最新化学发光免疫分析技术原理及优势教学讲义PPT课件
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《化学发光免疫分析》课件
内分泌疾病诊断
在内分泌疾病的诊断中，化学发光免疫分析可用于检测激素、维生素 D等，有助于评估患者的内分泌功能状态。
在药物研发中的应用
药效学研究
化学发光免疫分析可用于研究药物对生物体的作用机制和效果， 为新药研发提供重要的药效学数据。
药物代谢动力学研究
通过化学发光免疫分析技术，可以研究药物在体内的吸收、分布、 代谢和排泄过程，为新药研发提供药物代谢动力学数据。
04
化学发光免疫分析的优缺 点
优点
高灵敏度
化学发光免疫分析具有较高的灵敏度， 能够检测到极低浓度的目标物质，如肿
瘤标志物、激素等。
稳定性好
化学发光标记物在长时间内保持稳定 ，不易降解，提高了检测的可靠性。
宽线性范围
该方法具有较宽的线性范围，能够检 测到目标物质在较大浓度范围内的变 化。
自动化程度高
特点
高灵敏度、高特异性、低背景干扰、 操作简便、可实现自动化检测等。
历史与发展
1 2 3
起源
20世纪70年代，随着酶标记技术的发展，研究 者开始探索利用化学发光反应进行免疫分析。
发展历程
经过几十年的研究和发展，化学发光免疫分析技 术不断完善，成为一种成熟且应用广泛的免疫分 析方法。
最新进展
新型的化学发光标记物和检测系统不断涌现，提 高了检测的灵敏度和特异性，拓展了应用范围。
在生物医学研究中的应用
生物标志物检测
基因表达分析
化学发光免疫分析可用于检测生物体 中的各种生物标志物，如激素、细胞 因子、生长因子等，有助于研究生物 体的生理和病理过程。
结合其他技术，化学发光免疫分析可 以用于基因表达分析，检测基因表达 产物的蛋白质水平，从而研究基因功 能和调控机制。
在内分泌疾病的诊断中，化学发光免疫分析可用于检测激素、维生素 D等，有助于评估患者的内分泌功能状态。
在药物研发中的应用
药效学研究
化学发光免疫分析可用于研究药物对生物体的作用机制和效果， 为新药研发提供重要的药效学数据。
药物代谢动力学研究
通过化学发光免疫分析技术，可以研究药物在体内的吸收、分布、 代谢和排泄过程，为新药研发提供药物代谢动力学数据。
04
化学发光免疫分析的优缺 点
优点
高灵敏度
化学发光免疫分析具有较高的灵敏度， 能够检测到极低浓度的目标物质，如肿
瘤标志物、激素等。
稳定性好
化学发光标记物在长时间内保持稳定 ，不易降解，提高了检测的可靠性。
宽线性范围
该方法具有较宽的线性范围，能够检 测到目标物质在较大浓度范围内的变 化。
自动化程度高
特点
高灵敏度、高特异性、低背景干扰、 操作简便、可实现自动化检测等。
历史与发展
1 2 3
起源
20世纪70年代，随着酶标记技术的发展，研究 者开始探索利用化学发光反应进行免疫分析。
发展历程
经过几十年的研究和发展，化学发光免疫分析技 术不断完善，成为一种成熟且应用广泛的免疫分 析方法。
最新进展
新型的化学发光标记物和检测系统不断涌现，提 高了检测的灵敏度和特异性，拓展了应用范围。
在生物医学研究中的应用
生物标志物检测
基因表达分析
化学发光免疫分析可用于检测生物体 中的各种生物标志物，如激素、细胞 因子、生长因子等，有助于研究生物 体的生理和病理过程。
结合其他技术，化学发光免疫分析可 以用于基因表达分析，检测基因表达 产物的蛋白质水平，从而研究基因功 能和调控机制。
《化学发光分析》课件
《化学发光分析》PPT课 件
本课程将介绍化学发光分析的工作原理、分类、常用试剂和仪器、典型实验 操作步骤以及优点和应用。让我们一起探索这一极具活力和创新性的化学分 析技术。
化学发光分析概述
什么是化学发光分析？
化学发光分析是指利用发光剂 （luminophore）与感光器 （photodetector）在光激发条件下 发生发光反应进行分析的技术。
发光机制和原理
发光反应主要包括螯合发光、化学 发光、电化学发光和生物发光，其 基本原理为激发能量从分析物传递 到发光剂。
化学发光分析的分类
化学发光分析主要分为储能法、电 化学发光法、免疫分析法、分子印 迹技术法和气相化学发光分析 （GPCA）等。
优点和应用
快速、敏感、高效
化学发光法具有灵敏度高、特异性强、检测时间短和快速分析等优势，被广泛应用于临床、 食品、环境、药学、安全等领域。
数据统计和分析
4
利用计算机等工具进行数据的整理、计算与 分析，得出结果，并进行结果的验证和确认。
取样
用适当的方法取得样品，并得到有效的样品。
发光检测
激发分析样品使其产生发光，并利用仪器对 其进行检测。
案例分析和总结
CRO公司使用化学发光分析技术加 快药代动力学评估
合同研究组织（CRO）将计划100名志愿者的药代动力 学模拟研究里程碑提前了八个月，其采用了高通量类 似物筛选、高通量药代动力学测定和新一代大规模并 行化药代动力学建模等技术。这些技术包括，化学发 光法作为测定细胞器的特异性标记的方法。
电化学发光分析
电化学发光分析仪（ECL）是用于 电化学发光分析的专用设备，适用 于光谱分析和光度测定等分பைடு நூலகம்。
酶标仪
酶标仪是一种测量酶反应的光度仪 器，通常用于免疫学、生化学等领 域的分析。
本课程将介绍化学发光分析的工作原理、分类、常用试剂和仪器、典型实验 操作步骤以及优点和应用。让我们一起探索这一极具活力和创新性的化学分 析技术。
化学发光分析概述
什么是化学发光分析？
化学发光分析是指利用发光剂 （luminophore）与感光器 （photodetector）在光激发条件下 发生发光反应进行分析的技术。
发光机制和原理
发光反应主要包括螯合发光、化学 发光、电化学发光和生物发光，其 基本原理为激发能量从分析物传递 到发光剂。
化学发光分析的分类
化学发光分析主要分为储能法、电 化学发光法、免疫分析法、分子印 迹技术法和气相化学发光分析 （GPCA）等。
优点和应用
快速、敏感、高效
化学发光法具有灵敏度高、特异性强、检测时间短和快速分析等优势，被广泛应用于临床、 食品、环境、药学、安全等领域。
