虎杖蒽醌的提取分离方法
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18(5) 383—385 [6] 杨燕军 舒惠一 闵知大.巴戟天和恩施巴戟的蒽醌化合物[J].药学学报 1992 27(5) 358—364
3
热时间也长 致使其中的化学成分易改变 超声提取法虽然可以提高提取速率 但是对药材的
粒度的大小和形状有一定要求 否则提取液的后处理困难 冷浸法虽然避免了加热 对热不稳
定性药材有一定的安全性 但此法提取时间长 浸提 48h 提取仍不完全 尤其对于坚硬 较粗
的药材 溶剂难以浸入组织内部 所以提取效率不高 同时 溶剂消耗量大 渗漉法与冷浸法
虎杖蒽醌的提取分离方法
曾里 1
,
袁佩 2
(1.重庆医科大学应用技术学院 400050 2. 重庆医科大学药学院 400016 )
摘要 虎杖具有清热解毒 去风利湿 活血通经之功效 临床上用于治疗肝炎 高血脂症 烧
伤 烫伤等多种疾病 人们利用现代药理实验技术进一步发现虎杖还有抗血小板凝聚 抗白细
胞减少 调节 Ca2+通道等作用 对虎杖中有效成分的药理作用研究是目前中草药研究的热点
根据蒽醌类化合物在不同介质中吸收光谱的不同 采用差示分光光度法测定虎杖中蒽醌含 量
精确称取 1 2 5 8-四羟基蒽醌 5.39mg 置于 50mL 容量瓶中 用甲醇溶解并稀释至刻度 摇匀 精密吸取 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.60mL 各两份于 10mL 容量瓶中 一份加 0.5% 的醋酸镁甲醇溶液至刻度 另一份用甲醇稀释至刻度 摇匀 分别用甲醇及 0.5%的醋酸镁甲醇 溶液为参比液 于 400-550nm 区间作二者的吸收光谱图 确定在两种介质中的最大吸收波长 甲醇溶液最大吸收波长为 430nm 加入醋酸镁后的最大吸收波长为 505nm 因虎杖中非蒽醌类 成分不与醋酸镁甲醇溶液显色 因此 对于配制的标准系列分别以后者为参比 在 505nm 波长 处测定各溶液的吸光度 A 值 3 结果与讨论 3.1 虎杖中蒽醌类物质含量测定
关 70%乙醇的溶解能力和溶涨 穿透能力均达到最佳
2
药材粉碎度对提取率也有影响 药材粉碎得越细 药材粉末的表面积越大 提取速度和效 率就越高 但药材粉末过细 >100 目 表面吸附增强 反而降低提取率 同时 用乙醇和水 作溶剂时 粉末过细 大量糖类 鞣质 蛋白质 树胶等被提取出来 使提取液变得粘稠而给 后处理带来困难
查对酸解前后虎杖蒽醌类的提取效率的影响 可以看出 随着溶剂极性增强 提取率增加 但
溶剂极性过强 提取率反而降低 选用 70%乙醇溶剂作为提取剂时 各种提取方法都达到较高
的提取率 在回流和超声提取法中 提取液粘度大 所含鞣质 树胶等杂质较多 给进一步分
离提纯带来困难 回流提取所用时间较长 且一次提取又不完全 一般提取 2-3 次 药液受
选用 70%乙醇溶剂作为提取剂时 各种提取方法都达到较高的提取率 对于回流提取 索 氏提取和超声提取 提取率大体相当 且都高于冷浸和渗漉
在回流和超声提取法中 提取液粘度大 所含鞣质 树胶等杂质较多 给进一步分离提纯 带来困难 回流提取所用时间较长 且一次提取又不完全 一般提取 2-3 次 药液受热时间 也长 致使其中的化学成分易改变 超声提取法虽然可以提高提取速率 但是对药材的粒度的 大小和形状有一定要求 否则提取液的后处理困难 冷浸法虽然避免了加热 对热不稳定性药 材有一定的安全性 但此法提取时间长 浸提 48h 提取仍不完全 尤其对于坚硬 较粗的药材 溶剂难以浸入组织内部 所以提取效率不高 同时 溶剂消耗量大 渗漉法与冷浸法相比 渗 漉法保持了相当的浓度差 所以提取效率高 浸提液杂质较少 但提取时间很长 溶剂消耗量 特别大 操作麻烦
相比 渗漉法保持了相当的浓度差 所以提取效率高 浸提液杂质较少 但提取时间很长 溶
剂消耗量特别大 操作麻烦 使用索氏提取法 由于每一次提取都为新鲜纯溶剂 保持了比较
大的浓度差 使得提取率提高 提取液杂质少 是我们实验中主要采用的提取方法
关键词 虎杖 蒽醌 提取 分离
虎杖蒽醌的提取分离方法
曾里 1
Leabharlann Baidu
,
袁佩 2
(1.重庆医科大学应用技术学院 400050 2. 重庆医科大学药学院 400016 )
虎杖是一味重要的中药 蒽醌类衍生物是虎杖的重要活性部位 如大黄素-8-葡萄糖甙 大 黄素甲醚-8-葡萄糖甙 大黄素 大黄酸 大黄素甲醚等[1] 虎杖具有清热解毒 去风利湿 活 血通经之功效 临床上用于治疗肝炎 高血脂症 烧伤 烫伤等多种疾病 人们利用现代药理 实验技术进一步发现虎杖的许多药理作用 例如 抗血小板凝聚 抗白细胞减少 调节 Ca2+通 道等[2] 对虎杖中有效成分的药理作用研究是目前中草药研究的热点 然而 如何获取虎杖的 活性成分的研究却很少 目前仅停留在水煮 醇提等传统粗糙工艺上 我们使用渗漉 浸泡 回流 索氏和超声提取法提取虎杖蒽醌 通过提取效率及提取速率对各种提取方法进行评价 寻找适合虎杖蒽醌的提取方法 采用极性梯度溶剂法 寻找适合虎杖蒽醌的提取溶剂 1 实验仪器和试剂 仪器: 722 光栅分光光度计 四川仪表九厂 分析天平 湘仪天平仪器厂 , ZF-1 型三用紫 外分析仪 上海顾村电光仪器厂 , KQ-100 性超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司 试剂: 石油醚 ( AR) 乙醚 (AR) 氯仿 (AR) 95%乙醇 (CP) 甲醇 AR 乙酸乙酯(AR) 醋酸镁(AR) 虎杖 购自中药店 1,2,5,8-四羟基蒽醌( R.D.H 进口分装 AR)
综上可知 在进行提取溶剂选择时 对未水解的虎杖直接提取时 选用 70%的乙醇提取效 果最佳 而对于水解之后的提取则选用氯仿为溶剂 3.3 提取方法 提取时间对提取量的影响
根据实验结果 在回流 索氏和超声提取法中 选择四个提取时间分别为 0.5h 1.0h 1.5h 2.0h 通过对不同提取时间内蒽醌类提取量的比较 从而得到最佳的提取时间 达到既能获得最 大提取量又节约时间和能源 并且减少杂质的提出
NO 03030358 TEL 68826484 13628298191
E-mail bluesky cq@sina.com.cn 1
2 实验部分 2.1 虎杖的提取分离方法 2.1.1 冷浸提取 称取适当切碎的虎杖 20g 于 500mL 烧瓶中 加入 10 倍量乙醇溶剂浸提 24h 共提取两次 合并提取液 抽滤 测定体积和蒽醌含量 2.1.2 渗漉提取 称取适当切碎的虎杖 20g 装入玻璃柱中 用乙醇溶剂浸泡 24h 后开始渗漉 控 制流速使其用 20 倍量的溶剂渗漉 48h 为止 将提取液抽滤 测定体积和蒽醌含量 2.1.3 回流提取 称取适当切碎的虎杖 20g 于 250mL 烧瓶中 加入 6 倍量乙醇溶剂 加热回流 回流时间分别为 0.5h 1h 1.5h 2h 将提取液抽滤 分别测定不同提取时间提取液的体积和蒽 醌含量 2.1.4 索氏提取 称取适当切碎的虎杖 20g 于索氏提取器中 加入 6 倍量乙醇溶剂 水浴加热提 取 回流时间分别为 0.5h 1h 1.5h 2h 将提取液抽滤 分别测定不同提取时间提取液的体积 和蒽醌含量 2.1.5 超声提取 在上述回流提取过程中施加超声波提取 2.2 蒽醌类含量测定
y=0.0377x - 0.001 3.2 溶剂 药材粒度对提取率的影响
根据虎杖中各种成分的溶解性 我们选择五种极性梯度溶剂 极性比较 石油醚<乙醚<氯 仿<乙醇<水 来考查蒽醌类的提取效率 可以看出 随着溶剂极性增强 提取率增加 但溶剂 极性过强 提取率反而降低 这是因为虎杖中的蒽醌大多与糖类结合成甙类 具有较强的亲水 性 若先对虎杖进行水解后再提取 这时结合态的蒽醌游离出来 游离蒽醌为亲脂性物质 在 极性小的石油醚 乙醚和氯仿中容易提取 在强极性的水中提取率非常小
根据醋酸镁的甲醇液与蒽醌类成分反应 可得到稳定的红色 而虎杖非蒽醌类成分不与醋 酸镁甲醇液显色[3] 实验表明 醋酸镁法显色在 1.5h 内吸光度几乎不发生变化 加入醋酸镁后 蒽醌成分的最大吸收波长从 430nm 移动到 505nm 505nm 处没有加入醋酸镁显色时 蒽醌吸光 度很低 并且与加入醋酸镁显色后的吸光度差异很大 因此以未显色的样品溶液作参比 显色 后的样品具有较大的吸光度 其吸光度与蒽醌的浓度成正比 从而测出样品浓度 此测定方法 相关系数可达到 0.9990 浓度在 0.005-0.020mg/mL 范围有良好的线性关系 回归直线方程为
在五种溶剂中 乙醇对蒽醌的提取率最高 同时 乙醇毒性低 价格便宜 易于回收 用 乙醇为溶剂可以把不同类型 性质的蒽醌提取出来[4~6] 采用回流提取方法 分别用 20% 40% 60% 70% 80% 90%不同浓度乙醇提取虎杖中蒽醌成分 当乙醇浓度为 70%时的提取率最高 活性物质的提取不仅与溶剂的溶解能力相关 而且与溶剂对药材植物细胞的溶涨 穿透能力相
为获取虎杖有效成分蒽醌类衍生物 目前仅停留在水煮 醇提等传统粗糙工艺上 对不同提取
溶剂进行选择和对不同提取方法进行优化 通过比较渗漉 冷浸 回流 索氏和超声提取方法
对虎杖蒽醌提取速度 效率的影响 比较各种提取方法的优劣性 评价不同药材粒度 不同提
取时间的提取率 我们选择五种极性梯度溶剂 极性比较 石油醚<乙醚<氯仿<乙醇<水 来考
当用 70%的乙醇为溶剂时 在提取开始阶段 提取率增加很快 随着时间延长提取率逐渐 降低 在索氏提取中 每一次提取都是纯溶剂 保证较大的浓度差 它的提取率比回流高且速 率快 由于超声波的强烈空话 加速 振动等作用 有利于溶剂渗入药材中 可使药材组织内 部温度升高 加速药材有效成分进入溶剂 促进物质的传质作用 使得提取速度加快 提取效 率提高 但是 当提取液中蒽醌浓度与药材组织中的蒽醌浓度达到平衡时 提取液的蒽醌浓度 不再增加 提取过程达到动态平衡 而索氏提取法 没有这种动态平衡 因此 在本实验中 索氏提取 2.0h 效率最高 3.4 几种提取方法比较
使用索氏提取法 由于每一次提取都为新鲜纯溶剂 保持了比较大的浓度差 使得提取率 提高 提取液杂质少 是我们实验中主要采用的提取方法
参考文献 [1] 姚桂根 李莉 孙小萍,等.由制首乌制成首乌片的生产过程中蒽醌类成分的测定[J].中成药研究 1982
6(12) 9—12 [2] 张喜云 虎杖的化学成分 药理作用与提取分离[J] 天津药学 1999 11(3) 13 [3] 张继天.天然药物化学[M].北京:人民卫生出版社 1986 42~46 [4] 王素贤 华会民 吴立军,等.茜草中蒽醌类成分研究[J].药学学报 1992 27(10) 743—747 [5] 蔡雄 潘得济 陈御石,等.伸筋草和玉柏石松中的蒽醌成分的分离和鉴定[J].上海医科大学学报 1991
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热时间也长 致使其中的化学成分易改变 超声提取法虽然可以提高提取速率 但是对药材的
粒度的大小和形状有一定要求 否则提取液的后处理困难 冷浸法虽然避免了加热 对热不稳
定性药材有一定的安全性 但此法提取时间长 浸提 48h 提取仍不完全 尤其对于坚硬 较粗
的药材 溶剂难以浸入组织内部 所以提取效率不高 同时 溶剂消耗量大 渗漉法与冷浸法
虎杖蒽醌的提取分离方法
曾里 1
,
袁佩 2
(1.重庆医科大学应用技术学院 400050 2. 重庆医科大学药学院 400016 )
摘要 虎杖具有清热解毒 去风利湿 活血通经之功效 临床上用于治疗肝炎 高血脂症 烧
伤 烫伤等多种疾病 人们利用现代药理实验技术进一步发现虎杖还有抗血小板凝聚 抗白细
胞减少 调节 Ca2+通道等作用 对虎杖中有效成分的药理作用研究是目前中草药研究的热点
根据蒽醌类化合物在不同介质中吸收光谱的不同 采用差示分光光度法测定虎杖中蒽醌含 量
精确称取 1 2 5 8-四羟基蒽醌 5.39mg 置于 50mL 容量瓶中 用甲醇溶解并稀释至刻度 摇匀 精密吸取 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.60mL 各两份于 10mL 容量瓶中 一份加 0.5% 的醋酸镁甲醇溶液至刻度 另一份用甲醇稀释至刻度 摇匀 分别用甲醇及 0.5%的醋酸镁甲醇 溶液为参比液 于 400-550nm 区间作二者的吸收光谱图 确定在两种介质中的最大吸收波长 甲醇溶液最大吸收波长为 430nm 加入醋酸镁后的最大吸收波长为 505nm 因虎杖中非蒽醌类 成分不与醋酸镁甲醇溶液显色 因此 对于配制的标准系列分别以后者为参比 在 505nm 波长 处测定各溶液的吸光度 A 值 3 结果与讨论 3.1 虎杖中蒽醌类物质含量测定
关 70%乙醇的溶解能力和溶涨 穿透能力均达到最佳
2
药材粉碎度对提取率也有影响 药材粉碎得越细 药材粉末的表面积越大 提取速度和效 率就越高 但药材粉末过细 >100 目 表面吸附增强 反而降低提取率 同时 用乙醇和水 作溶剂时 粉末过细 大量糖类 鞣质 蛋白质 树胶等被提取出来 使提取液变得粘稠而给 后处理带来困难
查对酸解前后虎杖蒽醌类的提取效率的影响 可以看出 随着溶剂极性增强 提取率增加 但
溶剂极性过强 提取率反而降低 选用 70%乙醇溶剂作为提取剂时 各种提取方法都达到较高
的提取率 在回流和超声提取法中 提取液粘度大 所含鞣质 树胶等杂质较多 给进一步分
离提纯带来困难 回流提取所用时间较长 且一次提取又不完全 一般提取 2-3 次 药液受
选用 70%乙醇溶剂作为提取剂时 各种提取方法都达到较高的提取率 对于回流提取 索 氏提取和超声提取 提取率大体相当 且都高于冷浸和渗漉
在回流和超声提取法中 提取液粘度大 所含鞣质 树胶等杂质较多 给进一步分离提纯 带来困难 回流提取所用时间较长 且一次提取又不完全 一般提取 2-3 次 药液受热时间 也长 致使其中的化学成分易改变 超声提取法虽然可以提高提取速率 但是对药材的粒度的 大小和形状有一定要求 否则提取液的后处理困难 冷浸法虽然避免了加热 对热不稳定性药 材有一定的安全性 但此法提取时间长 浸提 48h 提取仍不完全 尤其对于坚硬 较粗的药材 溶剂难以浸入组织内部 所以提取效率不高 同时 溶剂消耗量大 渗漉法与冷浸法相比 渗 漉法保持了相当的浓度差 所以提取效率高 浸提液杂质较少 但提取时间很长 溶剂消耗量 特别大 操作麻烦
相比 渗漉法保持了相当的浓度差 所以提取效率高 浸提液杂质较少 但提取时间很长 溶
剂消耗量特别大 操作麻烦 使用索氏提取法 由于每一次提取都为新鲜纯溶剂 保持了比较
大的浓度差 使得提取率提高 提取液杂质少 是我们实验中主要采用的提取方法
关键词 虎杖 蒽醌 提取 分离
虎杖蒽醌的提取分离方法
曾里 1
Leabharlann Baidu
,
袁佩 2
(1.重庆医科大学应用技术学院 400050 2. 重庆医科大学药学院 400016 )
虎杖是一味重要的中药 蒽醌类衍生物是虎杖的重要活性部位 如大黄素-8-葡萄糖甙 大 黄素甲醚-8-葡萄糖甙 大黄素 大黄酸 大黄素甲醚等[1] 虎杖具有清热解毒 去风利湿 活 血通经之功效 临床上用于治疗肝炎 高血脂症 烧伤 烫伤等多种疾病 人们利用现代药理 实验技术进一步发现虎杖的许多药理作用 例如 抗血小板凝聚 抗白细胞减少 调节 Ca2+通 道等[2] 对虎杖中有效成分的药理作用研究是目前中草药研究的热点 然而 如何获取虎杖的 活性成分的研究却很少 目前仅停留在水煮 醇提等传统粗糙工艺上 我们使用渗漉 浸泡 回流 索氏和超声提取法提取虎杖蒽醌 通过提取效率及提取速率对各种提取方法进行评价 寻找适合虎杖蒽醌的提取方法 采用极性梯度溶剂法 寻找适合虎杖蒽醌的提取溶剂 1 实验仪器和试剂 仪器: 722 光栅分光光度计 四川仪表九厂 分析天平 湘仪天平仪器厂 , ZF-1 型三用紫 外分析仪 上海顾村电光仪器厂 , KQ-100 性超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司 试剂: 石油醚 ( AR) 乙醚 (AR) 氯仿 (AR) 95%乙醇 (CP) 甲醇 AR 乙酸乙酯(AR) 醋酸镁(AR) 虎杖 购自中药店 1,2,5,8-四羟基蒽醌( R.D.H 进口分装 AR)
综上可知 在进行提取溶剂选择时 对未水解的虎杖直接提取时 选用 70%的乙醇提取效 果最佳 而对于水解之后的提取则选用氯仿为溶剂 3.3 提取方法 提取时间对提取量的影响
根据实验结果 在回流 索氏和超声提取法中 选择四个提取时间分别为 0.5h 1.0h 1.5h 2.0h 通过对不同提取时间内蒽醌类提取量的比较 从而得到最佳的提取时间 达到既能获得最 大提取量又节约时间和能源 并且减少杂质的提出
NO 03030358 TEL 68826484 13628298191
E-mail bluesky cq@sina.com.cn 1
2 实验部分 2.1 虎杖的提取分离方法 2.1.1 冷浸提取 称取适当切碎的虎杖 20g 于 500mL 烧瓶中 加入 10 倍量乙醇溶剂浸提 24h 共提取两次 合并提取液 抽滤 测定体积和蒽醌含量 2.1.2 渗漉提取 称取适当切碎的虎杖 20g 装入玻璃柱中 用乙醇溶剂浸泡 24h 后开始渗漉 控 制流速使其用 20 倍量的溶剂渗漉 48h 为止 将提取液抽滤 测定体积和蒽醌含量 2.1.3 回流提取 称取适当切碎的虎杖 20g 于 250mL 烧瓶中 加入 6 倍量乙醇溶剂 加热回流 回流时间分别为 0.5h 1h 1.5h 2h 将提取液抽滤 分别测定不同提取时间提取液的体积和蒽 醌含量 2.1.4 索氏提取 称取适当切碎的虎杖 20g 于索氏提取器中 加入 6 倍量乙醇溶剂 水浴加热提 取 回流时间分别为 0.5h 1h 1.5h 2h 将提取液抽滤 分别测定不同提取时间提取液的体积 和蒽醌含量 2.1.5 超声提取 在上述回流提取过程中施加超声波提取 2.2 蒽醌类含量测定
y=0.0377x - 0.001 3.2 溶剂 药材粒度对提取率的影响
根据虎杖中各种成分的溶解性 我们选择五种极性梯度溶剂 极性比较 石油醚<乙醚<氯 仿<乙醇<水 来考查蒽醌类的提取效率 可以看出 随着溶剂极性增强 提取率增加 但溶剂 极性过强 提取率反而降低 这是因为虎杖中的蒽醌大多与糖类结合成甙类 具有较强的亲水 性 若先对虎杖进行水解后再提取 这时结合态的蒽醌游离出来 游离蒽醌为亲脂性物质 在 极性小的石油醚 乙醚和氯仿中容易提取 在强极性的水中提取率非常小
根据醋酸镁的甲醇液与蒽醌类成分反应 可得到稳定的红色 而虎杖非蒽醌类成分不与醋 酸镁甲醇液显色[3] 实验表明 醋酸镁法显色在 1.5h 内吸光度几乎不发生变化 加入醋酸镁后 蒽醌成分的最大吸收波长从 430nm 移动到 505nm 505nm 处没有加入醋酸镁显色时 蒽醌吸光 度很低 并且与加入醋酸镁显色后的吸光度差异很大 因此以未显色的样品溶液作参比 显色 后的样品具有较大的吸光度 其吸光度与蒽醌的浓度成正比 从而测出样品浓度 此测定方法 相关系数可达到 0.9990 浓度在 0.005-0.020mg/mL 范围有良好的线性关系 回归直线方程为
在五种溶剂中 乙醇对蒽醌的提取率最高 同时 乙醇毒性低 价格便宜 易于回收 用 乙醇为溶剂可以把不同类型 性质的蒽醌提取出来[4~6] 采用回流提取方法 分别用 20% 40% 60% 70% 80% 90%不同浓度乙醇提取虎杖中蒽醌成分 当乙醇浓度为 70%时的提取率最高 活性物质的提取不仅与溶剂的溶解能力相关 而且与溶剂对药材植物细胞的溶涨 穿透能力相
为获取虎杖有效成分蒽醌类衍生物 目前仅停留在水煮 醇提等传统粗糙工艺上 对不同提取
溶剂进行选择和对不同提取方法进行优化 通过比较渗漉 冷浸 回流 索氏和超声提取方法
对虎杖蒽醌提取速度 效率的影响 比较各种提取方法的优劣性 评价不同药材粒度 不同提
取时间的提取率 我们选择五种极性梯度溶剂 极性比较 石油醚<乙醚<氯仿<乙醇<水 来考
当用 70%的乙醇为溶剂时 在提取开始阶段 提取率增加很快 随着时间延长提取率逐渐 降低 在索氏提取中 每一次提取都是纯溶剂 保证较大的浓度差 它的提取率比回流高且速 率快 由于超声波的强烈空话 加速 振动等作用 有利于溶剂渗入药材中 可使药材组织内 部温度升高 加速药材有效成分进入溶剂 促进物质的传质作用 使得提取速度加快 提取效 率提高 但是 当提取液中蒽醌浓度与药材组织中的蒽醌浓度达到平衡时 提取液的蒽醌浓度 不再增加 提取过程达到动态平衡 而索氏提取法 没有这种动态平衡 因此 在本实验中 索氏提取 2.0h 效率最高 3.4 几种提取方法比较
使用索氏提取法 由于每一次提取都为新鲜纯溶剂 保持了比较大的浓度差 使得提取率 提高 提取液杂质少 是我们实验中主要采用的提取方法
参考文献 [1] 姚桂根 李莉 孙小萍,等.由制首乌制成首乌片的生产过程中蒽醌类成分的测定[J].中成药研究 1982
6(12) 9—12 [2] 张喜云 虎杖的化学成分 药理作用与提取分离[J] 天津药学 1999 11(3) 13 [3] 张继天.天然药物化学[M].北京:人民卫生出版社 1986 42~46 [4] 王素贤 华会民 吴立军,等.茜草中蒽醌类成分研究[J].药学学报 1992 27(10) 743—747 [5] 蔡雄 潘得济 陈御石,等.伸筋草和玉柏石松中的蒽醌成分的分离和鉴定[J].上海医科大学学报 1991