预实验一：拟南芥的萌发实验

预实验一：拟南芥种子的接种和春化

1.实验品种：

拟南芥Arabidopsis thaliana种子

2.仪器工具与药品

表1 实验用仪器、工具、药品

名称数量名称数量磁力搅拌器1套烧杯（500ml），量筒（50ml）各1个PH计1支玻璃棒1个

微波炉1台称量纸、滤纸各1套

湿热灭菌锅1台蓝盖瓶（200ml）

蓝盖瓶（100ml）

三角烧瓶（1000ml）1个2个1个

紫外线超净台1台小镊子3个冰箱、纯水机各1台报纸、麻绳少许电子天平（）1台培养皿2套

移液枪（20ul）移液枪（1ml）灭菌枪头（20ul）灭菌枪头（1ml）1只

1只

1套

1套

1/2MS培养基

蔗糖

NaOH、HCl

琼脂

75%乙醇

超纯水

2.5%NaClO

纳米TiO2

1.24g

15g

适量

5g

100ml

1000ml

100ml

0.75g

宽口生态瓶（空）1个方形培养皿（10个）1套

3.方法与步骤

3.1拟南芥种子的接种

（1）称量：称取1/2MS培养基1.24g，蔗糖15g，琼脂5g；量取无水乙醇75ml，NaClO 2.5ml，超纯水200ml和500ml两份。

（2）培养基的制备：将有500ml超纯水的烧杯放入磁力搅拌机上，放入磁石，打开开关；先后加入1/2MS培养基1.24g，蔗糖15g。

（3）调节PH：打开PH计，待其PH稳定后，先用纯水润洗后用纸巾擦干，在放入烧杯中测定，期间用NaOH和HCl调节PH至5.7-5.8。

（4）配置杀菌消毒剂：用超纯水配置75 %乙醇100ml，2.5 %NaClO100ml和200ml超纯水，放入对应的蓝盖瓶中。

（5）转移：将溶解好的培养基倒入1000ml三角烧瓶中。

（6）包扎：将三角烧瓶用塑料纸和麻绳包扎好，将生态瓶中放入少许滤纸，也按上述方法包扎好；将2套培养皿和镊子用报纸和麻绳包扎好，放入湿热灭菌锅中121℃30min。

（7）紫外杀菌：将紫外线超净台的门关闭，开启紫外灯提前杀菌30min。

（8）接种种子：晾凉后（培养基除外），将灭菌锅中的用具放入紫外线超净台，再移入种子、20ul的枪（含枪头）和方形培养皿。

1.打开酒精灯，用酒精喷雾剂对双手进行消毒。

2.倒平板：将方形培养皿打开（小盖朝下，大盖朝上），开一小口倒入培养基至小盖的大约1/2处，放在一边，等其凝固。

3.种子杀菌消毒：将种子倒入玻璃培养皿中，加入75%乙醇杀菌30s；用移液枪吸去75%乙醇（或者在不倒掉种子的前提下直接倒）：再用无菌水洗，洗完吸去；用NaClO浸泡8min；用无菌水洗5-6次。

4.干燥：倒至滤纸上干燥。

5.加种子：用移液枪加入到已经凝固的培养基上，每个格子放一颗种子。

6.春化4℃黑暗环境下春化48h。

图一：接种好的拟南芥图二：拟南芥春化