数据统计和分析
4
利用计算机等工具进行数据的整理、计算与 分析，得出结果，并进行结果的验证和确认。
取样
用适当的方法取得样品，并得到有效的样品。
发光检测
激发分析样品使其产生发光，并利用仪器对 其进行检测。
案例分析和总结
CRO公司使用化学发光分析技术加 快药代动力学评估
合同研究组织（CRO）将计划100名志愿者的药代动力 学模拟研究里程碑提前了八个月，其采用了高通量类 似物筛选、高通量药代动力学测定和新一代大规模并 行化药代动力学建模等技术。这些技术包括，化学发 光法作为测定细胞器的特异性标记的方法。
电化学发光分析
电化学发光分析仪（ECL）是用于 电化学发光分析的专用设备，适用 于光谱分析和光度测定等分பைடு நூலகம்。
酶标仪
酶标仪是一种测量酶反应的光度仪 器，通常用于免疫学、生化学等领 域的分析。
化学发光免疫分析PPT幻灯片课件
HRP
+N2 + H2O +光
8
对-羟基苯乙酸（HPA）
• HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光 物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长 的荧光，可用荧光光度计测量。
1.2 HPA
H2O2 HRP
HO
CH2 COOH +荧
光
HO
CH 2 COOH
氧化二聚体
9
AMPPD
化学发光免疫技术
第一节 发光与化学发光剂 第二节 发光酶免疫测定（CLEIA） （chemiluminescence enzyme immunoasssay） 第三节 化学发光免疫测定技术(CLIA) （chemiluminescence immunoassay） 第四节 电化学发光免疫测定技术(ECLI) (electrochemiluminescence immunoassay)
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一
步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
根据免疫学反应模式分
1.双抗体夹心法和双抗原夹心法
3.固相抗原竞争法：
14
荧光酶免疫测定技术反应原理图
R R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
12
3.电化学发光剂
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出 光的物质。
特点：①反应在电极进行； ②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N
+N2 + H2O +光
8
对-羟基苯乙酸（HPA）
• HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光 物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长 的荧光，可用荧光光度计测量。
1.2 HPA
H2O2 HRP
HO
CH2 COOH +荧
光
HO
CH 2 COOH
氧化二聚体
9
AMPPD
化学发光免疫技术
第一节 发光与化学发光剂 第二节 发光酶免疫测定（CLEIA） （chemiluminescence enzyme immunoasssay） 第三节 化学发光免疫测定技术(CLIA) （chemiluminescence immunoassay） 第四节 电化学发光免疫测定技术(ECLI) (electrochemiluminescence immunoassay)
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一
步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
根据免疫学反应模式分
1.双抗体夹心法和双抗原夹心法
3.固相抗原竞争法：
14
荧光酶免疫测定技术反应原理图
R R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
12
3.电化学发光剂
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出 光的物质。
特点：①反应在电极进行； ②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N
化学发光免疫分析技术 ppt课件
ppt课件 44
思考题
1．什么是发光免疫分析？什么是化学发光免疫分析？ 2．化学发光与荧光的区别？化学发光反应的条件？ 3．什么叫化学发光剂？化学发光剂必须具备那些条件？ 4．吖啶酯化学发光的原理和特点是什么？ 5．酶促反应的发光剂有哪些？其发光原理和特点是？
6．三联吡啶钌发光的原理和特点是什么？
ppt课件
3
发光免疫分析:是将发光分析和免疫反 应相结合而建立起来的一种新的检测
微量抗原或抗体的新型标记免疫分析
技术。
ppt课件
4
第一节 概 述
ppt课件
5
三大经典标记技术
放 射 免 疫 技 术 酶 免 疫 技 术 发 光 免 疫 技 术
ppt课件
6
发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态
34
辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图
ppt课件 35
㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，
在与反应体系中的待测标本和固相载体发生
免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶
标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，
碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。
化学发光免疫分析技术
ppt课件
1
第十章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述
一、化学发光
二、化学发光效率 第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
ppt课件 2
第三节 化学发光免疫分析的类型 一、直接化学发光免疫分析 二、化学发光酶免疫分析 三、电化学发光免疫分析 四、临床应用 思考题 小结
ppt课件
46
ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记
思考题
1．什么是发光免疫分析？什么是化学发光免疫分析？ 2．化学发光与荧光的区别？化学发光反应的条件？ 3．什么叫化学发光剂？化学发光剂必须具备那些条件？ 4．吖啶酯化学发光的原理和特点是什么？ 5．酶促反应的发光剂有哪些？其发光原理和特点是？
6．三联吡啶钌发光的原理和特点是什么？
ppt课件
3
发光免疫分析:是将发光分析和免疫反 应相结合而建立起来的一种新的检测
微量抗原或抗体的新型标记免疫分析
技术。
ppt课件
4
第一节 概 述
ppt课件
5
三大经典标记技术
放 射 免 疫 技 术 酶 免 疫 技 术 发 光 免 疫 技 术
ppt课件
6
发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态
34
辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图
ppt课件 35
㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，
在与反应体系中的待测标本和固相载体发生
免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶
标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，
碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。
化学发光免疫分析技术
ppt课件
1
第十章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述
一、化学发光
二、化学发光效率 第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
ppt课件 2
第三节 化学发光免疫分析的类型 一、直接化学发光免疫分析 二、化学发光酶免疫分析 三、电化学发光免疫分析 四、临床应用 思考题 小结
ppt课件
46
ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记
电化学发光免疫分析法课件
案例总结
通过实验技巧的分享，帮助读者更好地掌握电化学发光免 疫分析法的实验操作和优化方法。
案例三：疑难问题解答
案例名称
解决电化学发光免疫分析法中的常见问题
案例描述
列举一些在电化学发光免疫分析法中常见的疑难问题，如信号干扰、非特异性吸附等，并 提供相应的解决方案和注意事项。
案例总结
通过疑难问题解答，帮助读者更好地规避实验中可能出现的问题，提高实验的准确性和可 靠性。
03
实验步骤
样本准备
样本采集
采集血液、尿液等生物样本，确 保样本质量和代表性。
样本处理
对样本进行离心、分离、稀释等 操作，以去除杂质并获得纯度较 高的待测组分。
加样和反应
加样
将处理后的样本加入到电化学发光免 疫分析试剂中，确保加样量准确。
反应条件
控制温度、pH值等反应条件，确保反 应顺利进行。
电化学发光免疫分析法PPT课件
目录
• 引言 • 工作原理 • 实验步骤 • 仪器与试剂 • 结果解读 • 应用与优势 • 案例分析
01
引言
目的和背景
01
介绍电化学发光免疫分析法的目 的和背景，包括其在医学、生物 、环境等领域的应用。
02
分析电化学发光免疫分析法的发 展历程，以及当前的研究热点和 挑战。
定期对仪器进行校准和维护，保 证检测结果的准确性和可靠性。
05
结果解读
结果判读方法
确定参考值范围
根据不同年龄、性别和生理状态 ，确定各项指标的正常参考值范
围。
观察指标变化趋势
注意各项指标的变化趋势，如逐 渐升高或降低，可能提示某种疾
病或生理变化。
综合分析
结合其他检查结果和患者的临床 表现，进行综合分析，以得出准
通过实验技巧的分享，帮助读者更好地掌握电化学发光免 疫分析法的实验操作和优化方法。
案例三：疑难问题解答
案例名称
解决电化学发光免疫分析法中的常见问题
案例描述
列举一些在电化学发光免疫分析法中常见的疑难问题，如信号干扰、非特异性吸附等，并 提供相应的解决方案和注意事项。
案例总结
通过疑难问题解答，帮助读者更好地规避实验中可能出现的问题，提高实验的准确性和可 靠性。
03
实验步骤
样本准备
样本采集
采集血液、尿液等生物样本，确 保样本质量和代表性。
样本处理
对样本进行离心、分离、稀释等 操作，以去除杂质并获得纯度较 高的待测组分。
加样和反应
加样
将处理后的样本加入到电化学发光免 疫分析试剂中，确保加样量准确。
反应条件
控制温度、pH值等反应条件，确保反 应顺利进行。
电化学发光免疫分析法PPT课件
目录
• 引言 • 工作原理 • 实验步骤 • 仪器与试剂 • 结果解读 • 应用与优势 • 案例分析
01
引言
目的和背景
01
介绍电化学发光免疫分析法的目 的和背景，包括其在医学、生物 、环境等领域的应用。
02
分析电化学发光免疫分析法的发 展历程，以及当前的研究热点和 挑战。
定期对仪器进行校准和维护，保 证检测结果的准确性和可靠性。
05
结果解读
结果判读方法
确定参考值范围
根据不同年龄、性别和生理状态 ，确定各项指标的正常参考值范
围。
观察指标变化趋势
