微生物实验考试重点分析
医学微生物学实验考试切片复习
目录
切片观察基础 常见微生物切片 切片观察实验 微生物鉴定与鉴别 切片复习注意事项
01
CHAPTER
切片观察基础
选取适当的组织样本，确保其具有代表性。
切片制作过程
组织取材
将组织样本迅速固定，以保持细胞结构不被破坏。
固定
将组织样本中的水分去除，以便于切片制作。
脱水
将组织样本置于适当的介质中，以便于切片。
01
观察仔细
考试时，要仔细观察切片，抓住微生物的主要特征，避免遗漏或误判。
比较分析
对于相似的微生物切片，要进行比较分析，找出它们之间的异同点，有助于加深记忆。
答题规范
答题时，要按照标准格式，清晰、准确地描述微生物的特征，避免出现歧义或误解。
考试技巧
注意事项
保证切片质量
在复习过程中使用的切片应当清晰、完整，以保证观察的准确性和考试的公正性。
总结词
如锥虫、痢疾内变形虫等，以鞭毛为运动器官，呈长条形或椭圆形的细胞。
鞭毛虫
如疟原虫、弓形虫等，寄生于细胞内，形成孢子进行繁殖。
孢子虫
如肾形虫、肠袋虫等，以纤毛为运动器官，呈圆形、椭圆形的细胞。
纤毛虫
原生动物切片
03
CHAPTER
切片观察实验
了解革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色特性。
总结词
通过观察革兰氏染色切片，了解革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色，以及两者在形态和染色上的差异。
革兰氏染色法
抗酸染色法
生化试验
血清学试验
通过分离病毒并进行培养，观察病毒的形态、生长特征等，以确定病毒种类。
病毒分离与培养
利用电子显微镜观察病毒形态，有助于病毒种类的初步判断。
微生物学考试重点总结
绪论▲1.微生物的定义：是一切肉眼看不清楚或者看不见的微小生物的总称。
▲2.微生物的类群：非细胞（病毒）；原核生物（细菌）；真核生物（酵母菌）。
3.为什么说微生物是一把双刃剑：利：医药：抗生素的大规模生产和推广，利用工程菌产生多肽类生化药物。
农业：以菌治害虫和以菌治植病的生物防治；以菌促肥效，以菌促生长。
环境污染的治理：污水处理；环境污染监测和重要指示生物。
工业：生物发酵酿酒。
害：给人类带来各种疾病，威胁人类生存：结核、疟疾、霍乱农业：农作物病变（花卉的白粉病）。
食品：使食物腐烂变质。
发酵工业：发酵过程混入杂菌影响发酵产率。
▲4.微生物有哪些共性？最基本的是哪个？为什么：体积小，面积大（最基本）；吸收多，转化快；生长旺，繁殖快；适应强，易变异；分布广，种类多；因为微生物是一个小体积大面积系统，必然有一个巨大的营养物质吸收面，代谢废物排泄面，和环境信息交换面，并由此产生其余四个共性。
5.谁先看到了微生物：列文虎克（自制了世界上第一台放大倍数为300倍的显微镜。
1676年他利用这种显微镜，观察到了一些细菌和原生动物，当时称为微动体，首次揭示了微生物世界。
▲6.在微生物发展史上哪两位做出了重大贡献？什么贡献？：巴斯德————彻底否定了“自生说”学说；证实发酵由微生物引起的;免疫学奠基者，提出预防接种;发明巴氏消毒法.科赫—————A.微生物学基本操作技术方面的贡献（细菌纯培养方法的建立；设计了各种培养基，实现了在实验室内对各种微生物的培养；流动蒸汽灭菌；染色观察和显微摄影）；B.对病原细菌的研究作出了突出的贡献（证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则——柯赫原则）C.提出了动植物病原菌鉴定的柯赫法则。
7.巴氏消毒法：一般温度60～85℃，处理时间30分钟到15秒消毒的一种低温消毒法。
8.微生物对生物学的发展有什么贡献：学科交叉促进微生物学发展；对生命科学研究技术有重大贡献。
第一章1.什么是原核生物：细胞结构为原核的单细胞微生物。
微生物学重点内容（考试必看）
微⽣物学重点内容（考试必看）⼗章、细菌学概论细菌（bacteria）：⼀类具有细胞壁、单细胞、以⽆性⼆分裂⽅式进⾏繁殖的原核细胞型微⽣物。
⼀、细菌的形态、结构与分类（p123-137）⼀）⼤⼩与形态1.⼤⼩：微⽶、光学显微镜2.基本形态（适宜条件、8-18h、主要有3种；观察选对数⽣长期最优）球菌Coccus 单、双、链、四联、⼋叠、葡萄球菌杆菌Bacillus 各种杆菌差异较⼤，排列分散、⽆⼀定形式螺形菌Spiral bacterium 弧菌：⼀个弯曲、螺菌：数个弯曲3.多形性：细菌在条件改变时，出现不规则形态，呈梨形、⽓球状、丝状等，条件适宜，可以恢复。
⼆）细菌的细菌结构（10分）★★★★★1.基本结构（所有细菌共有的结构）：细胞壁、细胞膜、细胞浆及核质。
1）细胞壁：坚韧、有弹性；保护细菌；含主要成分肽聚糖，特殊成分磷酸壁、脂多糖等。
A.⾰兰⽒阳性菌细胞壁★★★★★较厚，含丰富肽聚糖，少量磷壁酸a.肽聚糖由40层左右的⽹格状分⼦交织成厚的三维⽴体⽹状结构，由聚糖⾻架和四肽侧链及五肽桥组成。
聚糖⾻架由N-⼄酰葡糖胺（G）和N-⼄酰胞壁酸（M）经β-1,4糖苷键交替间隔排列⽽成。
肽聚糖⽀架相同，肽链肽桥随菌⽽异。
b.磷壁酸（G+特有成分）酸性多糖，由核糖醇或⽢油残基经磷酸⼆酯键互相连接⽽成的链状聚合物。
分壁磷壁酸（核糖醇型）和膜磷壁酸（⽢油型）具重要⽣理功能：①.P-结合阳离⼦，Mg2+提⾼细胞表⾯酶活性②.细胞壁表⾯抗原成分③.噬菌体吸附的特异受体④.调节⾃溶素活⼒⑤.增加细菌粘附性，与致病性有关。
B.⾰兰⽒阴性菌细胞壁较薄，肽聚糖含量低。
外膜层位于细胞壁肽聚糖层的外侧，包括脂多糖、脂质双层、脂蛋⽩三部分a.肽聚糖b.外膜①.脂蛋⽩：⼀端以蛋⽩质部分共价键连接于肽聚糖的四肽侧链上另⼀端以脂质部分连接在外膜的磷酸上，其功能是稳定外膜并将之固定于肽聚糖层。
②.脂质双层：脂蛋⽩外侧，脂质双层结构。
含有外膜蛋⽩。
《微生物考试总结》
《微生物考试总结》巴XX效应：在有氧条件下。
兼性厌氧微生物终止发酵，进行有氧呼吸，这种呼吸抑制发酵的现象称为巴XX效应。
即呼吸抑制作用。
巴XX的贡献：1.证实了微生物活动和否定了微生物自然发生学说；2开创了免疫学预防接种。
3.发酵的研究；4.巴XX消毒法，观察丁醇发酵时发现厌氧生命，提出好氧厌氧属于。
柯X的贡献：1设计了分离和纯化细菌的方法：划线法、混合平板法。
2.设计了培养细菌用的肉汁胨培养液和营养琼脂培养基。
3.设计了细菌染色技术。
4.提出柯X法则：（证明某种生物是否为某种疾病的病原的基本原则）i.病原体微生物一定伴随着病害而存在;ii;必须能自原寄主分理处这种微生物，并培养成为纯培养;iii.分离培养出的病原体比能在实验动物身上产生相同的症状iiii必须自人工接种发病的寄主内，能重新分离出同一病原微生物并培养成纯培养。
3试述染色法的机制并说明此法的重要性。
答：革兰氏染色的机制为：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物。
G 由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次多和交联致密，故遇脱色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，在加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。
反之，G细菌呈红色，而G 细菌则仍保留最初的紫色。
此法证明了G 和G可得，球形无完整的细胞壁无细胞壁无完整的细胞壁（一定抗性）无细胞壁对渗透压敏感，需高浓度盐类才能存活不敏感生长缓慢，在固体培养基上形成油煎荷包蛋状菌落有鞭毛，但不运动，可生长，可形成芽孢，可繁殖，不能分裂，形成菌落，生物活性不变甾醇有较高的机械强度实际意义：原生质体和原生质球比正常有细胞壁的细菌更易导入外源遗传物质，故是遗传规律和进行原生质体育种的良好实验材料。
L型细菌：细菌在某种环境条件下（如低浓度青霉素）因基因突变而产生的缺乏细胞壁的遗传性能稳定的变异类型。
原生质体：在菌培养物中加入溶菌酶或通过青霉素阻止其细胞壁的正常合成而获得的完全缺壁细胞即为原生质体。
病原微生物实验考试总结
【培养基】【填空】真菌培养（条件、培养基）：三高三低：高糖、高湿度、高氧；低营养、低温、低ph。
真菌培养基：沙保弱培养基真菌三种类型的菌落：酵母型菌落、类酵母型菌落、丝状菌落细菌在液体培养基中可呈现的生长方式（3）：均匀浑浊，絮状沉淀，菌膜生长（或腐败性恶臭）。
半固体培养基两种生长状态：穿刺线两侧羽毛状生长，为动力阳性。
无鞭毛菌沿穿刺线线状生长，为动力试验阴性。
观察细菌的计量单位为μm，油镜观察，1000倍革兰染色可观察细菌的：大小，形态，排列，染色性。
细菌分类：球菌、杆菌、螺旋菌细菌的几种特殊结构：荚膜、鞭毛、芽孢。
常见的细菌变异现象：L型变异；菌落变异；鞭毛变异；耐药性变异S-R变异（中文名称、原理）：菌落变异。
菌落有光滑（S）型和粗糙（R）型两种。
S型菌落表面光滑湿润、边缘整齐；细菌经人工培养多次传代后，菌落表面粗糙干燥、边缘不整齐。
由光滑型变为粗糙型，称为S-R变异。
H-O变异（中文名称、原理）：鞭毛变异。
有周鞭毛的变形杆菌，普通琼脂培养基上具有迁徙生长的现象，菌落形似薄膜，为H菌落；若将此菌点种在0.1%苯酚的培养基上，鞭毛形成收到抑制，不再出现迁徙现象，在点种处形成不向外扩展的单个菌落，为O菌落。
失去鞭毛的变异为H-O变异。
血凝试验：流感病毒表面具有血凝刺突，其成分为糖蛋白，能与某些动物或人红细胞表面的糖蛋白受体结合，出现红细胞凝集的现象。
