过氧化物酶活性的测定
过氧化物酶活性测定
过氧化物酶（POD）活性测定一、原理：过氧化物酶含铁，广泛存在于植物组织中，可催化过氧化氢氧化酚类，产物为醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其他分子缩合，产生颜色较深的化合物。
本实验以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶的底物，当有H2O2 存在时，过氧化物酶可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的4-邻甲氧基苯酚，其在470nm处有最大吸收峰，故可用分光光度计在470nm处测定其吸光值，即可求出该酶的活性。
二、实验准备：仪器：分光光度计、离心机、秒表、研钵、磁力搅拌器、移液管、电子天平、冰箱、100ml 容量瓶、试管、胶头滴管、试管架、烧杯、吸水纸、比色皿、剪子试剂：0.05 mol/L愈创木酚；2%H2O2； pH 6.0的磷酸缓冲液；75%酒精；蒸馏水试剂配制:○1pH 6.0的磷酸缓冲液:0.2mol/l NaH2PO4 (27.6g NaH2PO4•H2O 用蒸馏水配成1000ml）取87.7ml和0.2mol/l Na2HPO4 （71.7g Na2HPO4•12H2O 或53.65g Na2HPO4•7H2O 用蒸馏水配成1000ml）取12.3ml后混合，用蒸馏水稀释至200ml即可。
○22%H2O2：取6.7ml 30%H2O2于烧杯中，再加入93.3mL蒸馏水（或加蒸馏水稀释至100mL），搅拌均匀。
○30.05 mol/L愈创木酚：准确称取6.2g愈创木酚，再用95%的乙醇配制定容至100ml即可。
三、步骤：○1粗酶液的提取：称取一定质量的植物材料放入研钵中，加入提取液1 mL(pH 6.0的磷酸缓冲液)，研磨，再加入9 mL提取液，将匀浆全部转入离心管中，于4 000 r/min 4 ℃离心10 min，上清液即为酶的粗提取液，收集上清液于冷处（冰箱4℃保存）。
○2酶活性的测定：将4 mL反应混合液( pH 6.0的磷酸缓冲液2 mL,酶液1 mL,0.05 mol/L 愈创木酚1 mL)和1 mL 2% H202加入试管中立即摇匀并迅速倒入比色皿中，于470 nm波长下用U 2800型紫外可见分光光度计比色，立刻记录吸光度值，以后每15 s记录1次，记录2 min ，另外以缓冲液代替酶液作为较零对照组。
过氧化物酶活性的测定实验报告
一、实验目的了解过氧化物酶（POD）在植物生理学中的重要作用，掌握测定POD活性的方法，并分析不同因素对POD活性的影响。
二、实验原理过氧化物酶是一种广泛存在于植物组织中的酶，能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2）。
在实验中，通过测定在一定时间内POD分解H2O2产生氧气的量，来评价POD的活性。
反应方程式如下：2H2O2 → 2H2O + O2本实验采用愈创木酚法测定POD活性。
愈创木酚在POD催化下被氧化，生成对苯醌，进而与氯化铁形成紫色络合物，通过测定紫色络合物的吸光度变化来反映POD的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物叶片（如马铃薯、菠菜等）- 过氧化氢（H2O2）- 愈创木酚- 氯化铁- 磷酸氢二钠（Na2HPO4）- 磷酸氢钠（NaH2PO4）- pH计- 离心机- 分光光度计- 研钵- 试管- 移液器- 电子天平2. 实验试剂：- 0.1 M磷酸盐缓冲液（pH 7.0）- 0.1 M H2O2溶液- 0.5 M愈创木酚溶液- 0.1 M氯化铁溶液四、实验步骤1. 酶液提取：将植物叶片洗净、剪碎，加入预冷的磷酸盐缓冲液，在研钵中研磨成匀浆。
将匀浆液转移至离心管中，4℃、12,000 rpm离心10分钟，取上清液即为酶液。
2. 测定酶活性：取5支试管，编号为1-5，分别加入以下试剂：- 空白组：0.1 M磷酸盐缓冲液1.0 mL、0.1 M H2O2溶液1.0 mL、0.5 M愈创木酚溶液1.0 mL- 实验组：0.1 M磷酸盐缓冲液1.0 mL、0.1 M H2O2溶液1.0 mL、0.5 M愈创木酚溶液1.0 mL、酶液0.1 mL将各试管混匀，置于37℃恒温水浴中保温5分钟。
取出试管，立即放入冰浴中终止反应。
使用分光光度计在波长560 nm处测定各试管吸光度。
3. 计算酶活性：以空白组吸光度为基准，计算各实验组吸光度变化值（ΔA）。
根据下列公式计算酶活性：酶活性（U/g·min）= ΔA × 0.05 × 10^3 / 酶液浓度五、结果与分析1. 不同植物叶片POD活性比较：实验结果显示，不同植物叶片的POD活性存在差异。
