
5.组织切片染色：组织切片染色是一种常见的特殊染色技术，它可以用于检测细胞和组织中的结构和细胞器。
常用的组织切片染色方法包括伊红染色、苏木素-伊红染色和单色染色等。
6.核酸染色：核酸染色用于检测细胞和组织中的核酸结构和功能，其中最常用的核酸染色方法是荧光原位杂交（FISH）和DAPI染色。
荧光原位杂交可以用来检测染色体异常和基因重排等。
7.肉眼可见染色：肉眼可见染色是一种用于检测显微镜下不易观察到的细胞和组织结构的染色技术。
常见的肉眼可见染色方法包括钙化染色和淀粉样变染色等。
总结以上所述，特殊染色技术在病理学领域中具有重要的应用意义，通过使用不同的染色剂，可以对细胞和组织进行全面和准确的分析和研究。
几种常用的特殊染色 ppt课件
ppt课件
1
磷钨酸-苏木素染色法（PTAH）
试剂配制： 磷钨酸苏木素液 苏木素 0.1g 磷钨酸 2.0g 蒸馏水 100ml 先将苏木素加热溶于 20ml 蒸馏水,再将 磷钨酸溶于 80ml 蒸馏水。等苏木素液冷却 后，加入磷钨酸溶液混合，放置数周后才可 使用（可保存 2-3 年） 。如急用，可加入 0.2g 高锰酸钾,加速其成熟（但几天后即失效） 。
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染色方法： 1 常规切片 、脱蜡至蒸馏水 2 0.5%高碘酸氧化5-10分钟 3 流水冲洗数分钟，蒸馏水洗一次 4 无色品红20分钟 5 水洗 5分钟后苏木素染核 6 常规脱水(或烤箱烘干)透明封固 结果：糖原或中性粘液或霉菌等 鲜红色，核蓝色。
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注意事项
•1 配制过程中玻璃器皿要干净，试剂要纯。
常规切片脱蜡至水
苏木素染核(可省) 入VG液中1-2分钟 快速水洗,烘干透明封固
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结果: 胶原纤维红色
肌纤维黄色
优点: 省去分化，两种纤维着色均
且鲜明艳丽
ppt课件
6
弹力纤维染色法
间苯二酚品红液: 碱性品红2.0g ① 30%三氯化铁25ml ④ 间苯二酚4.0g ② 浓盐酸 4ml ⑤ 蒸馏水 200ml ③ ①+②+③加热溶解,玻棒搅拌煮沸后慢慢加入④,搅 拌继续煮沸3-5分钟,冷却过滤,滤液倾去不用, 将滤 纸和沉淀物一起放回烧杯内, 温箱中烘干,取出后加 95%酒精200ml,隔水煮至沉淀物完全溶解后取出滤 纸,冷却后过滤,补足蒸发的酒精,最后加入⑤,冰箱保 存(3-6℃)。
•4 快速水洗.蒸馏水洗
•5 1%磷钼酸滴染1-3分钟 •6 倾去余液直接滴加亮绿液5分钟 •7 快速水洗后烤箱烘干,透明封固 •结果：胶原纤维绿色
特殊染色及组织化学
第一节特殊染色及组织化学的基本知识一、染色方法1863年由waldeyer率先倡导用苏木素染液染细胞核，后来Mallory、Mayer等也阐述过苏木素的应用。
近年来特殊染色和组织化学方法也屡有创新。
Shikata(1973)，Tanka 等(1981年)分别介绍了用地依红和维多利亚蓝混合液显示乙型肝炎表面抗原的方法；1987年Crocker J等推出了核仁组成区嗜银蛋白染色的技术方法以及1991年进行的乳腺肿瘤核仁组成区的研究方法等。
特殊染色的分类：特殊染色方法按照所染目的物进行分类，有结缔组织、肌肉组织、神经组织、脂类物质、糖类、色素、病理的内源性沉着物、病原微生物、内分泌物质、单种细胞和性染色质、骨、血液及造血组织、核酸、酶类等。
特殊染色的命名：对于特染的命名至今尚无统一的规定，多数均按发明者的姓名命名，如van Geison 染色等；有的则按所用染色剂命名，如甲基绿一派若宁染色、苏丹Ⅲ染色等；有的按目的物命名，如网织纤维染色；还有的采用混合命名，如试剂十人名等。
二、染色目的未加染色的任何组织切片在镜下只能辨认细胞和胞核的轮廓，看不清楚其他任何结构。
