设计实验 偶氮胂Ⅲ测定血清镁

设计实验偶氮胂Ⅲ测定血清镁
（标准对比法）
最适pH值的选择：
一、实验目的：选择该实验测定的最适pH条件。

二、实验原理：配制系列pH值的硼砂缓冲溶液，让反应物镁标准液和偶氮胂
Ⅲ在不同的pH条件下反应，然后以偶氮胂Ⅲ做空白溶液，分别测定其吸光度值，最后选择出适宜的pH条件。

三、实验仪器与试剂：硼砂3.0000g、蒸馏水、盐酸（0.100M）100mL、镁标
准液(1.10 mmol/L)0.30mL、偶氮胂Ⅲ试剂（105μmol/L）48mL。

50mL烧杯5个、25mL酸式滴定管1只、万分之一分析天平一台、5mL移液管1支、10mL移液管1支、药匙、1cm比色皿2个、UV-1100D分光光度计、50μL移液枪2支、pHS-2C型酸度计一台、pH复合电极一支、100mL容量瓶一个、10mL容量瓶
50mL容量瓶各1个。

四、实验步骤：
① 25℃时，取硼砂1.9060g用蒸馏水于50mL容量瓶定容即得50mL
C=0.1mol/L硼砂溶液,然后用移液管取10mL加入到100mL容量瓶中，加水稀释至100mL，此时为C=0.01mol/L硼砂溶液其pH=9.18；重复以上步骤，将溶液分别移入6个50mL烧杯，每个烧杯装30mL硼砂溶液，依次用盐酸滴定，得到pH分别为7.00、
7.50、8.00、8.50、9.00、9.18的硼砂缓冲溶液。

②从烧杯中取5mL缓冲液，加入到10mL容量瓶中，再往容量瓶中加入镁标准溶液50μL、偶氮胂Ⅲ4mL，混匀、定容，以偶氮胂Ⅲ做空白溶液，测其吸光度值，取不同pH值的缓冲溶液，重复以上步骤，得到不同pH条件下的反应液的吸光度结果。

③以缓冲液的pH值为横坐标，吸光度值为纵坐标，作图，找到测量吸光度的最适pH。

每次对相应偶氮胂Ⅲ试剂调零，偶氮胂Ⅲ与镁标准液C=1.10 mmol/L 反应液(镁标准液50μL+偶氮胂Ⅲ4mL)，于最大吸收波长λm处，测出吸光度，找出最适pH值。

五、实验数据处理：
1.pH缓冲溶液的配制：
编号 1 2 3 4 5
硼砂溶液30mL 30mL 30mL 30mL 30mL
pH值7.50 8.00 8.50 9.00 9.18
备注取硼砂1.9060g用蒸馏水于50mL容量瓶定容即得50mL C=0.1mol/L的硼砂溶液,然后用移液管取10mL C=0.1mol/L硼砂溶液，加入到100mL
容量瓶中，加水稀释至100mL ，此时为C=0.01mol/L硼砂溶液其
pH=9.18。

将溶液分别倒入5个50mL烧杯，依次用盐酸滴定，得到不同的pH值。

2.不同pH下的吸光度：
编号 1 2 3 4 5 6
ASAⅢ镁标准溶（220mM）50μL 50μL 50μL 50μL 50μL -
ASAⅢ2625μmol/L4mL 4mL 4mL 4mL 4mL 4mL
缓冲溶液5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL
最大吸收波（nm）616.5 607.6 614.2 615 610.8 - 吸光度0.270 1.165 1.009 0.727 0.660 - 备注取编号相对应的pH缓冲液，加入到10mL容量瓶中，往容量瓶
中加入镁标准溶液50μL、偶氮胂Ⅲ4mL，混匀，以偶氮胂Ⅲ
(7号)做空白溶液，在波长在400-700nm间找到最大吸收波长
λm，在λm处测其吸光度值。

（注意每次7号都要在不同pH
条件下重新配置）
最适pH=8.00
六、实验讨论：
1.测定过程中，严格按照仪器操作说明实验操作；
2.比色皿放入分光光度计前将外表面擦干净；
3.选择滴定的盐酸浓度时，应仔细计算，否则会导致一滴盐酸带来的滴定突
跃过大，无法得到适宜的pH值；
4.由于在探究pH这一条件时，其他条件还未确定，只能先参考文献设定条件
探究该条件再一一确定其他条件；
5.由于不知道每个条件下的最大吸收波长，故用仪器扫描每个pH下的溶液，
分别找它的最大吸收波长。

待测血清中镁的测定
一、实验目的：在选定好的实验条件下，用该方法测定待测血清中的镁含量。

二、实验原理：在选定的实验条件下，采用标准对比法与镁标准液测得的结
果对比测定待测血清中的镁含量。

三、实验仪器与试剂：显色试剂R1、镁标准液C=1.10 mmol/L、待测血清、蒸
馏水
UV-1100D型紫外可见分光光度计、250μL移液枪1个、5mL移液管1个、试管三
支、1cm比色皿2个
四、实验步骤：取洁净试管三支，测定管（U）、标准管（S）、空白管（B）分别加入待测血清、镁标准液和蒸馏水各50μL，每管各加R
1
3mL，混匀后置37℃
5 min，在最大吸收波长处，空白调零，最大吸收波长比色，记录A
U1、A
S1。

五、实验数据处理：
A
U1= 0.054 A
S1
=0.051
C(Mgcl
2)=1.10 mmol/L Cx=A
U1
*C(Mgcl
2
)/A
S1
=1.16mmol/L
六、实验讨论：
1.比色皿放入分光光度计前将外表面擦干净
2.由于该实验比较微量，所以比色皿在换装溶液时需要充分洗干净，防止干扰。

3.该实验测出的空白管吸光度值为-0.006，分析原因是因为蒸馏水稀释了溶液，导致其浓度下降所致。