血凝效价：血凝试验中‘++’表示有半数鸡红细胞凝集，在管低铺成薄膜，不凝集的红细胞在管底中心形成小圆点。
以出现‘++’的病毒液的最高稀释度为~平板划线原理：在划线过程中，线上的微生物越来越少，进而达到分离的目的，经培养后可获得由单个细胞生长而成的菌落。
鞭毛观察（3）：电镜观察，鞭毛染色后光镜下观察，半固体接种（或悬滴观察活菌运动）。
最重要的消毒方法：高压蒸汽灭菌，可达121度，维持15'-30'小白鼠拖腿实验常用于鉴定破伤风梭菌的破伤风痉挛毒素H2S生成实验：判断细菌分解含硫氨基酸的能力，培养基中出现黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀白喉棒状杆菌：阿伯特（Alert）染色法，异染颗粒。
微生物学实验复习提纲
微生物学实验复习提纲微生物学实验复习提纲1.研究微生物学的基本技术有哪些（显微镜技术、无菌技术、纯种分离技术和纯种培养技术）2.光学显微镜又称“复式显微镜”，由哪两部分组成？显微镜的什么最为关键？为什么？答：由机械装置和光学系统组成物镜的性能最为关键，因为它直接影响着显微镜的分辨率3.油镜的放大倍数为多少？与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头间滴加什么？其什么作用？答：10*100 需要滴加镜油增加照明亮度和增加显微镜的分辨率4.影响显微镜分辨率的因素有哪些？（光源的波长、物镜的镜口角和镜头间介质的折射率）5.油镜使用后应怎样处理？镜油擦拭的正确方法是怎样的？答：用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯6.制造接种环、接种针的金属常用铂或镍,原因是软硬适度，能经受火焰反复灼烧，又易冷却.7.培养皿的包装一般以多少套作一包比较合适？5~8套。
8.灭菌吸管的包装的注意事项：（1）吸管必须干燥;(2)在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段约1.5cm 长的棉花（不能用脱脂棉）。
作用是避免外界及口中杂菌吸入管内，并防止菌液等吸入口中。
9.空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌。
则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。
10.接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。
11.简单染色的原理是什么？其主要操作步骤是什么？固定的作用是什么？染色过程中应注意哪些环节？答：原理及步骤健实验课本71页。
固定作用：使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上12. 革兰氏染的原理及步骤是什么？革兰氏染色后的正确结果是什么颜色？答：原理见实验课本82页步骤：初染、媒染、脱色、复染结果颜色：阳性：菌体保持原有的蓝紫色阴性：洗脱后菌体变为无色，用复染剂染色后又变为复染剂颜色13.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？答：（1）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；（2）脱色，此环节最关键。
微生物学考试重点归纳
绪论1.微生物：微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称。
个体微小，单细胞或个体结构简单的多细胞甚至无细胞结构的低等生物的总称。
通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。
微生物包括细菌、病毒、霉菌、酵母菌等。
（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。
）分类：原核类：细菌（真菌类、古生菌）、放线菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体、衣原体真核类：真菌（酵母菌、霉菌）原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒（类病毒、阮病毒、拟病毒）2.微生物的五大共性一、体积小，面积大二、吸收多，转化快，三、生长旺，繁殖快四、适应强，易变异，五、分布广，种类多，3．微生物的发展史巴斯德——微生物学奠基人（免疫学-预防接种，巴斯消毒法，雁颈瓶实验）科赫——细菌学奠基人（科赫法则，证实了疾病的病原学说）第一章原核生物的形态、构造和功能细菌定义：狭义的细菌是指一类细胞细而短，结构简单，细胞壁坚韧，多以二等分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生物。
广义的细菌则是指所有原核生物。
1. a细菌形态：球菌、杆菌（最常见）、螺旋菌b细菌细胞的构造细菌细胞的基本结构包括：细胞壁、细胞膜、细胞质、核区、间体、核糖体、气泡、质粒和储藏物。
特殊结构包括：鞭毛、菌毛、性菌毛、糖被（包括荚膜和粘液层）、芽孢和伴孢晶体等。
细胞壁概念：位于细胞最外的一层厚实、坚韧的外被，主要由肽聚糖构成。
具有固定细胞外形和保护细胞不受损伤等多种生理功能。
功能：1固定细胞外形和提高机械强度，使其免受渗透压等外力的损伤2为细胞生长、分裂、鞭毛运动所需；3阻止大分子有害物质（某些抗生素和水解酶）进入细胞4赋予细菌特定的抗原性以及对抗生素和噬菌体的敏感性缺壁细胞四类缺壁细胞a．L型细菌：指那些实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷菌株。
L型细菌在固体平板上生长形成煎鸡蛋状小菌落b. 原生质体：用人为方法，在细菌生长培养基中加入抑制细胞壁合成的物质，如青霉素、丝裂霉素C，或用溶菌酶分解掉细菌的细胞壁而形成的仅有一层细胞膜包裹的圆球状渗透敏感细胞，一般由革兰氏阳性细菌形成c. 球状体：用溶菌酶、青霉素等处理革兰氏阴性细菌形成的去壁不完全的近球状体。
微生物实验思考题参考答案及知识要点
微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。
因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
美蓝浓度高了，代谢不太活跃的活细胞也会被染色，从而使观察到的死细胞较多，活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。
如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。
脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。
2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。
固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。
在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。
最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
4. 涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。
固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。
微生物学检验重点知识总结
微生物学检验重点知识总结微生物学是研究微生物的结构、生理、生化、生态以及与人类和环境的关系的一门学科。
在微生物学检验中，掌握以下重点知识是非常重要的。
1.微生物分类学：微生物可以分为原核生物和真核生物。
原核生物包括细菌和古细菌，真核生物包括真菌、原生动物和线虫等。
了解微生物的分类和命名体系，对于正确识别和鉴定微生物是至关重要的。
2.微生物培养技术：微生物的培养是检验微生物的基础。
掌握常见的微生物培养方法，如液体培养、平板培养和深层培养等，并了解培养基的配制和消毒操作的方法。
3.微生物的生长特性：微生物的生长特性包括生长曲线、生长速率、最适生长温度和最适生长pH等。
了解微生物的生长特性对于选择合适的培养条件和进行微生物检验是非常重要的。
4.微生物的鉴定方法：微生物的鉴定是微生物学检验的重点。
常见的微生物鉴定方法包括形态学观察、生理生化特性检测、免疫学检测和分子生物学检测等。
掌握常用的微生物鉴定方法和技术，可以准确快速地鉴定微生物。
5.微生物与人类健康的关系：微生物在人类健康中起着重要作用。
了解微生物对人类健康的影响，如微生物的致病机制、致病微生物的鉴定和抗微生物药物的应用等，有助于预防和治疗微生物引起的疾病。
6.微生物在环境中的作用：微生物在环境中起着重要的生态作用。
了解微生物在土壤、水体和大气中的功能和影响，对于环境保护和资源利用具有重要意义。
7.微生物学检验方法：微生物学检验方法包括微生物计数、微生物培养、抗微生物药敏试验、细菌鉴定和病毒检测等。
掌握常见的微生物学检验方法和技术，能够准确、快速地检测微生物。
8.检验结果的解读和分析：对于微生物学检验结果的解读和分析是非常重要的。
了解常见的微生物学检验参数和阈值，能够根据检验结果判断微生物的致病性和药物敏感性等。
