经口急性毒性试验

实习内容
试验动物的选择和性别鉴定。
试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 急性毒性试验常用染毒途径和方法。
急性毒性反应的观察和LD50计算。
实验材料
(一) 实验动物：健康成年小鼠或大鼠若干只。
(二) 器材 注射器(O.25，1，2，5ml)、吸管(0.1，0.2，0.5，1，2，
lgLD50 及其95%可信限为1.3521±1.96×0.0213＝1.3521±0.0417 lgLD50 及其95%可信区间范围为22.50mg/kg(20.44~24.76mg/kg)
举例：LD50的计算——寇氏法
外源化学物急性毒性分级（WHO）
6 只大鼠吸入 大鼠一次经口 兔经皮 4hr，死亡 2～4 LD50(mg/kg) LD50） （mg/kg） 只的浓度 （ppm） <1 1～ 50～ 500～ 5000～ <10 10～ 100～ 1000～ 10000～ <5 5～ 44～ 350～ 2180～ 对人可能致死的估计量 g/kg <0.05 0.05～ 0.5～ 5～ >15 总量（g/60kg） 0.1 3 30 250 >1000
10m1)、容量瓶(10，25，50ml、烧杯(10，25，50ml)、滴管、
灌胃针(大鼠、小鼠适用)、电子天平(感应量1/10000g)、动物 体重秤、外科剪刀、镊子。
(三) 试剂
受试化学物为氟化钠(NaF，分析纯)，苦味酸酒精饱和液 或其它染色剂。
实验动物的选择(提问)
实验动物的性别鉴定
♀
♂
(2)、等容量稀释法
寇氏法
Karber法或平均致死量法，是依据剂量对数与死亡率呈S型
曲线所包括的面积推导出死亡率为50%的剂量；
此法简单，准确率高，但实验设计要求每个染毒组实验动
物数相同，各计量组距呈等比级数，死亡率呈常态分布，最 低剂量组死亡率<20%，最高剂量组>80%。
预实验
目的是为了确定正式实验的剂量范围。
一般是采用少量动物(2~3只为一组)，拉大组距，逐渐
缩小，找出受试物0%和100%死亡剂量。
正式试验
经预试验求出受试化学物的致死剂量范围(即死亡率10%90%的剂量范围)，再以下式求出正式试验的剂量组距(i) 值。
logLD90 - logLD10 i n -1
i—表示相邻的两个剂量组，剂量对数之差或相邻两组剂 量比值的对数值；
面向自己,沿着门牙左 边滑入
气管
By LASCO
食道
经皮染毒
注射途径染毒
吸收速率：
静脉注射>吸入染毒>肌肉注射>腹腔注射>皮下注射> 经口染毒>皮内注射>其他染毒途径如经皮等
受试物的配制
1、受试化学物的量取
(1)、称量法--固体化学物
(2)、吸量法--液体化学物
2、受试化学物的稀释
(1)、等浓度稀释法
黑色：煤焦油的酒精溶液
单 色 法
大小鼠标记方法（单色法n<10）
单色法标记原则：单色 法编大于10的号码时，
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我们规定顺时针旋转，
后一位必需大于前一位 数，例如：可以编，12，
13，14……19，但不能
编10，11，20，21，22， 30，31，32，33，等， 以此类推。100以内最 大能编89号。
小鼠（Mouse）
大鼠（Rat）
实验动物的称重
大、小鼠秤的感应量需在0.1g以下。 同一组内、同性别动物体重差异应
小于平均体重的10%。
不同组间同性别动物体重均值差异
应小于5%。
急性毒性实验一般使用体重为18-
22g的小鼠或/和180-220g大鼠。
实验动物编号的标记方法
颜料涂擦被毛编号法（常用于大小鼠）： 红色：0.5%中性红或品红溶液 黄色：3-5%苦味酸溶液（水） 80-90%苦味酸酒精饱和溶液 咖啡色：2%硝酸银
大小鼠标记方法（单色法n>10）
双 色 法
大小鼠标记方法（双色法n<10）
红色表示十位数： 头部染红色为10
左前肢为20
左腰部为30 黄色表示个位数。 大小鼠标记方法（双色法n>10）
其它标记方法
烙印编号法：
体内埋号编号法：
耳孔编号法：
挂牌编号法：
实验动物的随机分组
表1 动物随机分组表 动物号 随机数字 除6余数 分组 动物号 随机数字 除6余数 分组 1 97 1 A 16 27 3 C 2 74 2 B 17 7 1 A 3 24 0 F 18 36 0 F 4 67 1 A 19 7 1 A 5 62 2 B 20 51 3 C 6 42 0 F 21 24 0 F 7 81 3 C 22 51 3 C 8 14 2 B 23 79 1 A 9 57 3 C 24 89 5 E 10 26 2 B 25 73 1 A 11 42 0 F 26 16 4 D 12 53 5 E 27 76 4 D 13 32 2 B 28 62 2 B 14 37 1 A 29 27 3 C 15 32 2 B 30 66 0 F
3
4 5
21.7
26.1 31.3
1.3361
1.4161 1.4961
