利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法在结核病中的应用

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XpertMTB_RIF技术在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用杨俊勇

Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用杨俊勇发布时间：2023-06-07T08:36:43.698Z 来源：《中国医学人文》2023年5期作者：杨俊勇[导读] 探讨Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌（MTB）快速检测及利福平耐药检测在黔东南州16县（市）的应用价值，旨在为后续肺结核的诊断与治疗提供指导。

方法：收集我中心结核病实验室2022年1月至10月共1367份检测样本进行Xpert MTB/RIF检测，分析Xpert MTB/RIF法检测的敏感性和特异性。

将1367份培养阳性样本进行分枝杆菌菌群鉴定和药物敏感性试验，评价Xpert MTB/RIF法检测MTB及其对利福平耐药的敏感性和特异性。

结果：MTB检出1323份，MTB未检出44份，RFP耐药基因检出87份；XpertMTB/RIF耐药位点以Probe E为主。

结论：Xpert MTB/RIF技术可快速检测MTB及其对利福平的耐药性，敏感性和特异性较好，具有较高的临床应用价值。

黔东南州疾病预防控制中心贵州黔东南 556000摘要：目的：探讨Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌（MTB）快速检测及利福平耐药检测在黔东南州16县（市）的应用价值，旨在为后续肺结核的诊断与治疗提供指导。

方法：收集我中心结核病实验室2022年1月至10月共1367份检测样本进行Xpert MTB/RIF检测，分析Xpert MTB/RIF法检测的敏感性和特异性。

将1367份培养阳性样本进行分枝杆菌菌群鉴定和药物敏感性试验，评价Xpert MTB/RIF法检测MTB及其对利福平耐药的敏感性和特异性。

结果：MTB检出1323份，MTB未检出44份，RFP耐药基因检出87份；XpertMTB/RIF耐药位点以Probe E为主。

结论：Xpert MTB/RIF技术可快速检测MTB及其对利福平的耐药性，敏感性和特异性较好，具有较高的临床应用价值。

利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法在结核病中的应用

利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法在结核病中的应用作者：辛宝林于秀坤来源：《中国实用医药》2016年第09期【摘要】目的探讨利福平和异烟肼耐药基因突变采用PCR线性杂交酶显色法建立快速检测方法的应用价值。

方法 88份送检的结核病患者临床标本，得结核分枝杆菌分离株64株，采用PCR线性杂交酶显色法建立利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法进行检测，同时采用比例法检测，并以比例法为标准评价快速检测方法的诊断价值。

结果快速检测方法中对利福平耐药24份，仅对异烟肼耐药24份，对利福平和异烟肼均耐药22份，不耐药18份。

以耐药不耐药作为分割点，比例法药敏试验结果为参考标准，快速检测方法的灵敏度100.0%，特异度90.0%，准确度97.7%；两种检验方法一致性好（P>0.05）。

结论 PCR线性杂交酶显色法建立快速检测方法可在12 h内对利福平和异烟肼耐药基因突变的作出判断，与比例法药敏试验一致性好，可信度高，值得临床推广。

【关键词】利福平；异烟肼；耐药；基因突变；结核分枝杆菌；快速检测DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.09.115利福平和异烟肼是结核病的最重要的一线抗结核药物[1]。

近年来结核分枝杆菌基因突变发生耐药的情况也时有发生，世界卫生组织报道每年有新增48.9万例耐多药结核病，其总量占结核病患者的4.8%，而在我国则更为严重。

耐多药结核病的早期确诊有利于患者的病情控制，比例法药敏试验虽然结果可靠，且被公认为判断结核分枝杆菌耐药的金标准，但该方法需要细菌培养，耗时2～4个月，易贻误病情。

随着分子生物学的飞速发展，为结核分枝杆菌耐药性快速检测提供可能。

本中心采用PCR线性杂交酶显色法建立利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法对送检的疑似耐药结核病患者临床标本进行检测，并将结果与比例法药敏试验进行分析，现报告如下。

1 材料与方法1. 1 材料取2013年10月～2015年5月送检的疑似耐药结核病患者临床标本88份，其中痰65份，肺泡灌洗23份。

耐多药结核分支杆菌基因突变在耐药性检测中的应用(一)(精)

耐多药结核分支杆菌基因突变在耐药性检测中的应用(一)【摘要】目的探讨耐多药结核病（MDR-TB）临床分离株rPOB、KatG 和rpsL基因突变在耐药性检测中的应用价值。

方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术分析了54株同时耐异烟肼（INH）、利福平（RFP）、链霉素（SM）的多耐药临床分离株和45株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。

结果以结核分支杆菌H37RV为对照，45株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常，其特异性为100%；KatG基因有2株图谱异常，特异性为95.6%。

89株结核分支杆菌临床分离株均未发现rPOB、KatG、rpsL基因缺失，其PCR扩增产物SSCP分析结果表明：54株多耐药临床分离株中，49株rPOB基因图谱异常；32株KatG基因图谱异常；40株rpsL基因图谱异常。