染色的目的就是将组织切片浸入染色剂内，经过一定的时间，将组织或细胞及其他异常成分染上不同深浅的颜色，便于在光学显微镜下进行观察。
三、染色原理染色过程是染色剂和组织细胞相结合的过程。
其机理尚未完全清楚。
1、有学者认为从物理学角度看，染色剂和组织细胞的结合是“溶解”或“吸收”。
例如苏丹类染色剂使脂质着色，就是利用染色剂在脂质中的溶解度大于在洒精等溶剂中的溶解度这一特性。
有些染色剂是染色剂分子通过渗透和毛细血管作用而被吸收或沉淀到组织、细肋的小孔中去而着色的‘这种机制的染色是很少的。
2、另有学者认为染色是染色剂相组织、细胞之间的化学性结合。
如显示含铁血黄素的普鲁士反应是最典型的例子。
但是，大量染色的化学反应并不象铁反应那样明确。
大多数染色的原理至今仍未搞清楚，有些可能是物理性的，有些可能是化学性的，有些则可能2种机制都起作用。
骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查
骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查是一种用于诊断血液疾病的特殊检查方法。
该检查可以通过染色技术直接观察血液细胞中特定的染色体、酶或其他化学物质，进而判断疾病的类型和程度。
下面我们将从步骤、原理及应用等多个方面进行细致的阐述。
一、步骤1.取样骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查需要从患者的骨髓中取得样本。
通常采用穿刺取骨髓的方法，使用空心针将骨髓组织抽取出来。
2.制片将采集到的骨髓组织用特定的方法制成薄片，然后将制片玻片放入预处理液中，去除组织中的脂肪和血液。
3.固定用甲醛等化学物质将薄片固定在制片玻片上，以免组织失去结构。
4.染色根据不同的需求，使用不同的染色方法染色。
常用的染色方法有Gear （G）染色、Wright（W）染色、Giemsa（G）染色、PAS染色、酶组织化学染色等。
5.观察染色完成后，使用显微镜观察染色后的组织和细胞，看到目标物质的颜色或形态变化，从而判断患者的疾病类型及程度。
二、原理骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查的原理是通过染色技术观察不同的物质反应，从而帮助医生确定患者的诊断。
例如，由于白血病细胞存在着特殊的染色体核型，因此通过染色技术可以直接观察到这些染色体。
又如，用PAS染色技术可以看到细胞中的糖原，发现是否存在糖尿病等疾病。
这些染色方法可以同时应用于细胞形态与细胞化学特性的研究。
三、应用骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查广泛用于对各种血液疾病的诊断，特别是在白血病、贫血、血小板疾病、骨髓增生异常综合症等疾病的确诊和辅助诊断中得到了广泛应用。
通过该检查方法的组织学检查，可以检查人体中蛋白质、酶液、糖原、脂肪等物质，并进一步辅助疾病的诊断和治疗。
而且，该检查方法具有操作简便、灵敏度高、结果准确等优势，可以为医生提供诊断血液疾病的重要实验依据，为患者提供更好的诊治服务。
总之，骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查是一种具有较高研究价值和应用前景的检查方法。
特殊染色及组织化学技术在病理诊断及科研中的应用
特殊染色及组织化学技术在病理诊断及科研中的应用
赵洁;任炜;于普燕;许馥郁
【期刊名称】《齐鲁医学杂志》
【年(卷),期】2013()5
【摘要】特殊染色及组织化学技术是临床病理诊断中重要的辅助技术之一,要求病理技术员熟知各种染色的机制和染色步骤,并严格按照操作规程进行染色。
同时,临床病理诊断医师和科研工作者也不应忽视特殊染色和组织化学技术在病理诊断和科研方面的作用。
【总页数】3页(P468-470)
