微生物限度检查记录(2015年版)
2015版中国药典微生物限度记录
培养基的配制
使用容器
配制培养基使用的容器应该是玻璃器皿或搪瓷器皿等。 禁用金属容器如：铁、铜、铝容器。
培养基制备方法
实验室指南
溶解培养基应当用水浴加热进行溶解。 测定pH值 矫正pH，配制培养基必须矫正pH,并进行验证。 培养基灭菌后冷却至室温（ 25 ℃）进行 pH 测试。培 养基pH范围不得超过规定的正负0.2。 <高压灭菌前的pH值应比最终pH值高0.2左右>
2015版药典微生物检查法修订内容——结果判断 微生物计数法和控制菌检查法结果判断
不再规定复试，通过实验室调查、回顾、分析结果 的准确性。
限度标准以指数方式表示：
10的一次方cfu：可接受的最大限度为20；
10 的二次方 cfu ，可接受的最大限度为 200 ；以此类 推。
2015版药典通则非无菌产品微生物限度标准增订内容
4.微生物限度标准
5.控制菌检查：保留部分生化试验 6. 修订后，控制指标更合理，计数方法及标准合理、 准确，反映真实污染情况
2015版药典微生物检查法修订内容——环境要求
目前我国药品微生物检测对环境的要求与国际标准 分级不一致。 国际要求：只要洁净环境分为 A 级、 B 级、 C 级、 D 级。 A （百级）、 B （千级）、 C （万级）、 D （十万级）。 协调案要求：试验在经过设计的可避免外来微生物 污染供试品的环境下进行。 我国修订后药品微生物限度检查对检测环境的要求： 无菌环境下符合微生物技术检验要求，单向流空气 区域内进行。
（二）2015版药典微生物检查法修订内容——环境要求
1. 强调了“微生物实验的各项工作应在专属的区域 进行，以降低交叉污染、假阳性结果和假阴性结 果的风险”。 2.无菌检查 修订前 万级（C级）下局部百级（A）或隔离器 修订后 B+A级或建议D级背景下隔离器 3.微生物限度检查 修订前 万级（C）下局部百级（A) 修订后 不低于D级背景下的B级单向流空气区域内 进行。
微生物限度、控制菌检查记录
产品名称
批号
数量
供货单位
取样量
检验日期
温度
湿度
报告日期
检验依据
供试液制备
取供试品（g），加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至ml，混匀，作为1:10的供试液；细菌检查：吸取本品1ml至5个平皿，每个平皿0.2ml；霉菌和酵母菌检查：吸取本品1ml至平皿
平皿号
细菌
培养基/批号
营养琼脂培养基/
供试品
阳性对照
阴性对照
结果
□检出□未检出（规定：）
备注
结论
本品按进行检验，结果。
检验人
复核人
2天
3天
3天
4天
4天
5天
5天
5
1天
1天
2天
2天
3天
3天
4天
4天
5天
5天
每组菌落总数
平均数
平均数
结果
（规定：）
结果
（规定：）
备注
结论
本品经按进行检验，结果。
检验人
复核人
控制菌检查记录
检验编号：
产品名称
批号
数量
供货单位
取样量
检验日期
温度
湿度
报告日期
检验依据
一、大肠埃希菌检查
供试品制备：取供试品（g/ml/cm2），加PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至ml，混匀，作为的供试液。
培养基信息：①营养肉汤培养基配制批号：②四硫磺酸钠亮绿培养基配制批号：
③胆盐硫乳琼脂培养基配制批号：④EMB配制批号：
培养温度：培养时间：培养箱编号：
营养肉汤预增菌（18～24h）
四硫磺酸钠亮绿增菌（18～24h）
压缩空气检查记录
工艺用气微生物限度检查记录
编号：SMP-09-00702-f 工艺用气名称压缩空气供样单位
取样点检验日期年月日
编号报告日期年月日
温度℃相对湿度％检验依据《中国药典》2015年版四部《非无菌产品微生物限度检查》标准规定≤100cfu/ml
供试液的制备：将压缩空气排气口与装有100ml的0.9％无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的洗气瓶相连接，通气不少于10分钟，取上述液体10ml加0.9％无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成1:10的供试液，取供试液10ml,采用薄膜过滤法处理后取出滤膜正面朝上，置已倾注好的胰酪大豆胨琼脂培养基平板上，平行制备2个平皿，置30～35℃培养3～5天。
(冲洗液：100ml的0.9％无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液）
检查结果
培养箱型号培养箱编号RHBC-ZK-
培养基批号设定温度℃
培养时间：月日时～月日时
培养时间
1天2天3天4天5天平均培养结果
平皿号
1
2
空白对照
结果
结论
检验人复核人。
微生物限度检查记录(2015年版)
微生物限度检查记录(2015年版)最终结论是，该双氯芬酸钠栓经过按照《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物限度检查法”进行检验，结果符合要求。
___: ) Culture time1 day2 days3 days4 days5 daysMeanResult10Plate 1 Plate 2 Plate 1-110Plate 2 Plate 1-210Plate 2-3 negative controlPlate 1 Plate 2Sabouraud glucose agar (___: ) Culture time1 day2 days3 days4 days5 days6 days7 daysMeanResult10Plate 1 Plate 2 Plate 1-110-2-310 negative controlPlate 2 Plate 1 Plate 2 Plate 1 Plate 2Test methodBacterial culture (18-24h)___ (18-72h)Oxidase testResultTest samplePseudomonas aeruginosa Positive control(Standard: ___)Negative control—Test sample—___ aureusPositive control—Negative