大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
酶联免疫分析法
②用已知抗体检测未知抗原； ③定性或定量检测体内多种大分子物质； ④用已知抗体检测某些药物、激素等多种半抗原物质。
第一节 酶联免疫分析概述
二、酶标识免疫分析法及常用标识酶 1、免疫分析法分类
第一节 酶联免疫分析概述
白都是抗体。 • 例如无免疫活性旳免疫球蛋白（如骨髓瘤蛋白）就不
是抗体，尽管其构造与抗体相同。 • 抗体主要存在于血清内，但在其他体液及外分泌液中
也有存在。 • 抗原抗体分子之间存在着构造互补性和亲和性，使得
抗原与相应抗体之间极易发生结合反应，这种反应具 有高特异性（即专一性）和可逆性。
第一节 酶联免疫分析概述
• Gal催化β-D-半乳糖苷水解反应旳最适pH为7.5，转 化效率很高，且比HRP易于标识，背景值低，稳定性 好。
• Gal比活力应不少于30U/mg，5℃能保存1～2年。
第二节 酶联免疫吸附分析法
一、光度酶联免疫分析 1 、 酶 联 免 疫 吸 附 分 析 （ enzyme-linked
immunosorbent assay，ELISA）原理 ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面； ②抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或抗体； ③在测定时，使受检标本和酶标抗原或抗体按不同旳环
值也略高。 • ELISA载体旳形式有小试管、小珠和微量反应板。
第二节 酶联免疫吸附分析法
3、固相载体旳包被与封闭 （1）包被（coating）指将抗原或抗体连接到固相载体
上旳过程。 • 以聚苯乙烯微量反应板为例，一般先将抗原或抗体溶
于pH 9.6旳碳酸盐缓冲液（或pH 7.2旳磷酸盐缓冲 液，pH 7～8旳Tris-HCl缓冲液）中，加满反应孔， 置4℃过夜，洗涤即可。 • 包被浓度随载体和包被物旳性质可有很大旳变化，每 批材料需经过试验与酶结合物旳浓度协调选定。 • 一般蛋白质旳包被浓度为0.1～20µg/ml。
兽药残留检测中酶联免疫试剂盒的选择原则与使用注意事项
比。该 显色 反应 可通 过 酶标 仪 进行 测 定 ，将酶 量 留进行广泛 、
量 检 测十 分必要 。
２
用 于 标 记抗 体 的酶 具 有较 高 的活 性 和敏 感
Ｓ Ａ） 是 酶 免 疫 性 、室温 下 稳 定 、产物 易 于显 色 、能够 商 品化 测 定 技 术 中 应 生产 等特 性 。 目前应 用较 多的 酶有 辣根 过氧 化
文 的 杂 质¨ ｌ 。兽 药 吸 附在 固相 载 体上 的抗 原 或抗 体 发生 特异 性 结 童
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残 留 会 损 害 人 合 。加 入底 物溶 液 后 ，可在 酶 的作 用 下使 其所 体 健 康 ， 严 重 含 的供 氢 体 由无 色 的 还 原 型 变 成 有 色 的 氧 化 者 可 引 起 中 毒 型 ， 出现 颜 色 反应 。 因此 ，可 通过 底物 的颜色
ｃ 。 越 小 ，试 剂 盒 越 灵敏 。② 结 合 ，使 固相 上 结合 的酶标 抗 原量 减少 ，最后 灵 敏度 的指 标 ，Ｉ
结合 于 固相 的酶 标抗 原与 待测 抗 原含量 呈 负相 定 性方 法 ：工作 浓度 范 围通 过 阴性 、临界 值浓 关 ，待 测抗原越 多 ，颜 色越 浅 。如 图 １ 。
【 收稿 日期】 ２ ０ １ ３ － ０ ４ — １ １
用 于 抗 原和 半抗 原 的定 量测 定 ，也 可用 于测 定 抗 体 。 以测 定抗 原为 例 ，主 要过 程 是将 异性 抗 体 吸 附于 固相 载 体 ；加入 待 测抗 原和 一 定量 的 酶标 已知 抗 原 ，二者 竞 争与 固相 抗 体结 合 ；经
大鼠p物质(SP)酶联免疫分析(精)
大鼠p物质(SP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E08358r检测范围：1.56 pg/ml - 100 pg/ml最低检测限：0.39 pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠SP，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中SP含量。
说明1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗SP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗SP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的SP呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）。