注意各项指标的变化趋势，如逐 渐升高或降低，可能提示某种疾
病或生理变化。
综合分析
结合其他检查结果和患者的临床 表现，进行综合分析，以得出准
化学发光免疫技术ppt课件
精选课件PPT
22
人民卫生出版社
化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图
精选课件PPT
23
人民卫生出版社
二、方法类型
1.分离方法 常用磁颗粒分离技术，即用抗原或抗体包被磁颗粒，
与标本中相应抗体或抗原及吖啶酯标记的抗体或 抗原通过一定模式的免疫学反应后,最终通过在磁场 中冲洗将结合到免疫复合物中的标记物和游离标记物 进行分离的技术。
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31
人民卫生出版社
电化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图
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32
人民卫生出版社
电化学发光免疫测定示意图
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33
人民卫生出版社
二、方法类型
1.分离方法 常用磁颗粒分离技术 2.免疫学反应模式 其反应模式同发光免疫分析，
主要有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原 竞争法三种主要模式，所不同只是相应抗原或抗 体上标记的是三联吡啶钌。
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11
人民卫生出版社
二.化学发光剂
• 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光 子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发 光底物。
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12
人民卫生出版社
• 作为化学发光免疫技术的化学发光剂应符合以下 几个条件：
发光的量子产率高 物理-化学特性要与被标记或测定的物质相匹配 能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物 其化学发光常是氧化反应的结果
由集光器和光电倍增管接收记录单位时间内所产生的光子能可从标准曲线上计算出待测抗原的含量第二节化学发光免疫分析人民卫生出版社化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图分离方法常用磁颗粒分离技术即用抗原或抗体包被磁颗粒与标本中相应抗体或抗原及吖啶酯标记的抗体或抗原通过一定模式的免疫学反应后最终通过在磁场中冲洗将结合到免疫复合物中的标记物和游离标记物进行分离的技术
《化学发光免疫技术》课件
总结词
利用酶催化反应放大信号，将化学发光物质作为底物，通过测量发光强度来检测 目标分析物。
详细描述
酶促化学发光免疫分析中，酶标记的抗体或抗原与目标分析物结合后，通过酶催 化反应放大信号，使化学发光物质的生成量大大增加，再通过测量发光强度来检 测目标分析物。
电化学发光免疫分析
总结词
利用电化学反应产生激发态的化学发光物质，通过测量发光 强度来检测目标分析物。
直接化学发光免疫分析
总结词
直接利用化学发光物质作为标记物，与抗体或抗原结合，通过测量发光强度来 检测目标分析物。
详细描述
直接化学发光免疫分析中，化学发光物质直接与抗体或抗原结合，形成复合物 ，当激发时，产生光子并释放出来，通过光电倍增管等设备测量发光强度，从 而确定目标分析物的浓度。
酶促化学发光免疫分析
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、检测速度快、可自动化等。
化学发光免疫技术的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测肿瘤标志物、激 素、病毒抗原抗体等。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留等有害物质 。
环境监测
用于检测水体中的重金属 离子、有机污染物等有害 物质。
化学发光免疫技术的发展历程
《化学发光免疫技术》 ppt课件
CATALOGUE
目 录
• 化学发光免疫技术概述 • 化学发光免疫技术的原理 • 化学发光免疫技术的分类 • 化学发光免疫技术的优缺点 • 化学发光免疫技术的应用实例
01
CATALOGUE
化学发光免疫技术概述
定义与特点
定义
化学发光免疫技术是一种利用化 学发光物质和免疫反应相结合， 对生物体内微量物质进行定性和 定量检测的技术。
利用酶催化反应放大信号，将化学发光物质作为底物，通过测量发光强度来检测 目标分析物。
详细描述
酶促化学发光免疫分析中，酶标记的抗体或抗原与目标分析物结合后，通过酶催 化反应放大信号，使化学发光物质的生成量大大增加，再通过测量发光强度来检 测目标分析物。
电化学发光免疫分析
总结词
利用电化学反应产生激发态的化学发光物质，通过测量发光 强度来检测目标分析物。
直接化学发光免疫分析
总结词
直接利用化学发光物质作为标记物，与抗体或抗原结合，通过测量发光强度来 检测目标分析物。
详细描述
直接化学发光免疫分析中，化学发光物质直接与抗体或抗原结合，形成复合物 ，当激发时，产生光子并释放出来，通过光电倍增管等设备测量发光强度，从 而确定目标分析物的浓度。
酶促化学发光免疫分析
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、检测速度快、可自动化等。
