蛋白纯化方法大全

蛋白纯化方法大全

蛋白纯化的技术很复杂，以下就会大家熟知蛋白纯化步骤。那为什么蛋白质要纯化呢，去掉蛋白质含有的一些杂质与其他蛋白质一起沉淀。那么又要去除蛋白质的杂质又要保证蛋白质的营养不被流失，于是就要制作不同的方案来应对，称为蛋白纯化技术。根据蛋白的相似度和差异去除蛋白中的杂质!

1、粗分级分离

当蛋白质提取液(有时还杂有核酸、多糖之类)获得后，选用一套适当的方法，将所要的蛋白与其他杂蛋白分离开来。一般这一步的分离用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简便、处理量大，既能除去大量杂质，又能浓缩蛋白溶液。有些蛋白提取液体积较大，又不适于用沉淀或盐析法浓缩，则可采用超过滤、凝胶过滤、冷冻真空干燥或其他方法进行浓缩。

2样品经粗分级分离以后，一般体积较小，杂蛋白大部分已被除去。进一步纯化，一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法，包括

区带电泳、等电点聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一般规模较小，但分辨率很高。

3结晶是蛋白质分离纯化的最后步骤。尽管结晶过程并不能保证蛋白一定是均一的，但是只有某种蛋白在溶液中数量上占有优势时才能形成结晶。结晶过程本身也伴随着一定程度的纯化，而重结晶又可除去少量夹杂的蛋白。由于结晶过程中从未发现过变性蛋白，因此蛋白的结晶不仅是纯度的一个标志，也是断定制品处于天然状态的有力指标。

41.机械破碎法

这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。

2.渗透破碎法

这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。

3.反复冻融法

生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种

方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。

4.超声波法

使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。

以上就是蛋白纯化的步骤，给大家了解一下。这项技术目前在国内越来越先进，去除蛋白中的杂质让蛋白更纯粹。这是一项很复杂的技术有兴趣的人可以多学习，要分离蛋白中的杂质还要纯化里面的蛋白，要制作出不同的方案，所以这项技术目前不断的发展，未来蛋白纯化的技术会越来越好。