常用染色方法 ppt课件

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革兰氏染色教学ppt课件

革兰氏染色教学ppt课件
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2.3、意义:
(1) 鉴别细菌:用此染色法可将所有细菌分为两大 类,这样可将致病菌的范围缩小,然后再进一步鉴定。 (2)选择药物:革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌在细胞 壁等结构上有很大差别,因而对抗生素的敏感性不 同。例如大多数阳性菌对青霉素敏感大多数阴性 菌对青霉素不敏感(脑膜炎球菌等除外),可供临床 实践中选用抗菌药物的参考。 (3)与致病性的关系:大多数革兰氏阳性菌的致病物 质主要为外毒素;而大多数革兰氏阴性菌的致病物 质主要为内毒素.
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细菌结构模式图
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2.7实验原理:
① G+细菌的细胞壁
• G+细菌细胞壁具有较厚(20-80nm)而致 密的肽聚糖层,多达20层,占细胞壁成分 的60%~90%,它同细胞膜的外层紧密相 连 ;有的G+细菌细胞壁中含有磷壁酸。细 胞生长中有自溶素(酶类)起作用,磷壁 酸对自溶素有调节功能,阻止胞壁过度降 解和壁溶。如果细胞壁的肽聚糖层被消溶, G+ 细 胞 成 为 原 生 质 体 ( protoplasts) , 细 胞壁不复存在,而只存留细胞膜。除链球 菌外,大多数G+细菌细胞壁中含极少蛋白
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2.4具体操作步骤:
2.4.1涂片: 左手持菌液试管,右手持接种环, 用接种环从试管培养液中取一环菌,从酒 精灯外焰穿过,于载玻片中央涂成薄层( 事先在背面做好标记圆圈)即可,或先滴 一小滴无菌水于载玻片中央,用接种环从 斜面上挑出少许,与载玻片上的水滴混合 均匀,涂成一薄层。拔或塞试管塞时,应 将试管口通过火焰略加烧灼,最后将接种 环在火焰上烧灼灭菌。
革兰染色
1
一、染色标本的制备
1、涂片:载玻片上滴加生理盐水一滴,接种环取待检 菌培养物少许,研入无菌生理盐水中,形成一个极薄的 均匀的菌膜,直径在1cm左右为宜。如果时液体培养物 则直接取少许菌液涂成菌膜。

《组织化学染色》课件

《组织化学染色》课件

科学研究
通过染色技术,研究人员可 以观察和研究细胞的结构和 功能。
药物开发
染色技术也可以用于药物开 发过程中的药效评估和分析。
组织化学染色的原理
组织化学染色的原理是利用化学反应将染料分子与组织或细胞结构中的特定 成分结合,从而产生颜色反应。
组织化学染色的步骤
1
标本制备
将组织标本收集、固定和包埋,以便进行 Nhomakorabea一步的染色过程。
2
染料选择
根据需要染色的组织或细胞成分特点选择合适的染料。
3
固定和染色
将标本与染料处理,使染料与目标结合,并增强染色效果。
优点和限制
优点
组织化学染色可以提供直观的视觉信息,用 于研究和诊断。
限制
染色结果可能受到多种因素影响,例如标本 质量和染色剂的稳定性。
常见问题和解决方法
1 染色结果不明显
可能因为染料浓度不足,可以尝试增加染料浓度。
常用的染色方法
1 酸性染料
酸性染料常用于染色细胞核和某些细胞器,例如血液涂片中的噬菌体。
2 碱性染料
碱性染料主要用于染色胞浆和细胞骨架,如组织切片中的嗜酸性细胞。
3 特殊染料
特殊染料用于特定类型的细胞或组织元素,例如肿瘤标志物的染色。
染色技术的应用
医学诊断
组织化学染色在病理学中广 泛应用于疾病的诊断和鉴定。
《组织化学染色》PPT课 件
欢迎来到《组织化学染色》的课程!在本课程中,我们将深入探讨组织化学 染色的基本原理、常用方法以及应用领域。准备好扩展您的知识,并让我们 一起开始这个令人兴奋的旅程吧!
染色的定义和作用
染色是一种在组织学和生物学研究中常用的技术,通过使用染料将细胞和组织的特定结构染色,以显示 其形态、组织类型和功能特点。