化学发光免疫技术的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测肿瘤标志物、激 素、病毒抗原抗体等。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留等有害物质 。
环境监测
用于检测水体中的重金属 离子、有机污染物等有害 物质。
化学发光免疫技术的发展历程
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目 录
• 化学发光免疫技术概述 • 化学发光免疫技术的原理 • 化学发光免疫技术的分类 • 化学发光免疫技术的优缺点 • 化学发光免疫技术的应用实例
01
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化学发光免疫技术概述
定义与特点
定义
化学发光免疫技术是一种利用化 学发光物质和免疫反应相结合， 对生物体内微量物质进行定性和 定量检测的技术。
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化学发光免疫分析技术
一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望
一、化学发光免疫技术的概念
化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光 的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光 系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与 待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或 定性检测。
ΦCL = 发光的分子数/ 参加反应的分子数 (4)
2.3 化学发光免疫分析的原理
化学发光免疫分析法是化学发光和免疫分析结合的产物。 它同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高选择 性。化学发光免疫分析是用化学发光反应的试剂标记抗原 或抗体, 标记后的抗原和抗体与待测物经过一系列的免疫 反应和理化步骤,最后以测定发光强度形式测定待测物的含 量。
• 灵敏度高
• 灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性，其灵敏度可 达 10-22 mol/L （ RIA 为 10 -12 mol/L ）。化学发光免疫分 析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出 的物质，对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。
• 宽的线性动力学范围
• 发光强度在 4 ～ 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显 色的酶免疫分析吸光度（ OD 值）为 2.0 的范围相比，优势明显。虽 然 RIA 也有较宽的线性动力学范围，但放射性限制了其应用。
由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的 光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准
直接化学发光的机理
--- 夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
带吖啶酯 标记物抗
体
（1） 加入H2O2 （pH<10）
冲洗后
（2） 加入碱 （pH>10）发光Βιβλιοθήκη 磁微粒技术磁微粒模式图
特点 – 抗原和抗体结合与未结合 部分的易分离
• 光信号持续时间长
• 辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实 验操作及测量。
• 分析方法简便快速
• 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式。
• 结果稳定、误差小
• 样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光 散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。
三、化学发光免疫分析的类型
化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大类, 即化直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化 学发光免疫分析法。
3.1 直接化学发光免疫分析
用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相 应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗 体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加 入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶 酯在不需要催化剂的情况下分解、发光 。
• 安全性好及使用期长
• 免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现其危害性；试剂稳定，保存期可达一 年。
二、化学发光免疫分析基本原理
