阪崎肠杆菌检验

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本实验室
1. 大多数分离株呈流蜡样， 粉紫色、圆形、光滑、凸 起、饱满，并散发出特殊 气味； 2. 干燥、顶端发白的粉紫色 菌落； 3. 从配方粉中初次分离到的 该菌在VRBGA平板上过夜 培养后呈现特殊的菌落形 态：菌落干燥、边缘有褶 皱，极富弹性。传代后， 菌落皱褶减少，延长培养 时间，可见皱褶逐渐增加。
• ESIA:蓝色，1-3mm • 国产显色培养基
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黄色素
TSA： 25℃培养后 典型ES：黄色 阴性对照E. coli ATCC 25922：白色菌落
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5.3 鉴定（生化反应）
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商业生化鉴定系统的应用
• 推荐使用的ES生化鉴定方法有很多，主要有 API 20E，ID 32E，Biolog GN2 MicroPlate， VITEK GNI+等。
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第一法：阪崎肠杆菌的检验
第二法：阪崎肠杆菌的计数
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第一法 阪崎肠杆菌的检验
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阪崎肠杆菌检验程序
检样 100 g/mL+BPW稀释液 900 mL 36℃±1℃，18 h±2h
1mL + mLST-Vm 10mL 44℃±0.5℃，24 h±2h
DFI琼脂 36℃±1℃，24 h±2h 挑取蓝绿色菌落 TSA 25℃±1℃，48 h±4h 挑取黄色菌落 生化鉴定 报 告 生 化 鉴 定 选择性分离 前 增 菌
选择性增菌
5.1 前增菌和增菌
BPW（合适时可选择无菌水） 左图：未混合； 右图：混合后。
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mLST-Fra Baidu bibliotekm
mLST-Vm，即在大肠菌群增菌肉汤LST中另加入 适量的NaCl和Vm 。
–研究证明与其他肠杆菌科细菌（如沙门菌属、大肠埃希
氏菌等）相比，ES具有较高的耐渗透压能力。加入0.5 M
的NaCl在保证ES良好生长的同时，可以有效地抑制上述 其他细菌的生长。 –Vm可有效地抑制G+菌的生长。而较高的生长温度可以进 一步抑制其他细菌的生长。
阪崎肠杆菌检验
GB 4789.40--2010
Enterobacter sakazakii(ES)
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内
容
第一部分：一般特征 第二部分：致病性 第三部分：ES的检验
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• 阪崎肠杆菌(E．sakazakii)是人和动物肠道内 寄生的一种革兰阴性无芽孢杆菌，属肠杆 菌科肠杆菌属，是肠道正常菌丛中的一种 ，在一定条件下可引起人和动物致病。 阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小 肠结肠炎和菌血症，死亡率高达50% 以上 。目前，微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌 的污染来源，但许多病例报告表明婴儿配 方粉是目前发现的主要感染渠道。
也能导致感染的发生。
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第二部分：致病性
一．易感人群 二．主要感染渠道 三．配方粉中ES的污染状况 四．PIF中ES的来源及中毒发生的原因
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一、易感人群
婴儿： 1. 脑膜炎 2. 坏死性小肠结肠炎 3. 菌血症 • 严重的神经系统后遗症
• • 高危人群：主要是婴儿，新生儿、尤其是早产儿、低出 生体重等免疫力低下的婴儿。 死亡率：50%，20-50 %
成人：局部感染、菌血症、术后骨髓炎等
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二、主要感染渠道 ！！！
• •
乳品安全标准（报批稿） 《婴儿配方食品》 《特殊医学用途配方食品》 0-6个月龄
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第三部分
食品卫生微生物学检验 阪崎肠杆菌检验
本标准修改采用
1. ISO/TS 22964 （ 1st edition 2006-02-01 ） Milk and milk products — Detection of Enterobacter sakazakii 2. FDA July 2002; Revised August 2002 Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula
–上述方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多 国家和组织的标准采用。
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5.2 分离
显色培养基的基本原理相似，二者都
是根据ES能产生α-葡萄糖苷酶，分解底物 XaGlc产生有色菌落。
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• 显色培养基对ES的选择性较好，ES形成的特征性菌 落易于辨认，以DFI为例：
1. 硫化氢指示剂可以区分ES和产生少量α-葡萄糖苷酶但H2S 阳性菌株（如普通变形杆菌）。 2. ES都可以在该平板上生长并产生蓝绿色菌落 3. 其他常见菌在DFI平板的菌落颜色 a. 白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希 氏菌、泛菌属的多种菌等 b. 黄色菌落：赫氏埃希氏菌 c. 黑褐色、粉色或中心蓝绿菌落：少量菌种
第一部分：一般特征
一．培养特征 二．生化反应 三．抵抗力 四．增殖能力
与其他常见肠杆菌相似
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一、培养特征
阪崎肠杆菌兼性厌氧，营养要求不高，能在营养琼脂、 血平板、麦康凯(MacConkey，MAC)琼脂、伊红美蓝 琼脂、脱氧胆酸琼脂等多种培养基上生长繁殖。
ES在VRBGA平板上首次划线分离时，37℃培养24h可生成2种不同 的形态学特征： 1. 干燥或粘液状、圆锯齿状（凹口或锯齿），用金属环接触时 可发现坚韧或有弹力，即粘贴金属环的菌量很少，并且菌落 可很快恢复。传代培养后可能会转变为典型的光滑菌落。 2. 光滑、易于用金属环从菌落移取细胞。
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二、生化反应
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• DNASE-脱氧核糖核酸酶
注：＋ ：90-100％；(＋) ：75-89%； V ：25-74％；(－)：10 -24％；－ ：0-9％
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三、抵抗力
• 耐热性 • 渗透压 • 干燥
不同菌株的耐热性存在明显的差别，但标准的巴氏消 毒过程能有效的灭活ES。 ES对渗透压的耐受性使该菌能够成为环境中的优势株， 增加PIF（婴儿配方奶）加工后污染的危险性，使其在PIF （婴儿配方奶） 中长期存活。
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四、增殖能力
• 6℃，21℃，37℃分别是13.7h，1.7h，19－21min
• 研究发现，与本底相比，25℃放臵6h该菌的相对危
险性可增加30倍；25℃放臵10h可增加30 000倍。
• 2004年2月FAO/WHO在日内瓦召开的PIF中ES专家研
讨会上提出PIF中微量的ES（＜3 CFU/100g）污染