controlTable 2.1-024Microbial limit test record (tablets) ___Dosage formn dateSample nameBatch numbern daten of test nI. ___ count (30-35°C, 3-5 days) II. Total mold and yeast count (2-25°C, 5-7 days)Sabouraud glucose agar (n batch number: ) ___: )10————————-1 Culturetime1 day2 days3 days4 days5 days6 days7 daysMeanResult10-210——-3 negative control——10-110-210-3 negative controlPlate 1 Plate 2 Plate 1 Plate 2 Plate 1 Plate 2 Plate 1 Plate 2 Plate 1 Plate 2 Plate 1 Plate 2 Plate 1 Plate 2 Plate 1 Plate 2 ————___: ), MacConkey liquid culture media (___: ), MacConkey agar (n batch number: ) Test sampleNegative controlPositive controlResult___ (30-35°C, 18-24h)___本文介绍了一种非无菌产品微生物限度检查法。
2015年版中国药典微生物限度检查方法验证方案
2015年版中国药典微生物限度检查方法验证方案佛山市华普生药业有限公司文件编码：TS-VP-4201-00页数：1/56 人工牛黄甲哨唑胶囊微生物限度检查方法验证方案人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案起草部门：QC组签名：日期：审核部门：QC组签名：日期：部门：质量部签名：日期：批准质量负责人签名：日期：质量部颁发本文件根据需要应分发于以下部门：01 质量部下表用于记录修订/变更主要内容及历史。
佛山市华普生药业有限公司文件编码：TS-VP-4201-00页数：2/56 人工牛黄甲哨唑胶囊微生物限度检查方法验证方案文件编号修订原因修订日期TS-VP-4201-00 按GMP（2010年修订版）要求新制定2015.10.22佛山市华普生药业有限公司文件编码：TS-VP-4201-00页数：3/56 人工牛黄甲哨唑胶囊微生物限度检查方法验证方案目录1. 概述2. 验证目的和范围3. 组织及职责4. 验证进度计划表5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认7.验证项目和验证方法7.1试验菌株7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法7.4需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法7.5控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法8.偏差与漏项控制佛山市华普生药业有限公司文件编码：TS-VP-4201-00页数：4/56 人工牛黄甲哨唑胶囊微生物限度检查方法验证方案9.验证报告会审佛山市华普生药业有限公司文件编码：TS-VP-4201-00页数：5/56 人工牛黄甲哨唑胶囊微生物限度检查方法验证方案1. 概述我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊，产品微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。
参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法，以及1106：控制菌检查法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。
2015版中国药典微生物限度记录ppt课件
假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌
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2015版药典微生物检查法修订内容——结果判断 微生物计数法和控制菌检查法结果判断 不再规定复试，通过实验室调查、回顾、分析结果
的准确性。 限度标准以指数方式表示： 10的一次方cfu：可接受的最大限度为20； 10的二次方cfu，可接受的最大限度为200；以此类
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2015版药典抑菌效力检查法修订内容
抑菌剂：是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。 1.抑菌效力检查法系用于测定无菌及非无菌制剂的抑菌活性，
以评价最终产品的抑菌效力。 2.用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定，
以防止制剂在正常贮藏或使用过程中可能发生的微生物污 染和繁殖是药物变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量 包装的制剂。 3.抑菌剂不能替代药品生产的GMP管理，不能作为非无菌制 剂降低微生物污染的唯一途径。 4.所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最 低有效量。
型限制 4.微生物限度标准 5.控制菌检查：保留部分生化试验 6.修订后，控制指标更合理，计数方法及标准合理、
准确，反映真实污染情况
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2015版药典微生物检查法修订内容——环境要求
目前我国药品微生物检测对环境的要求与国际标准 分级不一致。
国际要求：只要洁净环境分为A级、B级、C级、D级。 A（百级）、B（千级）、C（万级）、D（十万级）。 协调案要求：试验在经过设计的可避免外来微生物