【关键词】特殊染色;组织化学技术;病理诊断;操作规范
【作者】赵洁;任炜;于普燕;许馥郁
【作者单位】青岛大学医学院附属医院病理科;青岛大学医学院附属医院药剂科;青岛大学医学院附属医院东区特检科;山东大学齐鲁医院病理科
【正文语种】中文
【中图分类】R365
【相关文献】
1.免疫组织化学和天狼猩红双重染色技术在病理诊断中的应用 [J], 刘亚敏;张诗武;魏焕萍
2.常用特殊染色及组织化学技术在肿瘤病理诊断中的应用 [J], 曾汉英;于桂臣
3.特殊染色联合免疫组化技术在肿瘤病理诊断中的应用 [J], 李智
4.肿瘤病理诊断中特殊染色联合免疫组化技术应用价值分析 [J], 贺卿
5.免疫组织化学及特殊染色技术在法医损伤病理学鉴定中的应用 [J], 陈学士;褚俊;杨利军;王涛;陶陆阳
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(上课用) 特殊染色和组织化学PPT课件
(二)特殊染色
1．定义 专门用于显示某些特定目的物的染色 方法称为“特殊染色”，它又可以理解为 “选择性染色”。
特殊染色对目的物的选择性是相对的。有 些方法具有相对的特异性，如油红O等脂质 染色，显阳性者可以肯定为脂质；有些则显 示的是一类物质，如PAS呈阳性反应者有糖 原、粘蛋白、网织纤维、软骨、阿米巴原虫、 霉菌等许多物质和组织结构，并不能确定是 哪一种具体成分。
2．Lillie固定液(AFF) 无水乙醇85ml，冰醋酸5ml，甲醛 (38%一40%)10ml。此液为优良的固定液。配制及使用方 法与Gendre固定液相同。固定后组织可直接用95％乙醇开 始脱水。
3．Rossman固定液 苦味酸无水乙醇饱和液90ml，甲醛 (38％一40％)10ml。临用前配制，取小块新鲜组织于4℃ 冰箱内固定1—2d，更换2—3次新液，然后在室温下用95 ％乙醇浸洗数次，经无水乙醇脱水。
3．生成的反应产物必须在原位沉淀，着色深， 且不溶，为细小沉淀或小结晶。能保证定位的 精确性及稳定性，便于反复观察。
1.虽然形成了许多显示细胞化学的方法及一 些特殊染色。但发展的速度比较缓馒。这是因 为每一种方法都有自己不相同的试剂、底物和 方法，在发展上既没有系统的经验可以遵循， 在学习使用上也比较困难。
二、染色目的
未加染色的任何组织切片在镜下只能辨 认细胞和胞核的轮廓，看不清楚其他任何 结构。染色的目的就是将组织切片浸入染 色剂内，经过一定的时间，将组织或细胞 及其他异常成分染上不同深浅的颜色，便 于在光学显微镜下进行观察。
三、染色原理
染色过程是染色剂和组织细胞相结合的过程。其 机理尚未完全清楚。
(三)糖原染色应用
1．细胞内泡状变性的鉴别 在常规石蜡切 片的HE染色中，如胞浆内出现大小不等的 空泡，应考虑可能是脂肪变性，经脂溶剂 的脱水透明过程溶解而形成的空泡；也可 能是糖原在经水溶液固定过程中的脱失所 致；或可能是单纯的水样变性。为了鉴别 其性质，则需要用显示糖原或脂质染色法 加以证明。
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糖类物质染色——2、AB染色
应用
• 用于一般黏液性病变的观察。 • 在肿瘤诊断与研究中：
①用于肿瘤类型的鉴别，如黏液腺癌与未分化癌的鉴别， 黏液表皮样癌与鳞癌的鉴别； ②黏液染色还可以证明癌细胞是否浸润间质； ③观察胃黏膜腺体的肠上皮化生等
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脂类物质染色
染色方法和结果： 苏丹Ⅲ染色法：脂肪染橙红色，细胞核淡蓝色（切片染 色后不能长期保存)。 Lillie油红－O染色法：脂类物质呈鲜红色或橘红色，细 胞核呈淡蓝色。 以上两种染色的原理：是染料在脂质中的溶解度大于所 用溶液的溶解度，染料被移入脂质中。均需要冰冻切片， 甘油或甘油明胶封固。 锇酸染色：锇酸与脂肪形成不溶于有机质的氢氧化锇； 黑色脂肪呈黑色，类脂质颗粒呈褐色。应用组织块浸染。