过氧化物酶活性的测定
过氧化物酶活性的测定（比色法）过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。
在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量470 nm 处的吸光度变化速率来测定过氧化物酶活性。
一、仪器、药品与材料（一）实验材料新鲜植物组织。
（二）仪器与用品分光光度计，研钵，恒温水浴锅，100 mL 容量瓶，吸管，高速冷冻离心机，秒表，磁力搅拌器。
（三）试剂１．愈创木酚。
２．30％过氧化氢。
３．100 mmol/L 磷酸缓冲液pH 6.0。
４．反应混合液：取100 mmol/L 磷酸缓冲液（pH 6.0）50 mL 于烧杯中，加入愈创木酚28 μL，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30 % 过氧化氢19 μL，混合均匀，保存于冰箱中备用。
二、实验步骤1．称取植物材料0.1 g ，剪碎，放入研钵中，加入适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，残渣再用5 mL 磷酸缓冲液提取一次，以4000 rpm 低温离心15 min ，上清液即为粗酶液，定容至10 mL刻度，贮于低温下备用。
2．取2支试管，于1只中加入反应混合液3 mL 和磷酸缓冲液1mL，作为对照，另1支中加入反应混合液3 mL和上述酶液1mL（如酶活性过高可稀释之）。
迅速将两支试管中溶液混匀后，倒入比色杯，置于分光光度计样品室内，立即开启秒表记录时间，于470 nm 处测定吸光度（OD）值，每隔10S读数一次。
3．结果计算：以每分钟OD变化值（ΔA470 / gFW min）表示酶活性大小，。
也可以用每min OD值变化0.01作为1个过氧化物酶活性单位（U）表示。
过氧化物酶活性（U/gFW·min）= ΔA470×VT/W×VS×0.01×t式中：ΔA470——反应时间内OD变化值。
酶活性的测定
式中
A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数；
VT—酶液总量（ml）； V1—反应所用酶液量（ml）;
W—样品鲜重（g）；
1.7mg
1.7—1ml H2O2。
0.1mol/L旳KMnO4相当于
紫外分光光度法:
H化测2O氢量2在，吸2使光40反率nm应旳波溶变长液化下吸速有光度强度即烈可(吸A测2收40出)，随过过反氧氧应化化时氢氢间酶酶而旳能降活分低性解。。过根氧据 以1min内A240降低0.1旳酶量为1个酶活单位（u）。
硫酸盐缓冲液，盐酸羟胺，黄嘌呤，黄嘌 呤氧化酶，醋酸等。
试验环节：
计算措施：
每毫升反应液中SOD 抑止率达50％时相应 旳SOD 量为一种SOD 活力单位（U），待测 样品中旳SOD 活力由下式计算：
SOD克制率（％）＝（A2-A1）/A2×100% SOD 活力（U/ml）＝（A2-A1）
据此，可根据H2O2旳消耗量或O2旳生成量测定该酶活力大小。 在反应系统中加入一定量（反应过量）旳H2O2溶液，经酶促反 应后，用原则高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多出旳H2O2
。
即可求出消耗旳H2O2旳量。
酶表活达性 ：用每克鲜重样品1min内分解H2O2旳毫克数
酶活(mgH2O2/gFW·min)=
测定茶树鲜叶APX活性旳最佳条件
PVPP旳加入量为鲜叶重旳1.5倍，提取液pH 为7.8，反应液pH为7.0，底物AsA浓度为 0.5mmol/L。
注意事项：
（1）因为测定反应是经过加液量控制在60s内，使产生旳A290光值下 降呈良好旳线性关系。
1.试剂： 0.1mol/L Tris-HCl 缓冲液
(pH8.2
过氧化物酶活性的测定实验报告
过氧化物酶活性的测定实验报告实验名称：过氧化物酶活性的测定实验实验目的：1. 了解过氧化物酶（CAT）的性质及其在生物体内的作用；2. 学习如何测定CAT活性。
实验原理：CAT是一种重要的氧化酶，在生物体内主要负责清除细胞内的过氧化氢（H2O2）。
CAT能够将H2O2分解为水和氧，从而减少H2O2引起的细胞损伤。
因此，CAT的活性是衡量生物体抵抗氧化损伤能力的重要指标。
该实验通过比色法对CAT活性进行测定，其原理是：CAT能够快速分解H2O2，导致溶液中H2O2浓度的降低，从而使紫外吸收波长为240nm处的吸光度降低。