常用染色技术(食品微生物课件)

常用染色技术(食品微生物课件)
—95%乙醇脱色0.5min—— 番红复染 结果:
革兰氏阳性菌——紫色 革兰氏阴性菌——红色
一、细菌革兰氏染色
点样

初染


媒染
色 步

脱染
复染
二、酵母菌死活鉴别
结果观察:
蓝色酵母:死 无色酵母:活
知识点:细菌革兰氏染色技术
情境:细菌染色与形态观察 任务:细菌革兰氏染色
课程:食品微生物技术
细菌革兰氏染色技术
一、细菌革兰氏染色
革兰氏染色简介
一、细菌革兰氏一、细菌革兰氏染色
革兰氏染色
基本步骤: 涂片固定—— 结晶紫初染1min—— 碘液媒染1min—
知识点:酵母菌美蓝染色及死活鉴别
情境:酵母菌染色与形态观察 任务:酵母菌美蓝染色及死活鉴别
课程:食品微生物技术
酵母菌美蓝染色及死活鉴别
一、酵母菌美蓝染色
1.染色原理
美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,还原型无色。 用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细 胞内具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还 原型。因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的,而死细胞或代 谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死 细胞和活细胞进行鉴别。
一、酵母菌美蓝染色
2.实验仪器与器材
1)菌种:普通酵母菌 2)染色液:0.1%美蓝染液。 3)器材:显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、接种环等。
一、酵母菌美蓝染色
3.实验内容
(1)制片 取0.1%美蓝染色液1滴于载玻片中央,用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀 ,染色2~3 min后加盖玻片。 (2)镜检 用低倍镜和高倍镜观察细胞形态。根据酵母菌是否染上蓝色区别细胞的死活 。 (3)染色约0.5h后再次进行观察,注意死活细胞数量是否增加。

《革兰氏染色法》课件

《革兰氏染色法》课件

将脱色后的涂片用番红染液复染,时间约为1-2分钟。番红是 一种酸性染料,可以和蛋白质结合,使菌体或细胞呈现红色 。
番红复染的作用是使菌体或细胞呈现红色,使其更加明显, 有助于观察和鉴别。同时,番红还可以与结晶紫形成鲜明的 对比,使观察更加准确。
冲洗与干燥
• 将染色完成的涂片用清水冲洗干净,然后晾干或用吸水纸吸干 水分。冲洗的目的是去除染色过程中残留的染料和媒染剂等物 质,以免对观察造成干扰。干燥的目的是使涂片固定,以便于 保存和观察。
背景
革兰氏染色法的发明对于细菌学的发展起到了重要的推动作 用,为后续的细菌分类、疾病诊断和治疗提供了有力支持。
染色原理
原理
革兰氏染色法的染色原理主要是通过 一系列的脱色处理和复染,使细菌着 色,从而根据颜色差异将细菌分为革 兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
操作流程
革兰氏染色法通常包括涂片、脱色、 媒染、染色和复染等步骤,通过这些 步骤的组合和调整,可以实现对不同 类型细菌的准确鉴别。
革兰氏染色法的结
03
果与意义
革兰氏阳性菌与阴性菌的染色特性
革兰氏阳性菌
被染成紫色或蓝紫色,不易被酒 精脱色,有厚重的革兰氏染色反 应。
革兰氏阴性菌
被染成红色或淡红色,易被酒精 脱色,有较弱的革兰氏染色反应 。
染色结果的分析与解读
根据染色结果判断细菌的种类和特性,有助于临床诊断和 治疗。
通过观察染色后细菌的形态和排列,可以初步判断细菌的 致病性。
重要性
革兰氏染色法对于临床医学、生物技术和食品工业等领域具有重要意义,能够 帮助科学家和医生快速准确地鉴别不同类型的细菌,从而采取相应的治疗和预 防措施。
发展历程与背景
发展历程
革兰氏染色法由丹麦细菌学家汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884 年发明,至今已有百余年历史。随着科学技术的不断进步, 该方法在操作流程和染料选择等方面不断得到优化和改进。