其敏感性分别为rPOB(90.7%)、KatG(59.3%)，rpsL(74.1%)。

结论结核分支杆菌耐RFP、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。

PCR-SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的方法之一。

【关键词】结核分支杆菌；rPOB基因；KatG基因；rpsL基因；SSCP；药物耐受性Studies of Mycobacterium tuberculosis multi-drug resistant gene【Abstract】 Objective To eva luat the importance of rPOB、KatG and rpsL gene mutation detection in multi-drug resistant clinicalisolates of Mycobacterium tuberculosis. Methods rPOB、KatG and rpsL gene mutation of 54multi-drug resistant clinical isolates，which is INH RFP and Sm resistance and 54 drug susceptible strains were analyzed using polymerase chain reaction-single strand conformation (PCR-SSCP).Results SSCP pattern of H37RV strain as control，SSCP pattern of rPOB，rpsL PCR amplification from drug susceptible strains were all the same as control. The specificity was 100%. However，the different SSCP pattern of KatG gene were found in 2 susceptible strains. The specificity was 96.3%. Gene deletion of rPOB、KatG and rpsL were not found in all clinical isolates tested. SSCP patterns of rPOB gene were different from control in 49 drug resistant clinical isolates. SSCP patterns of KatG gene were different from control in 32drug resistant clinical isolates，SSCP pattern of rpsL gene were different from control in 40 drug resistant clinical isolates. The sensitivity were 90.1% (rPOB)，59.3% (KatG) and rpsl (74.1%)，respectively. Conclusion The major mechanism of RFP，INH，SMresistant drug was rPOB、KatG and rpsL gene mutation，respectively PCR-SSCP may be one of the way which applied to drug resistant detection of Mycobacterium tuberculosis.【Key words】 Mycobacterium tuberculosis；rPOB gene；KatG gene；rpsL gene；SSCP；drug tolerance我国是结核病疫情最严重的国家之一，其主要原因是耐药（DR-TB）和耐多药（MDR-TB）结核病的广泛分布和迅速传播。

结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药性形成机制及药物敏感性检测技术研究进展

急剧恶化］。。可见，结核病仍然是严重威胁人民生命和健康的重要公共卫生问题。快速准确检测结核分枝杆菌的耐药性，即药物敏感性检测技术，指导临床合理用药、效控制结核对有病流行具有重要意义。近年来，随着结核分枝杆菌分子遗传学
１结核分枝杆菌耐药性形成机制
结核分枝杆菌对临床常用的抗结核一线药物包括异烟肼
（ｏｉｉ，Ｈ、福平（ｉｍｉ，）吡嗪酰胺（ｙｚａｉ，ｉｎａｄＩ）利ｓｚＮｒａｐ肿、ｆｎｐｒｉｍｄａｎｅ
ＶＡ、Ｚ）链霉素（ｔｐｍｃ，Ｍ）ｓｅｔｙｉＳ和乙胺丁醇（ｔｍｕｌＥ）ｒｏｎｅａｂｔ，ＭＢ等ｈｏ均存在耐药现象，至是对多种药物同时产生耐药的情况，甚即出现ＭＲＴ，Ｄ－Ｂ是指结核病患者排出的结核分枝杆菌对Ｄ－ＢＭＲＴ至少包括ＩＨ和ＲＰ在内的２种或以上药物产生耐药。随ＮＦ着对结核分枝杆菌全基因序列的揭示，以及其耐药性分子机制的深入研究，目前对ＩＨ、Ｆ、Ｍ、ＭＮＲＰＳＥＢ和ＰＡ的耐药机制已经Ｚ
．
氢过氧化物还原酶的ａｐｈＣ基因（ｈＣ基因涉及细菌对氧化压ａｐ
力的反应）编码ｐ酮酰基载体蛋白合成酶的Ｋｓ，ａＡ基因及调节分枝杆菌氧化一激反应的ｏｙ应ｘＲ基因Ｅ。ｋｔ４ａ］Ｇ基因的变异（包括突变、缺失、插入等）导致的结核分枝杆菌触酶．氧化物酶过活性降低或缺失，可以解释９％以上的ＩＨ耐药。ｉＡ基因编０Ｎｎｈ码还原型烟酰胺二核苷酸（ＡＨ）赖的ｅｏｌｃＮＤ依ｎｙａｐ还原酶， — 该酶催化 △不饱和脂肪酸转化为饱和脂肪酸的还原反应，＿参与分

耐多药结核病(MDR-TB)快速诊断

耐多药结核病使用分子遗传学方法，对来自纯培养物或肺部物质涂片阳性的标本进行结核分枝杆菌复合群及其对利福平和肺结核病的复发当肺结核病（以一个惊人的速度增长着。

世界上大约三分之一的人口感染了肺结核，每年大约有两百万人死于该病。

由于染率的逐年升高，非洲的分枝杆菌的感染率也在显著增加。

抗药性的发展除了全球肺结核感染率的提高外，我们也观察到菌株抗药性和多重抗药性的持续增长。

如果肺结核的病原体对利福平和异烟肼这两种最重要的治疗肺结核的药物不敏感了，这也就意味着其多重耐药性的出现。

虽然在德国预计的肺结核病原体耐药性的比例相对较低，但是有观察表明在过去的几年中分支杆菌的多重耐药性在缓慢增加。

然而在东欧的广大地区，抗药性的比例特别高。

由于地理上相对靠近，这对附近国家也就理所当然的是一个惊人的发展，毕竟这些多重耐药性的菌株的传播在未来几年里很有可能对这些临近国家的肺结核病的情况产生深远影响。

因此，为了保证快速和彻底的治疗，不仅要鉴定肺结核的感染与否，快速测定肺结核病原体的抗药性也变得越来越重要。

GenoTypeGenoType的病人肺部物质，性的安全和快速检测。

鉴定结核分枝杆菌复合体和其对利(MOTT)鉴定和区别公司的分支杆菌检测相关产品系列提供了最适宜的补充。

检测的样本可以是纯培养物或是涂片阳性的肺部物质标本。

内部控制保证了结果的GenoType®系列中的任何测试系统进行联合运用，只需要很低的技术要求，即使是小的实验室也能受益于高效、现代的诊断方技术的分析，通过手动或自动的方式，都可以轻易的与你平常的诊断结合起来。