实验步骤：1.制备1mg/ml的CAT标准溶液；2.制备一定浓度的H2O2溶液；3.将CAT标准溶液和H2O2溶液分别稀释为不同浓度；4.将待测样品（如动物组织、血清等）加入混合液中，使得CAT参与H2O2的分解反应；5.反应10min后，加入硫酸铨（K2Cr2O7）溶液并混匀，其中硫酸铨是一种催化剂，能够加速反应速度；6.反应后，在240nm处测定溶液的吸光度；7.根据不同CAT标准溶液的吸光度值，绘制标准曲线；8.根据待测样品的吸光度值，利用标准曲线计算出CAT的活性。
实验结果：利用如上实验步骤，我们测得样品A的吸光度为0.56，样品B的吸光度为0.36，样品C的吸光度为0.22。
依据标准曲线的测定结果，我们可分别计算出样品A、B、C的CAT活性分别为12.3、8.4、5.2 U/g。
实验结论：本实验采用比色法测定了不同样品中CAT的活性。
结果表明，样品A的CAT活性最高，样品C的CAT活性最低。
通过该实验，我们可以了解CAT的性质及其在生物体内的作用，同时也掌握CAT活性的测定方法。
过氧化物酶活性测定
过氧化物酶活性测定
过氧化物酶（peroxidase）是一类广泛存在于各种生物中的酶。
它们能够催化过氧化物与底物之间的氧化还原反应。
此类酶有多种生物功能，其中最重要的是用于废弃物的代谢和细胞保护。
在工业和农业领域中，过氧化物酶也常被用作催化剂。
因此，对于过氧化物酶的活性测定十分重要。
传统的过氧化物酶活性测定方法主要包括光谱分析法、吸光度法、滴定法、电化学法等。
今天我们主要介绍光谱分析法的原理和步骤。
过氧化物酶在酸性pH下的催化活性主要是由其含有的含铁金属离子（Fe3+）决定的。
Fe3+构成的氧桥结构能够与底物发生氧化还原反应，同时产生吸收峰。
因此，利用曲线拟合的方法可以测定样品中过氧化物酶的活性。
具体操作步骤如下：
1. 处理样品。
将待测样品加入一定比例的磷酸盐缓冲液（pH 5.0）。
若含有颜色物质需添加过滤效果的吸附剂。
2. 加入反应液。
向样品中加入过氧化氢，使其浓度为0.1%。
3. 反应后读取吸收度。
反应结束后，利用紫外-可见光谱仪读取其吸收值。
4. 分析数据。
根据吸收峰的强度和波长，利用标准曲线计算出过氧化物酶的活性。
总之，过氧化物酶活性的测定对于研究生物学和工业化学等领域都具有重要的意义。
随着科学技术的不断发展，相信在未来，这一领域的研究也将不断深入，为我们带来更多的新发现和应用。
过氧化物酶活性的测定
实验六：过氧化物酶活性的测定左哥一、实验目的：过氧化物酶是植物体内重要的呼吸酶类，其活性高低与酶类物质代谢，植物抗性密切相关。
通过实验掌握提取POD和测定其活性方法和原理。
二、实验原理：过氧化物酶催化H2O2氧化酶类，生成醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其它分子缩合，产生颜色较深产物。
本实验以愈创木酚为底物，过氧化物酶催化H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物，次产物在470nm波长处有最大吸收峰，故可通过测定470nm波长下的吸收光度变化得知过氧化物酶的活性。
三、材料与试剂材料：马铃薯试剂：20m mol/L KH2PO4,反应混合液四、方法步骤：1、酶液制备：称取材料1.079g，加入20m mol/L KH2PO4 5ml,于研钵中研磨成匀浆，在3000r/min，下离心10min,上清液转入25ml,容量瓶，残渣再用5ml, KH2PO4,提取一次，定容，混匀，贮于冷凉处备用。
2、比色测定：光径1cm比色杯两只，1只先加1ml KH2PO4，再加3ml混合液作参比液；另一只加1ml,酶液，3ml混合液，立即计时并置于分光光度计中，在470nm下测定光密度，每隔1min读数一次，连续测8min，每次测定前重新对照校准。
五、实验结果酶活力（0.01 A470/L）=(A2-A1)/0.01(t2-t1)*(V2/V1)=328.2μ酶的比活力（μ/g）=酶活力/样品重=304.2μ/g实验七：种子生活力快速测定一、实验目的：种子生活力即种子发芽潜力，是鉴定种子力量研究种子储藏生理的重要指标，本实验运用TTC，红墨水发快速测定种子生活力。
二、实验原理：1、TTC法：有生活力的种子呼吸作用产生的NADH能还原TTC，生产的红色的TPE，将胚染成红色，无生活力的种子，无呼吸代谢活动，不能还原TTC，肧不着色。
2、红墨水法：植物活细胞的原生质膜有选择透性，某些染料分子不能透过。
如红墨水，因而不能将种肧染色，而死的种肧，其细胞膜结果破坏，选择透性丧失，因而染料分子能透过膜进入细胞将种肧染色。
实验五_过氧化物酶酶活性的测定
实验五_过氧化物酶酶活性的测定一、实验原理1. 过氧化物酶（POD）在植物生长过程中发挥重要作用。
在压力、紫外线辐射、微生物侵入和病原体感染等外界刺激下，植物组织中的过氧化物酶活性会显著增加，以保护植物免遭伤害。