• 黏蛋白：是由糖和蛋白质结合而构成，故又称糖蛋白， 见于各种组织上皮和腺体导管的分泌物中。
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糖类物质染色——2、AB-PAS染色
AB与PAS共同染色，亦称套染，对于显示和区别酸性 黏液物质与中性黏液物质均有较好效果。
结果： 酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，混合性黏液 物质呈紫红色；细胞核呈浅蓝色。
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脂类物质染色
应用： 证实和区别脂肪变性。 显示病变的脂质沉着，如动脉粥样硬化斑块内 胆固醇沉积；显示脂肪栓塞；显示先天性类脂质 沉积病，如戈谢病（Gaucher disease），尼 曼－皮克病（Niemann-Pick disease ）等。 脂肪源性肿瘤的诊断和鉴别
特殊染色在临床病理学中的应用
特殊染色体及酶组织化学诊断染色体A型
特殊染色体及酶组织化学诊断染色体A型特殊染色体及酶组织化学诊断染色体A型本文将介绍特殊染色体及酶组织化学诊断染色体A 型。
首先，我们需要了解什么是特殊染色体。
特殊染色体的概念染色体是存在于生物体细胞核内、可以看到以及带有一定形态和特点的染色体。
特殊染色体是一些结构独特的染色体，它们与普通染色体的形态、位置、大小等方面都有所不同。
这类染色体在总人口中出现的比例较低。
特殊染色体还可以根据其结构或编号分为以下几类：1、B染色体：由于在人类染色体29上出现多个中心亲和的短臂，而形成的多个染色体。
2、D染色体：由于两条普通染色体上的某一部分互换而形成的一组新染色体。
3、G染色体：由于两条染色体上的同源染色体臂错配得到的垃圾染色体。
4、翻转、倒位、平移、删除等结构变异形成的染色体。
酶组织化学诊断染色体A型染色体的诊断除了检测可以用普通的核型分析外，还有许多专门的技术。
酶组织化学技术是其中之一。
酶组织化学是指用染色剂处理薄片组织，使组织能够选择性的染色。
特别是这种染色能够区分不同细胞器和细胞核的某些部位，并使这些细胞器和细胞核部位呈现色差的特殊化学染色技术。
它是一种高分辨率、高专一性、高灵敏度和高效率的检测方法。
在酶组织化学染色中，DNA特殊结构的染色体区域体具有特殊性，这类结构常常是复杂、不稳定以及粘到其他染色体区域的高位置的染色体。
这类区域一般都是多个相似基因的簇。
在分子水平上，由于基因编码的蛋白质的功能、稳定性和特异性等多种因素，使得染色体区域具有较高的特异性，这种特异性可以在特殊的染色处理条件下异变而呈现出来。
酶组织化学染色技术通常采用局部或全身染色的方法。
局部染色方法采用细胞核或细胞器内部的特定染色体区域进行染色。
例如，对人类染色体上的rDNA（核糖体基因DNA）区域进行染色可形成一种特定的色带，常常被用于确定染色体中的rDNA基因数目和位置。
全身染色法是将整个组织在外部处理后，抹上染色剂，然后照相或显微镜观察组织染色表现，以判断染色体的变异。
高中化学利用色谱法分析染料组成教案
高中化学利用色谱法分析染料组成教案引言：化学是一门研究物质及其变化规律的科学，而色谱法是化学中常用的一种分析手段。
在化学教学中，了解色谱法的原理及应用十分重要。
本教案将探讨高中化学中利用色谱法分析染料组成的方法和步骤，帮助学生深入理解色谱法的原理，并掌握实际操作的技巧。
一、实验目的通过本次实验，学生应能够：1.了解色谱法的基本原理；2.掌握色谱法分析染料组成的方法和步骤；3.学习使用色谱仪进行分析实验。
二、实验器材与试剂1.色谱仪；2.色谱柱；3.色谱纸；4.待测染料样品。
三、实验步骤1.样品制备将待测染料样品溶解于适量的溶剂中，制备待测溶液。
2.色谱纸预处理将色谱纸切割成适当大小的片段，然后用纯净的溶剂将其浸泡，并在纸上绘制标线。
3.进样操作将待测溶液使用微量注射器等工具，沿着标线的底端点滴于色谱纸上。
4.上色操作待沉浸时间大约为10分钟后，可以用滴管将适量的显色剂滴于色谱纸的上端，标记样点。
5.色谱操作将色谱纸放入色谱槽中，槽中的溶剂使溶剂从槽底缓慢上升，直至至少达到样点的3/4处。
6.染料分离随着溶剂的上升，不同染料成分会在色谱纸上分离出来，形成带状图案。
7.结果分析观察带状图案，根据不同染料成分的颜色和位置，分析并记录结果。
四、实验注意事项1.实验操作过程中要小心谨慎，避免发生溢液或碰撞等意外情况。
2.实验结束后要将使用过的器材和废液进行妥善处理，保持实验环境整洁。
3.在进行色谱操作时，要注意控制溶剂上升速度，避免溶剂溅出或溢出。
五、实验结果分析观察带状图案并记录结果后，学生可以通过比较不同染料成分的颜色和位置，对染料组成进行初步分析。
同时，可以使用已知染料进行比对，进一步确认待测染料的成分。
六、拓展实验如果时间充裕，教师可以引导学生进行进一步的实验拓展。
比如，可以尝试使用不同类型的色谱纸，比较其对结果的影响；或者使用不同溶剂，观察不同染料成分的分离程度。
七、实验总结通过本次实验，学生掌握了色谱法分析染料组成的方法和步骤，并深入理解了色谱法的原理。
病理切片染色方法
病理切片染色方法病理切片染色是病理学中常用的一种技术，通过对组织切片进行染色，可以观察和分析组织结构、细胞形态和病理变化，从而对疾病进行诊断和鉴定。
本文将介绍常见的病理切片染色方法，包括常规染色、特殊染色和免疫组织化学染色。
一、常规染色常规染色是最常用的病理切片染色方法之一，主要包括血液染色和组织染色。
1. 血液染色血液染色常用的染色剂有偏碱性染料和酸性染料。
偏碱性染料如伊红、结晶紫和新蓝等，可用于染色细胞核和嗜酸性颗粒；酸性染料如朗格汉斯染剂、伊红B和伊红O等，可用于染色细胞质和嗜碱性颗粒。
2. 组织染色组织染色主要是为了观察细胞核、细胞质和细胞间质的结构，常用的染色剂有苏木精-伊红、伊红-酸性品红和伊红-伊红B等。
二、特殊染色特殊染色是指用于特定目的的染色方法，常用于观察特定组织结构、细胞器和病理变化。
1. 酶组织化学染色酶组织化学染色是利用酶的催化作用来观察组织和细胞中的特定物质。
常见的酶包括过氧化物酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶等。
2. 共聚焦显微镜染色共聚焦显微镜染色是一种高分辨率的显微镜技术，可以观察细胞内的亚细胞结构和分子分布。
常用的染色剂有荧光染料如DAPI、荧光素和罗丹明B等。
三、免疫组织化学染色免疫组织化学染色是利用抗体与抗原的特异性反应来观察组织和细胞中的蛋白质分布和表达情况。
免疫组织化学染色常用的标记物有酶标记物和荧光标记物，常用的抗体有单克隆抗体和多克隆抗体。
四、染色结果的评价染色结果的评价是病理切片染色中的重要步骤，可以通过显微镜观察染色结果的颜色、强度和分布情况，进而判断组织和细胞的状态和病变程度。
总结：病理切片染色方法是病理学中常用的一种技术，通过染色可以观察和分析组织结构、细胞形态和病理变化，为疾病的诊断和鉴定提供重要依据。
常规染色、特殊染色和免疫组织化学染色是常见的病理切片染色方法，每种方法都有其特定的应用范围和适用对象。
在进行染色时，我们需要注意染色剂的选择、染色时间的控制和染色结果的评价，以保证染色结果的准确性和可靠性。
生物显微技术 第三章 染色和组织化学
借助这一技术可以： • 直接观察到细胞的形态特征； • 可以观察到该细胞的化学成分、化学性 质； • 在不同生理状态下，组织形态、化学性 质的变化研究可以阐明细胞的功能。
组织化学的技术要求
• 保存细胞的生前结构。 • 保存细胞生前的化学成分和酶活性。 • 所用的化学方法是已知的化学反应，具 有高度的特异性。 • 反应产物应是一种能形成稳定沉淀的有 色物质，供光镜观察；或电子密度高的 物质供电镜观察。
组织化学的特点
• 定性 • 定位 • 相对定量 研究细胞或组织中的化学物质。
研究内容
• 蛋白质：酶类、抗原等具有某种特异功 能的蛋白。 • 核酸：DNA和RNA • 糖类 • 脂类 • 无机盐和微量元素
糖类显示
最常用于显示细胞、组织内 的多糖和蛋白多糖的方法是 过碘酸-雪夫反应 （periodic acid Schiff， PAS反应)。基本原理是：糖 被强氧化剂过碘酸（HIO4) 氧化后，形成2-醛基；后者 与Schiff试剂中的无色品红 亚硫酸复合物结合，形成紫 红色反应产物,PAS反应阳性 部位即表示多糖的存在。
分类
1. 一般组织化学 它的基本原理是在组织切片上滴加 一定试剂，使它与组织细胞内某种化学物质起反 应，并在原位形成有色沉淀产物，通过观察该产 物，可对某种化学物质进行定位、定性及定量的 研究。 2. 荧光组织化学 它的基本原理是用荧光显微镜以短 光波紫外线作光源，紫外线可激发标本内的荧光 物质，使其呈现荧光图象，借以了解细胞组织中 的不同化学成分的分布。 3. 免疫组织化学 是近年来发展起来的新技术。它的 基本原理是利用抗原与抗体特异性结合的特点， 检测细胞中某种肽类及蛋白质等大分子物质的分 布
• 媒染剂：组织—媒染剂---染料 复合体。 • 增强剂：加强染色的选择强度。 • 加速剂：加强染料的渗透作用。
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所谓特殊染色的相对性，就是一种方 法可以显示多种目的物，一种目的物 可以用多种方法显示，其中有些方法 可能呈阳性，而有些方法则呈阴性， 这就需要我们拿捏多种方法，因为有 时只有依靠多种方法才能确定所要确 认的目标。
2.特殊染色的分类
特殊染色方法按照所染目的物进行
分类，有结缔组织、肌肉组织、神经组织、 脂类物质、糖类、色素、病理的内源性沉 着物、病原微生物、内分泌物质、骨、血 液及造血组织、核酸、酶类等。
特殊染色及组织化学
赣南医学院病理学教研室
第一节 特殊染色及组织化学的基本知识
一、染色方法
1863年由waldeyer率先倡导用苏木素染 液染细胞核，后来Mallory、Mayer等也阐述过 苏木素的应用。近年来特殊染色和组织化学方 法也屡有创新。Shikata(1973)，Tanka等 (1981年)分别介绍了用地依红和维多利亚蓝混 合液显示乙型肝炎表面抗原的方法；1987年 Crocker J等推出了核仁组成区嗜银蛋白染色 的技术方法以及1991年进行的乳腺肿瘤核仁组 成区的研究方法等。
四、染色的分类
(一)普通染色
最广泛应用于常规制片的苏木素和伊
红染色，又称为常规染色。
(二)特殊染色
1．定义 专门用于显示某些特定目的物的染色 方法称为“特殊染色”，它又可以理解为 “选择性染色”。 特殊染色对目的物的选择性是相对的。有 些方法具有相对的特异性，如油红O等脂质 染色，显阳性者可以肯定为脂质；有些则显 示的是一类物质，如PAS呈阳性反应者有糖 原、粘蛋白、网织纤维、软骨、阿米巴原虫、 霉菌等许多物质和组织结构，并不能确定是 哪一种具体成分。
五、组织化学的基本概念
组织化学是在形态学基础上研究细胞 或组织中物质的化学组成、定位、定量及 代谢状态的学科，是组织学与生物学及生 物化学等的边缘科学，其目的是联系形态， 化学成分和功能来了解组织或细胞的代谢 变化。 目前有许多组织化学方法已划入特殊 染色，划分特殊染色和组织化学无绝对界 限。
六、方法和种类
2、另有学者认为染色是染色剂与组织、细胞之间 的化学性结合。如显示含铁血黄素的普鲁士反 应是最典型的例子。
但是，大量染色的化学反应并不象铁反应 那样明确。大多数染色的原理至今仍未搞清楚， 有些可能是物理性的，有些可能是化学性的， 有些则可能2种机制都起作用。正因为人们对染 色的原理还没有完全掌握，所以还不能很好地 运用原理来控制它，在相当程度上需凭工作经 验。
第二节
糖原和粘液物质染色
一、糖原 糖原在肝细胞、心肌细胞、骨胳肌细胞内含量最 多，其次是毛囊、子宫腺体、阴道上皮、脐带等处均 有少量糖原存在。 糖原易溶于水，在酶的作用下容易分解为葡萄糖。 葡萄糖更易溶于水，故机体死亡后糖原易受到破坏， 其含量发生明显变化甚至完全消失。用常规HE染色观 察不到糖原的形态，用显示糖原的特殊染色也难以观 察到糖原的形态及分布。所以为了观察和研究组织内 糖原的含量及分布、必须选取新鲜标本，用能保存糖 原的固定液及时固定，再经特殊染色后才能将糖原显 示出来。
1、化学方法 根据其化学反应的原理，在 组织切片上生成沉淀，显示定位。 2、类化学方法 有少数方法的染色反应有特 殊性，但机制不明。 3、物理方法 应用物质的物理学特性，如 苏丹、油红染料易溶于脂类而使脂类染色。
七、操作掌握的要点
1．组织材料及时切片与染色，才能保持组织细 胞良好的形态结构。 2．染色切片的判断，应把病变的形态、部位及 相应的理论一起进行综合分析，可借助阴性及 阳性对照，正确分析实验结果。 3．生成的反应产物必须在原位沉淀，着色深， 且不溶，为细小沉淀或小结晶。能保证定位的 精确性及稳定性，便于反复观察。
3.特殊染色的命名
对于特染的命名至今尚无统一的规定，
多数均按发明者的姓名命名，如van Geison 染色等；有的则按所用染色剂命名，如甲基绿 一派若宁染色、苏丹Ⅲ染色等；有的按目的物 命名，如网织纤维染色；还有的采用混合命名，
如试剂十人名等。
4．特殊染色的意义
1)显示在常规HE染色切片中不明显的目的物,如病变 中霉菌数量较少时，应用Gridley染色就容易发现
二、染色目的
未加染色的任何组织切片在镜下只能
辨认细胞和胞核的轮廓，看不清楚其他任 何结构。染色的目的就是将组织切片浸入 染色剂内，经过一定的时间，将组织或细 胞及其他异常成分染上不同深浅的颜色， 便于在光学显微镜下进行观察。
三、染色原理
染色过程是染色剂和组织细胞相结合的过程。其 机理尚未完全清楚。 1、有学者认为从物理学角度看，染色剂和组 织细胞的结合是“溶解”或“吸收”。例如苏丹类 染色剂使脂质着色，就是利用染色剂在脂质中的溶 解度大于在酒精等溶剂中的溶解度这一特性。有些 染色剂是染色剂分子通过渗透和毛细血管作用而被 吸收或沉淀到组织、细胞的小孔中去而着色的‘这 种机制的染色是很少的。
2)可以区别胶原纤维和平滑肌，苏丹染色可区别脑浆 内的脂肪。如网织 纤维、星形细胞的突起、结核杆菌、螺旋杆菌等， 都可用相应的特殊染色法显示。 因此，特殊染色是常规染色的必要补允，也是染色 技术中不可缺少的组成部分。它在病理诊断中起着 辅助作用。
1.虽然形成了许多显示细胞化学的方法及 一些特殊染色。但发展的速度比较缓馒。这是 因为每一种方法都有自己不相同的试剂、底物 和方法，在发展上既没有系统的经验可以遵循， 在学习使用上也比较困难。 2.自从免疫组织化学问世以来．几乎所有 的组织化学成分都可以用免疫组织化学方法检 测，所以组织细胞化学的许多方法大多数被免 疫组织化学所代替。 3.有些组织化学方法定性准确，方法简单、 使用方便或因试剂便宜，至今沿用不衰。
(一)固定方法及注意事项
1)尽可能选取小块新鲜组织并及时固定。 2)多次更换乙醇混合固定液，在4℃左右内固定与保 存。这是针对糖原的性质和避免糖原溶于水而采取的相应 措施。乙醇虽然是保持糖原的较好固定剂，但是用单一的 乙醇尤其是用无水乙醇固定肝、肌肉等实质性组织时，固 定作用迅速而穿透力弱，组织表面会很决凝固变硬。这样 由于固定不透和不均，糖原同样不能得到较好的保存，易 出现糖原颗粒趋于细胞一端的极化现象。 目前固定与保存糖原的固定液，以乙醇为溶剂配制含 甲醛、冰醋酸及苦味酸等混合固定液为好：此类固定液利 用乙醇防止糖原溶解于水；利用冰醋酸和苦味酸的膨胀及 软化作用，抵消乙醇对组织的收缩硬脆；利用甲醛对组织 固定的渗透力强、固定均匀等优点。其固定原理是使与糖 原相结合的蛋白质凝固。