化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学 发光分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或 抗体上, 经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。 然后进行对标记物进行检测, 来测定待检物。化学发光分 析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧 化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到 稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用发光信号测量仪器 光量子产率。
2.2 化学发光原理
化学发光(Chemiluminescence, CL)是化学物质在特定化学反 应中产生的光辐射。通过高能中间体的分解在化学反应中 激发单态分子形成,分子被激发后是不稳定的,它要释放出 多余的能量而回到基态,其中部分的能量以发光形式释放出 来。因此,任何一个化学发光反应包括两个过程:激发和发 光过程。一些激发态分子能量也会通过系间串跃和系内串 跃而消失。因此,化学发光反应的效率是:
Y
3.2、化学发光酶免疫分析
化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶 如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗 体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固 相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物 (发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光 电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至 计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
化学发光免疫测定是目前世界公认先进的标记免疫测定技
术，化学发光免疫分析技术具有高度的准确性和特异性， 成为检验方法中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析 技术作为疾病诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能 、传染性疾病、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、甲状 腺功能等方面的体外诊断实验中。
化学发光免疫分析的优势
2.1 免疫分析原理
免疫分析是利用抗原与抗体特异性结合形成抗原2抗体复合 物而建立起来的一种高选择性的分析方法, 根据其检测方法可 分为非标记免疫分析和标记免疫分析。非标记免疫分析是利用 抗原与抗体结合形成抗原2抗体复合物后, 其理化性质发生改变 ,出现肉眼可见的沉淀、凝集等现象,利用这些现象来检测待检 物。标记免疫分析是在不影响抗原、抗体生物活性的基础上将 标记物质标记在抗原或抗体上, 然后进行免疫反应形成抗原2抗 体复合物, 再对标记质进行检测, 从而间接检测待检物的方法 。目前常用的标记物有放射性的125 I, 非放射性的碱性磷酸酶 、辣根过氧化物酶, 镧系稀土元素等。
ΦCL =ΦCE·ΦEM (1)
式中,ΦCL为化学发光效率,ΦCE为生成激发态的效率, ΦEM为激发态的发光效率。ΦCE和ΦEM分别定义为：
ΦCE = 生成激发态的分子数/ 参加反应的分子数 (2)
ΦEM = 发光的分子数/ 生成激发态的分子数
(3)
从(1) 、(2) 、(3) 式得化学发光的效率ΦCL等价于生 成荧光和磷光的量子效率。即:
一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望
一、化学发光免疫技术的概念
化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光 的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光 系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与 待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或 定性检测。
ΦCL = 发光的分子数/ 参加反应的分子数 (4)
2.3 化学发光免疫分析的原理
化学发光免疫分析法是化学发光和免疫分析结合的产物。 它同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高选择 性。化学发光免疫分析是用化学发光反应的试剂标记抗原 或抗体, 标记后的抗原和抗体与待测物经过一系列的免疫 反应和理化步骤,最后以测定发光强度形式测定待测物的含 量。
• 灵敏度高
• 灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性，其灵敏度可 达 10-22 mol/L （ RIA 为 10 -12 mol/L ）。化学发光免疫分 析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出 的物质，对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。
• 宽的线性动力学范围
• 发光强度在 4 ～ 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显 色的酶免疫分析吸光度（ OD 值）为 2.0 的范围相比，优势明显。虽 然 RIA 也有较宽的线性动力学范围，但放射性限制了其应用。
由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的 光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准
直接化学发光的机理
--- 夹心法
+ + 磁微粒 抗体