常用染色设备及染色方法 (2)ppt课件

常用染色设备及染色方法 (2)ppt课件

二、旋转浆式散毛染色机
– 组成:圆形染槽、旋桨等 – 散纤维装在假底上,盖上多
孔盖板,并旋紧槽盖,放入 染液后即可进行染色。 – 染色时,由于旋桨的转动, 染液自多孔管喷出,进行循 环。 – 改变旋桨的转动方向,染液 的循环方向也发生改变。
3、GR20 1-50型高温高压染色机(146页)
染色机主要用于染涤纶散纤维、 涤纶毛球及涤纶绞纱。
三、毛条染色机(147页)
N461型毛球染色机有4个 毛球桶,可装毛(纤维)条 100~120 kg。 N462型毛球染色机(见图) 有2个毛球桶,可装毛(维 )条50~60 kg。 染色时,将毛球装入毛球 桶中,旋紧顶盖,开动环 泵,染液自毛球桶外穿过 毛球,从毛球桶芯的上部 喷出再回到环泵。染毕, 放去残液,注入清水,洗 净浮色,取出毛球。
二、筒子纱染色机(147-148页)
高温高压筒子纱染色机
染色前,先将绞纱卷绕在 特制的筒管上,筒管为多 孔的不锈钢管,纱筒可呈 锥形或圆形。
染色时,将筒子纱串装在 芯架上,吊入染缸,盖上 封闭盖,开动循环泵,染 液可正、反方向循环,按 升温工艺控制升温速度及 染色时间,染毕吊出筒子 纱架,送入筒子纱烘干机 中烘干。
一、绞纱染色机
3.液流式染色机
染物不动,用旋浆或泵 使染液循环流经染物 结构简单,浴比较大, 可密闭,容量大, 质量好 多用于绞纱。
一、绞纱染色机
4.高温高压染纱机
高温高压绞纱染色机多 以密封操作,升温和染 色时间均可自动控制, 浴比较小,
多用于涤纶及其混纺纱 的染色,也可用于其他 纤维的染色,适应性较 好,在纱线染色中日趋 重要,但Байду номын сангаас于不溶性偶 氮染料时则有困难。
三、经轴染纱机

微生物常用染色法-PPT

微生物常用染色法-PPT
微生物常用染色法
1
细菌染色的一般程序
涂片(干燥)---固定---染色---脱色---复染
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涂片制备
血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液体培养物,直接 在载玻上作薄涂片. 固体培养基上的菌落或菌 苔的制片,用接种环取1 环9g/L氯化钠溶液置载 玻片中央.再用无菌接种环取少量的培养物在 氯化钠溶液中磨匀,涂成人1CM*1CM大小的涂 面.置室温下自然干燥或火慢慢烘干.
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涂片见G+球菌,呈葡萄状排列
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涂片见G+球菌,呈链状排列
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染色原理:
最广泛接受观点认为与细菌细胞壁结构及化学 组成有关. G+菌细菌壁结构致密,肽聚糖层厚, 脂质含量少,形成结晶紫_碘复合物.脱 色过程 中,虽然溶解细菌壁脂质成分形成小孔.脱水作 用使细胞壁收缩又 构成屏障,阻止结晶紫—碘 复合物被乙醇溶出,细菌保持紫色.G-菌细菌壁 疏松,肽聚糖层较薄,脂质含量高,乙醇溶解脂质, 经复染细菌呈红色.
– 复染色法 用两种或以上的不同颜色的染料进行 染色,可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成 不同颜色
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大家有疑问的,可以询问和交流
可以互相讨论下,但要小声点
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革兰染色
– 细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液1min,清水冲去染液. – 加碘液媒染1min,水洗,甩干. – 用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30S,至无紫色洗落为止,水洗,
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染色原理
抗酸性染色细菌与细胞壁成分有关.分枝杆菌 细胞壁含脂质较多,其中主要成分是分枝菌酸. 决定抗酸性染色反应,用乙醚脱去分 分枝菌酸,则呈非抗酸染色性.
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剂.也可用加热法促进着色.
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脱色
使已着色的被染物脱去颜色.常用乙醇,丙酮等 作为脱色剂.脱色剂可以查出细菌与染料结合 的稳定程度,作为鉴别染色用.