如果需。

利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究

利福平在耐药结核分枝杆菌治疗中的问题研究近年来，结核病在全球范围内仍然是一个严重威胁健康的疾病。

结核病菌的耐药性增加已成为临床治疗挑战的重要因素之一。

其中，多药耐药结核病（MDR-TB）和广泛耐药结核病（XDR-TB）所引起的公共卫生问题日益突出。

目前，利福平作为治疗耐药结核病的重要药物，其疗效的高低已成为全球耐药结核病治疗的研究热点之一。

首先，利福平治疗耐药结核病的疗效存在差异。

利福平是第一代环丙沙星衍生物，是MDR-TB治疗的关键药物之一。

在以利福平为基础的治疗方案中，治疗强度和疗程在国际范围内存在差异，这些差异可能会影响利福平的疗效和不良反应。

一些研究表明，在利福平治疗期间，病人是否遵守治疗方案，以及治疗期间的营养状况、药物代谢等因素，都会影响利福平的疗效。

其次，利福平的耐药机制尚未完全阐明。

MDR-TB是指对利福平和异烟肼两种核心抗结核药物耐药的结核菌株。

利福平的耐药机制可能与利福平的磷酸酸化或者其他药物代谢酶有关。

此外，研究人员发现，在MDR-TB菌株耐药机制中，流入和泵出的通道都对利福平的耐药性起到了作用。

但是，利福平耐药的机制仍未完全阐明，需要进一步的研究。

最后，利福平的安全性和耳毒性需要加强研究。

利福平的不良反应包括神经系统症状、视力障碍和耳毒性等。

其中，利福平导致的耳毒性成为制约利福平使用的主要因素之一。

研究表明，耳毒性可能与利福平在人体中的代谢率和药物浓度有关。

因此，需要进一步研究利福平耳毒性的机制，并寻找预防和控制耳毒性的方法。

综上所述，利福平在治疗耐药结核病中发挥着重要作用。

但是，利福平在治疗期间的疗效、耐药机制和安全性等方面还存在一些问题需要研究和解决。

只有更深入地了解利福平的药理学特征和耐药机制，才能更有效地利用利福平来治疗耐药结核病，并保证病人的安全。

结核分枝杆菌中利福平和异烟肼耐药相关基因突变与耐药水平的相关性研究

• 248 •中国防痨杂志2021 年3 月第43 卷第3 期Chin J Am itnberc，March 2021，V〇1. 43，No. 3 .论著•结核分枝杆菌中利福平和异烟肼耐药相关基因突变与耐药水平的相关性研究王希江谭云洪贺文从欧喜超刘东鑫赵雁林【摘要】目的探究结核分枝杆菌中利福平和异烟肼耐药基因突变谱的分布，为研发更为精准的耐药分子诊断技术和临床决策提供依据。

方法收集国家耐药监测点新疆维吾尔自治区柯坪县、岳普湖县和疏勒县193株和湖南省怀化市、永顺县、祁东县、桃江县和耒阳市592株结核分枝杆菌。

采用微孔板法测定菌株的最小抑菌浓度(m in im u m in h ib ito ry c o n c e n tr a tio n，M IC)。

根据药物敏感性试验（简称“药敏试验”)结果选取利福平和异烟肼耐药菌株，经C T A B/N a C l法提取核酸后进行全基因组测序（w h o le g e n o m e s e q u e n c in g,W G S〉，将所得基因组原始序列过滤后上传至T B p r o f il e r分析工具以确定耐药基因型。

结果785株结核分枝杆菌中，124株（15.80%)为利福平和(或)异烟肼耐药，包括利福平耐药74株，异烟肼耐药111株，耐多药61株(7. 77%)。

97. 22%(70/72)利福平耐药菌株检测出中出基因位点突变，其中98.57%(69/70)的突变位于利福平耐药决定区（R R I)R)，1株检测出R R D R区以外的与利福平耐药相关的罕见突变I49I F。

利福平耐药突变主要位于450、;'/^/} 445及rpoB 435 密码子，占8L43%(57/70),其中i'/wB S450L突变出现的频率最高（45. 71%，32/70),中必450位点突变对应高浓度利福平耐药452位点突变主要对应低浓度利福平耐药（M I C=2吨/m l)。

耐药结核分枝杆菌的分子流行病学研究及耐药相关基因的分子生物学快速检测

图２异烟肼耐药表型的分布㈥３利福平耐药表型的分布（－－）、我国耐药结核分枝杆菌耐药相关基因谱１．ＰＣＲ．ＲＦＬＰ检测结果１）菌株ＤＮＡ的抽提与鉴定通过ｋａｔＧ２１０ｂｐ基因片段的扩增，对抽提的４２９株结核分枝杆菌的基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ鉴定，扩增产物经１．５％琼脂糖凝胶电泳，有４０７株可见单一清晰的目的条带（２１０ｂｐ，见图４），有２２株未见特异性条带。

１２３４５６Ｍ７－－－・－－－－－一７５０ｂｐ‘。

‘‘——５００ｂｐ－－－・－－——一２５０ｂｐ‘。

‘。

‘——１００ｂｐ图４结核分枝杆菌基因组ＤＮＡ的鉴定：Ｍ为ＤＮＡ分子量（ＤＬ２０００），１－６为临床分离株提取的基因组ＤＮＡ为模板扩增的阳性ｋａｔＧ基因目的片段，７为阴性对照。