10
10 10
5
7 9
0.5
0.7 0.9
0.5
0.3 0.1
0.25
0.21 0.09
i=0.08
Σp=2.3
举例：LD50的计算——寇氏法
lg LD50 1.4961 0.08(2.3 0.5) 1.3521 0.16 0.25 0.21 0.09 S m 0.08 0.0213 10
皮毛 眼睛
其他
小鼠氟化钠经口急性毒性测量
表4
受试物名称: 实验日期: 实验动物种系： 组别 剂量(mg/m3) 动物编号 性别
急性毒性症状记录表
结构式： 室 温： 体重(g) 症状出现时间 死亡时间
LD50的计算—寇氏法
其中：
计算公式:
m : 1ogLD50; Sm: 标准差; Σp : 各组死亡率总和; p : 各组死亡率; q : 1－p i ：相邻两组对数值之差 n ： 每组动物数;
毒性分级 剧毒 高毒 中毒 低毒 微毒
1mg/kg < 22.50mg/kg < 50mg/kg 该化合物大鼠急性经口毒性为高毒
注意事项
灌胃染毒时要求动物保持空腹状态，因此染毒前应禁食
（不禁水）6～10小时。灌胃后至少2～3小时后才能喂食。 油剂比水溶液要求限制喂食的时间更长些。 相同剂量的受试物，若以不同浓度给药，死亡情况会有所 不同。常用的方法是将受试物体积固定，根据实验设计的 剂量将受试物配制成不同浓度的溶液进行灌胃。 通常灌胃体积以体重的1%～2%计算，最多不超过3%，即 每100g体重溜胃l～2m1，最多不超过3ml。根据实际经验得
规定：
余数：1、2、3、4、5、6分别对应A、B、C、D、E、F 组
实验动物调配
按上法分组后，A组有动物7只，B组7只，C组6只，D组与E组各2只，F 组6只。为了使每组动物数均为5只，需要根据随机分配的原则再选出2
只A组和1只C组动物给D组。B组选出2只，F组选出1只给E组。
表2 初步分组结果
组 别 A B C D 1 2 7 26 4 5 9 27 14 8 16 鼠 号 17 10 20 19 13 22 23 15 29 25 28
E
F
12
3
24
6 11 18 21 30
具体方法如下：继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F组的现有动物数，即： 56/7(7为A组现动物数)整除，余数为0，将A组第7只动物(25号)调配给D组；下一 个：50/6(6为A组现有动物数)余2，将A组第2只动物(4号)调配给D组；接下来 26/6(6为C组现有动物数)余2，将C组第2只动物(9号)给D组。余类推，最后调整
n—为设计的剂量组数；
求得值后以最低剂量组的剂量值加上一个即是第二个剂 量组的对数剂量，依次推至最高剂量组，查各自反对数 及得出各组剂量的真实值。
小鼠氟化钠经口急性毒性测量
啮齿类动物急性毒性中毒主要观察内容 （1）
系统器官 中枢神经系统及神经肌肉系统 观察及检查项目 行为 动作 对各种刺激的反应 大脑及脊髓反射 肌肉紧张力 瞳孔大小 分泌 呼吸系统 鼻孔 呼吸性质和速率 流鼻涕 弛缓、困难、潮式呼吸 中毒后一般表现 改变姿态、叫声异常、不安、安静 震颤、运动失调、麻痹、惊撅、强制性动作 易兴奋、被动、缺乏知觉、知觉过敏 减弱、缺乏 强直、弛缓 扩大或缩小 流泪、出汗
分组成表3所示。雌性动物也按上法分组，然后将雌、雄动物合组进行试验。
表3 调配后30只动物随机分组
组别 A 1 14 鼠号 17 19 23 组别 D 4 9 鼠号 25 26 27
B
C
5
7
8
16
10
20
13
22
15
29
E
F
2
3
6
11
12
18
24
21
28
30
实验动物染毒途径和方法（示教）
常用的染毒途径： 经口染毒 经呼吸道染毒
植物神经系统
小鼠氟化钠经口急性毒性测量
啮齿类动物急性毒性中毒主要观察内容 （2）
系统器官 泌尿生殖系统 观察及检查项目 阴户、乳腺 阴茎 会阴部 颜色、张力、完整性 眼硷 眼球 透明度 直肠或皮肤温度 一般情况 中毒后一般表现 肿胀 脱垂、遗精 污秽、有分泌物 皮肤充血、紫组、皮毛松弛、污秽 上睑下垂 突出，充血，震颤 混浊 降低、升高 姿态不正常、消瘦
出的各种实验动物灌胃量的极限是：小鼠O.5～1ml，大鼠
4～5m1。
实验二 经口急性毒性试验 Acute Oral Toxicity Test
Dept. of Toxicology School of Public Health Xinjiang Medical University
目的要求
掌握实验动物的常用染毒途径和方法。 掌握半数致死浓度的测定方法和结果评定。
m Xk i(p 0.5)
pq Sm i n
Xk ：最大剂量的对数值
举例：LD50的计算——寇氏法
表5 某化学物质小鼠经口染毒死亡情况 组别 1 2 15 18 剂量 mg/kg 对数 1.1761 1.2561 动物数 死亡数 死亡率 存活率 （只） （只） （p） （q） 10 10 0 2 0 0.2 1 0.8 p.q 0 0.16