瓜类根腐病生防菌的筛选及效果测定
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Abstract：Ｔｏ ｓｃｒｅｅｎ ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｅｆｆｅｃｔ ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ｂａｃｔｅｒｉａ ｔｏ ｍｅｌｏｎｓ ｃｏｍｍｏｎ ｒｏｔ， １３ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｏｂａｃｃｏ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ｍａｎｙ ａｒｅａｓ ｉｎ Ｈｅｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ， ８ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｆｒｏｍ ｏｒｇａｎｉｃ ｍａｎｕｒｅｓ ａｎｄ １７ ｓｔｒａｉｎｓ ｆｒｏｍ ａ ｌａｒｇｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ． Ｂａｃｔｅｒｉａ ＹＹＧ－１，ＧＹＧ－２－３ ａｎｄ ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｍｅｌｏｎｓ ｃｏｍｍｏｎ ｒｏｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｕａｌ－ｃｕｌｔｕｒｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ， ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ．
菌株
ＣＫ ＹＹＧ－１ ＹＺ－１ ＹＺ－３ ＧＹＧ－１－１ ＧＹＧ－３－１ ＧＹＧ－２－４ ＧＹＧ－２－１ ＧＹＧ－２－２ ＧＹＧ－１－２ ＧＹＧ－２－５ ＧＹＧ－４－１
表 1 各个菌株对瓜类根腐病原菌的生长抑制效果测定
重复 １ ２ １ ０．８ － － － － － － － － ０．８
重复 ２ ２ １．２ ０．８ － － － － － － － － ０．７
重复 １ ０．９ － ０．６ － － － － － ０．９ － － ０．６ ０．８ ０．７ ０．４ ０．２ ０．７ ０．１ ０．８
重复 ２ ０．８ － ０．５ － － － － － ０．７ － － ０．８ ０．７ ０．８ ０．４ ０．２ ０．８ ０．１ ０．７
抑菌圈半径 ／ｃｍ 重复 ３ ０．７ － ０．６ － － － － － ０．６ － － ０．８ ０．７ ０．６ ０．４ ０．２ ０．７ ０．１ ０．８
﹢﹢
﹢﹢
﹢﹢
﹢﹢
﹢﹢
ＧＹＧ－２－３
﹢﹢
﹢﹢
﹢﹢
﹢﹢
﹢﹢
ＹＹＧ－１
﹢﹢
﹢﹢
﹢﹢
﹢﹢
﹢﹢
注：﹢表示有过敏反应；－ 表示无反应，正常生长。表 ３ 同。
从表 ３ 可以看出，３０ ｍＬ 水中加入 ０．２１ ｇ 的多 菌灵对生防菌的抑制效果较好，故可以选用质量浓
度低于 ０．００７ ｇ／ｍＬ 的多菌灵与生防菌混配测定防 治效果。
摘 要：为了筛选出瓜类根腐病的生防菌，从河南不同地区采集的烟草样本中分离出 １３ 株内生细菌，从不同的粪
肥中分离出 ８ 株菌株以及从河南农业大学植物病理学实验室保存的大批其他药用植物内生菌株中筛选出的
１７ 株菌株，对所有菌株通过比较筛选得到对瓜果根腐病防治效果较好的 ３ 株菌株，即 ＹＹＧ－１，ＧＹＧ－２－３ 和
通过对峙培养，其抑菌效果如图 １ 所示，其中， 菌株 ＹＹＧ－１ 的拮抗效果最好。测量的抑菌率数据 如表 １ 所示。通过表 １ 的抑菌率效果筛选出 ３ 株对 瓜类根腐病防治效果都相对较好的生防菌株，分别 为 ＹＹＧ－１，ＧＹＧ－２－３ 和 ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１，然后再进 行耐药性试验。