2. 过氧化物酶是一种氧化酶，催化产生氧气的反应（如下）：ROOR′+ 酶———> R′OH + O23. 过氧化物酶活性的测定实验基于上述反应，利用巴尔的显色方法测定过氧化物酶催化下的氧化反应速率。
二、实验步骤1. 将100mL的3% H2O2（v/v）制成浓度为60mmol/L的过氧化氢溶液。
2. 按0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL 5个等份，取出浓度分别为6、12、18、24、30mmol/L的H2O2溶液，放入5个试管中。
4. 将1mL的20mg/mL酶溶液加入中等浓度（12mmol/L）的H2O2溶液中，混合均匀。
缓慢倾斜试管，使溶液彻底混合。
5. 取出一根手指，将其浸泡于硫酸铁铵溶液中。
将试管倾斜，瓶口与硫酸铁铵溶液接触，放入深100°C的水浴中加热2min。
将溶液混合均匀。
6. 将试管移出水浴，冷却到室温后，再加入1mL的硼酸缓冲液，混合均匀。
7. 测定吸收值（深紫色的铁化合物阴离子形成）。
利用光度计在546nm处测量。
8. 按照如上步骤分别测定不同浓度下的H2O2溶液。
三、结果分析1. 计算各试管中产生的氧气量，并绘制曲线（以5mmol/L，10mmol/L，15mmol/L，20mmol/L，25mmol/L的浓度为横坐标）。
2. 计算过氧化物酶活性（OD/min/mg）。
四、实验注意事项1. 检查瓶塞和试管，确保没有损坏。
2. 操作过程中，需严格按照试剂用量来添加试剂。
3. 热水浴器的温度应为100°C。
4. 硫酸铁铵溶液应略微加热一会儿，以充分溶解。
5. 实验过程中避免强光照射。
实验过氧化物酶活性的测定
对未来研究的展望与建议
展望
随着生物技术的不断发展，过氧化物酶的研究和应用将更加广泛。未来可以进一步研究过氧化物酶的 分子结构和催化机制，以提高其活性和稳定性。同时，可以探索过氧化物酶在其他领域的应用，如环 境保护、能源转化等。
建议
为了更好地推动过氧化物酶的研究和应用，建议加强跨学科合作，结合生物学、化学、物理学等多学 科知识进行研究。同时，注重实验技术的创新和改进，以提高实验的准确性和可靠性。此外，加强过 氧化物酶应用方面的研究，为推动其在各个领域的应用提供有力支持。
实验结果的分析与解释
结果分析
根据实验数据，分析过氧化物酶的活性变化，判断酶活性的 高低。
结果解释
结合实验结果，解释过氧化物酶活性变化的原因，分析可能 的影响因素。
05
实验误差来源与控制措施
实验误差来源的分析
操作误差
环境误差
实验过程中，由于操作不当或技能不 熟练导致的误差。
实验环境温度、湿度、光照等因素对 实验结果的影响。
实验结果的解释与应用
解释
过氧化物酶是一种重要的生物催化剂，在许多生物化学反应中发挥着关键作用。实验结果表明，该酶具有较高的 活性，这为其在生物医学、农业和工业等领域的应用提供了重要依据。
应用
过氧化物酶可用于治疗某些疾病、催化有机合成反应以及作为生物传感器等。此外，在农业方面，过氧化物酶还 可用于提高作物的抗逆性和产量。
评估生物体的生理状态
过氧化物酶的活性与生物体的生理状态密切相关，因此测定其活性 有助于评估生物体的健康状况。
指导农业生产
了解过氧化物酶的活性可以帮助农业工作者了解作物的生长状况， 从而指导农业生产。
过氧化物酶在生物体内的功能
01
过氧化物酶活力测定
注意事项
1、用电子分析天平称量叶片，必须做到规范使用。 2、用离心机对酶液进行离心前，必须用托盘天平进行 平衡，两者质量相等后才能进行离心。 3、离心完毕后，请将酶液及时转移至比色管，酶液中 不能有颗粒物质。 4、熟练使用移液管，精确控制比色皿中所加酶液的量。 5、读数与记时必须协调好，精确控制时间，读数要当 时。
实验二、过氧化物酶活力测定
酶活性的测定方法
固定时间法 按照对酶 促反应时间 的选择不同 连续监测法
（一）固定时间法
定义：测定酶促反应开始后一段时间内底物的减
少量或产物的增加量。 优点：简单。 缺点：难以确定反应时间段酶促反应是否处于线 性期。 注意：固定时间法时间段的预定不宜太长，一般 以30～60分钟为宜。
结果计算
1、求出前后两个数据的差值(共4个)，取4个差值平均值，即得到每半分
钟每0.2ml的△OD470 。 ⊿A平均=(⊿A1+ ⊿A2+ ⊿A3+ ⊿A4)/4 2、以每分钟OD470nm变化0.01为1个活力单位(U)计算所有样品的酶活力单 位数. 酶活力（U）=⊿A平均/（0.01×t）×D 3、求出所取材料过氧化物酶的活力，以U/g表示 酶的比活力（U/g）=⊿A平均/（0.01×W×t）×D 式中，⊿A平均——反应时间内吸光值的变化 W——植物鲜重，g； t——反应时间，min； D——稀释倍数，即提取的总酶液为反应系统内酶液的倍数。
材料
本实验选用禾本科植物狗尾巴草为实验材料
仪器 722s型分光光度计、电子分析天平、高速冷冻离 心机、微量移液器等 试剂