２）ＰＣＲ—ＲＦＬＰ方法检测ｋａｔＧ基因３１５位点突变结果（见图５）ｋａｔＧ基因扩增阳性的４０７株菌株用于进行ＭｓｐＩ限制性内切酶的酶切消化及ＰＡＧＥ电泳。

如图５所示菌株２—３及５—９泳道中ＫａｔＧ基因被消化成三个片段（７９ｈｐ，５３ｂｐ，６６ｂｐ），为野生型。

１及４泳道的菌株ＤＮＡ在酶切消化后６６ｂｐ片段被一个更小的４８ｂｐ片段所代替，为Ｓ３１５Ｔ突变型。

３）ＲＦＬＰ方法检测ｋａｔＧ基因３１５位突变菌株的耐药谱在ｋａｔＧ基因ＰＣＲ扩增阳性的４０７株菌株中，有ＩＮＨ敏感株１９１株，均未发现３１５位突变。

ＩＮＨ耐药株２１６株，采用ＰＣＲ．ＲＦＬＰ方法发现６５｜３％（１４１／２１６）耐药株存在￥３１５Ｔ突变。

７９ｂｐ—－－－－－一５３ｂｐ．．，．．一４８ｂｐ‘。

’。

一一１１０ｂｐ－－－－－－－－一ｆｉ？ｂｐ一３４ｂｎ图５ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法检测结核分枝杆菌ｋａｔＧ基因３１５位点突变的ＰＡＧＥ电泳图谱：Ｍ．为ＤＮＡ分子量（ｐＵＣ１９ＤＮＡ／Ｍｓｐｌ（ＨｐａｉｄＭａｒｋｅｒ２３），１，４泳道为突变型菌株，２－３及５－８为野生型菌株。

２．ｋａｔＧ基因缺失的检测将以上２２株未见到有特异性条带扩增的菌株基因组ＤＮＡ用另一对引物进行ＰＣＲ反应扩增，结果其中有６株可以见到有单一清晰的目的条带（２７００ｂｐ），另外１４株仍然未见到特异性条带的扩增。

MPT64在MTB利福平和异烟肼耐药性检测方法中的应用

MPT64在MTB利福平和异烟肼耐药性检测方法中的应用作者：杨瑜李华邓丽雷杰王楠谢贝吴玲刘志辉孟繁荣来源：《新医学》2021年第03期【摘要】目的建立一种以MPT64为指标的结核分枝杆菌（MTB）耐药性检测的快速方法，探讨MPT64在MTB利福平（RFP）和异烟肼（INH）耐药性检测中的应用。

方法應用胶体金免疫层析法（GICA）分别检测MTB敏感株和耐多药株在含（观察组）与不含（对照组）RFP、INH的Middlebrook 7H9液体培养基上培养3、7、10 d的培养液中的MPT64，通过凝胶成像仪白光源拍照进行条带灰度分析（Image Jab Software 3.0），比较敏感株和耐多药株间的灰度比值的差异，依据受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）分析确定RFP、INH耐药的灰度比值界值;以比例法检测结果为金标准，评价新建方法的准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。

结果对照组中，随着培养时间的延长，12株MTB敏感株和11株耐多药株的灰度比值增大;观察组中，敏感株在不同的培养时间的灰度比值没有显著变化，而耐多药株则明显增大。

3、7、10 d敏感菌与耐多药菌在药物培养基中MPT64检测灰度比值差异均有统计学意义（P均< 0.05）。

依据观察组灰度比值分别绘制以MPT64指示的RFP和INH 耐药性检测的ROC曲线，两者的3 dAUC分别为0.84和0.77，灰度比值界值均为0.05;7、10 d AUC均为1.00，7 d的灰度比值界值分别为0.23与0.20;10 d的灰度比值界值分别为0.49和0.48。

GICA检测MPT64用于34株MTB的RFP、INH耐药性鉴定的准确度分别为97%和94%，灵敏度分别为93%和86%，特异度均为100%，阳性预测值均为100%，阴性预测值分别为95%和91%。

结论 GICA检测MPT64于MTB培养7 d时能准确检测抗结核药物RFP、INH耐药性，MPT64可作为MTB药敏试验的有效检测指标。

基因芯片技术检测分枝杆菌和异烟肼、利福平耐药性在结核性脓胸诊断中的应用

基因芯片技术检测分枝杆菌和异烟肼、利福平耐药性在结核性脓胸诊断中的应用林秀华;赖国祥;陈雨燕;郑丹;周银发;陈晓红【摘要】To evaluate the clinical value of gene chip technology (GCT) in detecting the mycoba-cteria,isoniazid and rifampin resistance of patients diagnosed tuberculous empyema.The 182 patients who met the inclusion criteria were enrolled to this study from January 2011 to December 2015,whose pus mycobacterial species were detected by GCT and MGIT,the simultaneous and sensitivity of them werecompared.Meanwhile,36 patients diagnosed tuberculous empyema were selected to detect isoniazid and rifampin resistance.The simultaneous and sensitivity of GCT were evaluated base on the standard of MGIT.The 135 patients were diagnosed by tuberculous empyema.The specificity of GCT was same to MGIT (95.7％),the the sensitivity was 48.9％ (66/135)in GCT,26.7％ in MGIT,there was significant difference between them(x2=80.5,P＜ 0.05).The sensitivity,specificity and coincidence rate of GCT in rifampin resistance were 100％,the sensitivity,specificityand coincidence rate in INH were 50.0％(1/2),97.1％(33/34) and 94.4％.Gene chip technology for detection of mycobacteria has high sensitivity and specificity,which can identify non-tuberculous mycobacteria quickly.And it can also effectively detect the resistance of Mycobacterium tuberculosis to isoniazid and rifampicin.It has important significance in early diagnosis and treatment of tuberculous empyema.%目的探讨基因芯片技术检测分枝杆菌和异烟肼(INH)、利福平(RFP)耐药性在结核性脓胸诊断中的临床应用价值.方法收集2011年1月至2015年12月临床疑似结核性脓胸患者182例的脓液标本,分别应用基因芯片技术和快速培养法进行检测,比较两种方法的特异性和敏感性;同时选取36例临床确诊为结核性脓胸患者,且基因芯片法和MGIT培养法均为阳性的标本进行INH、RFP耐药性检测.以MGIT培养法的药敏结果为标准,评价基因芯片法的灵敏度、特异度和符合率.结果 182例疑似结核性脓胸患者中,135例临床确诊为结核性脓胸,基因芯片法和快速培养法的特异性均为95.7％(45/47),灵敏度分别为48.9％(66/135)和26.7％(36/135),二者比较有统计学差异(x2=80.5,P＜0.05).基因芯片法检测RFP耐药性灵敏度、特异度和符合率均为100％;而检测INH耐药性的灵敏度、特异度和符合率分别为50.0％(1/2)和97.1％(33/34)和94.4％.结论基因芯片技术检测分枝杆菌具有较高的、特异性,可快速鉴别出非结核分枝杆菌,且可有效检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平的耐药性,对结核性脓胸的早期诊断与治疗有重要意义.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2017(033)008【总页数】5页(P720-723,729)【关键词】基因芯片;分枝杆菌;耐药性;结核性脓胸【作者】林秀华;赖国祥;陈雨燕;郑丹;周银发;陈晓红【作者单位】福建医科大学福州总医院临床医学院呼吸与危重症医学科,福州350025;福建医科大学福州总医院临床医学院呼吸与危重症医学科,福州 350025;福建中医药大学附属第三人民医院,福州 350108;福建医科大学教学医院福州肺科医院检验科,福州350008;福建省疾病预防控制中心,福州 350001;福建医科大学教学医院福州肺科医院结核科,福州350008【正文语种】中文【中图分类】R378.9渗出性胸膜炎不及时治疗或治疗不当，或胸膜下结核病灶向胸膜腔破溃，大量干酪物质及结核菌进入胸膜腔，就可发展为脓胸[1]。