7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）。
8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶mRNA在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠中的表达及意义
两组血清 Ｔ Ｌ、ＤＢＩ ＢＩ Ｌ、ＡＬ Ｔ水平均 分别低 于 Ｂ、ｃ 两组 ，肝脏形 态改变也明显趋 于正常 ，肝 组织 Ｇ一
６ Ｐ Ｅ ＣＫ的 ｍＲＮＡ表 达 亦均低 于 Ｂ、ｃ两组 ，且 Ｄ组在 血清 、肝 组织 ｍＲＮＡ表达 及光镜 下肝 细 一 、Ｐ Ｐ
胞 损 伤 方 面 与 Ｅ组 比较 均 降低 。 结 论 梗 阻性 黄疸 模 型形 成 后 ， 大 鼠肝 脏 分 泌 的胆 汁排 泄不 畅 形 成 淤 积 。
Ｍｅｈ ｄ ｈｒｙｈ ａｔｙｍａｅＷ ｉｔｒ ａｓｗｅｅｄｖｄ ｄ ｉｔ ｖ ｒｕ ｓａ ａ ｄ ｍ： ｒｕ （ｈ ｍ ｒｕ ）ｇｏ ｐＢ ｔ ｏ ｓ Ｔ ｉ ｅ ｌ ｌ ｓａ ｔ ｒ ｉｉｅ ｎｏｆ ｅｇｏ ｐ ｔｒｎ ｏ ｇｏ ｐＡ ｓ ａ ｇｏ ｐ ， ｒｕ ｔ ｈ ｒ ｉ
ｏ ｔ ｄ ｌ ｆ ｂ ｔｕ ｔ ｎ．ｕ ｄｃ ｄｒｃ ｎ ａｉａｉｎｏ ｉａｙｔ ｃ ＷＥ Ｎ ａ ． ｎｒ ｅｓｏ ｓ ｃｉ 、 ｎ ｉｅａ ａ ｎ ｌ ｔ ｆ ｌ ｒ ａ ｔ ａ ｍｏ ｏ ｒ ｏ ａ ｎ ｅ ｚ ｏ ｂｉ ｒ Ｎ ｕ ｎ ＷＵ ｈｔｍｉｇ Ｓａ ｒ ｎ
Ｃ ＨＥＮ Ｃ ｅ ， ｔ １Ｄｅ ａ ｔ ｎ ｏ Ｈｅ ａｏ ｉ ａｙＳ ｒ ｅｙ Ｒｅ ｍｉ ｈ ｎ ｅ ａ． ｐ ｚ ｍｅ ｔ Ｉ ｐ ｔｂｌ ｔ ｕｇ ｒ ， ｎ ｎＨｏ ｐ ｔ ｏ ｈ ｎＵ ｉ ｅｓｔ ｉ ｓ ｉ ｌ ｌＷａ ａ ｎ ｖｒｉ ，Ｗｕ ａ ３ ０ ０ Ｃ ｕ ａ ａ ｖ ｈ ｎ４ ０ ６ ， ｌ ｎ
第２ ４卷
肝 胆 胰 外 科 杂 志
第 ４期
・
实验 研 究 ・
葡萄糖 ～ ６磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 ｍ Ｎ ＲＡ
在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠中的表达及意义
类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体和葡萄糖-6-磷酸酶联合检测在类风湿关节炎中的临床意义
类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体和葡萄糖-6-磷酸酶联合检测在类风湿关节炎中的临床意义胡玲【摘要】目的探讨及评价类风湿因子(RF)联合抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和G-6-磷酸酶(GPI)检测在自身类风湿性关节炎(RA)诊断中的意义.方法选择我院2009～2010年收治的RA患者80例(A组),非RA自身免疫病患者60例(B组),健康体检者52例(C组),取空腹血制备血清,采用速率散射免疫比浊法检测RF,以酶联免疫固相吸附试验法(ELISA)检测抗CCP抗体,采用双抗体夹心酶联免疫固相吸附试验法检测血清GPI水平,并分析RF、抗CCP抗体和GPI在诊断RA中的价值.结果 RA 患者中RF、抗CCP抗体、GPI的敏感性分别为63.75%,70.00%和83.75%,以GPI最高;三者特异性分别为66.25%、90.00%和91.25%;三项指标联合检测敏感性为96.25%,显著高于任意单项指标(P < 0.05),且阳性符合率为91.25%.结论抗CCP抗体和GPI可作为RA诊断的实验室有效指标,临床中与RF联合应用可以起到增加敏感性,提高阳性符合率的互补作用.%Objective To explore and evaluate the clinical value of RF combined with CCP and GPI in diagnosis of rheumatoid arthritis. Methods 80 patients with rheumatoid arthritis, 60 patients with other autoimmune diseases and 52 normal people were selected and divided into A, B and C group, blood serums were prepared and RF, anti-CCP and GPI were detected by immunization rate nephelometry, enzyme-linked immunosorbent assay and double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent. Results The sensitivity of RF, anti-CCP