1、酶提取缓冲液：20mmol/L硼酸缓冲液（pH8.8），内含
5mmol/L亚硫酸氢钠（临用前加） 25%愈创木酚（溶于50%乙醇中）溶液（临用前配） 4、0.75%过氧化氢溶液（临用前配）
过氧化物酶活性的测定-愈创木酚法
过氧化物酶活性的测定 愈创木酚法目的意义 过氧化物酶是植物体内重要的呼吸酶类，其活性高低与酚类物质代谢、物 抗性密切相关。
通过实验掌握提取POD 和测定其活性的方法及其原理。
过氧化物酶催化H 202氧化酚类，生成醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其他分子 缩合，产生颜色较深的产物。
本实验以愈创木酚为底物，过氧化物酶催化H 202将愈创木酚 氧化生成茶褐色产物，此产物在470nm 波长处有最大吸收峰，故可通过测定470nm 波长下 的吸光度变化得知过氧化物酶的活性。
三、材料、设备和试剂1．材料 植物叶片。
2．设备 UVI1240型分光光度计、离心机、秒表(或手表)、天平、研钵、磁力搅拌器。
3．试剂 愈创木酚、30％过氧化氢、20mmol/L KH 2PO 4、100mmol/L 磷酸缓冲液(pH6．0)。
反应混合液配制 取100mmol/L 磷酸缓冲液(pH6.0)50ml 于烧杯中，加入愈创木酚28µl， 于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚完全溶解，待溶液冷却后，加入30％过氧化氢19µl 以，混合均匀，保存于冰箱中。
三、操作方法1．酶液制备称取植物材料0.5g ，加入20mmol/L KH 2PO 4溶液5m1，于研钵中研磨成匀浆，在5000r/min 下离心10min ，上清液备用。
2．比色测定取光径1cm 比色杯2只，于1只中加入已混匀的反应混合液3m1，KH 2PO 4溶液1ml ，作 为参比液；另一只中加入反应混合液3ml ，酶液1m1(如酶活性过高可稀释之)，立即记时并 置于分光光度计中。
在470nm 下测定光密度，每隔30s 读数一次，连续测1min 。
四、实验结果1．以时间为横坐标，光密度为纵坐标作图。
反应前期过氧化氢酶活性随反应时间直线上升，升到最大值后，其相关曲线出现转折点，转折出现的早晚取决于温度。
在曲线的前期部分找到一段近似直线的部分，和直线起点时间t 1和光密度A 1、直线终点时间t 2和光密度A 2。
过氧化物酶活性的测定
1.材料马铃薯块茎
2.设备光光度计、离心机、天平、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸管
3.试剂已配置好的反应混合液、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L磷酸缓冲液
四、操作方法
1.酶液制备
2．比色测定
五、实验结果
10分钟内测定的酶液吸光度
时间（min）0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
园艺学院设施201402李密
实验三
（一）过氧化物酶活性的测定（愈创木酚法）
一、实验目的
通过实验掌握提取POD和测定其活性的方法和原理。
二、实验原理
以愈创木酚为底物，在过氧化物酶（POD）催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470 nm波长处有最大光吸收值，故可通过测470 nm波长下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。
掌握测量可溶性蛋白的方法及其原理。
二、实验原理
可溶性蛋白质与考马斯蓝G-250反应生成青色产物，在595nm波长有最大吸收峰，其颜色深浅与可溶性蛋白含量成正相关，可用分光光度法测定可溶性蛋白的含量。
三、材料、设备和原理
1.材料马铃薯提取液
2.设备分光光度计、10ml刻度试管、移液管
3.试剂考马斯蓝G-250、100μg/ml标准蛋白液
A4700.126 0.257 0.385 0.513 0.602 0.694 0.789 0.875 0.999 1.041 1.119
计算：
酶活力（0.01A470/min）
245.0
酶的比活力（μ/g）
六、讨论
1、由于仪器较少,等待测POD值的时间较长,且没有放在低温下保持。导致酶活性的测定结果出现一定的偏差。
2、测定中，蛋白-染料复合物会有少量吸附于比色杯壁上，不可使用石英比色皿（因不易洗去染色）。可用塑料或玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。
实验过氧化物酶活性的测定
测定吸光值
将反应体系放入分光光度计中， 在特定波长下测定吸光值。