被测抗原
带吖啶酯 标记物抗
体
（1） 加入H2O2 （pH<10）
冲洗后
（2） 加入碱 （pH>10）发光Βιβλιοθήκη 磁微粒技术磁微粒模式图
特点 – 抗原和抗体结合与未结合 部分的易分离
• 光信号持续时间长
• 辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实 验操作及测量。
• 分析方法简便快速
• 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式。
• 结果稳定、误差小
• 样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光 散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。
三、化学发光免疫分析的类型
化学发光免疫分析法根据其标记物的不同可分为三大类, 即化直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化 学发光免疫分析法。
3.1 直接化学发光免疫分析
用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相 应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗 体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加 入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶 酯在不需要催化剂的情况下分解、发光 。
• 安全性好及使用期长
• 免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现其危害性；试剂稳定，保存期可达一 年。
二、化学发光免疫分析基本原理
化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学 发光分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或 抗体上, 经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。 然后进行对标记物进行检测, 来测定待检物。化学发光分 析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧 化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到 稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用发光信号测量仪器 光量子产率。
2.2 化学发光原理
化学发光(Chemiluminescence, CL)是化学物质在特定化学反 应中产生的光辐射。通过高能中间体的分解在化学反应中 激发单态分子形成,分子被激发后是不稳定的,它要释放出 多余的能量而回到基态,其中部分的能量以发光形式释放出 来。因此,任何一个化学发光反应包括两个过程:激发和发 光过程。一些激发态分子能量也会通过系间串跃和系内串 跃而消失。因此,化学发光反应的效率是:
Y
3.2、化学发光酶免疫分析
化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶 如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗 体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固 相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物 (发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光 电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至 计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
化学发光免疫测定是目前世界公认先进的标记免疫测定技
术，化学发光免疫分析技术具有高度的准确性和特异性， 成为检验方法中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析 技术作为疾病诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能 、传染性疾病、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、甲状 腺功能等方面的体外诊断实验中。
化学发光免疫分析的优势
2.1 免疫分析原理
免疫分析是利用抗原与抗体特异性结合形成抗原2抗体复合 物而建立起来的一种高选择性的分析方法, 根据其检测方法可 分为非标记免疫分析和标记免疫分析。非标记免疫分析是利用 抗原与抗体结合形成抗原2抗体复合物后, 其理化性质发生改变 ,出现肉眼可见的沉淀、凝集等现象,利用这些现象来检测待检 物。标记免疫分析是在不影响抗原、抗体生物活性的基础上将 标记物质标记在抗原或抗体上, 然后进行免疫反应形成抗原2抗 体复合物, 再对标记质进行检测, 从而间接检测待检物的方法 。目前常用的标记物有放射性的125 I, 非放射性的碱性磷酸酶 、辣根过氧化物酶, 镧系稀土元素等。
ΦCL =ΦCE·ΦEM (1)
式中,ΦCL为化学发光效率,ΦCE为生成激发态的效率, ΦEM为激发态的发光效率。ΦCE和ΦEM分别定义为：
ΦCE = 生成激发态的分子数/ 参加反应的分子数 (2)
ΦEM = 发光的分子数/ 生成激发态的分子数
(3)
从(1) 、(2) 、(3) 式得化学发光的效率ΦCL等价于生 成荧光和磷光的量子效率。即: