生物化学大实验报告
大学生物化学实验报告
大学生物化学实验报告引言：在大学中，实验是培养学生动手能力和创新能力的重要环节之一。
作为一门重要的科学实验课程，生物化学实验通常涉及生物化学原理的研究，如酶活性测定、蛋白质分离纯化等。
本实验报告将重点介绍一次生物化学实验的设计、操作步骤、结果分析和结论，通过这次实验，我们可以更深入地了解生物化学领域的研究方法和技术。
一、实验目的：本次实验的主要目的是通过观察和分析酶活性对温度和pH的影响，进一步理解酶与环境因素之间的相互关系。
通过实验，我们希望探究最适温度和最适pH值对酶活性的影响，并进一步理解酶的特性及其应用。
二、实验材料和设备：材料：A酶液、B底物液、C缓冲液、D洗涤液、E抗原液。
设备：吸光度计、温度控制仪、离心机、电子天平、试剂瓶、试管架等。
三、实验步骤：1. 准备工作：清洗实验设备，并按照实验操作要求准备好所需试剂、药品和仪器。
2. 设置实验组和对照组：将A酶液和B底物液分别装入试管中，加入不同温度和pH的缓冲液，并设置对照组进行比较。
3. 反应条件控制：将试管置于温度控制仪中，使其保持恒定的温度，并在一定时间内进行反应。
记录每组试验的开始时间和持续时间。
4. 酶活性测定：取出试管，使用吸光度计测定样品的吸光度，并将测定结果记录下来。
5. 数据分析：根据测定结果，绘制出不同温度和pH值下的酶活性曲线，并分析数据得出结论。
四、实验结果和讨论：根据实验数据统计和分析，我们观察到酶活性与温度和pH值之间存在一定的关系。
在一定范围内，酶活性随温度的升高而增加，但超过一定温度后，酶的活性会迅速下降。
这是因为高温会破坏酶的三维结构，使其失去催化活性。
此外，不同pH值对酶活性也有一定影响。
实验结果显示，酶活性在特定的pH值下达到最大值，而在过高或过低的pH环境下，酶的催化活性显著降低。
这是因为酶的催化反应需要特定的酸碱环境，而超出其最适pH范围会导致酶结构发生变化，从而降低其活性。
综合实验结果，我们可以得出结论：酶活性受温度和pH的影响较大，而最适温度和最适pH值因酶的种类而异。
大学生物化学实验报告
大学生物化学实验报告大学生物化学实验报告引言：生物化学实验是大学生物化学课程的重要组成部分，通过实验可以让学生更好地理解和掌握生物化学理论知识，培养学生的实验操作能力和科学研究思维。
本篇文章将以一次生物化学实验为例，介绍实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果及讨论，并对实验的意义进行探讨。
实验目的：本次实验的目的是通过酶的催化作用，研究酶对底物浓度的影响，并探讨酶的最适底物浓度。
通过本实验，旨在加深对酶活性和酶底物反应的理解，为生物化学领域的研究提供实验依据。
实验原理：酶是一类能够加速生物体内化学反应速率的蛋白质。
酶底物反应是酶与底物之间的特异性结合，形成酶底物复合物，进而催化底物转化为产物。
酶的活性受到多种因素的影响，其中底物浓度是一个重要的因素。
底物浓度低时，酶与底物的结合速率较慢，反应速率较低；而当底物浓度增加时，酶与底物结合的速率增加，反应速率也随之增加。
然而，当底物浓度达到一定程度后，酶的活性将达到最大值，此时增加底物浓度已无法进一步提高反应速率，这被称为酶的最适底物浓度。
实验步骤：1. 准备实验所需材料和仪器：酶溶液、底物溶液、酶活力检测试剂盒、试管、移液管等。
2. 将一定量的酶溶液和不同浓度的底物溶液分别加入试管中，并在恒温水浴中预热。
3. 在每个试管中加入相同体积的酶活力检测试剂盒，并迅速混匀。
4. 将每个试管放入恒温水浴中，控制反应温度。
5. 反应一段时间后，取出试管，立即停止反应。
6. 使用酶活力检测试剂盒中的试剂，按照说明书进行检测，并记录各组实验的吸光度值。
7. 根据吸光度值，绘制底物浓度与酶活性的关系曲线。
实验结果及讨论：根据实验数据，我们绘制了底物浓度与酶活性的关系曲线。
曲线呈现出一种特定的形态，即先上升后趋于平稳。
从曲线可以观察到，在底物浓度较低时，酶活性随底物浓度的增加而增加，这是因为底物浓度的增加提高了酶与底物的结合速率。
然而，随着底物浓度的进一步增加，酶活性逐渐趋于平稳，这是因为酶的活性已经达到最大值，无法再进一步提高。
生物化学实验报告（共2篇）
生物化学实验报告（共2篇）篇一：生物化学实验报告2012年生物化学实验b姓名：学号：实验时间：实验分组：组内成员：任课教师：实验报告xxxx 2012年11月17日摘要1. 实验部分1.1试剂与仪器1.试剂：（2）1 mol/l 醋酸，1 mol/l naoh，硫酸铵。
（3）平衡缓冲液：0.01 mol/l tris-hcl，ph 8.0。
（5）酶的底物溶液：用底物缓冲液配制15×10-3 mol/l 对硝基苯磷酸二钠溶液。
（7）分离胶缓冲液：1.5 mol/l tris-hcl缓冲液，ph 8.8，已加入10% sds。
（8）浓缩胶缓冲液：0.5 mol/l tris-hcl缓冲液，ph 6.8，已加入10% sds。
（13）脱色液：500 ml 10%甲醇和10%冰醋酸的脱色液1000 ml。
匀浆机、eppebdorf5型冷冻离心机、gsy—2型恒温水浴、uv762型紫外可见分光光度计。
1.2 小牛肠碱性磷酸酶提取方法2）将小肠粘膜液集中倒入匀浆机中，加冰冷蒸馏水，高速匀浆，重复多次。
3）缓慢加入冰冷正丁醇高速匀浆重复多次。
在4℃，10000 rpm条件下离心。
4）用滤布过滤去除杂质，倒入分液漏斗中，静止分层，取下层水相，用hac溶液调ph到4.9。
5）得到上清后放入离心管中，用naoh溶液调ph至6.5，称取硫酸铵加到离心管中溶解；再加冰冷丙酮，混匀，4℃静置30 min以上。
6）上清液中加入冰冷丙酮，4℃放置30 min以上。
4℃，10000 rpm，离心。
7）取沉淀溶于平衡缓冲液至全部溶解至冰箱保存待用。
1.3 小牛肠碱性磷酸酶酶活检测方法2）紫外分光光度计检测条件为405 nm波长，测定时间60 s，取值2 s，记录范围0.0-1.5。
上下倒2次，放回分光光度计中，测定酶动力学曲线1.4 聚丙烯凝胶制备分离胶制备（浓度10%，制备量10 ml）试剂用量 h2o30% 丙烯酰胺1.5 mol/l tris-hcl缓冲液ph 8.810% 过硫酸铵temed4.1 ml 3.4 ml 2.4 ml 100 μl 10 μl浓缩胶制备（浓度5%，制备量6 ml）试剂 h2o30% 丙烯酰胺0.5 mol/l tris-hcl缓冲液ph 6.810% 过硫酸铵temed用量3.4 ml 1.0 ml 1.5 ml 60 μl 8 μl1.5 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量3）各取100 μl加入到5 ml考马斯亮蓝试管中，混匀，反应5 min以上。
生物化学实验报告
生物化学实验报告实验目的，通过本次实验，掌握生物化学实验的基本方法和技能，了解生物化学实验的原理和应用，提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理，生物化学实验是利用生物化学原理和方法，对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器，本次实验所需材料包括，蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品；试剂，酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等；仪器，分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤：1. 蛋白质的定性实验，取少量蛋白质样品，加入蛋白质定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验，取少量核酸样品，加入核酸定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验，取少量酶样品，加入酶定性试剂，观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验，取少量碳水化合物样品，加入酚酞试剂，观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析，利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器，对生物分子进行定量分析。
实验结果分析，根据实验结果，可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析，从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论，通过本次实验，掌握了生物化学实验的基本方法和技能，了解了生物分子的定性和定量分析方法，提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义，生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节，通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解，为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中，我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法，还培养了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验，我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解，提高了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
生物化学实验报告范例
生物化学实验报告范例
实验目的
本次实验的目的是研究生物化学中的某一特定现象/理论/反应。
实验原理
在这一部分，我们对本次实验所涉及的生物化学理论或原理进
行介绍。
这有助于读者了解实验的背景和相关知识。
实验材料
列出本次实验所用到的材料和试剂，包括其名称、规格、供应
商等信息。
实验步骤
详细描述实验的操作步骤，包括使用的仪器和试剂的准备，以
及各个步骤的操作方法。
实验结果
将实验过程中所得的数据和观察结果进行记录。
可以使用表格、图表或文字描述的形式展示实验结果。
数据分析与讨论
对实验结果进行分析和讨论，解释实验所得结果与理论之间的
关系。
如果有多组数据进行比较，可以使用统计方法进行数据的处
理和分析。
结论
总结本次实验的结果和主要发现，给出一个简明扼要的结论。
实验总结
针对本次实验，总结实验的优点和不足之处，提出改进的建议。
同时，还可以对进一步研究的方向提出一些建议。
参考文献
列举实验中所涉及的参考文献，包括教科书、期刊论文等。
确
保引用的内容是可靠和可确认的。
附录
如果有需要的话，将实验中的详细数据、图表、记录表格等附
在文档的末尾。
致谢
感谢在实验中提供帮助的老师、同学以及其他相关人员，在这一部分对他们表示感谢。
以上是一份生物化学实验报告的范例。
根据实际情况，可以适度增加和调整各个部分的内容。
2023年生物化学实验报告化学实验报告
2023年生物化学实验报告化学实验报告在当下这个社会中，报告的使用成为日常生活的常态，报告具有成文事后性的特点。
那么报告应该怎么制定才合适呢？下面我就给大家讲一讲优秀的报告文章怎么写，我们一起来了解一下吧。
生物化学实验报告化学实验报告篇一实验目的：1.熟悉清洗设备2.掌握清洗流程以及清洗前预准备实验设备：1.半导体兆声清洗机（sfq-1006t）-1；sc-2清洗的目的在于清除表面污染杂质，包括有机物和无机物。
这些杂质有的以原子状态或离子状态，有的以薄膜形式或颗粒形式存在于硅片表面。
有机污染包括光刻胶、有机溶剂残留物、合成蜡和人接触器件、工具、器皿带来的油脂或纤维。
无机污染包括重金属金、铜、铁、铬等，严重影响少数载流子寿命和表面电导；碱金属如钠等，引起严重漏电；颗粒污染包括硅渣、尘埃、细菌、微生物、有机胶体纤维等，会导致各种缺陷。
清除污染的方法有物理清洗和化学清洗两种。
我们这里所用的的是化学清洗。
清洗对于微米及深亚微米超大规模集成电路的良率有着极大的影响。
sc-1及sc-2对于清除颗粒及金属颗粒有着显著的作用。
仪器准备：①烧杯的清洗、干燥②清洗机的预准备：开总闸门、开空气压缩机；开旋转总电源（清洗设备照明自动开启）；将急停按钮旋转拉出，按下旁边电源键；缓慢开启超纯水开关，角度小于45o；根据需要给1#、2#槽加热，正式试验前提前一小时加热，加热上限为200o。
本次实验中选用了80℃为反应温度。
③sc-1及sc-2的配置：我们配制体积比例是1:2:5，所以选取溶液体积为160ml，对sc-1 nh4oh：h2o2：h2o=20:40:100ml，对sc-2 hcl：h2o2：h2o=20:40:100ml。
① 1#号槽中放入装入1号液的烧杯，待温度与槽中一样后，放入硅片，加热10min,然后超纯水清洗。
② 2#号槽中放入装入2号液的烧杯，待温度与槽中一样后，放入硅片，加热10min,然后超纯水清洗。
大学生物化学实训报告范文
一、实训背景随着生物科学的快速发展，生物化学作为一门重要的基础学科，在生物技术、医药、食品等领域具有广泛的应用。
为了提高我们的实践能力，培养我们的综合素质，我们学院组织了一次生物化学实训活动。
本次实训旨在让我们深入了解生物化学的基本理论、实验技能和实际应用，提高我们的科研素养。
二、实训目的1. 熟悉生物化学的基本理论，了解生物化学在生物科学领域的应用。
2. 掌握生物化学实验的基本操作，提高实验技能。
3. 培养团队合作精神，提高沟通与协作能力。
4. 增强科研素养，为今后从事科研工作打下基础。
三、实训内容1. 生物化学基本理论实训期间，我们学习了生物化学的基本理论，包括生物大分子的组成、结构、功能及其相互作用。
通过学习，我们对生物化学有了更深入的了解，为后续实验操作奠定了理论基础。
2. 生物化学实验（1）蛋白质的分离与鉴定本次实训中，我们学习了蛋白质的分离与鉴定实验。
通过实验，我们掌握了SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝G250染色、Western blot等蛋白质分离与鉴定技术。
（2）核酸的提取与鉴定我们学习了核酸的提取与鉴定实验，掌握了CTAB法提取DNA、琼脂糖凝胶电泳、EB染色等核酸提取与鉴定技术。
（3）酶活性测定在酶活性测定实验中，我们学习了酶的催化反应原理、底物与产物检测方法等，掌握了酶活性测定的实验操作。
3. 生物化学应用实训期间，我们还学习了生物化学在生物技术、医药、食品等领域的应用。
通过学习，我们了解到生物化学在实际生产、科研中的重要作用。
四、实训过程1. 实训准备在实训开始前，我们进行了充分的准备，包括查阅相关资料、熟悉实验操作流程、了解实验原理等。
2. 实验操作在实验过程中，我们严格按照实验操作规程进行操作，注意实验安全，确保实验顺利进行。
3. 实验数据记录与分析在实验过程中，我们认真记录实验数据，对实验结果进行分析，总结实验现象。
4. 实训总结实训结束后，我们进行了总结，对实验中遇到的问题进行反思，并提出改进措施。
生物化学的实训报告
一、实训背景生物化学作为一门研究生命现象中的化学过程和原理的学科，是生命科学和医学领域的基础课程。
为了加深对生物化学理论知识的理解，提高实验技能，我们进行了为期两周的生物化学实训。
本次实训旨在通过实际操作，巩固课堂所学，培养学生的动手能力和创新意识。
二、实训目的1. 理解并掌握生物化学实验的基本操作和技能。
2. 培养严谨的科学态度和良好的实验习惯。
3. 加深对生物化学基本理论知识的理解和应用。
4. 提高分析问题和解决问题的能力。
三、实训内容本次实训主要包括以下内容：1. 蛋白质的鉴定与分离- 通过双缩脲法鉴定蛋白质的存在。
- 利用SDS-PAGE技术对蛋白质进行分离。
2. 核酸的提取与鉴定- 从细胞中提取DNA和RNA。
- 通过琼脂糖凝胶电泳法检测DNA和RNA的纯度和完整性。
3. 酶活性的测定- 测定不同底物对酶活性的影响。
- 分析温度、pH值等因素对酶活性的影响。
4. 代谢途径的实验研究- 研究糖酵解、三羧酸循环等代谢途径。
四、实训过程1. 蛋白质的鉴定与分离- 在实验开始前，我们首先复习了蛋白质的鉴定方法和SDS-PAGE技术。
- 通过实验操作，我们成功地将蛋白质从样品中提取出来，并利用双缩脲法进行了鉴定。
- 在SDS-PAGE实验中，我们严格按照操作步骤进行，成功分离了蛋白质。
2. 核酸的提取与鉴定- 在核酸提取实验中，我们学习了从细胞中提取DNA和RNA的方法。
- 通过琼脂糖凝胶电泳法，我们检测了DNA和RNA的纯度和完整性。
3. 酶活性的测定- 在酶活性测定实验中，我们研究了不同底物对酶活性的影响，并分析了温度、pH值等因素对酶活性的影响。
- 通过实验，我们得出了酶活性与底物浓度、温度和pH值之间的关系。
4. 代谢途径的实验研究- 在代谢途径实验研究中，我们重点研究了糖酵解、三羧酸循环等代谢途径。
- 通过实验，我们加深了对代谢途径的理解，并掌握了相关实验技能。
五、实训结果与分析1. 蛋白质的鉴定与分离- 双缩脲法成功鉴定了蛋白质的存在。
生物化学实践报告(2篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在通过生物化学实验，加深对生物大分子结构和功能的理解，掌握蛋白质、核酸等生物大分子的提取、分离和鉴定方法，并学会使用相应的实验技术和仪器。
二、实验原理1. 蛋白质的提取与鉴定：蛋白质是生命活动中的重要物质，其提取和鉴定是生物化学研究的重要内容。
本实验通过蛋白质的盐析、电泳等方法，实现对蛋白质的提取和鉴定。
2. 核酸的提取与鉴定：核酸是生物遗传信息的携带者，其提取和鉴定对于研究生物遗传具有重要意义。
本实验通过酚-氯仿法提取DNA，通过比色法测定DNA的浓度。
3. 酶的活性测定：酶是生物体内催化反应的催化剂，其活性测定是研究酶的重要方法。
本实验通过测定酶促反应速率，计算酶的活性。
三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜动物组织、化学试剂、缓冲液、电泳凝胶等。
2. 仪器：高速离心机、电泳仪、分光光度计、显微镜等。
四、实验步骤1. 蛋白质的提取与鉴定（1）取一定量新鲜动物组织，加入适量缓冲液，研磨。
（2）将研磨液离心，取上清液即为蛋白质提取液。
（3）将蛋白质提取液加入等体积的95%乙醇，混匀，静置。
（4）取沉淀，用少量双蒸水洗涤，干燥，溶解于适量双蒸水中。
（5）将蛋白质溶液进行SDS-PAGE电泳，观察蛋白质条带。
2. 核酸的提取与鉴定（1）取一定量新鲜动物组织，加入适量缓冲液，研磨。
（2）将研磨液加入等体积的酚-氯仿，混匀，静置。
（3）取上清液，加入等体积的异丙醇，混匀，静置。
（4）取沉淀，用少量双蒸水洗涤，干燥，溶解于适量双蒸水中。
（5）用分光光度计测定DNA的浓度。
3. 酶的活性测定（1）配制底物溶液。
（2）将底物溶液加入酶溶液，记录反应速率。