利福平和异烟肼抗结核分支杆菌耐药基因的研究

利福平和异烟肼抗结核分支杆菌耐药基因的研究【摘要】耐药结核病是全世界结核病疫情第三次回升的重要原因，结核病耐多药菌株的出现增加了结核病治疗的难度，目前，用于结核病治疗的一线要主要是利福平和异烟肼。

异烟肼耐药机制非常复杂，与之耐药相关的基因较多，如：katg，inha，aphc，kasa，ndh等。

其中最主要的耐药基因为katg 、inha 基因。

利福平相关耐药基因研究较为明确，目前认为rpob基因的突变是mdr-mtb菌株的标志。

迄今为止，对利福平和异烟肼抗结核分支杆菌耐药性的检测方法有多种，实际工作中需要将多种检测方法同时运用，以使检测结果真实可信，及时为临床治疗提供有效的依据。

【关键词】耐药结核病；利福平，异烟肼；耐药基因；检测方法肺结核是世界上主要的公共卫生问题，是严重危害人类身体健康的传染性疾病之一。

二十世纪五、六十年代人们便期望找到一种有效的方法来控制肺结核的传染，最后达到治愈结核病的目的，但目前肺结核仍是一个全球性的流行病，成为全球性的公共卫生问题，每年大概有2-3百万的人死于这种疾病。

近年来，肺结核在艾滋病患者中的广泛传播再一次引起了公众的关注1，耐药结核杆菌尤其是耐多药结核杆菌的出现和传播是导致结核病发病率升高的重要原因。

本文就结核杆菌对利福平和异烟肼产生耐药性的相关基因，以及耐药性检测的方法做一综述2。

1 异烟肼异烟肼（isoniazid，inh），是抗结核病的常用一线药物，在结核病的治疗中一直起着重要的作用。

但大多数结核病患者如果长期用药易产生耐药性，这主要是由于长期使用inh可诱导细菌产生基因突变，从而使细菌对inh的耐药性增强。

有研究表明。

1.1 katg 基因是过氧化氢酶‐过氧化物酶的编码基因，katg基因全长2223个核苷酸，上游与相隔44个碱基的fura基因（一种结核杆菌铁调控蛋白编码基因，可能为katg基因的启动子，并调控其表达）相连，下游与相隔2794个碱基的embc基因相连。

结核分枝杆菌的耐药性及检测方法

结核分枝杆菌的耐药性及检测方法结核病是一种由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引起的慢性传染病，主要累及肺部，但也可侵犯其他器官。