总结起来，微生物学检验的重点知识包括微生物的分类和命名、微生物培养技术、微生物的生长特性、微生物的鉴定方法、微生物与人类健康的关系、微生物在环境中的作用、微生物学检验方法以及检验结果的解读和分析等。
病原微生物实验考试总结
【培养基】【填空】真菌培养（条件、培养基）：三高三低：高糖、高湿度、高氧；低营养、低温、低ph。
真菌培养基：沙保弱培养基真菌三种类型的菌落：酵母型菌落、类酵母型菌落、丝状菌落细菌在液体培养基中可呈现的生长方式（3）：均匀浑浊，絮状沉淀，菌膜生长（或腐败性恶臭）。
半固体培养基两种生长状态：穿刺线两侧羽毛状生长，为动力阳性。
无鞭毛菌沿穿刺线线状生长，为动力试验阴性。
观察细菌的计量单位为μm，油镜观察，1000倍革兰染色可观察细菌的：大小，形态，排列，染色性。
细菌分类：球菌、杆菌、螺旋菌细菌的几种特殊结构：荚膜、鞭毛、芽孢。
常见的细菌变异现象：L型变异；菌落变异；鞭毛变异；耐药性变异S-R变异（中文名称、原理）：菌落变异。
菌落有光滑（S）型和粗糙（R）型两种。
S型菌落表面光滑湿润、边缘整齐；细菌经人工培养多次传代后，菌落表面粗糙干燥、边缘不整齐。
由光滑型变为粗糙型，称为S-R变异。
H-O变异（中文名称、原理）：鞭毛变异。
有周鞭毛的变形杆菌，普通琼脂培养基上具有迁徙生长的现象，菌落形似薄膜，为H菌落；若将此菌点种在0.1%苯酚的培养基上，鞭毛形成收到抑制，不再出现迁徙现象，在点种处形成不向外扩展的单个菌落，为O菌落。
失去鞭毛的变异为H-O变异。
血凝试验：流感病毒表面具有血凝刺突，其成分为糖蛋白，能与某些动物或人红细胞表面的糖蛋白受体结合，出现红细胞凝集的现象。
血凝效价：血凝试验中‘++’表示有半数鸡红细胞凝集，在管低铺成薄膜，不凝集的红细胞在管底中心形成小圆点。
以出现‘++’的病毒液的最高稀释度为~平板划线原理：在划线过程中，线上的微生物越来越少，进而达到分离的目的，经培养后可获得由单个细胞生长而成的菌落。
鞭毛观察（3）：电镜观察，鞭毛染色后光镜下观察，半固体接种（或悬滴观察活菌运动）。
最重要的消毒方法：高压蒸汽灭菌，可达121度，维持15'-30'小白鼠拖腿实验常用于鉴定破伤风梭菌的破伤风痉挛毒素H2S生成实验：判断细菌分解含硫氨基酸的能力，培养基中出现黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀白喉棒状杆菌：阿伯特（Alert）染色法，异染颗粒。
微生物检测分析知识点总结
微生物检测分析知识点总结引言微生物检测分析是指对环境中的微生物进行检测和分析的过程，它是一项非常重要的工作，可以帮助我们了解环境中的微生物种类和数量，从而得出相关结论。
在医疗、食品安全、环境保护等领域，微生物检测分析都扮演着至关重要的角色。
本文将围绕微生物检测分析的相关知识点展开探讨，并对其进行总结和归纳。
一、微生物检测技术1.1 传统方法传统方法是指使用培养基培养微生物并观察其生长情况，然后通过显微镜观察微生物的形态和结构，这种方法主要用于对微生物数量较大的情况进行检测。
1.2 生化鉴定法生化鉴定法是通过检测微生物的生化代谢产物来鉴定微生物的种属，常用作肠道菌属和革兰氏阴性杆菌的鉴定。
1.3 分子生物学方法分子生物学方法是通过检测微生物的DNA序列来进行检测分析，这种方法具有快速、准确、灵敏度高等优点，已经成为微生物检测分析的重要手段。
二、微生物检测分析的主要内容2.1 微生物的种类和数量微生物检测分析的一个重要内容是确定样本中的微生物种类和数量，通过分析微生物的种类和数量，我们可以更好地了解样本的微生物污染情况，并采取相应的措施进行处理。
2.2 微生物的生长特性微生物的生长特性是指微生物在不同环境条件下的生长情况，包括生长速率、适宜温度、适宜pH值等，通过了解微生物的生长特性，我们可以更好地控制和预防微生物的生长。
2.3 微生物的致病性部分微生物具有致病性，通过微生物检测分析，我们可以了解样本中是否存在致病微生物，从而采取相应的处理措施，保护人们的健康安全。
三、微生物检测分析的应用领域3.1 医疗领域在医疗领域，微生物检测分析主要应用于临床感染性疾病的诊断和治疗，包括细菌、病毒、真菌等致病微生物的检测和鉴定。
3.2 食品安全领域在食品生产、储藏和加工过程中，微生物污染是一个严重的问题，微生物检测分析可以帮助我们及时发现和处理食品中的微生物污染，并确保食品的安全性。
3.3 环境保护领域环境中的微生物对环境的稳定和生态平衡起着重要的作用，微生物检测分析可以帮助我们了解环境中微生物的种类和数量，从而更好地进行环境保护和管理。
病原微生物考试重点总结的
质粒：是细菌染色体外的遗传物质，为双股闭合环状DNA可独立与染色体外并自行复制，也可整合到染色体上。
中介体：细菌细胞膜向细胞浆内陷，并折叠形成囊状物称为中介体。
菌毛：许多革兰氏阴性菌和少数革兰氏阳性菌菌体表具有的数量众多比鞭毛细、短、直，类似毛发样的丝状物，称菌毛。
荚膜：某些细菌的细胞壁外包裹着一层排列有序且不易被洗脱的粘性物质，厚度约200nm，称为荚膜。
芽孢：很多革兰氏阳性菌在一定条件下，胞浆脱水浓缩，在菌体内部形成具有多层膜包裹的圆形或卵圆形的小体，称为芽胞。
热原质：或称致热源，是细菌合成的一种注入人或动物体内能引起发热反应的物质，及细胞壁的脂多糖。
噬菌体：是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒。
转化：受体菌直接摄取供体菌的游离DNA片段并整合到自己的基因中，从而获得新的遗传性状，成为转化。
转导：以温和噬菌体为载体，将供体菌的一段DNA转移至受体菌内，使受体菌获得新的性状，称为转导。
溶原性转换：溶原性细菌因染色体上整合有前噬菌体，从而新的遗传性状，称为溶原性转换。
接合：是指细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质从供体菌转移给受体菌，使受体菌获得新的遗传性状。
消毒:消除和杀灭物体上或环境中的病原微生物或其他有害因子，但并不以能杀死全部非病原微生物的方法。
灭菌：杀死物体上所有微生物的方法，包括杀死芽胞。
要求比消毒高，以杀死芽孢为指标。
毒血症：产生外毒素的病原菌只在局部生长繁殖，病原菌不能进入血流，但其产生的外毒素进入血循环，达到感靶器官，引起组织损伤，产生特殊的毒性症状。
菌血症：病原菌侵入血流后，但未在其中生长繁殖，只是短暂、一过性地经过血液循环到达体内适宜部位再繁殖致病。
败血症：病原菌侵入血流后，在其中大量生长繁殖并产生毒性物质，引起全身中毒症状。
17.脓毒血症：化脓性细菌侵入血流后，在其中大量繁殖，通过血流扩散到机体其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。
外毒素：是多数革兰氏阳性菌和少数革兰氏阴性菌在生长繁殖过程中释放到菌体外的蛋白质。
病原微生物实验重点
病原微生物实验重点高压蒸汽灭菌（最常用，最有效的一种湿热灭菌法）的原理和作用：原理：如果蒸汽被限制在一个密闭的容器（高压蒸汽灭菌器）中，随着压力的升高，蒸汽的温度也相应升高。
在103.4KPa蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持20-30min可杀灭包括细菌芽孢在内的所有微生物（但不能杀灭活朊粒）作用：适用于包括液体在内的各种耐热，耐潮湿物品的灭菌血清肉汤培养基的用途：用于培养乙型溶血性链球菌等营养要求较高的细菌血琼脂培养基的用途：主要用于分离培养营养要求较高的细菌和观察某些细菌的溶血现象双糖铁培养基的原理及用途：双糖培养基乳糖：葡萄糖=10:1，若细菌能分解两种糖，因产酸量多，整个培养基将由红变黄；若只能利用葡萄糖，因产酸量少，斜面表面积大，有机酸易挥发氧化，结果培养基底部变成黄色，斜面仍保持红色。
该培养基还含有亚铁离子，可与硫化氢生成黑色沉淀，所以利用此培养基还能观察到某些细菌分级含硫氨基酸产生硫化氢的情况。
由于该培养基是半固体培养基，还可用于有无鞭毛（痢疾杆菌无鞭毛）的鉴定。
本培养基主要用于肠道致病菌的鉴定。
S-S琼脂培养基的原理及作用：①主要用于分离肠道致病性沙门菌属和志贺菌属的细菌②培养基的选择成分主要体现在煌绿对球菌生长有抑制作用，有助于肠道致病菌的生长；胆盐，枸橼酸钠，硫代硫酸钠可抑制革兰阳性细菌和大多数的大肠埃希菌属细菌的生成，枸橼酸铁能中和中性红的毒性作用，并能与硫代硫酸钠作为还原剂，避免某些细菌产生的硫化氢被氧化③培养基的鉴别作用体现在不发酵乳糖的沙门菌属和志贺菌属细菌，在平板上形成的菌落不着色，呈半透明。
大肠埃希菌能发酵乳糖，产生的酸使胆盐沉淀，胆盐与中性红结合，使菌落呈红色，在平板上可见培养基中红色成片的乳浊状沉淀。
某些变形杆菌和沙门菌还能分解含硫氨基酸产生硫化氢，使菌落中心成黑色。
此外，细菌在该平板上生长后，分解蛋白质产生氨基酸等碱性代谢物，使平板PH值升高，培养基由红变黄罗氏培养基的用途：主要用于结核分枝杆菌的培养（结核杆菌在该培养基上生长缓慢，呈菜花样）油镜的放大倍数：90或100（光学显微镜的分辨率为0.25μm）观察细菌鞭毛所用方法：压滴法，悬滴法，半固体鞭毛穿刺法细菌的革兰染色法：①原理：革兰阳性细菌的细胞壁结够比较致密，肽聚糖含量高且交联度大，脂质含量少，乙醇脱色过程中，虽然能溶解细胞壁的脂质而在壁上形成小孔，但脱水作用使细胞壁收缩构成屏障，通透性降低，阻止细胞内的结晶紫-碘复合物的溢出，细胞仍保持结晶紫初染的紫色。
(完整版)微生物实验考试重点
1．微生物的纯培养物由一种微生物组成的细胞群体通常是由一个单细胞生长繁殖形成。