01
02
试剂准备
按照实验要求，准备试剂，如磷 酸盐缓冲液、过氧化氢等。
03
04
反应体系构建
在另一个试管中加入适量底物溶 液，加入酶液，构建反应体系。
实验结果记录
记录数据
01
记录每个时间点的吸光值，以及反应体系的温度、
pH等参数。
数据处理
2
过氧化物酶广泛存在于各种动植物组织中，其最 典型的底物是过氧化氢。
3
实验通过检测过氧化物酶分解底物过氧化氢生成 氧的速率，来测定过氧化物酶的活性。
实验步骤
2. 配置反应液
将过氧化氢、磷酸盐缓冲 液和酶提取液按比例混合
。
4. 记录数据
记录不同时间点吸光度的 变化值，并计算反应速率
。
01
02
03
04
实验组过氧化物酶活性升高，可能是由于植 物体受到胁迫或处于逆境条件下，需要增加 过氧化物酶的合成以应对外界环境压力。
对照组过氧化物酶活性较低，可能是由于植 物处于正常生长条件下，不需要过多的过氧 化物酶合成。
实验结论与讨论
01
本实验通过测定过氧化物酶活性，初步探讨了植物在
不同环境条件下的生理反应。
实验结果分析
01
根据实验数据绘制反应曲线， 判断酶活性与底物浓度之间的 关系。
02
比较不同样品之间过氧化物酶 活性的差异，分析其原因。
03
对实验结果进行统计学分析， 得出结论并讨论。
感谢您的观看
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02 根据记录的数据，计算过氧化物酶活性，包括单位时
间内底物消耗量、酶活性等指标。
植物体内过氧化物酶活性的测定
植物体内过氧化物酶活性的测定一、目的过氧化物酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能有一定关系，它在代谢中调控 IAA 水平，并可作为一种活性氧防御物质，消除机体内产生的 H2O2的毒害作用。
故在科研上常加以测定。
二、原理在过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶竭色 4 －邻甲氧基苯酚，在470nm 波长处测定生成物的吸光度（ A ）值，即可求出该酶活性。
三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：植物叶片2. 仪器设备：分光光度计；离心机；离心管；研钵；移液管；移液管架；试管；试管架；洗耳球。
3. 试剂及配制：0.1mol·L－1磷酸缓冲液（ pH7 ）。
反应液（100ml 0.1mol · L－1磷酸缓冲液（ pH6 ）中加入 0.5ml 愈创木酚、 1ml 30 ﹪ H 2 O 2，充分摇匀）。
四、实验步骤1. 酶液提取称取植物叶片 1g ，剪碎置于已冷冻过的研钵中，加入少量石英砂，分两次加入总量为 10mlpH7磷酸缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心管中，在 8000 r / min 离心 15min ，上清液即为粗酶提取液，倒入小试管低温下放置备用。
2. 酶活性测定吸取反应液 3ml 于试管中，加入酶提取液 0.02ml（视酶活性可增减加入量），迅速摇匀后倒入光径 1cm 的比色杯中，以未加酶液之反应液为空白对照，在 470nm 波长处，以时间扫描方式，测定 3min 内吸光度值变化，取线性变化部分，计算每分钟吸光度变化值（△ A 470 ）。
五、酶活性计算按下式计算酶的相对活性△ A 470 ×酶提取液总量（ml）酶活性（△A470·g－1Fw·min－1） = ————————————————————样品鲜重（g）×测定时酶液用量（ml）。
过氧化物酶活性的测定实验报告
过氧化物酶活性的测定实验报告过氧化物酶活性的测定实验报告引言：过氧化物酶（peroxidase）是一类广泛存在于生物体内的酶，具有氧化还原催化作用。
它能够催化过氧化物的分解，将有害的过氧化物转化为无害的物质，起到保护生物体的作用。
本实验旨在通过测定过氧化物酶活性的方法，了解该酶在不同条件下的活性变化。
材料与方法：1. 实验材料：- 过氧化氢（H2O2）溶液- 过氧化苯胺（TMB）溶液- 过氧化物酶提取液- 磷酸盐缓冲液（pH 6.0）- 96孔微孔板- 酶标仪2. 实验步骤：1) 在96孔微孔板中加入100μL过氧化物酶提取液；2) 加入100μL磷酸盐缓冲液和100μL过氧化苯胺溶液；3) 加入100μL过氧化氢溶液；4) 快速混匀，放置在酶标仪中；5) 设置酶标仪的波长为450nm，记录吸光度的变化；6) 每隔10秒记录一次吸光度值，持续测定3分钟。
结果与讨论：实验结果显示，随着时间的推移，吸光度值逐渐增加，说明过氧化物酶催化反应正在进行。
吸光度的变化趋势反映了过氧化物酶的活性。
进一步分析发现，在实验开始时，吸光度值的增加速度较快，随后逐渐减缓，最终趋于平稳。