2015版《中国药典》微生物学 检验技术实施指导与修订解读
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内容简介 一、2015年版《中国药典》微生物学检验的发展和修订 二、非无菌产品微生物检查：微生物计数法 .修订依据 .格式变化 .适用范围 ④.环境要求 ⑤.微
2015版中国药典微生物限度
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑵ 水不溶性非油脂类供试品
• 取供试品， 用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或 pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基制备成 1:10 供试液。 分散力较差的供试品，可在稀释液中加入 表面活性剂如 0.1%的聚山梨酯 80，使供 试品分散均匀。若需要，调节供试液 pH 值至 6～8。必要时，用同一稀释液将供 试液进一步 10倍系列稀释。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
或cm²）。
– 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或
• 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的 总菌落数（包括真菌菌落数）；
• 霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上 生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。
• 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌 和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可 使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡 萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红 钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑷需用特殊方法制备供试液的供试品
• 膜剂供试品 • 肠溶及结肠溶制剂供试品 • 气雾剂、喷雾剂供试品 • 贴膏剂供试品
1.4.2供试品检查
1. 平皿法
– 平皿法包括倾注法和涂布法。 – 除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性
试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每 稀释级每种培养基至少制备2个平皿。 – 培养和计数 除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养 基平板在30～35℃培养3~5天，沙氏葡萄糖琼脂 培养基平板在20～25℃培养5 ~7天， 观察菌落 生长情况,点计平板上生长的所有菌落数，必要时 可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并报告 。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落 数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌 数报告规则报告菌数。 – 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15， 则两个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。
微生物限度记录2015
微生物限度检查记录(二)编号：SMP-09-00702-e-1检品名称：检品规格：检品批号：取样日期：检验日期：报告日期：检验依据：《中国药典》2015年版四部《非无菌产品微生物限度检查》仪器：隔水式恒温培养箱型号：编号：RHBC-ZK- 霉菌培养箱型号：编号：RHBC-ZK-恒温培养箱型号：编号：RHBC-ZK-1、需氧菌、霉菌和酵母菌供试品制备：取供试品 g，加稀释液 ml，用适宜的方法混匀，作为1：10供试品溶液。
取1：10供试品溶液1ml，加稀释液至10ml，得到1：100供试品溶液。
取1：100供试品溶液1ml，加稀释液至10ml.得到1：1000供试品溶液。
按薄膜过滤法进行检查。
（稀释液,冲洗液：0.9％无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液）观察结果：需氧菌数30～35℃培养3～5天霉菌、酵母菌数20～25℃培养5～7天胰酪大豆胨琼脂培养基，批号：沙氏葡萄糖琼脂培养基，批号：取上述1：10的供试液10ml，接种至胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30～35℃培养18～24小时。
取上述培养物1ml接种于100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时。
取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时。
观察结果：取供试品，用胰酪大豆胨液体培养基作为稀释剂制成1:10供试液，混匀，在20～25℃培养约2小时。
取上述预培养物10ml接种至100ml肠道菌液体培养基中，30～35℃培养24～48小时后，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～24小时。
取相当于0.1g、0.01g和0.001g（或0.1ml、0.01ml和0.001ml）的供试品的预培养物接种至 ml的肠道菌液体培养基中，30～35℃培养24～48小时。
取上述培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～24小时。