2．菌落：单个微生物细胞在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成的肉眼可见的、有一定形态的子细胞生长群体。
3.灭菌：是指物体中包括芽孢在内的所有微生物都被杀死或消除。
4.消毒杀死或灭活物质或物体中所有病原微生物的措施消毒起到防止感染或传播作用5.无菌技术：在分离、转接及培养纯种微生物时，防止其被环境中微生物污染或其自身污染环境的技术。
6.鉴别培养基：在培养基中加入能与特定微生物的代谢产物发生特征性化学反应的化学物质，用于鉴别不同类型微生物。
7.选择培养基：根据不同微生物的营养需求或对某种化学物质敏感性不同，在培养基中加入相应营养物质或化学物质，抑制不需要微生物的生长，将所需微生物从复杂的微生物群体中选择分离出来。
8.基础培养基：含有一般微生物生长所需基本营养物质的培养基。
9.合成培养基：由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基，也称为化学限定培养基。
10.平板划线法：用接种环在培养平板表面划线接种微生物，使微生物细胞数量随着划线次数的增加而减少，并逐步分开。
保温培养后，在固体培养基表面得到生长分离的微生物菌落。
11.稀释倒平板法：将待分离的材料稀释后与已熔化并冷却至50°C左右的琼脂培养基混合，摇匀后制成可能含菌的培养平板，保温培养后分离得到的微生物菌落生长在固体培养基表面和里面。
12．平板菌落计数法：将适当稀释的样品涂布于琼脂培养基表面，培养后活细胞能形成菌落，通过计算菌落数能知道样品中的活菌数，该方法称为平板计数或菌落计数。
二．填空题（每空1分，共20分）1.用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括：平板划线分离法/稀释涂布平板法、稀释倒平板法。
2.霉菌菌体均由分支或不分支的菌丝构成。
许多菌丝交织在一起，称为菌丝体。
在固体培养基上，部分菌丝深入培养基内吸收养料，称为营养菌丝体；另一部分则向空中生长，称为气生菌丝体。
微生物学考试重点内容包含名词解释问答题(最新整理)
1微生物一切肉眼看不见或看不清的微笑生物的总称。
包括原核类：细菌，放线菌，蓝细菌，支原体，立克次氏体，衣原体真核类：真菌，原生生物，显微藻非细胞类：病毒，亚病毒2微生物学发展史(1)分期史前期;初创期;奠基期;发展期;成熟期实质: 朦胧阶段; 形态描述阶段; 生理水平研究阶段;分子生物学水平研究阶段; 开创者劳动人民; 列文.虎克;①巴斯德②科赫; E.BUCHNER-; J.WATSON和F.CRICK-; 特点①未见微生物个体②凭经验利用微生物; ①观察微生物个体②形态描述; ①微生物学建立②创立微生物学方法③实践-理论-实践④建立分支学科⑤寻找病原菌; ①酵母菌②代谢系统③普通微生物学④寻找有益代谢产物⑤微生物工业化培养技术; ①微生物生命活动规律②发酵工程③分支学科的发展④基础理论和实验技术⑤微生物基因组;单细胞蛋白也叫微生物蛋白，是用许多工农业废料及石油废料人工培养的微生物菌体锁状联合担子菌的次生菌丝每一个细胞都有二个核，其中一个核来自母本，一个来自父本，当双核细胞进行细胞分裂时，在二个核之间处生一个短小弯曲的分枝，核移动一个核进入钩，一个留在菌丝。
两个核分裂后钩中保留一个核菌丝中二个核一往前一个往后移，钩状突起向下弯曲与细胞壁接触溶化，分枝基部生分隔膜，在原分支外形成一隔膜，产生一个新细胞双核体，在分隔处保留一个桥形结构称锁状联合。
革兰氏染色法细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下革兰氏阳性菌（G+）此色不被脱去，革兰氏阴性菌（G—）可被脱去缺壁细菌细胞壁是细菌细胞的基本构造特殊情况下也有几种细胞壁缺损的或无细胞壁的细菌存在L型细菌L型指细菌发生细胞壁缺陷的变型荚膜是某些细菌在细胞壁外包围的一层粘液性物质，一般由糖和多肽组成芽孢有些细菌在一定条件下细胞质高度浓缩脱水所形成的一种抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体菌落细菌在固体培养基上（内）生长发育，形成以母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞的集团基内菌丝孢子落在固体基质表面并发芽后，不断伸长分枝并以放射壮向基质表面和内层扩展形成大量色浅较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的菌丝噬菌斑当一个噬菌体感染一个敏感细胞后，隔不久即释放出一群子代噬菌体，在固体培养基中，它们通过琼脂层的扩散又侵染周围的宿主细胞，并引起它们的裂解，如此经过多次重复，就出现了一个由无数噬菌体粒子构成的群体—噬菌斑，它是透亮不长菌的小圆斑，每一个噬菌斑是由一个噬菌体粒子形成的烈性噬菌体凡在短时间内能连续完成吸附、侵入、增殖、成熟、裂解这五个阶段而实现其繁殖的噬菌体溶源性噬菌体附着或整合在宿主染色体上，一道复制。
微生物学检验重点知识归纳总结（超详细）（精华版）
绪论1. 微生物的定义与特点一，微生物的概念与特点; 微生物的分类；1. 微生物（microorganism ）是一群个体微小，结构简洁，肉眼不能直接观察，必需借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍至数万倍才能观看到的微小生物的总称；2. 微生物的特点个体微小，结构简洁比表面积大，吸取多，转化快繁衍快，代谢强适应强，易变异种类多，分布广1. 微生物类型依据微生物大小，结构和组成不同分为三类型2. 病原微生物的定义病原微生物：是指能引起动物，植物或人类产生疾病的微生物；3. 医学微生物学的进展简史；.微生物的发觉与讨论（1）列文虎克创造显微镜，最早观看到微生物；微生物学讨论的创始人：巴斯德，科赫，李斯特第一章第一节细菌的基本性状细菌的形状与结构1.细菌细胞壁的结构和功能，肽聚糖结构及其化学组成；革兰阳性与革兰阴性细菌细胞壁的主要区分（一）细胞壁化学组成与结构，革兰染色共有组分：肽聚糖特别组分：G+ 菌，G- 菌不同革兰阳性菌细胞壁特别组分：磷壁酸革兰阴性菌细胞壁特别组分：外膜革兰阴性菌细胞壁肽聚糖2.细胞壁的功能：:聚糖骨架，四肽侧链（1）维护细菌固有形状和抗击低渗作用；（2）物质交换作用；（3）屏障作用；（4）免疫作用；（5）致病作用；（6）与细菌药物敏锐性有关；G+ 菌与G- 菌细胞壁结构比较. 细菌细胞膜的结构与真核细胞基本相同，. 细菌细胞膜可形成一种特有的结构，称2.细菌荚膜，鞭毛和菌毛的功能；荚膜：功能：由磷脂和多种蛋白质组成，中介体；但不含胆固醇；有抗吞噬和抗击杀菌物质的杀菌作用，增强细菌的侵袭力，构成细菌致病力的重要因素之一；②具有免疫原性；③鉴别细菌和血清学分型鞭毛：功能：细菌的运动器官菌毛一般菌毛：具有黏附性，与细菌致病性有关；性菌毛：与细菌的遗传变异相关3.芽胞结构特点，意义，与消毒灭菌的关系；细菌L 型的形状特点，检验要点；芽胞：某些细菌（主要为革兰阳性杆菌）在肯定条件下，细胞质浓缩脱水而形成一个折光性很强，具有多层膜状结构，通透性很低的圆形或卵圆形的小体；L 型细菌：细胞壁缺陷的细菌；常发生在作用于细胞壁的抗菌药物治疗过程中；依据细胞壁缺陷程度分：原生质体（完全失去细胞壁，见于原生质球（细胞壁部分缺损，见于G+菌，仅在高渗环境中存活)G-菌，在高渗或非高渗环境中均能存活）4.G+ 菌和G- 菌细胞壁结构的差异及其意义；其次节细菌的生理细菌的生长条件,生长周期及各期的特点;IMViC 试验的组成及机制;细菌分解及合成代谢产物的种类及意义；细菌的生长繁衍（一）细菌生长繁衍的条件1. 充分的养分物质2. 相宜的酸碱度3. 合适的温度4. 必要的气体环境包括：水，碳源，氮源，生长因子等；多为～；多数病原菌为35℃～37℃；O2 和CO 2；主要是按细菌对O2 的需要与否，将细菌分为：细菌生长繁衍的规律细菌的繁衍方式：无性二分裂；细菌的繁衍速度：大多数细菌20～30 分钟即可分裂一次；2.细菌的养分类型和养分机制，自氧菌与异氧菌的概念；3.细菌的生长曲线及其特点；（一）能量代谢细菌猎取能量的途径——生物氧化；细菌能量代谢的主要类型：（二）分解代谢检测细菌糖分解产物的常用试验：糖发酵试验，甲基红试验，VP 试验等；检测细菌蛋白质和氨基酸分解产物的常用试验：吲哚（靛基质）试验，硫化氢试验，苯丙氨酸脱氨酶试验等；其他检测细菌分解产物的常用试验：尿素分解试验，枸橼酸盐利用试验等；第三节细菌与环境1 正常菌群的概念和生理功能；条件致病菌的概念2.正常菌群的生理功能；条件致病菌的概念3.消毒，灭菌，无菌，无菌操作等概念；高温消毒灭菌法及其应用；二，细菌的掌握（一）基本概念：消毒杀死物体或介质中病原微生物的方法；灭菌杀灭物体或介质中所有微生物的方法；无菌无活菌存在的状态；无菌操作防止微生物进入机体或物体的操作技术；防腐防止或抑制细菌生长繁衍的方法；4.常用物理和化学消毒灭菌方法及其应用；噬菌体与宿主的相互关系；其次章真菌的基本性状真菌的概念真菌的分类真菌孢子与细菌芽胞的区分第三章病毒的基本性状病毒的大小病毒的结构病毒的增殖病毒的复制周期第四章微生物与感染细菌致病三大因素细菌内外毒素的区分毒血症，菌血症，败血症，脓毒血症的概念全身感染的类型其次篇第五章第一节微生物检验的基本技术细菌的检验技术细菌形状检验技术细菌染色的一般程序染色标本检查的一般程序革兰氏染色法，抗酸染色法的原理，方法； 2.