Bio-Plex-液相悬浮式蛋白质芯片系统简明操作
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一、芯片平台与试剂盒
悬液微珠芯片平台为：
Bio-Plex Magpix System ( Bio-Rad)；
实验中使用试剂盒包括以下几种：
1.仪器校准：
Bio-Plex Validation Kit ( Bio-Rad)，
Bio-Plex Calibration Kit ( Bio-Rad)；
2.Mouse多因子检测试剂盒：
以上试剂盒包括了实验中使用的所有试剂、样品稀释液、缓冲液等。
3.其他仪器
磁力洗板器，Handheld magnetic washer，美国Bio-Rad，171020100；
二、样品与标准品准备
按照试剂盒操作手册推荐，样本处理方法如下：
标准品稀释：向标准品瓶中，加入500ul Standard diluents，涡旋5秒，冰浴30分钟。然后按照以下稀释。
样品准备：（冰上操作）
样本解冻后，按照客户要求进行稀释。
三、检测操作
1、取微珠在振荡器上1400rpm振荡30s，按说明书上提示比例，用Assay Buffer
稀释微珠。
2、按照说明书要求，稀释液重悬标准品、轻轻混匀，放置于冰上30min以保证
其充分溶解。
3、用标准品稀释液对标准品进行稀释，本次实验共计稀释8个梯度，S1-S8。
4、将稀释完的微珠用vortex1400rpm震荡30s，每孔50ul的量加入96孔板中。
5、使用磁力洗板器洗涤两次。
6、加入稀释好的标准品和样品，每孔50ul，贴上封口膜，放置在平板摇床上
850rpm振荡避光室温孵育30-60min。
7、使用磁力洗板器洗涤三次。
8、采用Detection Antibody Dilute Buffer按说明书要求稀释度稀释Detection
Antibody。
9、加入稀释好的用biotin标记的抗体，每孔25ul，贴上封口膜，放置在平板摇
床上850rpm振荡避光室温孵育30min。
10、使用磁力洗板器洗涤三次。
11、用Assay Buffer按说明书要求稀释Streptavidin-PE。
12、加入每孔50ul稀释完的Streptavidin－PE（每0.5ul原液稀释到50ul）。
贴上封口膜，放置在平板摇床上850rpm振荡避光室温孵育10min。
13、使用磁力洗板器洗涤三次。
14、用每孔125ul的Assay Buffer重悬，贴上封口膜，室温避光1100rpm振
荡1min。
15、送入已校正的Bio-plex机器中读值。