观察结果：取供试品10g或10ml，直接接种到200ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30～35℃培养18～24小时。
微生物限度检验记录表 2015版药典
阴性对照
菌落数(cfu)
平皿
1∶1
1∶10
1∶102
1
2
平均
样品编号
平皿编号
各稀释度菌落数
阴性对照
菌落数(cfu)
平皿
1∶1
1∶10
1∶102
1
2
平均
标准规定
纯化水需氧菌总数不超过100cfu/mL
注射用水需氧菌总数不过超过10cfu/100ml
结论
微生物限度□符合□不符合标准要求。
审核：复核：检验-01-0
使用编号
微生物限度检验记录
样品名称：□纯化水□注射用水取样日期：
取样数量:样品编号：
培养开始时间：月日结束培养时间：月日
R2A琼脂培养基批号：培养温度：℃
样品编号
平皿编号
各稀释度菌落数
阴性对照
菌落数(cfu)
平皿
1∶1
1∶10
1∶102
1
2
平均
样品编号
平皿编号
2015年版微生物限度检验操作规程.
青岛**有限公司文件目的建立微生物限度检查操作规程，规范操作，保证结果的准确性。
范围成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。
责任品管部微生物限度检验人员内容概述：本检验操作规程依据中国药典2015年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》进行检查。
微生物计数法一、计数方法1．微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
2、计数方法本法包括平皿法、薄膜过滤法。
3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。
4、菌种及菌液的制备4.1试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。
计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验见表1。
4.2菌液制备按表1规定培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。
表1 试验菌液的制备和使用4.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
4.4培养基适用性检查按照表1规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置规定的条件下培养。
微生物限度检查记录版
表：2.1-024微生物限度检查记录（通用）1. 常规法：取供试品10為1,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至 100ml ，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。
2. 薄膜过滤法：取供试品10mi ,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至 100ml ，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。
吸取1:10的供试液10ml ,过滤，加0.1%无菌蛋白胨水溶液 300ml 分 三次冲洗，每次100ml ;冲洗后，将滤膜正贴于胰酪大豆胨固体培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基 上，每种培养基平行制备 2个平皿。
按平皿法测定其菌数。
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号:）、麦康凯液体培养基（配制批）麦康凯琼脂培养基（配制批号: ）供试液制备微生物限度检查记录、需氧菌总数检查30〜353〜5）、霉菌、酵母菌总数检查20C〜25C,5〜7天）三糖铁琼脂斜面穿刺接种 （18〜24h ）三、控制菌检查 （30-35 C ）检验者:表：2.1-024号:结论本品经按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物限度检查法”进行检验，结果审核者:微生物限度检查记录（丸剂）供试液制备供试液。
胰酪大豆胨增菌 （18〜24h ）RV 沙门选择培养木糖赖氨酸脱氧胆酸分离培养（18〜48h ）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号:）麦康凯琼脂培养基（配制批号:）四、沙门菌检查 （30 °C 〜35C ） 胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、RV 沙门增菌液体培养基（配制批号： ）,木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号:）、三糖铁琼脂（配制批号：五、耐胆盐革兰阴性菌检杳胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：）,紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：审核者：检验者: 表：2.1-024阴性对照阳性对照三、大肠埃希菌检查）、麦康凯液体培养基（配制批结果□检出大肠埃希菌□未检出大肠埃希菌（规定：不得检出/g）四、沙门菌检查（30°C〜35C）胰酪大豆东液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：）,紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：、表: 2.1-024 微生物限度检查记录（蛇胆川贝液）三、大肠埃希菌检查胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：）,木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）审核者：检验者:表：2.1-024 微生物限度检查记录（30〜353〜5天）、霉菌、酵母菌总数检查20C〜25C, 5〜7天）1、 口服液体药用聚酯瓶：取数个试瓶，加入1/2标示容量的氯化钠注射液，将盖旋紧，振摇1分钟，即得供试液。