２ 结果与分析
ＧＥＮＧ Ｙｕｅ－ｆｅｎｇ１，ＬＩ Ｙｕｅ２，ＧＡＯ Ｗｅｉ３
（１．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ，Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ ２５２０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００００，Ｃｈｉｎａ）
表 3 筛选的菌株对多菌灵的敏感性测定
每 ３０ ｍＬ 中多菌灵的量 ／ｇ
多菌灵
０．０６
０．０９
０．１２
０．１８
０．２１
ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１
－
－
－
﹢
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ＧＹＧ－２－３
－
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－
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ＹＹＧ－１
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－
－
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﹢﹢
３ 讨论
植物病害极大地影响农作物的产量，目前植物 病害以化学防治为主，但化学药剂严重污染环境， 诱导病原菌产生抗药性，因此，植物病害的生物防 治研究越来越受到重视。关于植物病害生防细菌， 以前绝大多数是从土壤或植物根际土壤微生物中
增加作物产量［６］。
１ 材料和方法
１．１ 材料 瓜类根腐病菌从山东采样分离得到；从烟草上
分离出一批生防菌；从河南农业大学三区农家肥分 离出的细菌；从河南农业大学植物病理学实验室分 离保存的植物内生菌。化学药剂有多菌灵、四霉素。 １．２ 方法 １．２．１ 生防细菌的筛选 从河南农业大学三区采 集了 ４ 份腐熟的农家肥或秸秆样本，每个样本分为 ２ 组，一组是在室温下稀释，另一组是在烘箱内进行 灭菌再稀释。２～３ ｄ 后取粪液的上清液少许，稀释 ３ 个不同的倍数进行涂板培养，再分离提纯。
抑菌率［７－８］＝（对照菌落半径－处理菌落半径）／ 对照菌落半径×１００％。 １．２．２ 生防菌的耐药性试验 主要利用化学药剂 多菌灵和四霉素检测生防菌对化学药剂的敏感程 度。将不同剂量的化学药剂放入定量的培养基中灭 菌，然后做成带药平板，将筛选出的生防菌在带药 平板上用三角玻璃棒涂匀，而后观察生防菌的生 长状况。即将多菌灵设置成 ０．０６，０．０９，０．１２，０．１８， ０．２１ ｇ 不同梯度和 ２０，３０，６０，９０，１００ μＬ 的四霉素 混入 ３０ ｍＬ 的 ＰＤＡ 培养基中做成带药培养基，灭 菌后在无菌操作室内倒入 ２ 个平板中，然后将生防 菌用三角玻璃棒在带药平板上涂匀，设 ２ 个重复。
２．１ 细菌筛选结果 经过大量的分离培养，从烟草中分离到内生菌
１３ 株，分别编号 ＹＹＧ－１，ＧＹＧ－４－１，ＧＹＧ－１－２，ＹＺ－３， ＧＹＧ－３－１ ，ＧＹＧ－２－４ ，ＧＹＧ－２－３ ，ＧＹＧ－２－５ ，ＧＹＧ－ １－１，ＧＹＧ－２－１，ＹＺ－１，ＹＹＪ－２，ＧＹＧ－２－２。粪肥分离 活化得到 ８ 株菌株，分别为 ＮＤＳＱ－ＭＪ－１－１，ＮＤＳＱ－
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分离筛选得到，但由于这些土壤微生物易受外界条 件的影响，在与土壤习居微生物的竞争中不易长期 定殖生存并占优势，因而极大地影响了它们的实际 防病效果［９］。