这说明过氧化物酶的活性在反应初期较高，随着反应的进行，底物浓度逐渐降低，酶的反应速率也随之降低。
这种现象与酶的底物浓度和酶-底物复合物的形成有关。
此外，我们还进行了不同条件下过氧化物酶活性的比较。
将实验分为两组，分别在室温和低温条件下进行。
结果显示，在室温下，酶的活性较高，吸光度值增加的速度更快。
而在低温条件下，酶的活性明显降低，吸光度值的增加速度也较慢。
这表明过氧化物酶的活性受到温度的影响，适宜的温度有利于酶的催化活性。
结论：通过本实验的测定，我们成功地测定了过氧化物酶的活性，并观察到了其在不同条件下的活性变化。
实验结果表明，过氧化物酶的活性受到底物浓度和温度的影响。
在反应初期，酶的活性较高，随着反应进行，活性逐渐降低。
适宜的温度有利于酶的催化活性。
第二章实验十一植物中过氧化物酶活性的测定
酶活力测定：
• 打开光度计，预热15分钟左右，并做好比色前的 准备工作。
• 在光径为1cm的比色杯内，依次加入2mL 0.1mol/L 的醋酸缓冲液和1ml 0.25%愈创木酚溶 液（以上溶液可预先放在25~30℃的水浴中）， 0.2 mL（根据反应情况调整）酶液（用加热煮沸 5 min 的酶液为对照），最后加入 0.1mL 0.75% 的过氧化氢溶液（开始计时）。
• 迅速颠倒混匀并立即把比色杯插入比色架，盖上 盖子，每隔 1 min 记录一次在470nm处的吸光度 值，共记录5次。
四、计算
以每分钟光密度变化（以每分钟 OD 470 nm变化 0.01 为 1 个 活力单位）表示酶活性大小
五、注意事项
酶提取需要在低温下进行； 测定酶活力时要保持待测酶液的酶活； 测定酶活力时时注意控制反应时间。
➢ 线粒体：超氧阴离子O·-2，是体内O·-2的主要来 源； O·-2在线粒体中再生成H2O2和·OH。
➢ 过氧化酶体：FAD将从脂肪酸等底物获得的电 子交给O2生成H2O2和羟自由基·OH。
➢ 胞浆需氧脱氢酶（如黄嘌呤氧化酶等）也可催 化生成O·-2。
➢ 细菌感染、组织缺氧等病理过程，环境、药物 等外源因素也可导致细胞产生活性氧类。
红棕色的物质可用分光光度计在 470nm处测定其消光值，即可求出该 酶的活性。
二、实验材料、主要仪器和试剂
酶提取缓冲液：20 mmol/L硼酸缓冲液 （pH 8.8），内含5mmol/L亚硫酸氢钠 （临用前加）
0.1 mol/L 醋酸缓冲液（pH 5.4） 0.25% 愈创木酚（溶于50%乙醇中）溶液
（临用前配） 0.75% 过氧化氢溶液（临用前配）
三、操作步骤
酶液提取：取植物样品0.5 g（表面水分 吸干），剪碎置于研钵中，加入5mL预冷 的酶提取液，研磨成匀浆（冰浴），转入 离心管，再用2mL提取液冲洗研钵，一并 转入10mL离心管，平衡后于10000转/ 分钟离心20分钟（低温）。将上清液倒 入刻度试管或量筒，定容至10mL，插入 冰浴待测。
过氧化物酶活性的测定
实验六 过氧化物酶活性的测定 (比色法)
实验六过氧化物酶活性的测定（比色法）过氧化物酶（peroxidase）是广泛存在于植物、动物和微生物体内的一种酶类。
它可以光催化、热催化或金属离子诱导形式存在。
过氧化物酶具有良好的实用性，因为它可以用于许多领域的生物学研究，例如生物化学、分子生物学和环境科学等领域。
本实验采用比色法测定过氧化物酶的活性，其原理是利用二氧化氢和过氧化氢作为试剂，测量其光吸光度能力。
其中，一种常用的受体是酚类化合物，如4-氨基联苯酚，其产生的有色化合物可以通过反应过程的光谱特性来检测光学密度变化。
实验原理当过氧化物酶在存在过氧化氢的情况下催化苯酚型受体的氧化反应时，产生的产物可在可见光区域吸收电磁能，并产生有色化合物。
比色法即是利用这种能力来检测催化作用在反应中的过氧化氢的活性。
该实验中，使用4-氨基联苯酚作为受体，在pH为6.0的琼脂糖基质中，在340nm处测量反应混合物的吸光度变化。
反应的一侧为过氧化氢，另一侧为受体，过氧化氢在过氧化物酶的催化下，氧化受体，产生的有色产物吸收可见光，从而形成比色反应。
过氧化氢的亲电性较大，能够与生物的活性系数发生相互作用。
因此，过氧化物酶的测量能力可以作为生物活性系数的一个指标。
实验材料1. 4-氨基联苯酚2. 过氧化氢4. 磷酸盐缓冲液（pH6.0）5. 琼脂糖实验步骤1. 将500μL的催化过程反应液与250μL的4-氨基联苯酚、250μL的磷酸盐缓冲液和50μL的琼脂糖混合，制备琼脂糖基质。
2. 分别添加20μL、40μL、60μL、80μL和100μL的过氧化物酶，混合后立即测量其吸光度。
3. 测量样品的吸光度变化，记录5次实验结果。
实验结果分析计算出反应液的吸光度，并绘制反应液中过氧化物酶催化下4-氨基联苯酚氧化反应过程的浓度关系曲线。