《细菌的革兰染色法》课件

《细菌的革兰染色法》课件
《细菌的革兰染色法》 PPT课件
通过本课件,我们将深入探索细菌的革兰染色法,包括该方法的概述、原理、 步骤和结果解读,以及其在医学和生物学领域的重要性和贡献。
革兰染色法的定义
革兰染色法是一种常用的细菌染色技术,用于将细菌分为革兰阳性菌和革兰 阴性菌两类,从而帮助确定细菌的形态特征和性质。
革兰染色法的历史和意义
革兰染色法的局限性和改进
适用性
革兰染色法对不同种类细菌的 适用性有限,对一些特殊菌株 无法发挥作用。
革兰阳性菌的染色
某些革兰阳性菌可能会出现未 染色或染色不明显的情况,增 加了结果解读的难度。
其他染色法和检测方 法
为了克服革兰染色法的局限性, 科学家们开发了其他染色法和 检测方法。
结语
重要性
革兰染色法作为一种常用技术, 对细菌学和医学领域做出了重要 贡献。
发展趋势和前景
对医学和生物学的贡献
随着科技的进步,革兰染色法将 继续发展并与其他检测方法结合, 提高细菌诊断的准确性和效率。
革兰染色法的研究和应用对细菌 病原体的诊断和治疗起到了至关 重要的作用。
3 环境监测
革兰染色法可用于监测水 和土壤中的细菌污染。
革兰染色的原理
革兰染色根据细菌细胞壁的结构差异进行分类,通过染色步骤的执行可区分出革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰染色法的步骤
1
1. 用菌技术准备样品
收集细菌样品并进行培养和纯化。
2
2. 固定样品在载玻片上
将培养物涂抹在载玻片上,形成薄的细菌涂片。
历史
革兰染色法由丹麦细菌学家克里斯蒂安·格拉姆于1884年发现并提出。
意义
革兰染色法的应用广泛,对细菌分类和临床诊断起着重要作用。
贡献

常用染色设备及染色方法培训讲义(PPT 33页)

常用染色设备及染色方法培训讲义(PPT 33页)
放在圆筒形机体的中央
• 染液由泵自内向外或自外向内循环 • 立式和卧式 • 高温染纱机 • 染后经轴纱可直接或再经过一定处理后用
于织造
• 比绞纱染色的工序要简化得多
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13
• 织物染色机分浸染和连续轧染 • 浸染机大多适用针织物、毛织物、丝绸织物等 • 连续轧染设备适用于棉、麻及其涤/棉、涤/麻等
常用染色设备及染色方法
概述
染色机械和设备是进行染色的必要手 段。他们对于染色时染料的上染速度、均 染性、染料的利用率、染色操作、劳动强 度、生产效率、能耗和染色成本等都有很 大的影响。染色机的品种、型号很多,没 有确定的分类法,但可以根据其运转操作 是否连续,染物的形态。染色温度、压力, 染液及染物相对运动的情况和使用的染色 方法等加以分类。下面是以染物形态分类 叙述的染色机。
• 主要用于合成纤维经编,纬
编织物及弹性织物等染色
• 可作高温高压染色,也可作
常温常压染色
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4、高温高压喷射染色机
• 高温高压喷射染色机的种类很多,
按外形不同可分为U字形立式喷染机 和C字形轮胎式喷染机等
• 常附有程控装置,可按预定工艺控
制时间、升降温等
• 喷射染色机与溢流染色机的不同点
是在溢流染色机中织物的上升是靠 主动导辊的带动,而在喷射染色机 中,织物的上升是由喷口喷射染液 带动的,因而织物的张力更小,各 部分所受的力更为均匀,染物手感 比较柔软。
物的两边温度与中间温度不
同,容易造成边中色差,很
少采用了
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(二)平幅染色机
4、连续轧染机
• 连续轧染机适用于大批量
的染色加工,劳动生产率 高,棉机织物及涤棉混纺 织物大都采用连续轧染工 艺。