革兰染色法【方法】其次节细菌的接种与培育技术调配—溶化—调Ph—过滤澄清—分装—灭菌—检定—储存细菌在各种培育基上的生长现象及观看要点；培育基的概念培育基的分类第三节细菌的生化鉴定技术糖( 醇,苷)类发酵试验，O/F 试验，MR 试验，VP 试验的原理，操作，结果判定要点及其应用；I 试验，C 试验，氧化酶，触酶，血浆凝固酶氢氧化钾拉丝试验及理，操作要领，观看结果要点及其应用；一，碳水化合物的代谢试验1，糖（醇，苷）类发酵试验KIA 和TSI 的试验原原理：多糖→单糖→丙酮酸→酸性产物→pH ↓ →呈酸性变色(或显现气泡2，O/F 试验(或产气)原理：依据细菌在分解葡萄糖的代谢过程中对氧分子需求的不同，将细菌分为氧化，发酵和产碱型三类3，甲基红试验原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，进一步分解生成大量混合酸，使培育pH 下降至以下，加入甲基红后，出现红色反应；为甲基红试验阳性；4，V-P 试验原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中，乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与胍基化合物结合，生成红色化合物，是为V-P 试验阳性；5，β-半乳糖苷酶试验（ONPG ）原理：有的细菌可产生β -半乳糖苷酶，能分解邻硝基酚β-D 半乳糖苷(ONPG) 而生成黄色的邻硝基苯酚，该试验也称为ONPG 试验；6，七叶苷水解试验原理：某些细菌能分解七叶苷产生葡萄糖与七叶素，七叶素与培育基中的Fe2+结合后，形成黑色的化合物，使培育基变黑；二，蛋白质和氨基酸的代谢2，硫化氢试验硫化氢与培育基中的亚铁盐或铅盐结合生原理：细菌产生酶，分解含硫氨基酸生成硫化氢，成黑色化合物；3，尿素酶试验原理：细菌产生脲酶，水解尿素生成氨和二氧化碳，培育基呈碱性反应4，苯丙氨酸脱氨酶试验使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与三氯化铁作用，原理：细菌产生苯丙氨酸脱氨酶，形成绿色化合物三，碳源利用试验枸橼酸盐利用试验细菌在生长过程中分解枸橼酸原理：有的细菌能利用培育基中的枸橼酸盐作为唯独的碳源，盐产生碳酸盐，使培育基呈碱性反应四，酶类试验1，氧化酶（细胞色素氧化酶）试验，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺氧原理：某些细菌具有氧化酶（细胞色素氧化酶）化生成红色的醌类化合物2，触酶试验继而形成氧分子显现原理：细菌产生的触酶（过氧化氢酶）能催化过氧化氢放出初生态氧，气泡；3，凝固酶试验（试管法）原理：金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白；4，凝固酶试验（玻片法）原理：金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白5，硝酸盐仍原试验原理：某些细菌能仍原培育基中的硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮磺酸，再与α-萘胺结合，生成N- α-萘胺偶氮苯磺酸(红色化合物第六章真菌检验技术真菌感染性疾病的微生物学检查原就第七章病毒检验技术病毒标本的采集和运输留意事项；第八章细菌对抗菌药物敏锐试验药物敏锐试验的基本概念，常用方法抗菌药物敏锐试验方法纸片扩散法稀释法E-test 法需氧菌及兼性厌氧菌的药物敏锐试验告）；（K-B 法和稀释法的原理，方法，结果判定及正确发报第三篇第十章常见微生物鉴定技术需氧和兼性厌氧球菌葡萄球菌，链球菌，肺炎链球菌，淋病奈瑟菌的主要形状特点，培育特性，分类依据及分类；病原性球菌标本采集种类，检验鉴定程序，鉴定要点，检验鉴定依据及报告要点；第十一章革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌第一节肠杆菌科概述肠杆菌科细菌：杆菌，多数有鞭毛，菌毛2.发酵葡萄糖，兼性厌氧3.氧化酶阴性4.仍原硝酸盐为亚硝酸盐5.触酶（＋）肠道挑选性培育基：麦康凯琼脂，伊红美蓝琼脂，SS琼脂等肠杆菌科抗原：O抗原（菌体抗原），K 抗原（荚膜抗原），H抗原（鞭毛抗原）等肠杆菌科鉴定依据： 1.革兰染色2. 触媒，氧化酶，硝酸盐仍原3.KIA ，MIU ，IMViC , 其他生化反应4.血清玻片凝集（鉴定到种，型或血清型）IMViC 试验：吲哚（I ），甲基红（M），VP（V），枸橼酸盐利用（C）四种试验，常用于鉴定肠道杆菌；二，埃希菌属形状染色： 1. 短杆菌2. 革兰染色阴性3. 有鞭毛4. 有菌毛培育特性：符合肠杆菌特点EMB——紫黑色有金属光泽乳糖发酵菌落S-S ——桃红色乳糖发酵菌落生化反应：IMViC（++-- ）大肠杆菌KIA：A A ＋－血清型表示法：O：K：HETEC肠毒素：耐热肠毒素（ST）o不耐热肠毒素（L T），65 C30min 被破坏引起腹泻的大肠埃希菌：肠产毒性大肠埃希菌ETEC肠致病性大肠埃希菌EPEC肠侵袭性大肠埃希菌EIEC肠出血性大肠埃希菌EHEC肠凝结性大肠埃希菌EAECEIEC 毒力测定试验：豚鼠眼结膜试验卫生学标准：每ml 饮水中细菌总数≤100 个，每1000ml 水中大肠杆菌菌群数≤ 3 个，每100 ml 瓶装汽水，果汁中，大肠杆菌菌群数≤三，沙门菌属5 个；对人类有致病性：肠热症；食物中毒；败血症-形状染色：G杆菌；周身鞭毛培育和生化反应：不分解乳糖分解葡萄糖；分解蛋白质，产生H2S伤寒沙门菌菌落特点（EMB，MA C）：无色透亮菌落伤寒沙门菌菌落特点（SS）：无色透亮或半透亮，中心黑色菌落伤寒沙门菌KIA：K A－＋标本实行：第1-2W，血，骨髓；第2-3W，粪便，尿；全程取骨髓肥达反应: 用已知伤寒沙门菌O，H 和甲型副伤寒沙门菌和乙型副伤寒沙门菌H 抗原与病人血清做定量凝集试验，用以帮助诊断肠热症；TO≥1：80，TH≥1：160；PA，PB 均≥1：80 才有意义；动态观看：双份血清抗体四倍上升有诊断意义四，志贺菌属形状染色：符合肠杆菌特点，有菌毛，无鞭毛，无动力是本菌与其它肠道致病菌主要区分点培育特性：肠道鉴别培育基上的无色透亮，乳糖不发酵菌落抗原分类：依据O抗原分4 群，40 余型，我国常见 B 群A 群——痢疾志贺菌群——福氏志贺菌BC群——鲍氏志贺菌群——宋氏志贺菌D培育和生化反应：不分解乳糖分解葡萄糖菌落特点（EMB，MA C）：无色透亮菌落KIA：K A－－MIU：－－－外毒素： A 群（Ⅰ，Ⅱ型）产生志贺毒素（ST）有3 种生物活性1. 肠毒素：类似ETEC毒素，霍乱肠毒素作用——水样泻2. 细胞毒性：对人肝细胞，肠黏膜细胞有毒性，引起变性坏死3. 神经毒性：损耗动物神经系统（麻痹，死亡）快速诊断：荧光菌球试验；协同凝集试验六，变形杆菌属形状染色：有周鞭毛培育特性：扩散生长，有迁徙生长现象；在培育基中（含5％琼脂）加入％石炭酸就形成单个菌落；肠道挑选性培育基上形成无色透亮菌落变形杆菌KIA：K A+ +MIU：+ +/- +八，耶尔森菌属历史：三次世界性大流行，是我国重点监控的自然疫源性传染病；—形状染色：G 球杆菌，两极浓染培育特性：一般培育基，生长缓慢，24-48h ，R 型“破草帽”状菌落菌落特点（EMB，MA C）：无色透亮菌落甲类烈性传染病：鼠疫（黑死病）常见临床类型：腺鼠疫，败血型鼠疫，肺鼠疫标本采集：临床标本（淋巴结穿刺液，血液或痰标本）；非临床标本（尸检取病变组织，鼠标本应严格消毒体表，再进行采集）其次节弧菌科一群菌体短小，弯曲成弧形或直杆状的革兰阴性细菌；具有一端单一鞭毛，运动快速；弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见弧菌属（一）霍乱弧菌霍乱弧菌的疫源地：印度恒河三角洲（O1群，古典生物型）；印尼苏拉威西岛（O1群，埃托生物型）；孟加拉湾（O139 群）已发生七次世界性的霍乱大流行：均由霍乱弧菌的O1群引起，前六次为霍乱弧菌的古典生物型，第七次为埃尔托生物型形状：新从患者标本中分别出的细菌革兰染色阴性，弧形或逗点状；在患者“米泔水”样便中，可呈头尾相接的“鱼群”样排列；菌体一端有鞭毛，悬滴观看时呈“穿梭”样运动培育特性：养分要求不高，故用Ph8.4-9.2 碱性培育基；分别（挑选）能在无盐培育基中生长（区分其它弧菌）；在的碱性胨水中经35℃4~6h 增菌后可在液体表面大量繁衍形成菌膜抗击力：较弱；水源性传播，水性爆发；怕酸，正常胃酸4min霍乱肠毒素（C T）：最猛烈的致泻毒素吐泻期：猛烈吐泻，米泔样免疫力：病人愈后可获得坚固免疫O1 群霍乱弧菌的O 抗原：由A，B，C 三种抗缘由子组成；通过不同组合可形成三个型别：由AB组成小川型，AC组成稻叶型，ABC组成彦岛型常用的挑选性培育基：1. 硫代硫酸盐- 枸橼酸盐- 胆盐- 蔗糖(TCBS) 琼脂平板：霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色2.4 号琼脂，庆大霉素琼脂：生长并将培育基中的碲离子仍原成元素碲, 形成灰褐色菌落中心3. 能在无盐培育基上生长古典生物型和埃尔托生物型的区分试验：羊红细胞溶血；鸡红细胞凝集；V-P 试验；多粘菌素 B 敏锐试验；Ⅳ组噬菌体裂解；Ⅴ组噬菌体裂解标本采集和运输：在发病早期，尽量在使用抗菌药物之前采集标本；取患者“米泔水”样便，亦可实行呕吐物或尸体肠内容物，或实行肛门拭子；标本应防止接触消毒液；实行的标本最好就地接种碱性胨水增菌；不能准时接种者可用棉签挑取标本或将肛门拭子直接插入卡－布运输培育基中动力和制动试验：直接取“米泔水”样便，制成悬滴( 或压滴) 标本后，在暗视野或相差显微镜下直接观看呈穿梭样运动的细菌；同法重新制备另一标本涂片，在悬液中加入 1 滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清( 效价≥1：64) ，可见最初呈穿梭状运动的细菌停止运动并发生凝集，就为制动试验阳性快速诊断：将标本接种于含有霍乱弧菌荧光抗体的碱性蛋白胨水中，经37℃4～6h，如有霍乱弧菌，在荧光显微镜下可见发荧光的菌球；本法适用于做大量标本的初筛SPA协同凝集试验：以霍乱弧菌IgG 型抗体与SPA阳性葡萄球菌结合作为试剂，与米泔水样便或增菌液作玻片凝集，立刻显现明显凝集者（＋＋＋）为阳性粘丝试验：将％去氧胆酸钠水溶液于霍乱弧菌混匀制成深厚菌液，1min 内悬液由混变清，并变得粘稠，以接种环挑取时可以拉出丝来（二）副溶血性弧菌具有嗜盐性形状：革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛）培育特性：在无盐培育基上不能生长，最适合生长的氯化钠浓度为 3.5%，超过8%不能生长TCBS琼脂平板: 蔗糖不发酵而呈蓝绿色菌落第三节非发酵革兰阴性杆菌非发酵革兰阴性杆菌：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧，无芽胞的革兰阴性杆菌一，假单胞菌属铜绿假单胞菌所致疾病：条件致病菌；医院感染的重要病原菌；大面积烧伤创面感染的重要病原菌生物学特性：革兰阴性，长短不一，单鞭毛，氧化酶阳性生长温度：25～42℃分别培育与鉴定： 1. 血平板上毛玻璃样，金属光泽，生姜味2. 可产生多种色素：荧光素与绿脓素血琼脂平板：透亮溶血环O/F 试验：氧化型第四节其他革兰阴性苛氧菌一，嗜血杆菌属流感嗜血杆菌所致疾病：原发化脓性感染及继发性感染，包括脑膜炎，鼻咽炎，关节炎，心包炎，鼻窦炎及中耳炎等生物学特性：革兰阴性短小球杆菌分别培育：需要X，V 因子；养分要求高，血琼脂平板培育基，巧克力琼脂培育基菌落特点：巧克力琼脂培育基, 小，无色透亮菌落卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培育时，靠近葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较大，远离葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较小四，布鲁菌属传染源：病兽，以羊，牛，猪多见传播途径：病兽的组织，尿，乳液等通过人体的皮肤，呼吸道，消化道进入人体易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医，皮毛加工，屠宰的工人发病率较高临床表现：长期发热，多汗；关节疼痛及全身乏力，疼痛微生物特性：革兰阴性短小球杆菌培育特性：需氧菌，养分要求较高；生长缓慢（5~7 天）第十二章革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌革兰阳性无芽胞杆菌白喉棒状杆菌+形状与染色: G瘦长微弯的杆菌；一端或两端膨大呈棒状；常排列呈V，L，X 等文字形；异染颗粒——形状上的鉴别特点培育特性：养分要求高，吕氏血清斜面或鸡蛋斜面亚碲酸钾BAP：挑选鉴别培育基，黑色菌落——鉴别依据毒力试验： 1. 体外法：琼脂平板毒力试验（Elek 平板毒力测定）；SPA协同凝集试验；对流电泳2. 体内法：用豚鼠作毒素革兰阳性需氧芽胞杆菌属- 抗毒素中和试验其次节炭疽芽胞杆菌临床意义：炭疽是人兽共患的急性传染病，皮肤炭疽，肠炭疽，肺炭疽等炭疽毒素：爱护性抗原，致死因子，水肿因子传染源：患病食草动物及其制品或被污染物传播途径： 1. 接触——皮肤炭疽食用——肠炭疽2.吸入——肺炭疽3.+形状染色: 致病菌中最大的G杆菌；两端平切，竹节状；有毒株可有明显荚膜芽胞： 1. 椭圆形，小于菌体，位于菌体中心2. 多在有氧条件下形成，25～30℃，在培育基中，土壤内，动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞3. 在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸体严禁解剖培育特性： 1. 一般培育基上卷发状菌落：12～15h 不溶血，18～24h 稍微溶血3. 肉汤：絮状沉淀生长4. 明胶：37℃18～24h 表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状；5.NaHC O3BAP：有毒株-- 黏液型菌落，挑取时呈粘丝状( 鉴别要点)无毒株—粗糙型菌落抗原构造： 1. 菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热，耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli 热沉淀反应），特异性不高，可作追溯性诊断2. 荚膜多肽抗原：荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义标本的采集与处理: 死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消毒皮肤后割取耳朵，舌尖采集少量血液串珠试验: 炭疽芽胞杆菌在每毫升含有0.05-0.5U 青霉素的培育基中，可发生形状变异，形成大而匀称的圆球状并相连如串珠状第十三章分枝杆菌属分枝杆菌是一类瘦长略带弯曲的杆菌，含有分枝菌酸，有分枝生长的趋势而得名；具有抗酸性，故又称抗酸杆菌；结核分枝杆菌所致疾病：通过呼吸道，消化道和损耗的皮肤等多途径感染机体，引起多种脏器的结核病，其中以肺结核为多见致病物质：荚膜，脂质和蛋白质等菌体成分免疫性：有菌免疫或称传染性免疫，细胞免疫在抗感染免疫中起重要作用微生物特性： 1. 分枝状，略带弯曲的抗酸杆菌，抗酸性染色法染色后结核分枝杆菌呈红色，背景呈蓝色2. 专性需氧，养分要求较高，最适生长温度为35℃，生长缓慢, 2 ~5w 才显现肉眼可见的如菜花样粗糙型菌落；结核菌素试验：纯蛋白衍生物(PPD)，注入皮内后如受试者已感染结核，就结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，形成迟发型超敏反应性炎症机体抗结核免疫特点：传染，免疫，超敏反应共存第十四章厌氧性细菌破伤风梭菌，产气荚膜梭菌，肉毒梭菌的形状特点，培育特性；厌氧性细菌的检验鉴定要点和报告方式；第十五章螺旋体，支原体，衣原体，立克次体第一节螺旋体螺旋体：是一种瘦长，松软，螺旋状，运动活泼的原核细胞型微生物钩端螺旋体所致疾病：钩端螺旋体病传染源与储存宿主: 自然疫源性疾病，鼠类和猪为主要储存宿主传播途径：间接接触传播（接触被含菌尿液污染的水源），血液传播，垂直传播生物学特性： 1. 螺旋一端或两端呈钩状2. 有两根周浆鞭毛，运动活泼-3. G，但不易着色，镀银染色成棕褐色梅毒螺旋体所致疾病：梅毒1. 先天性：母体通过胎盘传给胎儿2. 获得性：性传播获得性梅毒临床分期：分为三期1. Ⅰ期（初期）梅毒：感染后 3 周左右局部显现无痛性硬下疳，感染性极强；2. Ⅱ期梅毒：发生于硬下疳显现后2~8 周，全身皮肤，粘膜常有梅毒疹，全身淋巴结肿大3. Ⅲ期（晚期）梅毒：发生感染 2 年后，病变可波及全身组织和器官；基本损害为慢性肉芽肿；病损内螺旋体少但破坏性大-生物学特性：G，但不易着色，镀银染色呈棕褐色；对青霉素，四环素，红霉素等抗生素敏感微生物学检查：标本：Ⅰ，Ⅱ期梅毒取下疳渗出液，梅毒疹渗液或淋巴结穿刺液；先天性梅毒取脐血其次节支原体支原体：是一类没有细胞壁，形状上呈多样性，可通过细菌滤器，能在无生命培育基中生长-的最小的原核细胞型微生物；因其生长后能形成分枝长丝，故命名为支原体；G，但不易着色，Giemsa 染色呈淡紫色；油煎蛋样的菌落所致疾病：支原体肺炎冷凝集试验: 肺炎支原体感染后，患者血清中显现冷凝集素，能在0-4 ℃条件下凝集人红细胞（37℃时却无此效应）；此凝集试验为非特异性的，是肺炎支原体感染的帮助诊断试验衣原体：是一类专性活细胞内寄生，具有特殊发育周期，且能通过细菌滤器的，介于立克次体与病毒之间的原核细胞型微生物第一胜利分别鉴定出沙眼衣原体：我国学者汤飞凡于1956 年能引起人类疾病的衣原体：主要有沙眼衣原体和肺炎衣原体-立克次体：是一类专性活细胞内寄生的G原核细胞型微生物，是引起斑疹伤寒，恙虫Q病，热等传染病的病原体；与节肢动物关系亲密，大多是人畜共患病的病原体反应（外斐反应）：大部分立克次体与一般变形杆菌某些菌株（X19，X k，X2）的Weil-Felix菌体抗原有共同的抗原成分，故可用这些变形杆菌的菌体抗原与不同稀释度的患者血清做凝集反应，诊断立克次体病；第十六章常见真菌1.真菌的概念，生物学性状；真菌感染性疾病的微生物学检查原就；皮肤癣真菌，白假丝酵母菌，新生隐球菌的形状特点及微生物学检验；2.真菌感染性疾病的微生物学检查原就；皮肤癣真菌，白假丝酵母菌，新生隐球菌的形状特征及微生物学检验；第十七章常见病毒第一节呼吸道病毒1.正粘病毒(流感病毒)的结构，型别，抗原变异与流行的关系；微生物学检验；2.正粘病毒(流感病毒)的型别，抗原变异与流行的关系；其次节肝炎病毒1. HAV ，HBV ，HCV ，HDV ，HEV 五型肝炎病毒的生物学特性，微生物学检验；2.乙肝五项的结果分析及临床意义第三节逆转录病毒HIV 的微生物学检验；1. HIV 的生物学特性，致病性，免疫性与防治原就；2.HIV 的生物学特性；第四节其他病毒1.流行性乙型脑炎病毒，出血热病毒，狂犬病毒，疱疹病毒，人乳头瘤病毒的生物学特性及致病性；以上病毒的微生物学检验；2.流行性乙型脑炎病毒，出血热病毒，狂犬病毒，疱疹病毒，人乳头瘤病毒的生物学特性及致病性；第五节肠道病毒1.肠道病毒的共性，种类；2.脊髓灰质炎病毒的生物学特性，致病性与微生物学检验；第十八章临床常见标本的细菌学检验1.临床常见标本采集及运输，检验程序，报告方式，血液标本的细菌学检验，痰液标本的细菌学检验，脑脊液标本的细菌学检验；2.粪便标本的细菌学检验，尿液标本的细菌学检验，脓标本的细菌学检验；。
微生物检验重点知识点总结
微生物检验重点知识点总结微生物检验是临床生物化学检验中的一个重要分支，其主要目的是检测病原微生物的存在和种类，以帮助临床诊断和治疗。
微生物检验涉及到多种技术和方法，包括细菌培养、抗生素敏感性测试、真菌检测等。
在本文中，我们将对微生物检验的重点知识点进行总结，包括微生物培养、菌种鉴定、抗生素敏感性测试等方面。
一、微生物培养1. 细菌培养条件：细菌培养需要适宜的温度、pH值和营养物质。
一般来说，大多数细菌在37摄氏度下生长最适宜，pH值维持在7左右，而营养物质主要包括碳源、氮源和无机盐等。
2. 培养基的选择：根据不同的细菌种类和要求，可以选择不同种类的培养基。
常用的培养基包括营养琼脂、大肠杆菌培养基、葡萄球菌培养基等。
3. 培养方法：常用的细菌培养方法包括平板法、液体培养法和混悬液培养法。
其中，平板法是将含有琼脂的培养基均匀涂抹在培养皿上，使其凝固后可以在上面观察细菌的生长情况。
4. 培养时间：一般来说，细菌培养需要一定的时间来观察其生长情况。
常见的培养时间包括24小时、48小时和72小时等。
二、菌种鉴定1. 形态学鉴定：观察细菌的形态特征，包括细胞形状、大小、颜色等。
常用的方法包括显微镜下观察和染色法。
2. 生理生化鉴定：通过细菌的生理和生化特性来鉴定其种类，包括对碳水化合物的利用、氧气需求、氧化酶活性等。
3. 分子生物学鉴定：采用PCR技术和分子生物学方法对细菌的基因进行检测和分析，以确定其种属和亲缘关系。
三、抗生素敏感性测试1. 纸片扩散法：将含有不同抗生素的纸片放置在琼脂培养基表面，观察其抑菌圈的形成情况，以确定细菌的抗生素敏感性。
2. 微量稀释法：将一定浓度的抗生素溶液与不同浓度的细菌混合，通过改变抗生素浓度来确定最小抑菌浓度，从而确定其抗生素敏感性。
3. 自动化敏感性测试：通过自动化设备和方法对大量细菌菌株进行抗生素敏感性测试，提高测试效率和准确度。
以上是微生物检验的一些重点知识点总结，通过对微生物培养、菌种鉴定、抗生素敏感性测试等方面的了解，可以更好地开展微生物检验工作，为临床诊断和治疗提供有力的支持。
微生物考试总结重点
微生物考试总结重点1.微生物:微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称.包括类群：①原核类的细菌`放线菌`蓝细菌’支原体`立克次氏体和衣原体;②真核类的真菌`原生动物`和显微藻类,以及属于非细胞类的病毒和亚病毒.6.微生物有哪五大共性？其中最根本的是哪一个？为什么？答：①.体积小，面积大；②.汲取多，转化快；③.生长旺，生殖快；④.适应强，易变异；⑤.分布广，种类多。
其中，体积小面积大最根本，由于一个小体积大面积系统，必定有一个巨大的养分物质汲取面、代谢废物的排泄面和环境信息的交换面，并由此而产生其余4个共性。
第一章原核生物的形态、构造和功能1．试设计一张表格，比拟以下6个大类原核生物的主要特性。
2．试图示G+和G-细菌细胞壁的主要构造，并简要说明其异同。
G+细菌与G-细菌的细胞壁都含肽聚糖和磷壁酸；不同的是含量的区分：如下表3．试述染色法的机制并说明此法的重要性。
答：革兰氏染色的机制为：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物。
G+由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次多和交联致密，故遇脱色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，在加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。
反之，G-细菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄和交联度差，遇脱色剂乙醇后，以类脂为主的外膜快速溶解，这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此细胞退成无色。
这时，在经沙黄等红色染料复染，就使G-细菌呈红色，而G+细菌则仍保存最初的紫色。
此法证明白G+和G-主要由于起细胞壁化学成分的差异而引起了物理特性的不同而使染色反响不同，是一种积极重要的鉴别染色法，不仅可以用与鉴别真细菌，也可鉴别古生菌。
4．什么是菌落？试争论细菌的细胞形态与菌落形态间的相关性。
答：菌落即单个（或聚拢在一起的一团）微生物在相宜的固体培育基外表或内部生长、生殖到肯定程度可以形成肉眼可见的、有肯定形态构造的子细胞生长群体。
微生物的实验室培养生物选修一知识点考点
微生物的实验室培养生物选修一知识点考点培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
下面是小偏整理的微生物的实验室培养生物选修一知识点考点，感谢您的每一次阅读。
微生物的实验室培养生物选修一知识点考点培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
培养基按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂(是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂)后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源;糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+(无机氮源)蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有机氮源)等。
只有固氮微生物才能利用N2。
培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验一、培养基制备与消毒灭菌一、培养基：满足微生物生长的营养需要，人工配制的混合营养基质。
用途：用于微生物的分离、培养、增殖、保藏及鉴定。
牛肉膏蛋白胨培养基（用于腐生细菌的培养）马铃薯糖培养基（常用于培养真菌）高氏一号培养基（用于培养放线菌）二、培养基配制原则1）根据营养不同配制不同培养基；2）注意各种营养物质的浓度及配比；3）调节适宜的pH 值；4）考虑加生长因子；5）培养基应物美价廉；6）灭菌处理三、培养基分类1、根据化学组成分类(1)天然培养基完全用天然物质或其浸出汁配制。
成分不确定。
如肉汁、豆芽汁、牛乳、土豆汁是天然营养原料。
酸奶、饮料酒、腐乳、酱类的发酵生产。
优点：配制方便，成本较低，营养丰富。
生产上用缺点：成分不确定。
（2）合成培养基全由化学成分已知的物质配制的培养基。
成分确定。
如：高氏培养基、察氏培养基优点：成分确定，重复性强，宜于科学研究如菌种选育，遗传分析。
实验室用。
缺点：费用较高。
（3）半合成培养基由部分天然物质和一些成份已知的化学药品配制而成。
如：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
优点：营养成分更全面、均衡实验室、发酵业用得最多。
2、根据物理状态分类（1）固体培养基概念：在液体培养基中加入凝固剂——琼脂、明胶、硅胶等。
常用的是琼脂（洋菜）。
琼脂加入量1.5～2.0％。
琼脂的特性：1、成分为多缩半乳糖2、绝大多数微生物不能利用3、融化温度96℃，凝固温度45℃4、对微生物无毒性固体培养基作用：培养菌落进行分离、鉴定、计数、保藏（2）半固体培养基加入凝固剂。
琼脂加入量0.2～0.5%作用：观察细菌的运动状况。
（3）液体培养基不加凝固剂用于发酵业。
液体培养。
3、按用途差异分类（1）基础培养基概念：含有微生物生长繁殖所需的基本营养物质。
用于普通微生物培养。
细菌通用培养基——牛肉膏蛋白胨培养基。
真菌通用培养基——马铃薯蔗糖培养基。
（2）加富培养基在普通培养基中加入某些特殊物质或某些生长素，只适于一种或一类微生物的生长。
特点：某种微生物富集逐渐淘汰其它各种微生物。
（3）选择培养基根据培养微生物的生理特性配制。
可促进某种微生物生长，抑制某类微生物生长。
如：加青霉素的培养基，分离霉菌和酵母菌。
加1%酚——分离放线菌（4）鉴别培养基概念：用以区别不同微生物种类的培养基。
特点：●确保所培养的微生物有丰富的营养条件。
●显示微生物的某些形态构造或生理代谢上的特点。
如：伊红－美兰培养基区分大肠杆菌和产气肠杆菌。
（5）活体培养基用某些活的动植物体或离体的生活组织细胞作培养基。
病毒培养。
四、灭菌消毒：应用理化方法杀灭部分微生物（主要是病原微生物）。
灭菌：应用理化方法杀灭物体上所有微生物。
一）、加热高温灭菌1.干热灭菌▲火焰烧灼灭菌▲热空气灭菌2.湿热灭菌▲常压蒸汽灭菌▲高压蒸汽灭菌▲煮沸法灭菌▲超高温灭菌二）、紫外线灭菌三）、过滤灭菌四）、化学药剂的消毒与灭菌1.高温灭菌：利用高温使菌体蛋白和核酸变性而失去活力以达到杀菌的目的。
