大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定

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实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定

实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定一、实验目的：1、了解一个天然药物中含有的主要有效成分并对其进行提取分离。

2、掌握植物中活性成分的化学检测方法，并进行初步的鉴定工作。

二、实验原理：大黄是一味天然草药，具有泻下通便之效果。

其主要活性成份是大黄素与蒽醌类物质，其中瑞贝洛Ⅱ（rustbelineⅡ）、大黄素（emodin）、芦丁（rutin）等，在医学上有广泛的应用。

大黄素与蒽醌类物质在自然状态下大多处于质子化状态，存在于与水相较弱的有机溶剂中。

为了获得高品质的大黄素与蒽醌类物质，需要对有机溶剂进行筛选，筛选出适宜的溶剂并对大黄中的主要成分进行提取与分离工作。

三、实验步骤：A. 大黄中蒽醌的提取分离1、将粉末大黄紫锥子取 1g 加入圆底烧瓶中，加入 15 mL 95% 乙醇溶液，加热回流30分钟。

2、冷却后用干净的滤纸分离上清液用热水冲涤保持颜色相同（保留水冲涤液备用）。

3、将去溶剂后的渣用 10 mL 苯醇溶解，并过滤写滤液保存，不断冲涤干净渣质。

4、将 2mL 苯醇滤液分离于干净的离心管中，在室温下慢慢加入正硫酸，足量使呈酸性.，加入 5 mL 甲醇，蒸去溶剂后，注 1mL 50%氨水，筛过活性炭或过硅酸钠脱除杂物，使溶液呈现深黄色液体。

5、以上溶液在 20ml 分液漏斗中加入 20-25 mL 丙酮，振荡混合，分离两层液体，取下蒸馏收干（可以置于干燥器或开放场地自然干燥，当感觉无水分或连续称量两次称量值一致时即可）6、将干燥沉淀取少量溶解于绝对丙酮中成特邻醌的溶液。

7、分别进行下列试验来分离纯特邻醌：（1）纯特邻醌呈现红色；（2）用极少量生石灰进行检测，呈现橙色。

B. 大黄中大黄素含量的色谱定量测定色谱图谱图峰形面积法进行测定。

1、用同上操作，按“ A ”-“ E ”方法操作，取所得特邻醌溶液 1-5 mL 再加入丙酮使其溶解（溶液的浓度以能出现三个吸光峰为适宜，可调配NaOH溶液调节pH 值，使吸光峰相对集中于三个波长摆荡之一）。

实验八大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定

留存的乙醚液，置圆底烧瓶中，回收乙醚，放置。抽滤收集沉淀，经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。 4．鉴定（1）碱液试验：分别取蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加 1ml乙醇溶解，加数滴5%氢氧化钾试剂振摇，溶液呈红色（2）醋酸镁试验：分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加1ml乙醇溶解，加数滴0.5%醋酸镁试剂，产生橙、红、紫等颜色
③
芦荟大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用0.5%NaOH水溶液每次15ml萃取3～4次。乙醚溶液再以蒸馏水萃取 2～3次，以洗去碱液。合并NaOH和水的提取液，加盐酸调pH2~3，放置。抽滤析出沉淀，收集沉淀，经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。
（三）蒽醌类化合物的提取与分离
蒽醌的提取与分离
蒽苷的分离比苷元困难，分离前一般先用溶剂法除去大部分杂质，得较纯的总苷后，再用柱色谱分离。
（3）薄层检识
（4）纸色谱检识
支持剂：新华色谱滤纸（中速、20cm×7cm）样品：各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液
对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液
展开剂：甲苯显色剂：0.5%醋酸镁甲醇溶液
四、思考题
1．在实验过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌，萃取过程中若出现乳化现象，应如何处理？ 2．大黄酚和大黄素甲醚结构相似，怎样分离？
②
大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次 15～20ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止，约需6～7次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH2~3，放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上，干燥后称重。

实验报告

植化方法学实验报告单位：六班七组成员：樊若西付云飞原雪娜邹晓楠毕天民总结汇报：毕天民报告执笔：付云飞2011年7月8日大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验题目：大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定二、实验目的：1、掌握大黄浸膏的提取方法2、了解柱层析、薄层层析的操作技术3、学习用硅胶柱色谱法和硅胶制备薄层色谱法分离大黄中的蒽醌类成分的提取分离方法4、学习蒽醌类化合物的鉴定方法三、实验原理：大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泻下、健胃、清热、解毒等。