革兰氏染色课件PPT

革兰氏染色课件PPT

复染
复染:将脱色后的涂片用复染液进行复染处理,以便更好地观察菌体或组织的形态和结构。
复染时应注意控制复染时间,避免过长或过短,以免影响染色效果。
冲洗和干燥
冲洗
将染色和脱色处理后的涂片用清 水冲洗干净,以便观察菌体或组 织的染色效果。
干燥
将冲洗干净的涂片放在干净的纸 巾上自然干燥,以便后续观察。
Part
固定时应注意控制火焰温度,避免过高或过低,以免影响 染色效果。
染色
染色:将涂片浸入革兰氏染色液中, 染色一定时间后取出晾干。
染色时应注意控制染色时间,避免过 长或过短,以免影响染色效果。
脱色
脱色:将染色后的涂片用脱色液进行脱色处理,以去除菌体或组织表面的色素。
脱色时应注意控制脱色时间,避免过长或过短,以免影响染色效果。
复染与初次染色要匹配
复染的颜色要与初次染色相匹配,以 便更好地观察染色效果。
其他注意事项
染色液要新鲜
染色液使用前要确保新鲜,过期 或变质的染色液会影响染色效果

避免交叉污染
在染色过程中要避免不同染色液之 间的交叉污染,以免影响染色结果 。
注意安全
染色过程中要注意安全,避免染色 液溅到皮肤或眼睛上,如不慎溅到 应立即用大量清水冲洗并及时就医 。
革兰氏染色还可以用于研究细菌的生 物学特性和分类学研究,有助于深入 了解细菌的生态学和进化关系。
Part
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片:将待染色的菌体或组织薄而均匀地涂在洁净的玻片上,然后晾干或烘干, 以便后续染色。
涂片时应注意避免涂层过厚,以免影响染色效果。
固定
固定:将涂片在火焰上快速通过两次,使菌体或组织固定 在玻片上,以便后续染色。

微生物革兰氏染色法和芽孢染色法ppt课件

微生物革兰氏染色法和芽孢染色法ppt课件
注:乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节,脱色不 足,阴性菌被染成阳性菌;脱色过度,阳性菌被染成 阴性菌
精品
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实验结果
阳性菌(蓝紫色) 阴性菌(红色)
精品
6
细菌芽孢染色法
实验目的
学习并掌握芽孢染色方法;初步了解芽孢杆 菌的形态特征。
实验原理
芽孢:某些细菌在一定的环境条件下,能在 菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体,是细菌的 休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。
2
革兰氏染色原理
第一步:初染:结晶紫使菌体着上蓝紫色; 第二步:媒染:碘和结晶紫形成大分子复 合物,能被细胞壁阻留在细胞内;第三 步:酒精脱色:细胞壁成分和构造不同, 出现不同的反应——G+菌:细胞不能被 酒精脱色,仍呈紫蓝色;G-菌:酒精将 细胞脱色,细胞无色;第四步:番红复染, G-菌呈红色, G+菌呈紫蓝色。
精品
9
细菌芽孢染色法
实验步骤
1)改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 制备菌悬液 孔雀绿染液(2滴)水浴加热染色15-20 min 取1小滴,涂片,固定 水洗 番红染液复染23min,倾去染液,水洗 镜检 2)Schaeffer-Fulton氏染色法 涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色5min 水洗 番红染液复染2min 水洗 镜检
实验二
革兰氏染色法和芽孢染色法
精品
1
革兰氏染色法
实验目的
学习并掌握革兰氏染色方法;了解革兰氏染 色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
实验原理
革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法,由 丹麦病理学家Hans Christian Gram 于1884年 创立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
精品