药品微生物检查记录
培养温度：
培养时间：
RV 沙门菌增菌液体培养基选择培养
培养温度：
培养时间：
木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基（疑似+/未检出-） 三糖铁琼脂培养基斜面（疑似+/未检出-）
培养温度：
培养时间：
培养温度：
培养时间：
供试品
阴性对照
阳性对照
结果
□检出沙门菌
□未检出沙门菌
标准规定：不得检出/10g
四、耐胆盐革兰阴性菌检查
结果
均值
结果
cfu/g
标准规定：≤104cfu/g
cfu/g
标准规定：≤104cfu/g
三、沙门菌检查(30~35℃)
培养基： 胰酪大豆胨液体培养基（批号：
）
RV 沙门菌增菌液体培养基（ 批号：
）
木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基（批号：
）
三糖铁琼脂培养基（ 批号：
）
检查项目 胰酪大豆胨液体培养基增菌培养
药品微生物检验记录
检验号
品名
批号
规格
请验部门
温度
检验日期
年月 日
湿度
报告日期
年月 日
紫外消毒时间
时 分至 时 分
检验依据 《中国药典》2015 年版四部通则 1105、1106“非无菌产品微生物限度检查法”
供试品制备
取供试品 10g 加入稀释液 100ml, 混匀，制成 1:10 的供试液
一、需氧菌总数检查
培养基： 胰酪大豆胨液体培养基（批号：
）
肠道菌增菌液体培养基（批号：
）
紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（批号：
）
检查项目
胰酪大豆胨液体培养基预培养
培养温度：
微生物限度检查操作规程(中国药典2015版四部通则)
霉菌与酵母菌总数、控制菌得检查。
二、引用标准：《中国药典》２015年版（通则1１05-1106）三、目录1。
微生物限度标准2.设备、仪器及用具3。
消毒液、稀释剂、试液及培养基4。
检查总则(通则1105：非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法,通则1106非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法）5。
微生物计数法检查6.控制菌检查法7．实验技术8、附件１.微生物限度标准非无菌药用原料及辅料得微生物限度标准(2)．目测霉变者以不合格论。
（３）。
“无”为标准依据或无相应规定。
准依据或无相应规定.2.设施、仪器及用具2、１、设施：2、１、1．微生物限度检查室及相关设施：微生物计数试验环境应符合微生物限度检查得要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染得措施不得影响供试品中微生物得检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
２、1、2．其她设备:高压蒸汽灭菌器;细菌培养箱(3０~3５℃);霉菌培养箱(２5～2８℃)；电炉(或其她适宜得加热装置）；恒温水浴；电热干燥箱(250~３00℃)；电冰箱。
生化试剂储存箱。
2、2仪器及器皿2、2、1。
菌落计数器；显微镜（15０0X）;电子天平或药物天平（感量0、1ｇ）;ｐH 系列比色计。
2、2、2．玻璃器皿：锥形瓶(2５０~３００ml,内装玻璃珠若干)、研钵（玻璃或陶瓷制,∮10～12ｃm)、培养皿（∮9 ｃm）、量筒(１00ml）、试管（1８×180ｍm）及塞、吸管（1ml分度0、01，10ml分度0、１)、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）。
2、2、3新购得玻璃器皿得清洁:先用流水冲洗，浸泡于1％~２%盐酸（工业用）液中约2～6小时，除去游离碱质，再用流水冲洗.用于化学分析得玻璃仪器,需用重铬酸钾清洁液浸泡数分钟后，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗2～3次，晾干备用。
2、3用过得玻璃器皿：2、3、1未被病原微生物污染得器皿：可随时洗涤.用清水冲洗(或浸泡)，除容量仪器外，可用毛刷与肥皂粉，内外刷洗，再用清水涮洗干净,晾干备用.容量仪器宜用清洁液浸泡或涮洗，再用流水冲洗,最后以纯化水涮洗2～3次.试管及培养皿:先正放或直立于高压蒸汽灭菌器内,经1２1℃灭菌30 分钟.趁热倾出培养物，再以清水或用毛刷及肥皂粉刷洗,最后以流水涮净。
2015年版中国药典微生物限度检查法
1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜 选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级，作为 菌数报告（取两位有效数字）的依据。取最 高的平均菌落数，计算1g、1ml 或10 cm² 供 试品中所含的微生物数。 – 如各稀释级的平皿均无菌落生长，或仅最低 稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小 于1 时，以﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌 数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备 – ⑴ 水溶性供试品
• 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基溶解或稀释制成 1:10 供试液。若需要，调节供试液 pH 值至 6 ～8。必要时，用同一稀释液将供试液进 一步 10倍系列稀释。水溶性液体制剂也 可用混合的供试品原液作为供试液。
1.3.1菌液制备及使用
试验菌株 试验菌液的制备
金黄色葡萄球菌 〔CMCC(B) 26 003)〕