然而，近年来出现了结核分枝杆菌对抗生素的耐药性问题，给结核病的防治带来了巨大挑战。

本文将就结核分枝杆菌的耐药性机制以及常用的检测方法进行论述。

一、耐药性机制1.多重耐药（MDR）多重耐药是指结核分枝杆菌对两种最主要的抗结核药物——异烟肼和利福平同时产生耐药现象。

这种耐药形式使得传统治疗手段无法有效控制感染，并且增加了传播风险。

2.延迟耐药（XDR）延迟耐药是在MDR基础上，又产生对氟喹诺酮类等二线抗结核药物的耐药性。

这使得治疗选择更加有限，且通常需要使用更昂贵和毒副作用更大的抗结核药物。

3.全耐药（TDR）全耐药是指对所有一线和二线抗结核药物都产生耐药现象，这种情况下仅能依靠其他的药物才能进行治疗。

然而，这些替代治疗方案费用昂贵且可行性有限。

二、检测方法1.传统的抗生素敏感性测试传统的抗生素敏感性试验使用培养分枝杆菌，并将其接种于含有抗生素的琼脂平板上。

通过观察细菌在不同浓度抗生素下的生长情况来判断其对该抗生素是否具有耐药性。

尽管这种方法简单易行，但其确诊时间较长，且容易出现误判。

2.分子检测方法随着分子生物学技术的进步，利用PCR技术可以更快速地检测结核分枝杆菌的耐药基因突变。

这种方法通过检测与耐药性相关基因序列的存在与否来确定细菌对特定抗生素是否具有耐药性。

由于PCR技术高灵敏度和高特异性，它已成为常用的结核分枝杆菌耐药性检测方法之一。

3.流式细胞术流式细胞术利用荧光标记的结核分枝杆菌单个细胞对特定抗生素的反应进行测定。

通过测量细胞内荧光信号的变化来判断其对抗生素是否产生了耐药性。

这种方法具有高通量和快速的优势，但需要对样本进行前期处理以获得单个菌落。

4.质谱法质谱法利用MALDI-TOF质谱仪检测结核菌代谢产物图谱与数据库匹配，从而快速确定结核分枝杆菌的耐药类型。

快速检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药相关基因mPCR-SSCP建立及应用

快速检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药相关基因mPCR-SSCP建立及应用褚美芬;严杰;钟雅文;吴亦斐;王欢;孙爱华【期刊名称】《中华微生物学和免疫学杂志》【年(卷),期】2012(032)007【摘要】Objective To establish multi-PCR-single strand conformational polymorphism analysis (mPCR-SSCP) for rapid detection of isoniazid (INH) and rifampin (RIF) resistance associated katG,inhA and rpoB genes of Mycobacterium tuberculosis isolates.Methods The INH-and RFP-resistance of 134 isolates was determined by using drug susceptibility test.The primers were designed for detecting INH and RFP resistance-associated katG,inhA and rpoB gene in the isolates by mPCR-SSCP.PCR-DS technique was applied to detect the mutations in katG,inhA and rpoB genes.All the results from different assays were subsequently analyzed as well as compared.Results All of the 134 tested isolates had katG,inhA and rpoB genes.Of the 134 isolates,42 (31.3％) and 45 (33.6％) strains were INH-and RFP-resistant,respectively.The results of mPCR-SSCP and PCR-DS showed that all the 92 INH-susceptible isolates had no mutation in katG and inhA genes with 100％ specificity.In the 89 RFP-susceptible isolates,2 and 1 had mutation in rpoB genes confirmed by mPCR-SSCP and PCR-DS with 97.8％or 98.9％ specificity,respectively.Among the 42 INH-resistance isolates,33 and 36 strains had the mutations in katG and/or inhA genes due to theresults of mPCR-SSCP and PCR-DS with 78.6％ or 85.7％sensitivity,respectively.The results of mPCR-SSCP and PCR-DS also demonstrated that in the 45 RFP-resistance isolates,41 and 43 strains had the mutations in rpoB gene with 91.1％ or 95.6％sensitivity,respectively.Conclusion The mPCR-SSCP established in this study can be used to rapidly detect INH and RFP-resistance associated mutations in katG,inhA and rpoB genes of M.tuberculosis with convenience,specificity and sensitivity,which shows a good prospect for application in clinic.%目的建立快速检测结核分枝杆菌异烟肼(INH)和利福平(RFP)耐药相关基因katG、inhA和rpoB突变的多重聚合酶链反应-单链构象多态性(multi PCR-single strand conformational polymorphism analysis,mPCR-SSCP)方法.方法药敏试验检测134株结核分枝杆菌临床菌株对INH和RFP的耐药性.设计结核分枝杆菌INH和RFP耐药相关katG、inhA和rpoB基因PCR引物,建立mPCR-SSCP技术检测上述菌株katG、inhA和rpoB基因的突变,同时采用PCR直接测序技术(PCR-DS)检测上述基因片段突变情况,并对上述3种方法检测结果进行分析和比较.结果 134株临床菌株均含有katG、inhA和rpoB基因,其中42株(31.3％)对INH耐药、45株(33.6％)对RFP耐药.mPCR-SSCP和PCR-DS检测结果显示,92株INH敏感菌株katG和inhA基因均未发生突变,检测特异性均为100％；89株RFP敏感菌株中rpoB基因分别有2株和1株检测出突变,检测特异性分别为97.8％和98.9％；42株INH耐药菌株中分别有33株和36株katG和/或inhA基因突变,检测灵敏度分别为78.6％和85.7％；45株RFP耐药菌株中rpoB基因分别有41株和43株发生突变,检测灵敏度分别为91.1％和95.6％.结论本研究建立的mPCR-SSCP能快速、简便、特异,并有一定的敏感性检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药相关基因katG、inhA和rpoB突变,具有临床应用前景.【总页数】6页(P655-660)【作者】褚美芬;严杰;钟雅文;吴亦斐;王欢;孙爱华【作者单位】310053 杭州,浙江医学高等专科学校;310058 杭州,浙江大学医学院病原生物学系;310053 杭州,浙江医学高等专科学校;310058 杭州,浙江大学医学院病原生物学系;310058 杭州,浙江大学医学院病原生物学系;310053 杭州,浙江医学高等专科学校【正文语种】中文【相关文献】1.MTBDR plus方法快速检测北京地区临床结核分枝杆菌分离株利福平和异烟肼耐药性效果评价2.基因芯片技术快速检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平耐药性3.探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素耐药突变4.结核分枝杆菌中利福平和异烟肼耐药相关基因突变与耐药水平的相关性研究5.结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测技术在利福平耐药结核诊断中的应用价值因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