2.紫外线灭菌：诱发菌体核酸结构变异，及使空气中氧电离、水氧化而产生杀菌化学物质以杀灭杂菌。
3.过滤除菌：将处理的含菌液体或气体通过细菌过滤器，使杂菌被机械截留从而达到除菌。
4.化学药剂的消毒和灭菌：杀菌剂（破坏微生物的代谢机能并有致死作用）；消毒剂；防腐剂（抑制微生物的生长繁殖）。
干燥热空气箱灭菌用法：160-170℃,2小时（利用热空气灭菌)特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死。
所以温度高、时间长。
高压蒸汽灭菌法:利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，提高温度以达到高温灭菌目的方法。
a 方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2）20min-30min。
b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。
c 注意事项：灭菌开始排净冷空气；灭菌终了，缓慢降压；灭菌结束，趁热取出物品。
干热灭菌的操作⏹包扎。
⏹装箱（物品不可与灭菌箱内壁接触，且不可摆放过挤）⏹灭菌（启动开关，并打开排气孔，待温度升至80℃-100℃关闭排气孔，继续升温至160℃-170 ℃计时，恒温2小时）⏹降温，取物（关闭电源，自然降温到60度开箱取物）高压蒸汽灭菌的操作⏹灭菌前准备（在锅内加适量水）。
⏹装放物品（不要过挤，且容器口端不要与物品接触）⏹加热放气（打开放气阀，待有大量水汽排出，维持3—5分钟，锅内空气排尽，关上放气阀）⏹升温保压（温度，压力升至灭菌所需时计时，压力1.05Kg/cm2,121.3 ℃，20—30分钟）出锅（关闭电源，待指针回零，打开放气阀，稍等一些时间，再取物）★湿热灭菌较干热灭菌效果好1) 特点：温度低、时间短、灭菌效果好。
2) 灭菌效果好的原因：κ菌体内含水量越高凝固温度越低。
κ蒸汽冷凝会放出潜热。
κ饱和水蒸汽穿透力强。
3、高压蒸汽灭菌（1）灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适量的水，将内桶放入。
（2）装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。
盖上锅盖，以两两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。
（3）加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，维持3-5min，锅内空气排尽，关上排气阀。
（4）升温保压：★压力为1.05kg/cm2（121.3℃）,20-30min（5）出锅：隔断热源，自然降温，待压力表指针回到零，打开排气阀，稍等一些时间，再开盖取物。
实验二油镜的使用及细菌基本形态观察一、油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。
原因：1）油镜分辨率高于低倍镜、高倍镜2）油镜汇聚光线的能力大于低倍镜、高倍镜◆分辨率是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（R）R=λ∕（2NA）(λ为入射光波波长；NA为显微镜数值孔径)η为标本、物镜之间介质的折射率。
θ为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的一半。
二、染色荚膜染色: 主要成分多为糖类，无色透明且不易着色常用负染色观察。
负染色是将细菌细胞和背景着色，从而把无色透明、不着色的荚膜结构衬托显现出来。
芽孢染色:细菌芽孢壁厚而致密，透性低，难于染色，但一旦被染色又难于脱色。
因此先用强着色力的染料（孔雀绿）处理，并同时加热，使菌体以及芽孢均着色，后使菌体脱色，而芽孢保留原色，经复染（蕃红），菌体与芽孢分别以不同颜色显现。
三、油镜使用主要步骤▲观察前准备：显微镜的准备和调试视野明亮▲低倍镜观察▲高倍镜观察（此步可以省略）▲油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦▲显微镜油镜头的清洗和归位（二甲苯清洗）实验三细菌的简单染色和革兰氏染色一、简单染色的原理1、细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表现为无色透明，不易观察，所以必须进行染色处理，使细胞着色，便于观察。
2、简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌形态、大小、及排列方式。
3、染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体并使之粘附于玻片上，还可以增强菌体的着色能力。
固定有加热法和化学法两种，无论采用何种方法均应维持细胞原有形态。
简单染色操作步骤1涂片：载玻片、无菌水、斜面菌种、无菌操作、均匀的薄层2干燥：3固定：加热固定4染色：结晶紫染1min，或石炭酸复红染1min。
5水洗：6 干燥：7镜检：低倍镜观察以确定目标和范围，再换用油镜观察绘图。
二、革兰氏染色原理革兰氏染色是用于细菌鉴别的一种重要染色方法。
它是根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而使用一系列的染色处理使之差别显色。
其染色方法是先将细菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脱色，再经复染剂复染。
最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌；被染成紫色的是革兰氏阳性细菌。
第一步：结晶紫使菌体着上紫色第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。
第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。
G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。
G- 菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红复染后呈红色。
操作步骤1涂片：方法同单染色，然后干燥、固定。
2初染：滴加结晶紫染色1min，后用水冲洗。
3媒染：滴加碘液染色1-2min，后用水冲洗，甩尽残余水4脱色：用95%乙醇冲洗30秒（需要严格控制时间和浓度），然后立即用水冲洗。
5复染：用石炭酸复红覆盖涂片进行复染，石炭酸复红染1min。
水洗，晾干。
6镜检：先用低倍镜观察，后用油镜观察。
注意事项：1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。
2、涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。
3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。
关键步骤：酒精脱色实验四放线菌、真菌形态观察及各类微生物菌落特征观察区分和识别各类微生物可从菌落形态（群体形态）和细胞形态（个体形态）两方面进行，菌落形态是无数细胞形态的集中反映，因此，每一大类微生物都有其一定的菌落特征，可通过这些特征差异区分和识别之。
特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质地等。
细菌菌落特征：凝胶状、表面较光滑湿润、与培养基结合不紧密，易挑取，正反颜色一致。
放线菌特征：致密坚硬、多皱、不易用针挑起，不透明。
孢子成熟后，表面粉末状，干燥。
酵母菌菌落特征：与细菌相似比细菌大而厚，不透明，表面光滑、湿润、粘稠，易用针挑起。
多呈乳白色。
霉菌的菌落特征：比细菌菌落大，由菌丝组成疏松的绒毛状、絮状或蜘蛛网状，有的无固定大小，延至整个培养基中，产色素，使菌落显色。
1、印片法操作步骤:1 用拨针将平板上的菌落培养基切割成小方块，并用拨针挑起一块菌落培养基（注意无菌操作），用火焰微加热的洁净载玻片，以生长的菌落面朝向载玻片，在载玻片上不同部位印压。
2 将印片加热固定。
3 用蕃红染色2-3min，水洗风干。
4 镜检：先用低倍镜观察，后换用油镜观察气生菌丝、孢子丝孢子等结构。
注意事项：用力要轻，且不要错动，染色水洗时水流要缓，以免破坏孢子丝形态。
2、水浸片法操作步骤：（1）在载玻片上滴加一滴碘液，用接种环以无菌操作方式挑取少许啤酒酵母，在碘液中充分混匀，盖上盖玻片。
（2）镜检：先低倍镜观察，后换用高倍镜观察细胞形态注意事项：1、用接种环将菌体与染液混合时不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。
2、滴加染液要适中，否则用盖玻片覆盖时，染液过多会溢出，过少会产生大量气泡。
3、盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡。
实验五微生物细胞大小的测定及显微镜下直接计数一、镜台测微尺及目镜测微尺测定微生物细胞大小是在显微镜下利用测微尺进行。
测微尺可分为目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺是特制的圆形玻片，中央有一刻度尺（100等分），可放入目镜镜筒内，用于测定细胞大小。