两面针的提取分离工艺

两面针的提取分离工艺研究进展

（华中科技大学应用化学1002班 )

摘要：

两面针是组分相当复杂的体系，其有效成分是其发挥疗效的物质基础，而现代中药两面针的发展过程中，对有效成分的提取、分离和纯化这一复杂工作的要求也越来越高，从天然药物中提出分离出单体并发展成新药或为先导化合物提供参考是中药开发工作中的重要内容，在传统提取分离基础上，近年来越来越多新型技术不断被开发和应用，具有明显的优越性。

关键词：两面针；有效成分；提取；分离

两面针药材性味辛、苦、微温,小毒,具有祛风通络、胜湿止痛、消肿解毒等作用,其中生物碱为重要活性成分,具有抗肿瘤、诱导白血病细胞分化作用。

两面针有效成分的提取和分离对于其有效的机理、降低毒性、提高疗效、改进剂型、控制生产质量以及新药开发均有重要意义。有效成分提取的过程就是将溶剂渗入细胞内，将存于细胞内容物中的生物碱、糖类、苷类、酮类等有效成分溶解于溶剂中，随着细胞内外的浓度差而扩散至细胞外，直至达到动态平衡，通过多次输入新的溶剂，而将大部分有效成分溶出。传统提取方法存在溶剂使用量大、提取效率不高、周期长、劳动力耗费多、有效成分损失多等缺点，而一些新技术方法的出现在一定程度上解决了这些问题，具备广阔的应用前景，本文对传统经典的提取分离方法及新兴技术进行阐述。

1 传统提取分离方法

1.1 煎煮法

煎煮法是使用最早也是最广泛的传统提取方法，通过对药材进行加热煮沸而提取有效成分，但是不溶于水的有效成分损失较大，不适于挥发性成分和易被加热破坏的成分，提取前宜用冷水浸泡60min以上，具体煎煮的时间和粉碎的粒径依据要两面针本身的质地、硬度、成分等情况而定。

1.2 渗漉法

在工业上,两面针药膏的提取方法有浸泡、回流、渗漉提取等方法,其中以渗漉和回流提取法为主。渗漉提取使用的溶剂很多,如水、乙醇、甲醇、丙酮等,但多以乙醇为主要的提取溶剂。在渗漉提取的过程中,所用的乙醇体积分数、浸泡时间和渗漉体积流量等对两面针中新棒状花椒酰胺提取的影响很大。试验研究发现,不同的提取条件,两面针中新棒状花椒酰胺差别很大。当乙醇体积分数为95%、浸泡时间为72 h、渗漉体积流量为3.9 mL /m in时,两面针提取液中新棒状花椒酰胺的提取率最高为0.74% ;当乙醇体积分数为50%、浸泡时间为24

h、渗漉速度为1.3 mL /m in时,两面针提取液中新棒状花椒酰胺的提取率最低,为0.031%。

1.3 回流法

两面针总生物碱最佳提取工艺为：先将药材粉碎成粗粉，以体积分数60%乙醇5ｇ·Ｌ-1盐酸为溶剂回流提取3次，各次溶剂量分别为6，5和4倍，回流时间分别为1，0.5和0.5ｈ，总生物碱提取率为94.7%。有文献采用甲醇加盐酸索氏提取法测定两面针药材。生物碱含量，但经实验发现，回流法提取得到的总生物碱比索氏提取法高。以体分数60%乙醇为溶剂按本工艺提取，总生物碱提取率为68.29%。回流工艺加酸于提取溶剂中进行回流提取，总生物碱提取率提高20%以上。该结果表明，两面针药材使用加酸加热回流法比加热回流提取工艺所得到的氯化两面针碱提取率要高得多。

两面针药材的两种不同回流提取工艺方法

提取方法溶剂

乙醇加热回流75%乙醇溶液

乙醇加酸加热回流75%乙醇溶液加0．3%盐酸溶

液

2 现代中药提取分离技术

2.1 硅胶柱层析

取两面针药材，用95 %乙醇温浸提取,减压回收乙醇得稠浸膏,此浸膏用2 %盐酸水溶液反复搅溶,直至酸液呈微弱的生物碱反应为止,酸水液过滤,合并,用2 %NaOH液碱化至pH9—10 ,用氯仿萃取,回收氯仿得总碱(60 g) ,经反复硅胶柱层析及重结晶方法,得到化合物。具体可以查阅《两面针中化学成分的分离鉴定及活性测定》樊洁等。

2.2 D001AM树脂及D-101大孔树脂提取分离

取D001AM 树脂，加入回流提取的氯化两面针碱，在25℃环境下中进行搅拌吸附24 h，吸附饱和后，树脂用去离子水进行除杂，去离子水的用量为8BV。树脂晾干后先用4%NaHCO3-25%EtOH 溶液进行解吸附，解吸附完毕后用去离子水洗涤树脂至流出液为中性后，晾干再加入 3.0 mol/L HCl-70%EtOH 溶液进行解吸附；解吸附剂的用量为树脂体积的20倍，分4次进行解吸附，每次5.0 BV，搅拌5h 后滤出解吸附溶液，合并 4 次得到的滤液。解吸附液分别离心（3000r/min），可得到母液和沉淀。用D001AM 树脂提取分离氯化两面针碱的得率为0.023%，氯化两面针生物碱提取率是44.65%。

大孔树脂分离纯化两面针总生物碱的工艺中以体积分数60%乙醇5ｇ·Ｌ-1盐酸提取液上D-101大孔树脂柱，流出液回收乙醇至４５％，再上D-101大孔树脂柱，其流出液再回收乙醇至无醇味，再上D-101大孔树脂柱，分别用体积分数95%，80%和50%乙醇洗脱。产品总生物碱质量分数为18.07%～27.67%。将醇提液上大孔树脂柱进行乙醇体积分数梯度吸附，克服了醇提液一次性回收乙醇后出现大量沉淀、水难溶沉淀、容易堵柱等缺点，在富集总生物碱的同时还实现了把各成分按极性大小初步分离的目的。但该方法流程较长。2.3 阳离子树脂分离纯化

两面针总生物碱的提取可用醋酸水溶液对两面针乙醇浸膏进行萃取，得到的酸水溶液再用氯仿萃取，回收氯仿，经纯化处理得两面针总生物碱。此法氯仿对环境污染较大，也对工作人员健康不利。另外，也有用大孔吸附树脂对两面针中总生物碱进行分离，通过大孔树脂分离纯化后，终产品总生物碱的纯度为33.25%，含量比较低。离子交换树脂在天然产物有效成分的分离方面具有广泛应用。在选择优化条件下实验，Ls006型阳离子树脂对两面针中的氯化两面针碱选择性吸附，而且得到的产品经简单分离就可达到较高的纯度。每g Ls006阳离子树脂对两面针总生物碱最大吸附量为32.90 mg，解吸率为94.78%，总生物碱保留率为47.17%，结晶产品以氯化两面针碱计含量达89.07%，得率大于50%。

2.4 酶工程技术（酶解法辅助浸渍提取）

酶提取是利用酶反应的高度特异性、条件温和等优势，应用适当的酶（如纤维素酶、果胶酶等）降解细胞成分，破坏细胞壁及间质造成的传质阻力。酶解提取两面针的工艺条件为纤维素酶、果胶酶与底物质量比均为1∶250，4 倍量pH 5 缓冲液，室温( 30 ℃) 下酶解30 min; 最佳浸渍提取工艺为以12，4，3 倍量60% 乙醇溶液( 盐酸质量浓度5 g·L－1) 室温下浸渍3 次，每次2 h，总生物碱提取率85. 22% 。

酶法提取所表现出的明显优势是其越来越受到重视，它使得药效成分能在温和条件下进行高选择性地转化，增强了有效成分的活性，是将有效成分最大限度提取出的方法之一，优选的工艺简单高效、节能环保，具有广阔前景。

2.5 超临界流体萃取