细菌革兰氏染色PPT课件

细菌革兰氏染色PPT课件
细菌革兰氏染色ppt课件
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用,帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一,通过对细菌的染色, 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类,对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合,实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术,用于快速识别细菌种类,对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域,革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色,分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行,避免 染色过度或不足,同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理,以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量,避 免脱色过度或不足,影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异,通过结 晶紫初染和碘液媒染后,由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同,酒精脱色时,细胞壁对染料的吸 附能力不同,从而导致被脱色的程度 不同,最终影响了复染后细菌的着色。

《细菌染色技术》课件

《细菌染色技术》课件
常用的脱色液有乙醇、丙酮等,脱色时间需要根据染色液和染色方法而定。
复染的目的是使染色后的细菌更加清晰可见,常用的复染液有稀释复红、稀释结晶 紫等。
干燥与镜检
干燥与镜检是细菌染色技术的最 后步骤,需要将染色完成的载玻 片干燥后进行显微镜检查,以便
观察染色效果和细菌形态。
干燥过程中需要注意避免过度加 热或干燥,以免影响染色效果。
01
02
03
04
简单染色法
利用单一染料对细菌进行染色 。
复染色法
利用两种或多种染料对细菌进 行染色,以便区分不同的细胞
结构。
荧光染色法
利用荧光染料对细菌进行染色 ,通过荧光显微镜观察。
特殊染色法
针对某些特殊性质或结构的细 菌,采用特殊的染色方法。
染色过程中的物理和化学变化
物理变化
染色过程中染料分子与细菌细胞 之间的相互作用,如吸附、渗透 等。
勤洗手
操作后应立即用肥皂和水彻底 清洗双手,确保个人卫生。
废弃物处理
使用过的培养物、染料和其他 废弃物应按照实验室规定进行
安全处理。
染色技术的优缺点和未来发展方向
优点
细菌染色技术是一种简单、快速、有效的细菌检测方法,能够直观地观察细菌的形态和结 构,有助于初步鉴定细菌种类。
缺点
染色技术需要人工操作,容易受到操作者主观因素的影响,且无法对细菌进行深入的分子 生物学鉴定。
《细菌染色技术》 ppt课件
REPORTING
目录
• 引言 • 细菌染色技术的基本原理 • 细菌染色技术的操作步骤 • 细菌染色技术的结果分析 • 细菌染色技术的注意事项和问题解决
PART 01
引言
REPORTING

最新常规石蜡制片HE染色技术PPT课件

最新常规石蜡制片HE染色技术PPT课件

五、浸蜡
(一)浸蜡目的
浸蜡是将透明过的组织块在熔化的石 蜡中浸渍的过程。目的是用石蜡代替组织 块中的二甲苯,在随后温度下降中,使较 软的组织块变成有一定硬度的组织蜡块, 以便切片机切片
(二)浸蜡的步骤
第1杯熔蜡(软蜡)(熔点54℃以下) 1小时
第2杯熔蜡(硬蜡)(58~60℃)
1小时
第3杯熔蜡(硬蜡)(58~60℃)
2.切片刀与磨刀 石蜡切片常用的切片刀为平楔型切 片刀,也有一次性切片刀
非一次性使用的切片刀在切片前需 要研磨,以保持其锋利;研磨Байду номын сангаас可分为 手工研磨刀和机械研磨刀(磨刀机)两 种
(二)石蜡切片过程
1.修块 2.蜡块和切片刀固定 3.调整蜡块切面和切片刀角度(10°以内) 4. 调整刀台与标本台距离 5. 修整蜡块切面,暴露完整组织切面 6. 调整切片厚度调节器(厚度为6~8μm) 7. 正式切片 8.切片展平 9.贴片和烘片
四、透明
(一)透明意义及透明剂
组织脱水后,内部仅含脱水剂,但大多数脱 水剂不能与石蜡相溶,石蜡仍不能浸入组织内进 行包埋和切片。为此,需要一种既能溶于脱水剂 又能溶于包埋剂(石蜡)的溶剂,以便逐步将脱 水剂置换成包埋剂。这一过程往往使组织呈半透 明状,故称透明
二甲苯为石蜡包埋法中最常用的透明剂;它 透明能力强,但易使组织收缩、变脆,故组织块 的透明时间不宜太长,小组织块以30分钟为宜, 较大组织块适当延长但不超过2小时
5ml
0.2 mol/L PB(pH 7.4)
~100ml
第二节 固定后处理及切片
一、组织修整
固定结束后,将受挤压或不需要的 部分组织修切或整形,同时选择好包埋 面,称组织修整。修整可在冲洗前、也 可放在冲洗后
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4
2020/10/28
瑞氏染色法
❖ 二、细胞着色原理: 既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用。各种细胞
成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样。如血 红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合 ,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白、淋巴细胞、 嗜碱性粒细胞胞质为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合, 染紫蓝色或蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态 与伊红和美蓝均可结合,染淡紫红色,称为嗜中性物质、 原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质,染 成较浓厚的蓝色;中幼红细胞既含酸性物质,又含碱性物 质,染成红蓝色或灰红色;完全成熟红细胞,酸性物质彻 底消失后,染成粉红色。
6、染色过深可用水冲洗或浸泡水中一定时间,也可用 甲醇脱色。
7、染色偏酸或偏碱时,均应更换缓冲液再重染。 8、瑞氏染液的质量好坏除了用血涂片实际染色效果评 价外,还可采用吸光度比值RA评价。瑞氏染液的成熟指数 以RA(A650nm/A525nm)=1.3±0.1为宜。
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中性杆状核粒细胞 中性分叶核粒细胞
嗜酸性粒细胞
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嗜碱性粒细胞
单核细胞
淋巴细胞
网织红细胞染色方法
❖ 一、概述: 根据网织红细胞的形态特征和成熟程度将其分为五型:
花冠型、丝球型、网型、破网型、点粒型。网织红细胞经 体外活体染色后,显微镜下凡含有两个以上的深染颗粒或 具有线网状结构的无核红细胞,即为网织红细胞。WHO 推荐使用新亚甲蓝染色液,因其对网织红细胞染色力强且 稳定而被首推。
2、染色的时间与染液浓度、染色时温度成反比;而与细 胞数量成正比。
3、冲洗时不能先倒掉染液,应用流水冲去,以防染料沉 淀在血膜上。
4、如血膜上有染料颗粒沉积,可加少许甲醇溶解,但需 立即用水冲掉甲醇,以免脱色。
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瑞氏染色法
5、染色过淡,可以复染。复染时应先加缓冲液,创造 良好的染色环境,而后加染液,或加染液与缓冲液的混合 液,不可先加染液。
数/1000; 网织红细胞绝对数(个/L)=网织红细胞百分数*红
网织红细胞染色方法
❖ 三、注意事项: 1、活体染色时间不能过短。室温低时,放37℃恒温箱。 2、最好制两张片,每张计数1000个红细胞,避免分布不 均引起的误差,涂片要薄而均匀,不使红细胞重叠。 3、为计数方便,可于目镜中放一中间有孔硬纸片或用 Miller窥盘,缩小视野便于计数。 4、用瑞氏或瑞氏-吉姆萨染液复染后,可使网织红细胞计 数结果减少。 5、染液与血液比约为1:1,严重贫血时可适量增加血液 的比例。
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网织红细胞染色方法
❖ 二、操作: 1、取小试管一支,加入新亚甲蓝染液2滴。 2、加入末梢血或EDTA抗凝静脉血2滴于上述试管中,
混匀。 3、室温下放置15min后,取1滴制成薄片。 4、油镜下至少计数1000个红细胞中网织红细胞数量。 5、计算: 网织红细胞百分数=计数1000个红细胞中的网织红细胞
常用的染色方法
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主要内容
❖瑞氏染色法 ❖网织红细胞染色方法 ❖革兰染色法 ❖抗酸染色法
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精品资料
瑞氏染色法
❖ 一、概述: 瑞氏染色法是目前最常用的血涂片染色方法。其染料
由酸性伊红和碱性美蓝组成,美蓝和伊红的水溶液混合后 ,产生一种不溶于水的伊红化美蓝中性沉淀(ME),即 瑞氏染料。将适量的ME溶解于甲醇中,即成为瑞氏染液 。
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瑞氏染色法
❖ 三、操作: 1. 制作血液或脱落细胞涂片,自然干燥固定; 2. 用蜡笔在血膜两头划线,滴加瑞氏染液3~5滴以覆盖 整个血膜,固定1~2分钟;滴加等量或稍多的缓冲液(未 加缓冲液涂片上有染料颗粒残留),吸球吹匀或摇动玻片 染色5~10分钟; 3. 用流动水从玻片的一侧冲去染液,自然干燥(或滤纸吸 干); 4. 镜检。
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Miller窥盘法
❖ 由于目测计数误差较大,用Miller 窥盘法可减低标准误,特别是 RBC较少时.
❖ 盘:厚1mm,直径19mm,圆玻片上 划出格子:大方格内Ret/(小方格 内RBCx9)X100%
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网织红细胞
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革兰染色法
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瑞氏染色法
❖ 四、注意事项: 1、PH对细胞染色有影响。由于细胞中各种蛋白质均为
两性电解质,所带电荷随溶液PH值而定。在酸性环境中正 电荷增多,已与酸性伊红结合,染色偏红;相反,则易与 美蓝结合,染色偏蓝。因此,应使用清洁中性的载玻片, 稀释染液必须用PH6.8缓冲液。冲洗玻片必须用流水。
2、干燥:制备的涂片应自然干燥。 3、固定:多采用加热固定,目的在于保持细胞原有的 形态和结构,杀死细菌,使染料易于着色,并是细菌附着 于玻片上不易脱落。自然冷却后在染色。 4、革兰氏染色成败的关键是脱色时间,如脱色过度, 革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌;如 脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性 菌。因此必须严格把握脱色时间。
❖ 一、基本原理: 革兰染色是细菌最基本的染色法,可用于标本涂片或
菌落涂片。细菌的等电点较低,约在PH2-5,一般情况下 细菌带负电荷,易于被带正电荷的碱性染料(结晶紫,碱 性复红)着色。染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和 革兰阴性(红色)两类。
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革兰染色法
❖ 二、方法: 涂片→干燥→固定→染色过程如下: 1、涂片经火焰固定后,加结晶紫液染1min,清水冲去
染液,倒去玻片上水。 2、加碘液染1min,水洗。 3、加脱色液(95%乙醇),不使摇动10-30s,至无紫
色脱落为止,水洗。 4、加复染液(碱性复红液),染30s,水洗。 5、干后镜检。
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革兰染色法
❖ 三、注意事项: 1、涂片:菌液涂片时,用接种环蘸取菌液直接在玻片
上涂布;若是菌落,先取生理盐水1滴,置于玻片上,用 接种针挑取菌落,在盐水中涂布。
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