生防菌在植物病害防治应用中存在的问题主 要有：生防效果不稳定，田间定殖能力差［１０］。拮抗细 菌的防效实质上是生物间在自然界中的平衡作用，
ＪＺＴＹ０７－５－Ｂ１ ＬＣＪＢ１９－１ ＣＣＳ０７－１－Ｂ
ＭＤＹ０７－５－Ｂ１ ＪＢ０６０１
ＭＤＰ０７－３－Ｂ１ 防 －１
ＭＤＹ０７－２－Ｂ２ ＨＴＹ０７－１－Ｂ２ ＨＧ－０９－３－Ｂ１ ＪＸ－Ｚ－０９－３－Ｂ３ Ｈ－Ｂ１－０９－３－Ｂ Ｈ－Ｙ－０９－２－Ｂ１ ＨＧ－０９－３－Ｂ３ ＪＸ－Ｙ－０８－２－Ｂ５ ＨＪ－０８－５－Ｂ１ ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１
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耿月锋等：瓜类根腐病生防菌的筛选及效果测定
态、大小、颜色、边缘形状、质地、光泽等相同的单菌 落，在 ＰＤＡ 培养基上纯化。
采用平板对峙培养法检测各个菌株对病原菌 生长的抑制能力，无菌操作室将 ＰＤＡ 培养基上长 好的病原菌用打孔器制成菌饼，然后将菌饼转接至 ＰＤＡ 培养基平板中央，再用无菌牙签将分离纯化的 细菌接至距病原菌 ２ ｃｍ 处，每皿接种一株供试细 菌，共设 ３ 个重复，同时以只放菌饼的平板为对照， ２５ ℃恒温培养 ７ ｄ，测量各平板中病原菌的半径， 得出抑菌圈半径并计算出不同菌株对病原菌的抑 菌率，最终选出对该病原菌抑制效果都相对较好的 菌株。
抑菌圈半径 ／ｃｍ 重复 ３ ２ ０．９ ０．６ － － － － － － － － ０．７
平均 ２
１．０３ ０．７３
－ － － － － － － － ０．７３
抑菌率 ／％
５１．５ ３６．５
－ － － － － － － － ３６．５
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山西农业科学 ２０１４ 年第 ４２ 卷第 ５ 期
续表 1
Hale Waihona Puke Baidu
菌株
ＧＹＧ－２－３ ＹＹＪ－２
平均 ０．８０
－ ０．５７
－ － － － － ０．７３ － － ０．７３ ０．７３ ０．７０ ０．４０ ０．２０ ０．７３ ０．１０ ０．７７
抑菌率 ／％
４０．０ －
２８．５ － － － － －
３６．５ － －
３６．５ ３６．５ ３５．０ ２０．０ １０．０ ３６．５ ５．０ ３８．５
注：－ 表示生防菌对病原菌没有抑制效果。从粪肥中分离活化得到的 ８ 株菌株对该病原菌均没有抑制效果，表中未列出。
Key words：ｍｅｌｏｎｓ ｃｏｍｍｏｎ ｒｏｔ； ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ｂａｃｔｅｒｉａｌ； ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ
近年来，瓜类根腐病严重影响着瓜果的生长， 甚至会造成作物死亡［１］。瓜果根腐病原菌是从山东 分离到的一种茄镰刀菌。茄镰刀菌（Fusarium solani （Ｍａｒｔ．）Ｓａｃｃ）菌 丝 为 淡 黄 色 ，棉 絮 状 ，菌 落 边 缘 整 齐，２８ ℃培养 ３ ｄ 后，ＰＤＡ 培养基上菌落直 径 为 ３．４～４．０ ｃｍ。其以小型分生孢子为主，大小为（７．５～ １９．０）μｍ×（２．０～３．８）μｍ，大多为 １ 隔膜，卵形；大分 生孢子为 ３ 分隔，马蹄形，大小为（１８．５～２９．５）μｍ× （２．０～４．０）μｍ，顶部钝圆［２］。
将烟草内生菌和河南农业大学植物病理学实 验室保存下来的菌株进行纯化。将小管保存的细菌 在 ＰＤＡ 培养基平板上划线活化，放于 ２５ ℃恒温培 养箱中培养。培养 １～２ ｄ，待细菌长出后，挑取形