（3）根据反应速率计算酶的活性。
五、实验结果与分析1. 蛋白质的提取与鉴定：通过SDS-PAGE电泳，成功分离出多条蛋白质条带，表明实验中成功提取了蛋白质。
2. 核酸的提取与鉴定：通过比色法测定，成功提取出DNA，浓度为0.5μg/μL。
生化实验报告格式范文(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握实验原理和方法。
2. 学会使用实验仪器和试剂。
3. 通过实验，加深对生物化学知识的理解。
二、实验原理（在此处简要介绍实验原理，包括反应机理、反应条件等。
）三、实验材料与仪器1. 实验材料- 样品：待测物质- 试剂：各种试剂名称及浓度- 试剂配制方法：详细说明各试剂的配制过程2. 实验仪器- 仪器名称：仪器名称- 仪器型号：仪器型号- 仪器功能：简要介绍仪器功能四、实验步骤1. 准备阶段- 样品处理：说明样品处理方法，如提取、纯化等。
- 试剂准备：按照试剂配制方法配制各种试剂。
2. 实验操作- 步骤一：详细描述实验步骤，包括试剂加入顺序、反应条件、观察现象等。
- 步骤二：按照步骤一的方法进行操作，记录观察到的现象。
3. 数据处理- 根据实验结果，进行数据处理，如计算、绘图等。
五、实验结果与分析1. 实验结果- 列出实验数据，如反应速率、浓度等。
- 以表格、图表等形式展示实验结果。
2. 结果分析- 分析实验结果，解释现象产生的原因。
- 讨论实验误差的来源。
六、实验讨论1. 实验现象- 分析实验现象，解释反应机理。
2. 实验误差- 分析实验误差的来源，提出改进措施。
3. 实验结论- 总结实验结论，说明实验结果的意义。
七、实验报告1. 报告格式- 标题：实验报告标题- 作者：姓名、学号、班级- 指导教师：姓名- 实验日期2. 报告内容- 按照实验报告格式，将实验目的、原理、材料、步骤、结果与分析、讨论等内容依次列出。
八、附录1. 试剂配制方法- 详细列出各种试剂的配制方法。
2. 实验数据- 列出实验数据，如反应速率、浓度等。
3. 参考文献- 列出实验过程中参考的文献。
九、注意事项1. 实验过程中应注意安全，遵守实验操作规程。
2. 实验数据应真实、准确，不得篡改。
3. 实验报告应规范、完整，字迹清晰。
十、实验总结1. 总结实验过程中遇到的问题和解决方法。
2. 提出改进实验的建议。
生物化学实训课实验报告
一、实验名称：蛋白质分子量测定——凝胶层析法二、实验目的：1. 理解凝胶层析法的原理和操作步骤。
2. 掌握蛋白质分子量测定的方法。
3. 分析实验结果，并探讨影响实验结果的因素。
三、实验原理：凝胶层析法是一种分离和纯化蛋白质的方法，其原理是利用凝胶的分子筛作用，根据蛋白质分子大小不同进行分离。
凝胶是一种多孔材料，其孔径大小与蛋白质分子大小相匹配，使得小分子蛋白质能够进入凝胶内部，而大分子蛋白质则无法进入，从而实现分离。
四、实验材料与试剂：1. 蛋白质样品：如鸡蛋清、血清等。
2. 凝胶：如聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等。
3. 电泳缓冲液：如Tris-HCl缓冲液、硼酸缓冲液等。
4. 标准蛋白质分子量对照品：如已知分子量的蛋白质。
5. 电泳仪、电泳槽、紫外灯等。
五、实验步骤：1. 准备凝胶：将凝胶溶解在适当浓度的缓冲液中，倒入模具中，制成凝胶板。
2. 准备样品：将蛋白质样品与适量的电泳缓冲液混合，加入样品缓冲液，制成样品溶液。
3. 制备标准蛋白质分子量对照品：将已知分子量的蛋白质溶解在电泳缓冲液中，制成标准蛋白质溶液。
4. 加样：将样品溶液和标准蛋白质溶液分别加入凝胶板上的孔中。
5. 电泳：将凝胶板放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，接通电源，进行电泳。
6. 显色：电泳完成后，将凝胶板取出，放入含有显色剂的溶液中，进行显色。
7. 测量：用紫外灯照射凝胶板，观察蛋白质条带的位置，并记录下蛋白质分子量。
六、实验结果与分析：1. 通过观察电泳图谱，可以清晰地看到蛋白质条带，其中标准蛋白质分子量对照品的条带位置已知，可以用来判断样品蛋白质分子量的大小。
2. 实验结果显示，样品蛋白质分子量分布较广，存在多个分子量大小不同的蛋白质。
3. 通过比较样品蛋白质条带与标准蛋白质条带的位置，可以估算出样品蛋白质的分子量。
4. 影响实验结果的因素包括凝胶的制备、电泳条件、显色剂的选择等。
七、讨论与心得：1. 凝胶层析法是一种常用的蛋白质分离和纯化方法，具有操作简单、分离效果好等优点。
大学生物化学实验报告
一、实验名称：蛋白质分子量测定——凝胶层析法二、实验目的：1. 了解凝胶层析法的基本原理和操作步骤。
2. 学习利用凝胶层析法测定蛋白质的分子量。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
三、实验原理：凝胶层析法是一种利用凝胶作为固定相，通过分子大小不同的物质在凝胶孔径中的移动速度差异来实现分离的方法。
在凝胶层析中，大分子物质不能进入凝胶内部的孔径，而小分子物质可以进入孔径，从而在洗脱过程中，大分子物质先流出，小分子物质后流出。
通过测量不同分子量蛋白质的洗脱体积，可以计算出其分子量。
四、实验材料与试剂：1. 凝胶层析柱（直径1.5cm，长30cm）2. 凝胶（聚丙烯酰胺凝胶）3. 蛋白质样品（已知分子量）4. 标准样品（已知分子量）5. 洗脱液（Tris-HCl缓冲液）6. 显色剂（考马斯亮蓝G-250）7. 移液器8. 旋转混匀器9. 分光光度计五、实验步骤：1. 准备凝胶层析柱：将凝胶倒入层析柱中，用洗脱液充分浸泡凝胶，直至凝胶膨胀并固定在层析柱中。
2. 准备样品：将蛋白质样品和标准样品分别稀释至适当浓度。
3. 加样：将蛋白质样品和标准样品分别加入凝胶层析柱中，用洗脱液洗脱，收集不同洗脱体积的洗脱液。
4. 显色：将收集到的洗脱液加入考马斯亮蓝G-250显色剂，室温下显色10分钟。
5. 测量：用分光光度计测定显色液在595nm处的吸光度值。
6. 数据处理：以标准样品的分子量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
根据蛋白质样品的吸光度值，从标准曲线上查得蛋白质的分子量。
六、实验结果：（此处插入实验数据表格，包括标准样品和蛋白质样品的分子量、洗脱体积、吸光度值等）七、实验分析：通过凝胶层析法，成功分离了蛋白质样品，并测定了其分子量。
实验结果表明，蛋白质样品的分子量与标准样品的分子量相符，说明实验操作正确。
八、讨论与心得：1. 凝胶层析法是一种简单、有效的蛋白质分离方法，可用于测定蛋白质的分子量。
2. 在实验过程中，要注意凝胶层析柱的制备、样品的加入和洗脱液的收集等操作步骤，以保证实验结果的准确性。
生物化学实验报告
实验名称：蛋白质分子量测定——凝胶层析法实验日期：2023年10月26日实验目的：1. 理解凝胶层析法的原理和操作步骤。
2. 通过凝胶层析法测定蛋白质的分子量。
3. 掌握蛋白质分离和鉴定技术。
实验原理：凝胶层析法，也称为分子筛层析法或排阻层析法，是一种基于分子大小差异进行分离的方法。
凝胶是一种多孔材料，其孔径大小不一，能够根据分子的大小将混合物中的不同组分分离。
在凝胶层析中，大分子蛋白质不能进入凝胶内部的孔洞，因此沿着凝胶颗粒间的缝隙快速移动，而小分子蛋白质则可以进入凝胶内部，移动速度较慢。
通过比较不同蛋白质在凝胶层析中的迁移距离，可以推断其分子量。
实验器材与试剂：- 凝胶层析柱- 凝胶- 蛋白质样品- 标准蛋白质分子量对照品- 缓冲液（pH 7.4）- 标记笔- 移液器- 洗脱液- 紫外线检测仪实验步骤：1. 准备凝胶层析柱，用标记笔标记起始线。
2. 将凝胶加入层析柱中，使其填充均匀，注意避免气泡。
3. 准备蛋白质样品和标准蛋白质对照品，用缓冲液稀释至适当浓度。
4. 用移液器将蛋白质样品和标准蛋白质对照品分别加入层析柱的起始线处。
5. 加入洗脱液，调节流速，保持洗脱液面始终高于凝胶表面。
6. 收集洗脱液，每隔一定时间取样，用紫外线检测仪检测蛋白质的吸收峰。
7. 根据标准蛋白质对照品的分子量和迁移距离，绘制标准曲线。
8. 根据样品的迁移距离和标准曲线，计算样品的分子量。
实验结果：- 蛋白质样品和标准蛋白质对照品在凝胶层析中的迁移距离分别为：样品A 2.5 cm，样品B 3.0 cm；标准蛋白质对照品1 2.0 cm，标准蛋白质对照品2 3.5 cm。
- 根据标准曲线，样品A的分子量为 10 kDa，样品B的分子量为 15 kDa。
讨论与分析：本实验成功地将蛋白质样品与标准蛋白质对照品分离，并测定了样品的分子量。
凝胶层析法是一种简单、有效的蛋白质分离和鉴定技术，广泛应用于生物化学和分子生物学研究中。
生物化学实验报告
实验一糖类的性质实验（一）糖类的颜色反应一、实验目的1、了解糖类某些颜色反应的原理。
2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。
二、颜色反应（一）α-萘酚反应1、原理糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。
因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。
2、器材试管及试管架，滴管3、试剂莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100 mL，贮于棕色瓶内。
用前配制。
1％葡萄糖溶液100 mL1％果糖溶液100 mL1％蔗糖溶液100 mL1％淀粉溶液100 mL0.1％糠醛溶液100 mL浓硫酸 500 mL4、实验操作取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、0.1％糠醛溶液各1 mL。
再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。
倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢立起试管，切勿摇动。
观察记录各管颜色。
（二）间苯二酚反应1、原理在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反应是酮醣的特异反应。
醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。
2、器材试管及试管架，滴管3、试剂塞氏试剂：0.05％间苯二酚－盐酸溶液1000 mL，称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000 mL。
1％葡萄糖溶液100 mL1％果糖溶液100 mL1％蔗糖溶液100 mL4、实验操作取3试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5 mL。
再向3支试管中各加入塞氏试剂5 mL，充分混合。
将试管同时放入沸水浴中，。
观察记录各管颜色。
(二)糖类的还原作用一、实验目的1、理解并掌握糖类的还原性质；2、学习常用的鉴定糖类还原性的方法。
生物化学专科实验报告
生物化学专科实验报告实验目的：本实验旨在通过生物化学实验手段，探究某一生物分子的结构与功能，并加深对生物化学的理论知识的理解。
实验材料：1. 实验所需生物分子样本2. 高性能液相色谱仪（HPLC）3. 各种必要的实验试剂和溶剂4. 透析袋5. 离心机实验步骤：1. 准备实验样品：根据实验分析的需要，选择合适的生物分子样本，并制备样品溶液。
2. 高性能液相色谱仪分析：将样品溶液注入高性能液相色谱仪中，设置相关参数。
通过不同的溶剂流动，利用色谱柱分离目标生物分子并进行检测。
记录和分析峰形和峰面积。
3. 分离纯化：根据色谱分析的结果，选择目标峰进行分离纯化。
可以采用透析、离心和其他纯化手段。
4. 结构鉴定：通过质谱、核磁共振等分析手段，对目标峰进行结构鉴定。
分析其分子式、分子量、化学结构等信息。
5. 功能研究：根据生物分子的性质和功能，进行进一步的研究和探索。
可以通过酶活性测定、配体结合实验等方法，验证其功能。
6. 数据处理与分析：对实验获得的数据进行整理、统计和分析。
绘制图表，归纳总结实验结果。
实验结果与讨论：根据实验获得的数据和分析结果，我们可以得出某一生物分子的结构与功能信息。
通过与文献数据的对比，可以验证实验结果的准确性。
结论：通过本实验的研究，我们得出某一生物分子的结构与功能，并对其进行深入的了解。
实验过程中遇到的问题和改进的方法可以在后续的研究中加以完善。
此外，本实验的成果也为相关领域的研究提供了重要的参考依据。
参考文献：[1] 作者1. (年份). 文献名称. 杂志名, 卷(期), 页码.[2] 作者2. (年份). 文献名称. 杂志名, 卷(期), 页码.[3] 作者3. (年份). 文献名称. 杂志名, 卷(期), 页码.。
生物化学实训报告总结
一、引言生物化学作为一门研究生物体内分子结构与功能的科学，对于理解生命现象、推动医学、农业和工业等领域的发展具有重要意义。
为了加深对生物化学理论知识的理解，提高实验操作技能，我们开展了为期一个月的生物化学实训。
以下是对本次实训的总结。
二、实训目的1. 深入理解生物化学基本理论，掌握生物大分子的结构、功能和性质。
2. 提高实验操作技能，熟悉实验室安全规范和仪器设备的使用。
3. 培养科学思维和团队合作精神，提高解决实际问题的能力。
三、实训内容本次实训主要包括以下内容：1. 蛋白质的提取与鉴定：通过学习蛋白质的提取方法，掌握蛋白质的分离、纯化技术，并运用SDS-PAGE等方法对蛋白质进行鉴定。
2. 核酸的提取与鉴定：学习核酸的提取方法，掌握DNA、RNA的分离纯化技术，并运用琼脂糖凝胶电泳等方法对核酸进行鉴定。
3. 酶的提取与活性测定：学习酶的提取方法，掌握酶的活性测定方法，并研究酶的底物特异性和催化机制。
4. 糖类的提取与鉴定：学习糖类的提取方法，掌握糖类的鉴定方法，并研究糖类的生物合成途径和生理功能。
5. 脂质的提取与鉴定：学习脂质的提取方法，掌握脂质的鉴定方法，并研究脂质的生物合成途径和生理功能。
四、实训过程1. 准备工作：实训前，我们认真学习了相关理论知识，了解了实验原理和操作步骤。
同时，我们还对实验室的仪器设备进行了熟悉，确保实验顺利进行。
2. 实验操作：在实验过程中，我们严格按照实验步骤进行操作，注意观察实验现象，记录实验数据。
遇到问题及时与指导老师沟通，确保实验结果的准确性。
3. 数据分析：实验结束后，我们对实验数据进行整理和分析，得出结论，并与理论知识进行对比，加深对知识的理解。
五、实训成果1. 理论知识的巩固：通过本次实训，我们对生物化学的基本理论有了更深入的理解，为今后的学习打下了坚实的基础。
2. 实验技能的提升：在实验过程中，我们掌握了多种生物化学实验技术，提高了实验操作能力。
3. 团队合作精神的培养：在实训过程中，我们学会了与他人合作，共同完成任务，培养了团队合作精神。
（大学）生物化学实验报告
班级: 姓名：座号:实验一生物化学实验基本知识与操作一、课堂目标1．简述生化实验的五点基本知识2．动手练习三种吸量管的使用，培养严谨的科学态度3．选择弹动混匀法做操作练习，使试管内溶液混匀4．仔细观察老师使用离心机的示教过程，并练习使用。
二、生物化学实验基本知识1．实验前做好预习每次实验课前应首先复习与实验有关的理论知识，然后认真阅读实验指导，明确课时目标，了解实验原理、操作程序及实验中应注意的事项。
2．实验中要认真操作、仔细观察实验时要求学生严格按照实验指导和教师的要求，一丝不苟地进行操作，仔细观察和分析实验中出现的各种现象，如实地将实验结果、数据填写在记录本内。
3．正确使用和爱护仪器实验时须遵照教师要求，严格按操作规程正确使用每种仪器。
贵重仪器未经允许不得随意搬动，如不慎损坏，应及时报告指导老师。
4．保持实验室的整洁和秩序遵守实验室规则，实验时保持室内安静。
实验仪器及用具必须洁净，实验试剂的排列应整齐有序。
勿将试剂药品洒于桌面、地上或它处。
废物及强酸、强碱溶液应适当处理，以防堵塞和腐蚀水管。
实验结束，做好清洁工作，注意关断水，电源，关闭好门窗。
5．认真填写实验报告三、生物化学实验几项基本操作1．吸量管的选择和使用(1)刻度吸管常见容量有l0ml、5ml、2m1、1ml、0.5ml等数种。
通常将管身标明的总容量分刻度为100等分。
常选用与移取非整数量的试液，因厂家不同，有分刻度到尖端和刻度不到尖端的两种。
如刻度到管尖的，通常在管壁上标有“吹”字，放液时必须在容液流完后吹出残留于吸管尖端的试液。
使用前先认明。
(2)移液管吸管中间膨大，管壁只有一条总量标线，准确度较高，常用作移取整数量的试液。
常见规格有50ml、25m1、l0ml、5ml、2ml和lml等容量。
操作时在放出试液后，吸管尖端在容器内壁上仍要停留10~15秒钟。
以上两种吸管使用方法如下：用右手拇指和中指靠住吸管标线以上部分，将管尖插入所要移取的试液液面下约lcm处。
生物化学实验实训报告总结
一、实验背景与目的生物化学实验是生物学与化学交叉的一门实验科学，旨在通过实验手段探究生物体内化学反应的规律和机制。
本次实训报告旨在总结生物化学实验实训过程中的经验与收获，提升对生物化学实验原理和方法的理解，以及实验操作技能。
二、实验内容与过程本次实训涵盖了多个实验项目，包括但不限于以下内容：1. 蛋白质的制备与鉴定- 实验原理：利用硫酸铵盐析法从鸡蛋清中提取蛋白质，并通过比色法测定蛋白质含量。
- 实验步骤：取鸡蛋清，加入硫酸铵溶液，搅拌，离心，取上清液，加入考马斯亮蓝G-250染料，比色测定蛋白质含量。
2. 酶的活性测定- 实验原理：利用底物-酶反应动力学原理，通过测定在一定时间内底物的消耗量或产物的生成量来反映酶的活性。
- 实验步骤：配制底物溶液，加入酶样品，记录反应时间，测定底物消耗量或产物生成量。
3. 核酸的提取与鉴定- 实验原理：利用酚-氯仿法从细胞中提取DNA，通过紫外分光光度法测定DNA 含量。
- 实验步骤：取细胞样品，加入酚-氯仿溶液，振荡，离心，取上清液，测定DNA含量。
4. 生物大分子的电泳分离- 实验原理：利用生物大分子在电场中的迁移速率差异，通过电泳技术实现分离。
- 实验步骤：配制凝胶，加入样品，施加电压，观察电泳结果。
三、实验结果与分析1. 蛋白质的制备与鉴定- 通过硫酸铵盐析法成功提取蛋白质，比色法测定蛋白质含量为1.2mg/mL。
- 结果分析：实验结果表明，硫酸铵盐析法是一种有效的蛋白质提取方法，比色法可以准确测定蛋白质含量。
2. 酶的活性测定- 实验结果表明，在一定时间内，底物的消耗量与酶的活性呈正相关。
- 结果分析：实验结果表明，酶的活性可以通过底物消耗量来反映，为酶活性的研究提供了可靠的方法。
3. 核酸的提取与鉴定- 通过酚-氯仿法成功提取DNA，紫外分光光度法测定DNA含量为50ng/μL。
- 结果分析：实验结果表明，酚-氯仿法是一种有效的DNA提取方法，紫外分光光度法可以准确测定DNA含量。
生物化学实验实训报告
一、实验目的1. 熟悉生物化学实验的基本操作流程。
2. 掌握常见生物化学实验方法及原理。
3. 培养严谨的科学态度和实验技能。
二、实验原理本实验主要涉及以下原理：1. 酸碱滴定法：利用酸碱指示剂的颜色变化来判断滴定终点，通过计算反应物的摩尔比来确定待测溶液的浓度。
2. 紫外-可见光谱法：通过测量待测物质在特定波长下的吸光度，根据比尔定律计算其浓度。
3. 酶活性测定：通过检测酶催化反应的速率来评估酶的活性。
三、实验器材与试剂1. 器材：酸式滴定管、碱式滴定管、锥形瓶、移液管、移液器、试管、紫外-可见分光光度计、恒温水浴锅、天平等。
2. 试剂：0.1mol/L盐酸溶液、0.1mol/L氢氧化钠溶液、酚酞指示剂、甲基橙指示剂、葡萄糖标准溶液、淀粉溶液、过氧化氢溶液、酶制剂等。
四、实验步骤1. 酸碱滴定法测定氢氧化钠溶液浓度- 准备好0.1mol/L盐酸溶液、酚酞指示剂。
- 用碱式滴定管准确吸取一定体积的氢氧化钠溶液于锥形瓶中。
- 加入适量的酚酞指示剂，观察溶液颜色变化。
- 用酸式滴定管逐滴加入盐酸溶液，直至溶液颜色由粉红色变为无色，记录滴定终点。
- 根据消耗的盐酸体积计算氢氧化钠溶液的浓度。
2. 紫外-可见光谱法测定葡萄糖浓度- 准备好葡萄糖标准溶液、淀粉溶液、过氧化氢溶液。
- 将一定量的淀粉溶液与过氧化氢溶液混合，置于紫外-可见分光光度计中，测定吸光度。
- 将一定量的葡萄糖标准溶液与过氧化氢溶液混合，置于紫外-可见分光光度计中，测定吸光度。
- 根据比尔定律计算葡萄糖的浓度。
3. 酶活性测定- 准备好酶制剂、底物溶液、缓冲溶液。
- 将底物溶液与酶制剂混合，置于恒温水浴锅中。
- 定时取样，测定酶催化反应的速率。
- 根据反应速率计算酶的活性。
五、实验结果与分析1. 酸碱滴定法测定氢氧化钠溶液浓度- 消耗的盐酸体积为V1 mL，计算氢氧化钠溶液的浓度为C1 mol/L。
2. 紫外-可见光谱法测定葡萄糖浓度- 根据比尔定律，计算葡萄糖的浓度为C2 mol/L。
生物化学检验实训报告
一、实训目的本次生物化学检验实训旨在使学生掌握生物化学检验的基本原理、操作技能和实验方法，提高学生的实际动手能力和分析问题、解决问题的能力。
通过实训，使学生熟悉各种生物化学检验仪器的使用，加深对理论知识的学习，培养严谨的科学态度和良好的实验习惯。
二、实训环境实训地点：生物化学实验室实训仪器：生物化学检验仪器、试管、移液器、离心机、培养箱等实训试剂：各种生物化学试剂、标准品、对照品等实训材料：动物组织、细胞培养物等三、实训原理生物化学检验是利用生物化学原理和技术，对生物体内各种成分进行定量和定性分析的方法。
本次实训主要包括以下几种检验方法：1. 蛋白质定量分析：采用双缩脲法测定蛋白质含量。
2. 血糖测定：采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。
3. 血脂测定：采用酶法测定总胆固醇和甘油三酯。
4. 肝功能检测：采用谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）测定肝功能。
5. 肾功能检测：采用尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）测定肾功能。
四、实训过程1. 蛋白质定量分析（1）称取一定量的组织样品，加入双缩脲试剂，振荡混匀。
（2）沸水浴加热5分钟，取出后冷却至室温。
（3）在540nm波长下测定吸光度。
（4）根据标准曲线计算蛋白质含量。
2. 血糖测定（1）取一定量的血清样品，加入葡萄糖氧化酶试剂，混匀。
（2）在340nm波长下测定吸光度。
（3）根据标准曲线计算血糖浓度。
3. 血脂测定（1）取一定量的血清样品，加入胆固醇和甘油三酯测定试剂，混匀。
（2）在570nm波长下测定吸光度。
（3）根据标准曲线计算总胆固醇和甘油三酯浓度。
4. 肝功能检测（1）取一定量的血清样品，加入ALT和AST测定试剂，混匀。
（2）在特定波长下测定吸光度。
（3）根据标准曲线计算ALT和AST活性。
5. 肾功能检测（1）取一定量的血清样品，加入尿素氮和肌酐测定试剂，混匀。
（2）在特定波长下测定吸光度。
（3）根据标准曲线计算尿素氮和肌酐浓度。
五、实训结果1. 蛋白质定量分析：样品中蛋白质含量为XX mg/mL。
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生物化学大实验报告
——谌星生物学（基地）
【摘要】碱性磷酸酶是适于在pH约9-10的条件下水解许多非特异性磷酸单脂而使磷酸游离的磷酸脂酶的总称，它的作用是催化核酸分子脱掉5'磷酸基团，从而使DNA(或RNA)片段的5'-Pi末端转换成5'-OH末端，这也就是所谓的核酸分子的脱磷酸作用。
细菌碱性磷酸酶（BAP）是一种从大肠杆菌中分离纯化而来的一种酶，是分子生物学中常用的一种工具酶，它是一种底物专一性低的磷酸单酯酶,为了了解并掌握蛋白分离与纯化以及相关性质，进行了生物化学大实验的操作，涉及到SDS-PAGE检测表达蛋白、蛋白质印迹、亲和层析纯化、离子交换层析纯化、分子筛排层析测定活性BAP的蛋白质分子量以及BAP活力与比活力的测定。
关键词：细菌碱性磷酸酶分离纯化
一、材料与方法
1.1研究对象
本次选择的细菌为BL21大肠杆菌工程菌株，外源基因克隆在含有lac启动子的表达载体中，让其在E. coli中表达。
先让宿主菌生长，阻遏蛋白与lac操纵基因结合，从而不能进行外源基因的转录及表达，此时宿主菌正常生长。
然后向培养基中加入lac操纵子的诱导物IPTG（异丙基硫代-β-D—半乳糖），阻遏蛋白不能与操纵基因结合，则外源基因大量转录并高效表达。
1.2研究内容
1.2.1 分子筛排阻层析测定活性BAP的蛋白质分子量
首先是凝胶处理，然后是装柱、联机、上样、标准曲线的制作和目的蛋白分子量测定
1.2.2离子交换层析纯化
通过亲和柱纯化后的样品可再通过离子交换层析进行纯化。
先是装柱，然后上样、洗脱及收集，再使离子交换柱再生。
1.2.3亲和层析纯化
亲和层析是利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使酶等生物分子分离纯化的技术。
（1）. 过夜BL菌以1:50扩培比进行扩培，至OD600＝0.5，需190 r/min约1 h20 min，然后加入IPTG至终浓度为1 mM，于28 °C，160 r/min-190 r/min条件下诱导5 h。
（2）. 诱导表达后的菌体5000 r/min离心15 min，弃去LB培养基。
按10:1体积比重悬于破碎缓冲液中（即starting buffer），5000 r/min离心10 min，弃上清，加入破碎缓冲液以及终浓度为1 mg/mL的溶菌酶，30 ℃温浴15 min。