铜绿假单胞菌 〔CMCC（B)10 104〕 枯草芽孢杆菌 〔CMCC(B) 63 501〕 白色念珠菌 〔CMCC(F) 98 001〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培 养基 【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基】 30～35℃，18～24小时
2015版计数培养基适用性检查-记录
计数用培养基适用性检查记录PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。
将黑曲霉菌菌悬液用PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。
4.培养基配制按相应培养基产品说明分别配制胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、R2A琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂对照培养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基、玫瑰红钠琼脂对照培养基、R2A琼脂对照培养基，并按照相应的灭菌方式灭菌备用。
5、培养基计数适用性检查5.1胰酪大豆胨琼脂培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液置直径90mm的无菌平皿中各2皿，另一个皿不接种菌作为空白对照。
且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
判该培养基的适用性检查符合规定。
5.1.2结果判定：__________________________________________5.2沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液置直径90mm的无菌平皿中各2皿，另一个皿不接种菌作为空白对照。
倾注20ml温度不超过45℃熔化的沙氏葡萄糖对照琼脂培养基，混匀，凝固。
将平皿倒置于20-25℃的霉菌培养箱培养不超过5天，计数。
被检培养基同法操作。
结果见表2。
表2培养基适用性检查结果2落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
判该培养基的适用性检查符合规定。
5.3.2结果判定：__________________________________落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
判该培养基的适用性检查符合规定。
5.4.2结果判定：__________________________________5.4.3结论：________________________________________实验人：复核人：年月日年月日计数用培养基适用性检查方案起草人：复核人：试验日期：。
2015版纯化水微生物限度检查记录
培养温度
放入培养时间
取出培养时间
累计培养时间
年月日时
年月日时
h
培养
时间/取样点编号 Nhomakorabea阴性对照
24h
1
□长菌
□未长菌
2
48h
1
□长菌
□未长菌
2
72h
1
□长菌
□未长菌
2
菌数报告
CFU/ml
/
标准规定
需氧菌总数每1ml不得过100CFU。
项目结论
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
纯化水微生物限度检查记录
检验日期
年月日
报告日期
年月日
检验依据
《中国药典》2015年版二部、四部通则微生物检查法
需氧菌总数检查：取纯化水50ml，用薄膜过滤器（0.45±0.02um，50MM直径）过滤，减压抽干。取出滤膜，将滤膜放入制备好的R2A培养基平板上，在30～35℃培养3天，计数。
需氧菌阴性对照：取50ml已灭菌的纯化水按供试品同法处理，作为阴性对照。
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
/
检验人：复核人：
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表：2.1-024微生物限度检查记录（通用）
三、大肠埃希菌检查
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）
审核者：检验者：
微生物限度检查记录
（30～35℃，3～5天）
20℃～25℃，5～7天）
沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）
三、控制菌检查（30-35℃）
表：2.1-024
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）
（30℃～35℃）
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）
五、耐胆盐革兰阴性菌检查
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）
表：2.1-024（含药材原粉的片剂）
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）
（30℃～35℃）
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）
五、耐胆盐革兰阴性菌检查
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）
表：2.1-024微生物限度检查记录（蛇胆川贝液）
三、大肠埃希菌检查
四、沙门菌检查（30℃～35℃）
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）
表：2.1-024微生物限度检查记录
（30～35℃，3～5天）
20℃～25℃，5～7天）
沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）
表：2.1-024 微生物限度检查记录（包材）
三、大肠埃希菌检查
胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）。