and GPI in RA patients were 63.75%, 70.00% and 83.75% respectively, the GPI was higher than the other index, and the specificity ofthe three index were 66.25%, 90.00% and 91.25% respectively. The sensitivity in combination was 96.25%, which was higher than any single index (P < 0.05), and the positive coincidence rate was 91.25%. Conclusion Anti-CCP and GPI are effective indicators in diagnosis of RA, the two index combination with RF have the effects on improvement of the sensitivity and the positive coincidence rate.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2012(009)012【总页数】2页(P105-106)【关键词】类风湿因子;抗环瓜氨酸肽抗体;葡萄糖-6-磷酸酶;类风湿性关节炎【作者】胡玲【作者单位】南京医科大学附属淮安第一医院,江苏淮安,223000【正文语种】中文【中图分类】R593.22类风湿关节炎（RA）是一种原因不明性、多关节性、慢性炎症性自身免疫疾病，主要累及周围关节，我国发病率为0.32%～0.38%，且随着年龄的增长而逐渐增加[1]。
酶联免疫试剂盒elisa原理(一)
酶联免疫试剂盒elisa原理(一)酶联免疫试剂盒（ELISA）原理解析什么是酶联免疫试剂盒（ELISA）？•ELISA是一种常用于生物医学研究和临床诊断的试验方法。
•它基于酶标记的免疫技术原理，用于检测样品中特定蛋白质、抗体或其他生物分子。
ELISA的工作原理ELISA试剂盒通常由以下几个关键组分组成：1.固相酶标板：通常为96孔板，内壁涂有特定的抗原或抗体。
2.标准品：已知浓度和活性的特定蛋白质，用于制作标准曲线进行定量分析。
3.样品：待测蛋白质或抗体的来源。
4.酶标记的二抗：特异性与待检测的目标蛋白质或抗体结合的二抗（抗体）。
5.底物：酶标记的二抗与底物反应产生可测量的信号。
ELISA的基本步骤ELISA通常包括以下几个基本步骤：1.准备：准备实验所需材料，包括试剂盒、样品和标准品等。
2.涂覆：将待检测抗原或抗体溶液加入固相酶标板孔中，并在静置条件下使其吸附于酶标板孔内壁。
3.阻断：加入一种阻断剂防止未被固定的表面结合位点与样品中非特异性蛋白质结合。
4.孵育：将样品、标准品和质控样品加入不同孔中，与固定在孔内壁的抗原或抗体发生特异性结合反应，并在适当的条件下进行孵育。
5.洗涤：用缓冲液洗涤孔中未结合的样品，以去除非特异性结合物。
6.检测：加入酶标记的二抗，与已结合的目标蛋白质或抗体发生结合反应。
7.洗涤：再次用缓冲液洗涤除未结合的酶标记的二抗。
8.底物作用：加入底物，使酶标记的二抗与底物发生化学反应，生成可测量信号。
9.停止反应：加入停止液停止底物的反应，防止信号进一步发展。
10.分析：使用光谱仪等设备测量反应产物的吸光度，根据标准曲线定量分析待测样品中目标蛋白质或抗体的浓度。
ELISA的优势与应用•ELISA具有高灵敏度和特异性，可用于检测多种生物分子，包括蛋白质、抗体、荷尔蒙等。
•它被广泛应用于临床诊断、药物研发、食品安全监测和环境检测等领域。
•ELISA可以定量检测目标生物分子，因此被广泛用于疾病诊断和监测治疗效果等临床应用。
医学检验动物实验报告(3篇)
第1篇一、实验名称医学检验动物实验二、实验目的1. 掌握动物实验的基本操作技能。
2. 了解医学检验的基本原理和方法。
3. 通过实验，提高对医学检验相关知识的理解和应用能力。
三、实验原理医学检验是通过检测生物体中的生理、生化、遗传、免疫等指标，以判断机体是否存在疾病或潜在疾病的一种方法。
本实验以动物为模型，通过实验操作，了解医学检验的基本原理和方法。
四、实验材料1. 实验动物：昆明小鼠4只（2雌2雄）。
2. 仪器：灌胃器2个、注射器4个、酒精、棉球、生理盐水、小鼠固定器1个、大鼠固定器1个。
3. 试剂：生理盐水、抗生素、实验药物、实验指示剂等。
五、实验步骤1. 抓取和固定1.1 抓取：左手抓小鼠的尾根部。
1.2 固定：左手抓住小鼠的尾根部，让小鼠在粗糙平面上爬行，后拉尾跟部，右手的拇指和食指抓住小鼠两耳及其间的颈部皮肤，小指和无名指将尾巴固定在手掌面。
同样操作将大鼠抓取和固定。
2. 性别鉴定2.1 抓取和固定小鼠。
2.2 观察肛门与生殖器间的距离和二者之间的毛发。
雄性：距离长，毛发密；雌性：距离短，毛发稀疏。
同样鉴别方法，重复鉴别大鼠。
3. 给药3.1 灌胃法：按正确方法用左手抓取和固定小鼠，使腹部朝上，颈部拉直。
固定后，右手持接灌胃针的注射器吸取药液，将针头从口角插入口腔内，然后用灌胃针头压其头部，使口腔与食管成一直线，再将灌胃针头沿上腭壁轻轻进入，转动针头刺激动物吞咽，然后沿咽后壁慢慢插入食道。
当感觉有落空感时表明灌胃针可能进入胃内，向外抽动注射器活塞，感觉有负压，此时可将药液灌入。
用大鼠重复同样操作。
3.2 注射给药：皮下注射，用左手抓取和固定小鼠，右手持注射器吸取药液，从皮下注射入小鼠体内。
4. 实验操作4.1 生理指标检测：测量小鼠的体温、心率、呼吸频率等生理指标。
4.2 生化指标检测：采集小鼠血液，检测血糖、血脂、肝功能等生化指标。
4.3 遗传指标检测：提取小鼠DNA，进行基因检测。
4.4 免疫指标检测：检测小鼠的免疫细胞数量、免疫功能等指标。
骨碱性磷酸酶检测试剂盒(酶联免疫法)说明书
生物素、叠氮化钠（0.09%）的牛/马蛋白基质。每瓶 14mL。 2. 微孔板：板孔内包被链霉亲和素，包装于带干
燥剂的铝箔袋中。12×8 孔 3. 标准品 0/稀释液（0）：不含 BAP 的牛蛋白基质，
含叠氮化钠（0.09%）。每瓶 14mL。 4. 标准品（1-5）：含 BAP、叠氮化钠（0.09%）的
变形性骨炎是一种常见的骨骼紊乱，表现为正常骨 细胞的局灶性增生。变形性骨炎的发病率比曾一度认为 发病人群在3%-4%的中年患者和10%-15%的老年人要 高出许多。这种疾病不影响年轻人。绝大部分变形性骨 炎患者无临床症状，容易漏诊，除非在一些不相关原因 的医疗检查时出现X摄片或血清碱性磷酸酶水平异常时 才发现的。这种症状的患者最常见的症状是疼痛和畸形。
骨碱性磷酸酶检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
【产品名称】 通用名称：骨碱性磷酸酶检测试剂盒 （酶联免疫法） 英文名称： OSTASE® BAP EIA
【包装规格】96 人份/ 盒 【预期用途】
骨碱性磷酸酶检测试剂盒（酶联免疫法）仅用于体 外诊断使用，用于定量检测人血清中骨特异性碱性磷酸 酶（BAP）。作为成骨细胞活性的指示剂，本试剂盒可作 为管理绝经后骨质疏松和变形性骨炎的辅助工具。
【检验原理】
本试剂盒是一种固相单克隆抗体酶联免疫测定。样
本中的 BAP 与含有生物素标记的 BAP 特异性单克隆抗 体的溶液进行反应。反应发生在包被了链霉亲和素的微
孔中（微孔固定于塑料板框中），形成固相/捕获抗体/BAP
复合物。微孔洗涤除去未结合的 BAP，再加入酶底物进行
孵育。终止反应后，在酶标仪 405nm 下读取吸光度。吸 光度值与待测样本中 BAP 浓度成正比。样本中 BAP 浓度 的计算基于 BAP 标准品及标准品 0/稀释液的同步检测。
酶联免疫反应常用底物
酶联免疫反应常用底物辣根过氧化物酶HRP底物辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP具有分子量小，标记方法简单，性质稳定等优点，是临床检验试剂中常用的酶。
该产品广泛用于各类生化检测项目及免疫类（ELISA）试剂盒。
中华试剂网辣根过氧化物酶的底物种类丰富，可满足不同的实验需求。
■ HRP的发色底物辣根过氧化物酶发色底物为过氧化物和供氢体（DH2，其真正底物是HLQ,但人们习惯把供氢体称为底物或统称供氢体底物。
在ELISA中常用的供氢体有以下几种：1、OPD是ELISA技术中应用较多的供氢体，酶作用后显黄色（最大吸收波长为492 nm）,其灵敏度高，测定方便。
2、TMB是近年来常用的一种供氢底物，经酶作用后显天蓝色，目测对比度鲜明，加酸终止酶反应后变黄色（最大吸收波长为450 nm），易比色定量测定。
3、D B A供氢底物，其反应产物为不能溶解的棕色吩嗪衍生物，可用不同光镜观察。
此种多聚物能被还原和++ H :O a5 g 10 g1 g1 g ■ HRP 的发光底物鲁米诺（3-氨基邻苯二甲酰肼，Luminol ）或其衍生物如异鲁米诺（4-氨基邻苯二甲酰肼，Isoluminol ），是一类重要的发光试剂。
用 HRP 标记抗体，进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光底物，在 HRP 和起动发光试剂（NaOH+HO ）作用下，鲁米诺发光，发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。
反应过程如下图所示:纯度包装25 g英文名称 CAS 号 纯度 包装A5300 异鲁米诺Isoluminol 3682-14-298%产品编号中文名称英文名称CAS328061鲁米诺Luminol 521-31-3 98%分子式：CsHNQ 分子量：433.63 熔点：194-195 °C 储存条件：2-8 ° C产品编号 中文名称 洗涤渚除沪双抗体夹心复合物♦XE + V +取抗体夹心复合物増强剤書米诺鲁米诺发光抗怀包彼固相我体% ♦注靡W +HiO I 抗原 掠朦体唑-6-磺酸）铵 盐3-氨基-9-乙基咔唑3-Amino-9-ethylcarbazole, AEC红色、可 溶性132-32-15 g25 g4-氯-1萘酚Chloro-1-naphthol蓝色、可 溶性604-44-425 g探小贴士：氧化物、硫化物、氟化物及叠氮化物等可抑制 HRP 的活性，故勿用这类试剂作为防腐剂分子式：GH7NO分子量：177.16熔点:194-195 °C 储存条件：2-8 ° C■配套产品中文名称英文名称CAS号纯度包装4-碘苯酚4-Iodophenol 540-38-5 99%5 g 25 g 100 g四苯基硼酸钠Sodium tetraphenylborate 143-66-8 99.5%(ACS)25 g 100 g 500 g牛血清白蛋白Bovine serum albumin [ FractionV], BSA 9048-46-8 —5 g25 g100 g十二烷基硫酸钠Dodecyl sulfate sodium salt, SDS 151-21-3 99% 100 g 500 g脱氧胆酸钠Sodium deoxycholate 302-95-4 98%25 g 100 g 500 g苯甲基磺酰氟化物Phenylmethylsulfonyl fluoride, PMSF 329-98-6 99%25 g 100 g亮抑酶肽Leupeptin 103476-89-7 96.5% 10 mg 50 mg三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐Tris(hydroxymethyl)aminomethanehydrochloride, Tris-HCl1185-53-1 99%25 g100 g500 g吐温80 Polysorbate 80 9005-65-6 —250 mL1 L碱性磷酸酶(Alkaline phospharase, AP) 是一种能够在碱性情况下将对应底物去磷酸化的酶，广泛分布于人体的各脏器器官中，以肝脏、骨骼、小肠中存在的量最多。
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP))说明书活性
Stop Solution
3ml×1 bottle
6ml×1 bottle
2-8℃
wash solution
（20ml×20fold）
×1bottle
（20ml×30fold）
×1bottle
2-8℃
Specimen requirements
1.serum-coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-minat the speed of2000-3000 r.p.m. removesupernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
4.cell culture supernatant-detect secretory components,collect sue a sterile container,centrifugation 20-minat the speed of2000-3000 r.p.m. removesupernatant,detectthe composition of cells, Dilut cell suspension withPBS（PH7.2-7.4）,Cell concentration reached 1 million / ml,repeated freeze-thaw cycles,damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-minat the speed of2000-3000 r.p.m. removesupernatant,Ifprecipitation appeared,Centrifugal again.
糖尿病新型分子靶点葡萄糖-6-磷酸酶活性的检测及应用
异无统计学意义 （＞ ． ） ／０ ５， ９ ０ 没有呈现 出剂量依赖 ｌ变化。 结论 ： 生 利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测 定葡 萄糖一 一 酸酶活 ６磷
性 ， 目前值得推崇 的一个检测速度较快 、 是 结果较稳定 的方法。 此外 ， 栎精能够有效逆转高糖诱导的 Ｇ ６ Ｐ ｓ 一 一 ａｅ活性增
ｐ ｏ ｐ ａａｅｉ ｉｈ ｇｕ ｏ ｅｇ ｏ ｐｗ ｓｈｇ ｅ ａ ｈ ｔｉ ｏ ｔｏ ｒｕ ， ｈ ｉｅ ｅ ｃ ｅｗｅ ｎｔ ｅｅｔ ｏ ｈ ｓ ｈ ｔｓ ｎ ｈｇ ｌ ｃ ｓ ｒｕ ａ ｉｈ ｒｔ ｎ ｔａ ｎｃ ｎｒｌｇｏ ｐ ｔ ｅｄｆ ｒｎ ｅｂ ｔ ｅ ｓ ｗ ｈ ｆ ｈ
ＡＢ Ｔ ＣＴ Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｔｄ ｅ ｅｅｔｎ ｔｏ ｇｕｏｅ６ｐ ｏｐ ａ ｓ（－ －ａｅａｔ ｉ ｓ ｇ Ｓ ＲＡ ｊｃｉ ： ｏｓ ｙｈ ｔ ｉ ｈｄ ｆｌｃｓ－ －ｈｓｈｔ ｅＧ－ Ｐ ｓ）ｃｖｙ ｉ ｖ ｕ ｔ ｄ ｃ ｏ ｍｅ ｏ ａ ６ ｉｔｕ ｎ
ｔｅ ｇｕ ｏ ｅ ｄ ｈ ｄ ｏ ｅ ａｅ ｃ ｕ ｌｄ ｒ ａ ｔ ｎ ａ ｄ ｅ ｏ ｈ ｌ ｃ ｓ ｅ ｙ ｒ ｇ ｎ ｓ ｏ ｐ ｅ ｅ ｃ ｉ ｎ ｒ ｃ ｍｍｅ ｄ ｉ ａ ａ ｃ ｍｍｏ ｌ ｕ ｅ ｌｂ ｒ ｔｒ ｅ ｔ ｏ ｎ ｔ ｓ ｏ ｎ ｙ ｓ ｄ ａ ｏ ａ ｏ ｙ ｔ ｓ．
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加， 利用它对于 Ｇ ６ Ｐｓ活性的干预作用可能改善糖 尿患者 的高血糖状态 。 一一 ａ ｅ
迈瑞 VIDAS 甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）说明书
说明书【产品名称】通用名称：甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）英文名称：VIDAS T4【包装规格】60人份/盒【预期用途】该产品用于定量检测人血清或血浆（肝素锂抗凝）中的总四碘甲腺原氨酸（T4）。
该产品是一种在VIDAS®系列分析仪上使用的自动定量试剂，使用ELFA（酶联荧光分析）技术，定量检测人血清或血浆（肝素锂作为抗凝剂）中的总四碘甲腺原氨酸(T4)的酶免疫测定法。
甲状腺素或者四碘甲腺原氨酸(T4)是甲状腺分泌的激素，大部分（99.9%）与其载体蛋白相结合。
这些载体蛋白主要是TBG（甲状腺素结合球蛋白）。
少部分的游离甲状腺素被认为是这种激素的活性形式。
该产品有助于评价甲状腺的功能。
在甲状腺功能亢进的病人，甲状腺激素水平升高，而在甲状腺功能衰退的病人，甲状腺激素水平一般都会下降。
T4的检测依赖于其在载体蛋白中的浓度，因此有必要检测激素与载体蛋白的结合能力。
这种结合能力的检测还需要与其他甲状腺机能评估的检测相结合，如TSH和T3，同时还要包括患者的临床检查。
甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）有助于对甲状腺功能失调的诊断。
【检验原理】甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）采用将酶免疫竞争分析方法与最后荧光检测(ELFA)相结合的分析原理。
固相管（SPR®）在分析中除作为反应的固相表面，也作为移液装置。
反应试剂为即用型并事先加入到试剂条的孔中，再将孔密封。
所有分析步骤都由仪器自动进行。
反应物进出SPR数次。
首先，取样并加入到含有碱性磷酸酶标记的T4抗原（共扼物）的孔中。
样品中存在的抗原和标记的抗原竞争结合包被于SPR内表面的特异性抗T4抗体。
在最后检测步骤当中，底物（4-甲基伞形酮磷酸酯）循环进出SPR。
共扼物酶催化水解底物成荧光产物（4-甲基伞形酮），在450nm处测量其荧光强度。
荧光强度与样本中抗原的浓度成反比。
分析结束的时候，根据储存在存储器中的校准曲线，由VIDAS®分析仪自动计算结果，然后打印输出。
酶联免疫吸附试验(ELISA)
前两种方法主要用于测定抗体和大分 子抗原，适用于临床诊断上，而竞争法事 测定小分子抗原的方法，因而尤其适用于 食品分析。
ELIZA 方法图示
间接法
“Indirect” ELISA
The steps of "indirect" ELISA follows the mechanism below: 1. A buffered solution of the protein antigen to be tested for is added to each well of a microtiter plate, where it is given time to adhere to the plastic through charge interactions. 2. A solution of non-reacting protein, such as bovine serum albumin, or casein is added to block any plastic surface in the well that remains uncoated by the protein antigen. 3. Then the serum is added, which contains a mixture of the serum donor's antibodies, of unknown concentration, some of which may bind specifically to the test antigen that is coating the well. 4. Afterwards, a secondary antibody is added, which will bind any antibody produced by a member of the donor's species (for example, an antibody produced in a mouse that will bind any rabbit antibody). This secondary antibody often has an enzyme attached to it, which has no effect on the binding properties of the antibody. 5. A substrate for this enzyme is then added. Often, this substrate changes color upon reaction with the enzyme. The color change shows that secondary antibody has bound to primary antibody, which strongly implies that the donor has had an immune reaction to the test antigen. This can be helpful in a clinical setting, and in R&D. 6. The higher the concentration of the primary antibody that was present in the serum, the stronger the color change. Often a spectrometer is used to give quantitative values for color strength
大鼠骨特异性碱性磷酸酶BALP
大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.6μg/L -16μg/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)水平。
用纯化的大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)，再与HRP标记的骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)浓度。
试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
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大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)酶联免疫分析试剂盒使用说明书使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)水平。
用纯化的大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入
葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)，再与HRP 标记的葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)抗体结合，形成抗体-抗
原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝
色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)呈
正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠葡
萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（400U/L）0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进
行稀
释。
200U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
100U/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
50U/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
25U/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
12.5U/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显
色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。
测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，
即为样品的实际浓度。