（3）. 冰浴条件下，60％功率超声处理5 min，超声4 sec间隔12 sec；再用40％功率超声处理5 min，超声4 sec间隔12 sec。
（超声要求：a.将菌液处理至清亮；b.始终保持低温环境；c.避免出现黑色沉淀）。
（4）. 将超声处理后的样品于4 ℃2000 r /min离心10 min，沉淀为细胞碎片，弃去。
再于4 ℃12000 r/min离心10 min，上清为可溶性蛋白，沉淀即为包涵体。
（如需纯化包涵体蛋白，沉淀可用破碎缓冲液冲洗两次，将1mL裂解液对应的包涵体溶于500 L 8 M/L尿素中）。
将上清再次于4 ℃12000 r/min离心10 min，进一步除去杂质。
除用于亲和层析纯化外，于4°C保存至少1mL可溶性蛋白粗提液用于碱性磷酸酶活力和比活力。
（5）. 镍柱亲和层析纯化可溶性蛋白：
①将亲和层析介质用5柱体积灭菌超纯水冲洗；
②用5柱体积starting buffer进行平衡柱子；
③将5-10mL的可溶性蛋白样品上柱，并可反复过柱2-3次；
④用含30mM 咪唑的wash buffer冲洗约10-12柱体积；
⑤用3 mL含有300 Mm 咪唑的elution buffer洗脱目的蛋白，每500 μL收集1管（为增加洗脱效率，每收集500 μL后可用elution buffer孵育柱子5min）；
⑥SDS－PAGE检测蛋白纯化效果；
1.2.4 SDS-PAGE检测表达蛋白
蛋白质与SDS结合后，均带有负电荷，且具有相似的形状，在电场下，按相对分子质量大小在凝胶胶上排列。
蛋白条带经考马斯亮蓝R250染色后形成肉眼可见的蓝色条带，并可用凝胶成像系统分析条带蛋白含量和相对分子质量。
首先，配制分离胶，再配制5%浓缩胶，然后电泳，将电板从电池槽中取出，在凝胶成像系统中分析特异条带的位置和分子量。
1.2.5 蛋白质印迹
印迹法一般由凝胶电泳；样品的印迹和固定化；各种灵敏的检测如抗体、抗原反应等三大实验部分组成。
①取出凝胶，切去浓缩胶，分离胶也可以做适当裁减（电泳时最好使用预染Marker这样在以后可以检查转移效率）。
用灭菌去离子水冲洗，然后放入转移缓冲液中浸泡平衡。
②戴乳胶手套将PVDF膜裁成和需印迹凝胶相似而略大的小块，用100％甲醇处理15S （不可超过），然后放入转移缓冲液中平衡15min。
③海绵垫2块放入转移缓冲液中浸泡到没有气泡；将滤纸裁成比凝胶和硝酸纤维素纸略大的片，共4片，转移缓冲液中浸湿，然后按以下顺序组装转移装置：阴极黑板－海绵垫－2层滤纸－凝胶－PVDF膜－2层滤纸－海绵垫－阳极红板。
④恒流80mA转移2.5-3h，可于冰水浴中操作。
⑤卸去装置，取出PVDF膜置于干燥滤纸上片刻，但勿使膜变干，然后转移到灭菌去离子水中。
⑥将膜转移至杂交袋中，加入5mL封闭液（5mL TBST+0.25g脱脂奶粉），排出气泡，封口，摇床上室温封闭2h，可以过夜。
⑦将杂交袋剪一小口，弃去封闭液，加入含有5uL一抗的封闭液5mL，排出气泡，摇床上室温摇动10min，4℃过夜做一抗孵育（或2-3h过中午）。
⑧将杂交袋剪一小口，回收一抗溶液并放于4℃（若使用已经超过1次则可以弃去）。
用TBS漂洗膜洗3次，每次10min（摇床上）。
⑨加入含有10uL二抗的封闭液5mL，排出气泡，摇床上室温摇动1.5-2h做二抗孵育。
⑩回收二抗溶液并放于4℃（若使用已经超过1次则可以弃去）。
用TBS漂洗膜洗3次，每次10min（摇床上）。
取1片DAB片溶于37℃预热的10mL灭菌去离子水中，用前加入30％的H2O2 33uL，即终浓度为0.1％。
将膜置于平皿中，倒入上述显色液，暗处显色5min，条带清晰后用灭菌去离子水终止反应，漂洗一遍，凝胶影像系统中迅速记录结果。
1.2.6 BAP功能检测——活力和比活力的测定
（1）酶活力的测定
①将底物溶液在37 ℃温浴5 min。
②测定3组样品和1组空白对照的酶活力：a.纯化前的可溶性蛋白；b.纯化后的可溶性蛋白；c. BAP标准品；d.空白对照只加入相应量的超纯水。
③取2mL酶活力测定底物，加入样品a或b各200 L，或BAP标准品1μL+199μL超纯水，或超纯水200μL（对照），37 °C温浴5 min。
④5min后取出各加入终浓度为0.025 mol/L NaOH，终止反应。
⑤在可见分光光度计中测量OD410，计算3次测量的平均值。
⑥参照BAP标准品（0.45U/ L）计算各样品的酶活力。
（2）蛋白浓度测定
①取纯化前的可溶性蛋白和纯化后的可溶性蛋白各500 L，用超纯水稀释4-6倍。
②在紫外分光光度计上分别测定其OD280和OD260值。
③将OD值乘以稀释倍数后，依据经验公式计算其蛋白浓度。
（3）酶比活力的计算
根据公式：比活力＝活力单位数/mg蛋白计算纯化前后蛋白样品的比活力以及一次亲和层析的纯化倍数。
二、结果
图表一牛清蛋白的时间和A值得关系图
图表二糜蛋白的时间和A值得关系图
图表三目的蛋白分子筛的时间与A值之间的关系
（1）本次实验选择的流速是为每分钟0.3ml,,目的蛋白的洗脱体积为90x0.3=27根据标准曲线y=-36.637x+165.90，所以目的蛋白的分子量为44.3KDa。
（2）本次实验稀释倍数为10，根据公式酶活力=（样品OD410/标准蛋白OD410）x稀释倍数，蛋白质浓度（mg/ml）=1.45OD280-0.74OD260，酶的比活力=酶活力/蛋白质浓度。
得出
纯化倍数=纯化后比活力/纯化前比活力，纯化倍数为1.138。
三、讨论与结论
如上面图表所示，测量标准蛋白分子质量的时候并不准确，纯化倍数也不够，我们初步分析的主要原因有三个：①实验室提供的溶质存放时间太长制成的柱子质量并不是很好。
②实验操作的失误，在筛排糜蛋白时没有使仪器调到零。
③由于装柱时是手工操作的，造成柱子密度不一，对实验结果也有影响。
另外在进行电泳时，操作发生了错误，点样时没有往槽子里面加缓冲液，点完样后加缓冲液冲撞了样品，使之电泳后转膜不成功。
综上所述，本次实验让我们了解了生化实验的基本操作，学会了分子筛排阻层析测定活性BAP的蛋白质分子量，离子交换层析纯化，亲和层析纯化，SDS-PAGE检测表达蛋白，蛋白质印迹，活力和比活力的测定等各种方法。
虽然得出的数据不是很符合标准实验，但是提供了一个根本的舞台。
参考文献：
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