因为过氧化物酶的催化效率与其浓度成正比，所以可以用这种曲线来确定反应液中的过氧化物酶浓度。
实验注意事项1. 实验中的4-氨基联苯酚是有毒的，应严格遵守安全操作规程。
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过氧化物酶活性的测定
一、实验目的
掌握酶活性的测定方法和原理。
二、实验原理
过氧化物酶是一种含铁卟啉的氧化酶，是利用H2O2将代谢中一些化合物氧化,其活性与呼吸作用、光和作用等一些生理过程有关。
测定过氧化物酶的活性变化是植物生理和病历上一个常用的指标。
在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量470 nm的吸光度变化测定过氧化物酶活性。
三、材料、设备和试剂
新鲜马铃薯块茎
容量瓶（25ml）、量筒（25ml）、移液管（1ml）、研钵、试管架
UV-9200紫外可见分光光度计、天平、秒表
0.2M磷酸缓冲液（pH6.0）：将0.2M NaH2PO4溶液87.7ml与0.2M Na2HPO4溶液12.3ml混合
反应混合液
四、实验方法
4.1制备酶液：
4.2活性测定：
值为纵坐标，绘制酶促反应曲线，计算酶的相对活性。
过氧化物酶活性=(△OD470*Vt)/(W*Vs*0.01*t)[u/(g·min)]
其中：△OD470为反应时间内吸光值的变化；W为样品质量；t为反应时间；Vt为提取酶液总体积；Vs为测定时酶液体积。
聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离种子蛋白质
一、实验目的
学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理，掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳的操作技术。
二、实验原理
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基磺酸钠), SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小.当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMW=K-bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k,b 均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量，从而根据分子量将混合蛋白质分离开。
三、实验仪器及试剂
材料：绿豆芽
试剂：
（1）丙烯酰胺（Acr）凝胶贮液：22.2克Acr，0.6克甲叉双丙烯酰胺(Bis)，加水溶解并定容到100毫升，过滤后使用，4℃下可贮藏1-2个月。
（2）10% SDS溶液。
（3）10%过硫酸铵溶液。
（4）TEMED溶液。
（5）分离胶缓冲液：1.5MpH8.8的Tris—HCl缓冲液。
将18.15克Tris用水溶解后，用6N盐酸调至pH8.8，定容到100ml。
（6）浓缩胶缓冲液：0.5MpH6.8的Tris—HCl缓冲液。
将6克Tris溶解后，用6N盐酸调至pH6.8，定容到100ml。
（7）电极缓冲液：将3克Tris，14.4克甘氨酸和1克SDS，加水溶解后定容到100ml，pH应为8.3。
（8）样品缓冲液：将1克SDS，2毫升β-巯基乙醇，5毫升甘油和1毫升试剂6，用水溶解并稀释到50毫升。
（9）0.1%溴酚蓝溶液。
（10）已知分子量的标准蛋白（M<10万KDa）5种。
成分分子量（道尔顿）含量（ug/支）兔磷酸化酶B 97,400 40
牛血清白蛋白66,200 40
兔肌动蛋白43,000 40
牛碳酸酐31,000 40 胰蛋白酶抑制剂20,100 40 鸡蛋清溶菌14,400 40
（11）考马斯亮蓝溶液：称取0.25克考马斯亮蓝R—250，加入45毫升乙醇，10毫升冰乙酸和45毫升水过滤后使用。
（12）脱色液：37.5毫升冰乙酸，25毫升乙醇加水到100毫升。
（13）SDS的重结晶：50克SDS，加100毫升95%乙醇，70℃下保温溶解，趁热过滤后于低温下过夜结晶，用少量无水乙醇或乙醚洗两次，于真空干燥器内干燥。
四、实验步骤
4.1样品的提取：
4.2 SDS电泳
计算相对迁移率： Rm----相对迁移率
d------蛋白带移动距离
d0-----指示剂移动距离
相对迁移率（Rm）=蛋白质移动距离（d）/指示剂移动距离（d0）
分子量97400 66200 43000 31000 20100
LogM 4.988 4.821 4.633 4.491 4.303 4.158
d (cm)
d0(cm)
迁移率(Rm)。