收 稿 日 期 ：２０１４－０１－１９ 作者简介：耿月锋（１９８７－），男，山东聊城人，初级农艺师，主要从事农药检测工作。高 巍为通讯作者。
植物病害生物防治是利用有益微生物及其微 生物的代谢产物对农作物病害进行有效防治的技 术与方法［３－５］。目前，用于植物病害生物防治的生防 因子很多，包括拮抗微生物、抗生素和植物诱导因 子等。微生物种类繁多，主要有细菌、真菌、放线菌 和病毒，而细菌又具有很多特异的优点：种类和数 量众多，对病原菌的作用方式较广，繁殖速度快，适 应环境能力强，大多可以人工培养，便于控制，在实 践中易于操作，有些细菌不仅能防治病害而且可以
２．２ 耐药性试验结果 由表 ２ 可知，在 ３０ ｍＬ 水中加入 ２０ μＬ 四霉素
（已超出它用量的最低限度） 平板上都没长出生防
菌，表明生防菌对四霉素过于敏感，用量很低时就 受到抑制，故盆栽试验时二者不能混配使用。
表 2 筛选的菌株对四霉素的敏感性测定
四霉素 ２０
体积 ／μＬ
３０
６０
９０
１００
ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１
山西农业科学 ２０１４，４２（５）：４８６－４８９ doi:10.3969/j.issn.1002-2481.2014.05.19
Journal of Shanxi Agricultural Sciences
瓜类根腐病生防菌的筛选及效果测定
耿月锋 1，李 跃 2，高 巍 3
（１．聊城市农业委员会，山东 聊城 ２５２０００；２．河南农业大学植物保护学院，河南 郑州 ４５００００； ３．河南农业大学资源与环境学院，河南 郑州 ４５００００）
ＭＪ－１－２，ＮＤＳＱ－ＭＪ－２－１，ＮＤＳＱ－ＭＪ－２－２，ＮＤＳＱ－ＭＪ－ ３－１，ＮＤＳＱ－ＭＪ－３－２，ＮＤＳＱ－ＭＪ－３－３，ＮＤＳＱ－ＭＪ－４－ １。河南农业大学植物病理学实验室保存的生防 菌１７ 株：ＭＤＹ０７－５－Ｂ１，ＣＣＳ０７－１－Ｂ，ＭＤＰ０７－３－Ｂ１， ＭＤＹ０７－２－Ｂ２，ＪＢ０６０１，ＪＺＴＹ０７－５－Ｂ１，防 －１，ＨＴＹ ０７－１－Ｂ２ ，ＬＣＪＢ１９－１ ，ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１ ，ＪＸ－Ｙ－０８－２－ Ｂ５，Ｈ－Ｂ１－０９－３－Ｂ，ＨＧ－０９－３－Ｂ１，ＨＪ－０８－５－Ｂ１，ＪＸ－ Ｚ－０９－３－Ｂ３，ＨＧ－０９－３－Ｂ３，Ｈ－Ｙ－０９－２－Ｂ１。从中筛 选对瓜类根腐病原菌生长抑制效果较好的菌株。
ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１，并对其耐药性进行了验证。
关 键 词 ：瓜类根腐病；生防菌；筛选
中 图 分 类 号 ：Ｓ４３６．４２
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１００２－２４８１（２０１４）０５－０４８６－０４
Screening of Biocontrol against Melons Common Rot
菌株
ＣＫ ＹＹＧ－１ ＹＺ－１ ＹＺ－３ ＧＹＧ－１－１ ＧＹＧ－３－１ ＧＹＧ－２－４ ＧＹＧ－２－１ ＧＹＧ－２－２ ＧＹＧ－１－２ ＧＹＧ－２－５ ＧＹＧ－４－１
表 1 各个菌株对瓜类根腐病原菌的生长抑制效果测定
重复 １ ２ １ ０．８ － － － － － － － － ０．８
重复 ２ ２ １．２ ０．８ － － － － － － － － ０．７
重复 １ ０．９ － ０．６ － － － － － ０．９ － － ０．６ ０．８ ０．７ ０．４ ０．２ ０．７ ０．１ ０．８
重复 ２ ０．８ － ０．５ － － － － － ０．７ － － ０．８ ０．７ ０．８ ０．４ ０．２ ０．８ ０．１ ０．７
抑菌圈半径 ／ｃｍ 重复 ３ ０．７ － ０．６ － － － － － ０．６ － － ０．８ ０．７ ０．６ ０．４ ０．２ ０．７ ０．１ ０．８
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ＧＹＧ－２－３
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ＹＹＧ－１
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注：﹢表示有过敏反应；－ 表示无反应，正常生长。表 ３ 同。
从表 ３ 可以看出，３０ ｍＬ 水中加入 ０．２１ ｇ 的多 菌灵对生防菌的抑制效果较好，故可以选用质量浓
度低于 ０．００７ ｇ／ｍＬ 的多菌灵与生防菌混配测定防 治效果。
摘 要：为了筛选出瓜类根腐病的生防菌，从河南不同地区采集的烟草样本中分离出 １３ 株内生细菌，从不同的粪
肥中分离出 ８ 株菌株以及从河南农业大学植物病理学实验室保存的大批其他药用植物内生菌株中筛选出的
１７ 株菌株，对所有菌株通过比较筛选得到对瓜果根腐病防治效果较好的 ３ 株菌株，即 ＹＹＧ－１，ＧＹＧ－２－３ 和
通过对峙培养，其抑菌效果如图 １ 所示，其中， 菌株 ＹＹＧ－１ 的拮抗效果最好。测量的抑菌率数据 如表 １ 所示。通过表 １ 的抑菌率效果筛选出 ３ 株对 瓜类根腐病防治效果都相对较好的生防菌株，分别 为 ＹＹＧ－１，ＧＹＧ－２－３ 和 ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１，然后再进 行耐药性试验。
２ 结果与分析
ＧＥＮＧ Ｙｕｅ－ｆｅｎｇ１，ＬＩ Ｙｕｅ２，ＧＡＯ Ｗｅｉ３
（１．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ，Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ ２５２０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００００，Ｃｈｉｎａ）
表 3 筛选的菌株对多菌灵的敏感性测定
每 ３０ ｍＬ 中多菌灵的量 ／ｇ
多菌灵
０．０６
０．０９
０．１２
０．１８
０．２１
ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１
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ＧＹＧ－２－３
－
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ＹＹＧ－１
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３ 讨论
植物病害极大地影响农作物的产量，目前植物 病害以化学防治为主，但化学药剂严重污染环境， 诱导病原菌产生抗药性，因此，植物病害的生物防 治研究越来越受到重视。关于植物病害生防细菌， 以前绝大多数是从土壤或植物根际土壤微生物中
增加作物产量［６］。
１ 材料和方法
１．１ 材料 瓜类根腐病菌从山东采样分离得到；从烟草上
分离出一批生防菌；从河南农业大学三区农家肥分 离出的细菌；从河南农业大学植物病理学实验室分 离保存的植物内生菌。化学药剂有多菌灵、四霉素。 １．２ 方法 １．２．１ 生防细菌的筛选 从河南农业大学三区采 集了 ４ 份腐熟的农家肥或秸秆样本，每个样本分为 ２ 组，一组是在室温下稀释，另一组是在烘箱内进行 灭菌再稀释。２～３ ｄ 后取粪液的上清液少许，稀释 ３ 个不同的倍数进行涂板培养，再分离提纯。
抑菌率［７－８］＝（对照菌落半径－处理菌落半径）／ 对照菌落半径×１００％。 １．２．２ 生防菌的耐药性试验 主要利用化学药剂 多菌灵和四霉素检测生防菌对化学药剂的敏感程 度。将不同剂量的化学药剂放入定量的培养基中灭 菌，然后做成带药平板，将筛选出的生防菌在带药 平板上用三角玻璃棒涂匀，而后观察生防菌的生 长状况。即将多菌灵设置成 ０．０６，０．０９，０．１２，０．１８， ０．２１ ｇ 不同梯度和 ２０，３０，６０，９０，１００ μＬ 的四霉素 混入 ３０ ｍＬ 的 ＰＤＡ 培养基中做成带药培养基，灭 菌后在无菌操作室内倒入 ２ 个平板中，然后将生防 菌用三角玻璃棒在带药平板上涂匀，设 ２ 个重复。
２．１ 细菌筛选结果 经过大量的分离培养，从烟草中分离到内生菌
１３ 株，分别编号 ＹＹＧ－１，ＧＹＧ－４－１，ＧＹＧ－１－２，ＹＺ－３， ＧＹＧ－３－１ ，ＧＹＧ－２－４ ，ＧＹＧ－２－３ ，ＧＹＧ－２－５ ，ＧＹＧ－ １－１，ＧＹＧ－２－１，ＹＺ－１，ＹＹＪ－２，ＧＹＧ－２－２。粪肥分离 活化得到 ８ 株菌株，分别为 ＮＤＳＱ－ＭＪ－１－１，ＮＤＳＱ－
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分离筛选得到，但由于这些土壤微生物易受外界条 件的影响，在与土壤习居微生物的竞争中不易长期 定殖生存并占优势，因而极大地影响了它们的实际 防病效果［９］。
生防菌在植物病害防治应用中存在的问题主 要有：生防效果不稳定，田间定殖能力差［１０］。拮抗细 菌的防效实质上是生物间在自然界中的平衡作用，
ＪＺＴＹ０７－５－Ｂ１ ＬＣＪＢ１９－１ ＣＣＳ０７－１－Ｂ
ＭＤＹ０７－５－Ｂ１ ＪＢ０６０１
ＭＤＰ０７－３－Ｂ１ 防 －１
ＭＤＹ０７－２－Ｂ２ ＨＴＹ０７－１－Ｂ２ ＨＧ－０９－３－Ｂ１ ＪＸ－Ｚ－０９－３－Ｂ３ Ｈ－Ｂ１－０９－３－Ｂ Ｈ－Ｙ－０９－２－Ｂ１ ＨＧ－０９－３－Ｂ３ ＪＸ－Ｙ－０８－２－Ｂ５ ＨＪ－０８－５－Ｂ１ ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１
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耿月锋等：瓜类根腐病生防菌的筛选及效果测定
态、大小、颜色、边缘形状、质地、光泽等相同的单菌 落，在 ＰＤＡ 培养基上纯化。
采用平板对峙培养法检测各个菌株对病原菌 生长的抑制能力，无菌操作室将 ＰＤＡ 培养基上长 好的病原菌用打孔器制成菌饼，然后将菌饼转接至 ＰＤＡ 培养基平板中央，再用无菌牙签将分离纯化的 细菌接至距病原菌 ２ ｃｍ 处，每皿接种一株供试细 菌，共设 ３ 个重复，同时以只放菌饼的平板为对照， ２５ ℃恒温培养 ７ ｄ，测量各平板中病原菌的半径， 得出抑菌圈半径并计算出不同菌株对病原菌的抑 菌率，最终选出对该病原菌抑制效果都相对较好的 菌株。
抑菌圈半径 ／ｃｍ 重复 ３ ２ ０．９ ０．６ － － － － － － － － ０．７
平均 ２
１．０３ ０．７３
－ － － － － － － － ０．７３
抑菌率 ／％
５１．５ ３６．５
－ － － － － － － － ３６．５
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山西农业科学 ２０１４ 年第 ４２ 卷第 ５ 期
续表 1
Hale Waihona Puke Baidu
菌株
ＧＹＧ－２－３ ＹＹＪ－２
平均 ０．８０
－ ０．５７
－ － － － － ０．７３ － － ０．７３ ０．７３ ０．７０ ０．４０ ０．２０ ０．７３ ０．１０ ０．７７
抑菌率 ／％
４０．０ －
２８．５ － － － － －
３６．５ － －
３６．５ ３６．５ ３５．０ ２０．０ １０．０ ３６．５ ５．０ ３８．５
注：－ 表示生防菌对病原菌没有抑制效果。从粪肥中分离活化得到的 ８ 株菌株对该病原菌均没有抑制效果，表中未列出。
Key words：ｍｅｌｏｎｓ ｃｏｍｍｏｎ ｒｏｔ； ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ｂａｃｔｅｒｉａｌ； ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ
近年来，瓜类根腐病严重影响着瓜果的生长， 甚至会造成作物死亡［１］。瓜果根腐病原菌是从山东 分离到的一种茄镰刀菌。茄镰刀菌（Fusarium solani （Ｍａｒｔ．）Ｓａｃｃ）菌 丝 为 淡 黄 色 ，棉 絮 状 ，菌 落 边 缘 整 齐，２８ ℃培养 ３ ｄ 后，ＰＤＡ 培养基上菌落直 径 为 ３．４～４．０ ｃｍ。其以小型分生孢子为主，大小为（７．５～ １９．０）μｍ×（２．０～３．８）μｍ，大多为 １ 隔膜，卵形；大分 生孢子为 ３ 分隔，马蹄形，大小为（１８．５～２９．５）μｍ× （２．０～４．０）μｍ，顶部钝圆［２］。
将烟草内生菌和河南农业大学植物病理学实 验室保存下来的菌株进行纯化。将小管保存的细菌 在 ＰＤＡ 培养基平板上划线活化，放于 ２５ ℃恒温培 养箱中培养。培养 １～２ ｄ，待细菌长出后，挑取形
收 稿 日 期 ：２０１４－０１－１９ 作者简介：耿月锋（１９８７－），男，山东聊城人，初级农艺师，主要从事农药检测工作。高 巍为通讯作者。
植物病害生物防治是利用有益微生物及其微 生物的代谢产物对农作物病害进行有效防治的技 术与方法［３－５］。目前，用于植物病害生物防治的生防 因子很多，包括拮抗微生物、抗生素和植物诱导因 子等。微生物种类繁多，主要有细菌、真菌、放线菌 和病毒，而细菌又具有很多特异的优点：种类和数 量众多，对病原菌的作用方式较广，繁殖速度快，适 应环境能力强，大多可以人工培养，便于控制，在实 践中易于操作，有些细菌不仅能防治病害而且可以
２．２ 耐药性试验结果 由表 ２ 可知，在 ３０ ｍＬ 水中加入 ２０ μＬ 四霉素
（已超出它用量的最低限度） 平板上都没长出生防
菌，表明生防菌对四霉素过于敏感，用量很低时就 受到抑制，故盆栽试验时二者不能混配使用。
表 2 筛选的菌株对四霉素的敏感性测定
四霉素 ２０
体积 ／μＬ
３０
６０
９０
１００
ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１
山西农业科学 ２０１４，４２（５）：４８６－４８９ doi:10.3969/j.issn.1002-2481.2014.05.19
Journal of Shanxi Agricultural Sciences
瓜类根腐病生防菌的筛选及效果测定
耿月锋 1，李 跃 2，高 巍 3
（１．聊城市农业委员会，山东 聊城 ２５２０００；２．河南农业大学植物保护学院，河南 郑州 ４５００００； ３．河南农业大学资源与环境学院，河南 郑州 ４５００００）
ＭＪ－１－２，ＮＤＳＱ－ＭＪ－２－１，ＮＤＳＱ－ＭＪ－２－２，ＮＤＳＱ－ＭＪ－ ３－１，ＮＤＳＱ－ＭＪ－３－２，ＮＤＳＱ－ＭＪ－３－３，ＮＤＳＱ－ＭＪ－４－ １。河南农业大学植物病理学实验室保存的生防 菌１７ 株：ＭＤＹ０７－５－Ｂ１，ＣＣＳ０７－１－Ｂ，ＭＤＰ０７－３－Ｂ１， ＭＤＹ０７－２－Ｂ２，ＪＢ０６０１，ＪＺＴＹ０７－５－Ｂ１，防 －１，ＨＴＹ ０７－１－Ｂ２ ，ＬＣＪＢ１９－１ ，ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１ ，ＪＸ－Ｙ－０８－２－ Ｂ５，Ｈ－Ｂ１－０９－３－Ｂ，ＨＧ－０９－３－Ｂ１，ＨＪ－０８－５－Ｂ１，ＪＸ－ Ｚ－０９－３－Ｂ３，ＨＧ－０９－３－Ｂ３，Ｈ－Ｙ－０９－２－Ｂ１。从中筛 选对瓜类根腐病原菌生长抑制效果较好的菌株。
ＺＨＣ－０９－２－Ｂ１，并对其耐药性进行了验证。
关 键 词 ：瓜类根腐病；生防菌；筛选
中 图 分 类 号 ：Ｓ４３６．４２
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１００２－２４８１（２０１４）０５－０４８６－０４
Screening of Biocontrol against Melons Common Rot