自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药店所收载的世界性生药。

大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheumpalmatclm L），大黄（R.officinale Baill）及唐古特大黄（R.tangutium Maxim.et Regll）的根茎及根大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷，总含量约2-5%。

已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：大黄酸 R1=H R2=COOH大黄素 R1=CH3 R2=OH芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3大黄酚 R1=CH3 R2=H大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。

大黄酸连有-COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连有-CH3，因而后者酸性排在第四位。

四、实验材料：1、仪器：旋转蒸发仪、红外灯、天平、回流装置一套、圆底烧瓶、烧杯、蒸发皿、层析槽、布氏漏斗、抽滤瓶、试管、滴管、橡皮管、分液漏斗、普通滤纸、水浴锅、薄层板、喷雾器、点样毛细管等。

2、试药：大黄3、试剂：95%乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、冰醋酸4、吸附剂：薄层色谱硅胶（10~40目）柱色谱硅胶（200~300目）显色剂（装置）：1%氢氧化钾溶液，2%三氯化铁溶液，10%硫酸乙醇溶液，紫外灯五、实验步骤：（一）大黄浸膏的提取称取大黄50g，用95%乙醇200ml加热回流提取2h，常压蒸馏回收溶剂，得大黄浸膏47.6g。

实验六大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(二)

大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定（二）
实验目的
1. 通过大黄酚及大黄素甲醚的分离试验，掌握硅胶柱色谱的操作技术。 2. 掌握蒽醌类化合物的化学鉴定及色谱鉴定技术。

实验原理

大黄中游离蒽醌的极性大小顺序为：大黄酸>大黄素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚。前三种可用 pH梯度萃取法分离。大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。总蒽醌及各种分离成分可用色谱法进行鉴别。同时硅胶柱色谱洗脱液可用色谱法鉴别后，合并单一成分的洗脱液。来自注意事项

①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒； ②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。 ③ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。回洗液应弃去，可除去混入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。留取5ml的三氯甲烷提取液做总样，供最后层析鉴定用。
仪器、材料与试剂

实验试剂及试药：大黄药材粗粉2Kg，氯仿500ml 10瓶，浓硫酸2瓶，浓盐酸2 瓶，冰醋酸，苯，乙酸乙酯，碳酸钠（5% Na2CO3溶液 3000ml），碳酸氢钠（5% NaHCO3溶液3000ml），氢氧化钠（5% NaOH溶液1000ml），氢氧化钾，醋酸镁试剂等。实验仪器设备： 500ml圆底烧瓶10个，冷凝回流管10只，500ml分液漏斗10 只，500ml烧杯20只，100-250ml量筒10只，常压漏斗（510cm斗径10只），定性滤纸（10cm）2盒，毛细管点样器1 盒，玻璃喷瓶4套，广谱PH试纸5盒，纱布一卷，多孔水浴锅5台，旋转蒸发仪2台。

实验五大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(一)

2）大黄素的分离与精制
将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH10缓冲液（5%NaCO3溶

3）芦荟大黄素的分离和精制
余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 碱水液200ml振
摇萃取2次，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤水洗干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。
注意事项

①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒； ②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。 ③ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。回洗液应弃去，可除去混入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。留取5ml的三氯甲烷提取液做总样，供最后层析鉴定用。

2．分离原理——pH梯度法
根据蒽醌苷元酸性强弱不同，选用不同的pH碱液进行分
步萃取，以分离酸度不同的蒽醌苷元。大黄酸连有COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连有-CH3，因而后者酸性排在第四位。

1．大黄总蒽醌苷元的提取
大黄粉50g，置于500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和三氯甲烷250ml，
水浴回流提取4h，放置，冷却后过滤，残渣弃去，三氯甲烷提取液置于分液漏斗中，分出酸水层，得三氯甲烷提取液。

大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定

大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄是一种广泛应用的中药材，含多种活性成分，其中最重要的是蒽醌类化合物。

这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此成为广泛应用的化合物之一。

本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。

大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。

醇提法是最常用的提取方法之一。

一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。

以乙醇为例，其提取过程如下：（1）将大黄切碎，加入适量的96%的乙醇。

（2）加热回流提取1小时。

（3）过滤，滤去残渣。

（4）将过滤液浓缩至干燥。

（5）得到蒽醌类化合物粗提取物。

大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术进行分离。

其中，高效液相色谱技术最常用。

根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器等条件的不同，可以对获得的粗提取物进行进一步分离。

以高效液相色谱为例，其分离过程如下：（1）将粗提取物溶于少量甲醇中。

（2）进行反相或正相高效液相色谱分离。

大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。

其中，以紫外分光光度法为例，其鉴定过程如下：（1）使用UV特征峰进行鉴定。

（2）将标准品或纯品溶于适量的甲醇中，按比例稀释。

（3）将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。

（4）记录在特定波长下的吸光度。

（5）通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。

总之，大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。

通过这些技术的应用，可以得到单纯、纯度高的化合物，为下一步的药理、毒理研究提供了保障。

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定

药渣（弃）
氯仿提取液
实验内容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（1）
蒽醌类成分的缓冲纸色谱
层析材料：3×12㎝滤纸样品：大黄氯仿提取液展开剂：氯仿（水饱和）显色：自然光下观察
3%NaOH 5%Na2CO3:5%NaOH(9:1) PH9.9 pH8 pH3
实验内容（二）

蒽醌苷元的分离和精制（2）
思
考
题
1.大黄中5种羟基蒽醌的酸性和极性大小应如何排列？为什么？ 2.pH梯度法的原理是什么？适用于哪些中药成分的分离？
蒽醌类成分的鉴定

实验原理

提取：蒽醌苷
酸水解
氯仿提取
苷元(溶于热氯仿)
总蒽醌苷元
实验原理

分离：
OH O OH
R1 O
R2
由于各羟基蒽醌结构上的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法分离他们；大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，利用其极性的差异，用柱色谱分离之。
R2= CH3 R2= CH3 R2= CH3 R2=CH2OH R2=COOH
实验内容（二）

蒽醌苷元的分离和精制（3）
柱层析法分离大黄酚、大黄素甲醚
装柱（湿法装柱）上样（干法上样）
洗脱剂1 石油醚-乙酸乙酯（98：2）
洗脱
洗脱剂2 石油醚-乙酸乙酯（95：5）
流份检查（合并相同流份）
实验内容（三）

大黄蒽醌类成分的鉴定
（1）化学鉴定（2）色谱鉴识
实验内容（三）
A大黄酚（chrysophanol） R1=H B大黄素（emodin） R1= OH C大黄素甲醚（physcion） R1=OCH3 D芦荟大黄素（aloe-emodin） R1=H E大黄酸（rhein） R1=H

大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.

试验三大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。

自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。

大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。

已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OOHR 2OHR 112-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。

大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。

（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。

2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。

3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。

4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。

（三）实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉（100g）加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。

残渣氯仿提取液（约450ml）注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定

大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。

由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。

根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。

2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。

具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。

以分离酸度不同的蒽醌苷元。

也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。

（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。

三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。

大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定

大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是一类具有重要药用和工业价值的化合物，广泛应用于医药、染料和化学工业等领域。

提取、分离和鉴定大黄蒽醌类成分的方法对于进一步研究其生物活性和应用具有重要意义。

本文将介绍一种常用的大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定方法。

我们需要准备待提取的植物材料。

大黄是一种常见的含有蒽醌类成分的植物，可以作为提取的原料。

为了提高提取效果，可以将大黄切碎或研磨成较小的颗粒。

接下来，我们可以选择合适的提取剂。

一般来说，乙醇、甲醇或乙醚等有机溶剂是常用的提取剂。

将大黄与提取剂充分混合并浸泡一定时间，以促进目标成分的溶解和转移。

提取完成后，我们需要对提取液进行分离。

通常使用离心、过滤或萃取等方法，将固体颗粒和溶液分离开。

这样可得到含有目标成分的溶液。

为了进一步纯化目标成分，我们可以使用柱层析、薄层层析或高效液相色谱等分离技术。

这些技术可以根据成分的物化性质，如极性、分子大小和亲水性等进行选择。

通过不断进行分离和收集，我们可以得到纯度较高的目标成分。

在分离得到目标成分后，我们需要进行鉴定。

常用的鉴定方法包括红外光谱、质谱和核磁共振等技术。

红外光谱可以用来确定分子的官能团和结构特征。

质谱可以提供分子的相对分子质量和结构信息。

核磁共振可以用来确定分子的空间结构和化学环境。

还可以通过比较样品与标准物质的色谱保留时间和质谱图谱等数据，来确定目标成分的纯度和结构。

如果有条件，还可以进行生物活性实验，评估目标成分的药理活性和毒理学特性。

大黄蒽醌类成分的提取、分离和鉴定是一项复杂而重要的工作。

通过合理选择提取剂、分离技术和鉴定方法，我们可以得到高纯度的目标成分，并进一步研究其应用前景和药理学特性。

这对于推动大黄蒽醌类成分的研究和开发具有重要意义。

大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定

大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定是一项重要的分析化学工作。

通常采用溶剂提取法将大黄中的蒽醌类成分分离。

首先将大黄粉末用60目筛过筛，然后用乙醇将大黄粉末浸泡2~3次，每次浸泡时间为1小时，离心分离液体，将沉淀收集并用肉桂酸重结晶法纯化获得大黄中的蒽醌类成分。

对所提取的大黄蒽醌类成分进行鉴定时，需采用高效液相色谱和质谱联用技术。

高效液相色谱条件为：色谱柱为C18（250mm×4.6mm，5μm），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，梯度洗脱方式：A相为甲醇，B相为水，梯度程序：0~12min，A相从30%逐渐升高到98%，12~15min，A相维持在98%。

通过高效液相色谱检测，可以得到大黄中蒽醌类成分的相对保留时间和峰面积，并使用质谱联用技术对其分子式进行鉴定。

同时，通过实验数据对大黄中蒽醌类成分的含量进行确定，并与国家药典规定的标准相比较，以确保其质量符合相应的药品标准。

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定（实验报告）.

⼤黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定（实验报告）.⼤黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定⼀、实验⽬的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离⽅法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定⽅法⼆、实验器材材料及试剂：⼤黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、⼄酸⼄酯、⽯油醚、⼄醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、⼴泛PH试纸、剪⼑、铅笔、尺⼦、点样⽑细管、样品管等。

仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡⽪管、烧杯、滴管、层析缸（⼴⼝瓶）、250mL分液漏⽃、布⽒漏⽃、抽滤瓶、⽔浴锅、集热式磁⼒搅拌器、磁⼦、循环⽔式多⽤真空泵、铁架台等。

三、实验原理⼤黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉⾎解毒、逐瘀通经等功效。

其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，⼤部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有⼤黄酸、⼤黄素、芦荟⼤黄素、⼤黄酚、⼤黄素甲醚等。

其中，⼤黄酸具有羧基，酸性最强；⼤黄素具有β-酚羟基，酸性第⼆；芦荟⼤黄素连有羟甲基，酸性第三；⼤黄素甲醚和和⼤黄酚的酸性最弱。

根据以上化合物的酸度差异，可⽤碱性强弱不同的溶液进⾏梯度萃取分离。

⼤黄酸R1=H R2=COOH⼤黄素R1=CH3R2=OH芦荟⼤黄素R1=CH2OH R2=H⼤黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3⼤黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容⼤黄素的提取、分离流程图⼤黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、⼲燥滤饼150ml⼄醚回流提取1 h⼄醚层⽔层（紫红⾊）⼄醚层HCl 3⼤黄酸沉淀（粗品）⽔层（红⾊）⼄醚层HCl 0.25% NaOH⼤黄素沉淀（粗品）⽔层（红⾊）芦荟⼤黄素、⼤黄酚、⼤黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸⽔解：称取⼤黄粗粉10g，加20%H2SO4⽔溶液150mL，在⽔浴上加热1⼩时，放冷，抽滤，滤饼⽤NaOH溶液洗⾄近中性（pH约为6），于70℃⼲燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加⼊⼄醚150mL回流提取1⼩时（调45℃，回流即可），得到⼄醚提取液。

大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定

大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是指一类存在于大黄根茎中的化学成分，主要成
分包括大黄素、大黄酸与大黄蒽醌等。

提取分离与鉴定这些化学成分
需要以下几个步骤：
1. 样品的准备：采集大黄根茎样品，削去外皮和细根，切碎成小
块或粉碎成粉末状。

2. 提取：将样品加入适量的有机溶剂中进行提取，常用的有机溶
剂有乙醇、乙醚、丙酮等。

提取可以采用不同的方法，比如浸泡提取、超声波提取等。

3. 结晶：将提取得到的药材颗粒溶解在有机蒸馏水中，然后用双
水浴器加热到一定温度，待溶液浓缩到一定程度时，停止加热，继续
搅拌至其冷却结晶。

4. 分离：用过滤或分离漏斗等方法将结晶物分离出来，再用洗涤
剂或其他方法对其进行提纯。

5. 鉴定：利用色谱法、红外光谱法、核磁共振法等手段对所提纯
的化合物进行鉴定，确定其结构和成分。

以上是大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定的基本步骤，可以根据
实际情况进行调整和优化。

大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定

大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。

提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。

在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。

2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。

为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。

柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。

薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。

3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。

常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。

红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。

以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。

实验5 大黄中蒽醌类的提取与分离

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5.pH梯度萃取
取乙醚提取液2/3量，置 250ml分液漏斗中。
1、大黄酸：用2.5% NaHCO3溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤，得大黄酸沉淀。
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2 、大黄素：分离出大黄酸的乙醚层，用 2.5% Na2CO3溶液60ml分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤可得大黄素沉淀。
1.简述大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸性与结构的关系。
2. pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合物？
3.大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的极性与结构的关系如何？薄层鉴别时常用何类吸附剂？Rf值顺序如何？
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3、芦荟大黄素：分离出大黄素的乙醚层，继续用2.5% Na2CO3溶液60ml分四次萃取，合并四次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤可得芦荟大黄素沉淀。
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4、大黄酚和大黄素甲醚混合物:将分离出芦荟大黄素的乙醚层，用0.5% NaOH溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤，得大黄酚和大黄素甲
3.pH梯度萃取法分离羟基蒽醌，是利用羟基蒽醌的酸性不同，可溶于不同 pH的碱液中，在分离时，应注意萃取的次数不宜过多，否则被分离的成分间回游混杂，最好同时用薄层对照。所用碱液的pH值分别如下：5%碳酸氢钠为8， 5%碳酸钠为10-11，0.5%氢氧化钠为12以上。
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五、思考题
用铅笔在距硅胶板点样端约2cm处平行地划上点样标记，用毛细管点样（注意：样点的间距不能小于1cm，点的直径能够不得超过0.5cm!），自然风干

大黄中蒽醌类成分的提取 - 大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴别

为了验证分离所采用的萃取液是否合理，作如下缓冲纸色谱试验：取层析滤纸3 cm×12 cm，距下端2 cm处划一起始线，向上每隔1.5 cm划一平行线，在各条带上依pH由低至高顺次涂布实际所用的各缓冲液及碱液，涂布完后，将湿滤纸夹在两片干滤纸中吸至半干。取样品总蒽醌苷元氯仿提取液点在起始线上，用氯仿上行展开，将结果绘制在下面图中，并确定选择的萃取剂是否合理。
b.醋酸镁试验分别取蒽醌结晶数毫克，置于小试管中，各加乙醇l ml使溶解，滴加0.5％醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化。
(2)色谱鉴识
a.薄层板：硅胶G-CMC-Na板。
b.点样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的氯仿溶液及各对照品氯仿溶液。
c.展开剂：石油醚－乙酸乙酯－甲酸（15:5:1）上层溶液。
洗脱：先用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）洗脱，至第一条黄色色带洗下来，再换用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脱下第二条色带。
4.鉴定
(1)蒽醌类成分化学鉴定
a.碱液试验分别取各蒽醌结晶数毫克置于小试管中，加2％氢氧化钠溶液l ml，观察颜色变化。凡有互成邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色，其它羟基蒽醌呈红色。
b.大黄素的分离和精制
pH 8缓冲液萃取过的氯仿层，用pH 9.9缓冲液300 ml振摇萃取，静置至彻底分层后，分出碱水层，在搅拌下用20％盐酸酸化至pH 3，析出棕黄色沉淀，抽滤，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀经干燥后，用15 ml丙酮热溶，趁热过滤，滤液静置，析出橙色针晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。
（2）分离与精制
a.大黄酸的分离和精制
将含有总蒽醌的氯仿液450 ml于1000 ml分液漏斗中，加pH 8缓冲液150 ml充分振摇，静置至彻底分层，分出碱水层置250 ml烧杯中，在搅拌下滴加20％盐酸至pH 3，待沉淀析出完全后，过滤，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀干燥后，样品加冰醋酸10 ml加热溶解，趁热过滤，滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。

大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定

滤液
减压回收乙醇至糖浆状，将浓缩物转移至250ml三角瓶中
乙醇总提物
放冷，加入乙醚60ml冷浸，振摇20′将乙醚液倾入500ml三角瓶中
乙醚层
浸膏
40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15′）
乙醚层
浸膏
乙醚总提液
2、游离蒽醌的分离
乙醚总提液
5%NaHCO3水溶液萃取3次，每次40、 30、30ml，至水层颜色变浅
它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
实验目的
1．掌握PH梯度萃取的原理及操作技术； 2．掌握蒽醌类化合物鉴定方法； 3.了解液液萃取法分离混合物的实验方法；
实验原理
利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质互异的蒽醌类成分提取出来；
总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得总提取物可用乙醚提取总苷元；
乙醚层
5%Na2CO3水溶液萃取3次，每次40、35、35ml
碱水层
酸化，抽滤水洗，干燥
沉淀Ⅱ 大黄素
乙醚层
碱水层
滴加HCl酸化，静置沉淀，抽滤，水洗至中性，干燥
沉淀I，大黄酸乙醚层
2%NaOH水溶液萃取3次，每次30ml，
碱水层
酸化，抽滤水洗Biblioteka 干燥沉淀Ⅲ 大黄素甲醚、大黄酚
3、蒽醌类化合物的检识
（1）薄层鉴别吸附剂：硅胶展开剂：石油醚-正己烷-苯-甲酸乙酯-甲醇-水（25：75：5：35：6：25）显色：紫外灯下观察，斑点为黄色
（2）呈色反应 ① 滴加2%NaOH水溶液，观察颜色变化 ② 滴加0.5%醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化 ③ 滴加浓硫酸数滴，观察颜色变化

实验四--大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定

实验四大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、概述植物来源：大黄系蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L．)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim. ex Balf．)或药用大黄(Rheum offcinale Baill．)的干燥根及根茎。

大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。

自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典收载的世界性药材。

功效：大黄具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗肿瘤活性有效成分主要为蒽醌类衍生物，如：大黄酸、大黄素和芦荟大黄素；止血的主要有效成分为大黄酚；泻下的有效成分是结合型的蒽苷类。

蒽醌类衍生物占大黄总化学成分的3％～5％，该类成分少部分以游离状态存在，大部分与葡萄糖结合成苷的形式存在。

此外，大黄还含有鞣质等多元酚类化合物，含量在10％一30％之间，具止泻作用，与蒽苷的泻下作用恰恰相反。

主要化学成分的结构及物理性质大黄中含有多种游离的羟基蒽醌及其与糖所形成的苷类化合物，已知的游离羟基蒽醌主要有以下5种化合物。

大黄酸(rhein)，C15H806，黄色针晶，m.p321—322℃(330℃分解)，UVλmax431，258，231，204。

可溶于碱水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚，不溶于水。

大黄素(emodin)，C15H1005，橙黄色针晶(乙醇)，m.p256—257℃。

UVλmax436，289，266，253，222。

可溶于碱水，微溶于乙醚、三氯甲烷，不溶于水。

芦荟大黄素(aloe emodin)，橙色针晶(甲苯)，m.p223～224℃。

UVλmax429，287，254，225，202。

可溶于乙醚、苯及碱水，不溶于水。

大黄素甲醚(physcion)，砖红色单斜针状结晶(苯)，m.p205—207℃。

溶于苯、三氯甲烷及甲苯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮，不溶于水。