基因芯片技术快速检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平耐药性

ｓｔｎｅｏ２ｃｉｉａｓｌｔｓｏＢｕｉｇｔｅｇｎｈｐｔｃｎｌｇｆｏａｅｔｅｒｓｌｓｏｏｖｎｉｎｒｐｒｏｔｏ．ｉａｃｆ６ｌｎｃｉｏａｅｆＭＴｓｅｅｃｉｅｈｏｏｙｗｅｅｃｍｐｒｄｗｉｔｅｕｔｆｃｎｅｔｏａｐｏｔｎｍｅｈｄｓｌｎｈｈｈｌｏｉ
ｆｔｅｔｇｔＩｎａｉＩＨ）ａｄＲｆｉｎ（Ｆａｓｎｏｉｚｓｔｉｏｓｄ（ＮｎｉｍｐｃＲＰ）ｉｃｂｃｅｕｂｒｕｏｉＭＴ．ＭｅｈｄＴｅｄｔｆＮｄＲＰｒ— ａｉｎＭｙｏａｔｉｍｔｅｃｓｒｕｌｓ（Ｂ）ｔｏｓｈａｏＨａＦａＩｎｅ
ＲｅｕｔＴｈｅｕｔｆｅｓｔｉ，ｓｃｆｃｔ，ｐｓｔｖｒｄｃｉｅｖｕ，ｎｇｔｅｐｅｉｔｖａｕ，ａｄａｃｒｃｂｍｎｄｕｉｇｔｅｇｎｓｌｓｅｒｓｌｏｎｉｖｔｐｅｉｉｓｓｉｙｉｙｏｉｅｐｅｉｔａｅｅａｉｒｄｃｉｅｖｅｎｃｕａｙｏｔｅｓｎｅｅｉｖｌｖｌｈ
ｒｍｂｒｕｏｉＸＥＳｉ，ｉｔｅｃｌｓＩｈｄｕｕｓａ
Ｊａｇｕ２１０ｉｎｓ２０４
Ｃｅｇｏｇ，ＨＮｅｇｈ，ＥｕｅＸｚｏｆｃｏｓＤｓｓｏｉｌｈｎｙｎＺＡＧＦｎｃｉＰＮＧＳｚｎｕｈｕＩｅｔｕｉａｅＨｓｔ，ｈｎｉｅｐａ
ｃｉｃｎｌｙｎｃｍｐｒｏｔｈｏｖｎｏａｐｏｒｏｅｏ，ｗｒａＨｗ：ｆｒＩｎａｉｈｅｅｅ７％（２１，ｈｐｔｈｏｏ．ｉｏａｓｎｗｉｔｅｃｎｅｔｎｒｐｔｎｍｔｄｅｅｓｆｏｓｏｓｉｄ，ｔｙｗｒ５ｅｇｉｈｉｌｏｉｈｏｏｚ１／６）７．％（６４）４５（２２）０（６４，７．％（８６）ｅｐｃｖｌ；ｒＲｆｉｎｔｅｅｅ８．％（５１，８３３／６，５．％１／２，９％３／０）７４４／２，ｒｓｅｉｅｆｉｍｐｃｈｙｗｒ３３ｔｙｏａｉ１／８）８．％（８４）７．％（５２）９．％（８４）５５（３６，ｓｅｔｅ．ＣｎｌｓｎＴｅｅｔｔｅＭｙｏａｔｉｍｔ— ６４３／，１４１／１，２７３／１，８．％５／２）ｒｐｃｉｌｅｖｙｏｃｕｉｏｄｔｃｈｃｂｃｒｕｏｅｕ

基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性临床应用评价

基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性临床应用评价许榕青;李丹;林银霞;黄明翔;陈新朝【摘要】We evaluated clinical application effect of gene chip for detection of rifampin (RFP) and isoniazid (INH) resistance in Mycobacterium tuberculosis (MTB).Rifampin and isoniazid drug-resistance gene loci were detected by gene chip with sputum specimens from smear-positive tuberculosis patients and clinical strains,comparing the results of detection.BACTEC MGIT 960 drug susceptibility test results were used as control to evaluate the detection performance of gene chip.The sequences of the polymerase chain reaction products of the rpoB,katG and inhA genes from 999 strains identified as Mycobacterium tuberculosis were determined to confirm the mutations by DNA sequencing.Results showed that 100 cases were identified as nontuberculous mycobacteria by gene chip in the 1 108 cases of smear-positive samples.Among the rest 1 008 samples,there were only 9 cases of microarray results different from BACTEC MGIT960 culture-positive strains,achieving the coincidences of 99.1％.Compared with BACTEC MGIT 960 drug susceptibility testresults,the gene chip method displayed a concordance of 98.1 ％ and 94.5 ％for RFP and INH respectively in the 999 pared with the DNA sequencing method,the accuracy of gene chip method was 99.6％ for rifampin resistance and 99.8％ for isoniazid resistance.It's concluded that the gene chip technology can quickly and accurately detect rifampin andisoniazid resistance in MTB and can be used directly for the detection of sputum samples.%目的评价基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的临床应用效果.方法利用基因芯片技术对涂阳肺结核患者的痰标本和临床分离株进行利福平和异烟肼耐药基因位点检测,比较痰标本与菌株检测结果的差异;并以BACTEC MGIT 960药敏试验结果为对照评价基因芯片的检测性能.另外,通过对999株鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株进行rpoB、katG和inhA基因耐药相关区域扩增产物测序,以验证基因芯片对核酸序列检测的准确性.结果在涂阳的1 108例标本中有100例经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌.其余的1 008例痰标本基因芯片结果与BACTEC MGIT960培养阳性的菌株基因芯片结果比较仅有9例结果不一致,符合率为99.1％.以BACTEC MGIT960培养法药敏结果为对照,999株菌株基因芯片法检测利福平耐药性的符合率为98.1％,异烟肼的耐药性的符合率为94.5％.与DNA测序法相比,基因芯片法检测利福平和异烟肼耐药性的准确率分别为99.6％和99.8％.结论基因芯片技术能够快速、准确地进行结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性检测,并能直接用于痰标本检测.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2017(033)001【总页数】6页(P43-48)【关键词】结核分枝杆菌;利福平;异烟肼;耐药性;基因芯片【作者】许榕青;李丹;林银霞;黄明翔;陈新朝【作者单位】福建省福州肺科医院检验科,福建医科大学临床教学医院,福州350008;福建省福州肺科医院检验科,福建医科大学临床教学医院,福州 350008;福建省福州肺科医院检验科,福建医科大学临床教学医院,福州 350008;福建省福州肺科医院检验科,福建医科大学临床教学医院,福州 350008;福建省福州肺科医院检验科,福建医科大学临床教学医院,福州 350008【正文语种】中文【中图分类】R378.91Supported by the Young Research Program of Department of Public Health of Fujian Province (No. 2013-2-77) Corresponding author: Huang Ming-xiang,Email:**************结核病是全世界范围内严重威胁公共健康的传染病。

噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的药物敏感性应用价值

ｔｔｌ１７ｔｉｓｗｅｅｕｔｒｄｏｏｗｎｔｉ—ｅｅｃｈｒｍｅｉｍｎｄｎｉｅＭｙｏａｔｒｕｅｃｌｓｏａ６ｓａｎｒｃｕｅｎＬ — ｅｅｎＪｎｎｕｕｅｄｕａｄｉｅｔｄａｒｌｓｓｆｓｃｂｃｅｕｔｂｒｕｏｉｉｍｓ
Ｓｘｙｎｎｓｒｉｓｏｅｂｃｅｉｍｔｂｒｕｏｉｓｒｉｓｉｔ— ｉｅｔａｎｆＭｙｏａｔｒｕｕｅｃｓｓｔａｎｗｅｅｂａｎｄｆｏｈｅｐｕｌｒｏｔｉｅｒｍｔｓｕｔｍｏｅｒｍａｙｕｍｏａｙｆｔｐｈｉｒｐｌｎｒ
ｂｏｇａｙａｓｙＦＮ胁ｉｌｉｌａＡｏｃｌｓ
Ｈａｄ５Ｏｎａｎ０６Ｏ２，Ｃｈｎｉａ
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ｔｂｒｕｏｉｃｓｓｕｅｃｌｓａｅ．Ｎｉｅｙｅｇｔｔｉｓｗｅｅｏｔｉｅｏｔｅｓｕｕｏｅｒｐａｅｕｍｏａｙｔｂｒｕｏｉｅｅ．田ｓｎｔ－ｉｈｒｎｒｂａｎｄｆｍｈｐｔｍｆｈｅｅｔｄｐｓａｒｔｌｎｒｅｃｓａｓｕｌｓｓ
ｂｏｏｉａｌｓａＰａｉｌｇｃｙａｓｙ（ｈＢ）ｉｅｄｔｃｉｎｏｏｉｚｄａｄｒａｉｅｉａｃｎＭｙｏａｔｒｍｕｅｃｌｓ．Ｍｅｈｄｌｎｔｅｅｔｆｉｎａｉｆｍｐｎｒｓｓｎｅｉｅｂｅｅｕｔｂｒｕｏｉｈｏｓｎｉｔｉｓｔｏｓ

应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性

应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性张俊仙;吴雪琼;阳幼荣;梁艳【期刊名称】《中国防痨杂志》【年(卷),期】2011(033)010【摘要】目的应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)对利福平和异烟肼的耐受性,评价其临床应用价值.方法应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增一基因芯片杂交的方法检测经常规药敏实验证实的30株Mtb利福平和异烟肼敏感株和5.株耐利福平和异烟肼分离株的堆rB基因及katG和inhA基因突变,同时以PCR-直接测序法为对照.结果应用PCR-基因芯片与基因测序方法检测30株Mtb利福平敏感株咖B基因和异烟肼敏感株katG基因和inhA基因均为野生型.50株Mtb利福平耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析3株rpoB基因均为野生型,41株均为突变型;6株PCR-基因芯片与基因测序结果不一致.50株Mtb异烟肼耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析16株katG基因和30株inhA基因均为野生型,31株katG基因均为315位密码子突变,7株inhA基因均为-15位突变型,其中2株为katG和inhA双重突变,3株katG和13株inhA PCR-基因芯片与基因测序结果不一致.结论应用PCR-基因芯片方法可快速、有效地检出大多数Mtb耐多药分离株,指导临床用药.【总页数】6页(P680-685)【作者】张俊仙;吴雪琼;阳幼荣;梁艳【作者单位】100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室;100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室;100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室;100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室【正文语种】中文【相关文献】1.长春地区基因芯片法和比例法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的比较研究 [J], 赵淑杰;2.基因芯片和比例法药物敏感性试验检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的比较研究 [J], 欧维正;骆科文;王燕;秦万;蒙俊;张廷梅3.基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性临床应用评价 [J], 许榕青;李丹;林银霞;黄明翔;陈新朝4.基因芯片检测临床标本结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药性的研究 [J], 熊敏;骆科文;周忠;欧维正5.基因芯片技术对结核分枝杆菌利福平及异烟肼的耐药性检测研究 [J], 孙桂英; 赵刚; 沈燕; 徐密琴; 高胜利; 俞净; 钮志林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

结核分支杆菌利福平和异烟肼耐药基因的快速检测

结核分支杆菌利福平和异烟肼耐药基因的快速检测宋阳;韩中波;于宏波【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2006(010)011【摘要】近年来，全球结核病呈现死灰复燃的趋势，其主要原因是耐药（DR-TB）和耐多药（MDR-TB）结核病的广泛分布和迅速传播。

作为一线抗结核药物，INH 和RFP结核病的预防、治疗方面起着重要作用。

但由于单药化疗和不规则化疗，其耐药情况越来越严重。

有研究表明结核分杆菌耐异烟肼的产生与过氧化氢酶-过氧化物酶的编码基因KatG基因的缺失和突变有关；而利福平耐药则与RNA聚合酶的p亚基的编码基因rpoB突变有关。

我们在用PCR-SSCP方法单独检测KatG 和rpoB基因突变时，发现在非变性聚丙烯酰胺凝胶中，这两种基因的迁移率不同，且差异很大。

因此，我们在一个反应中同时扩增KatG和rpoB基因。

再根据其SSCP图谱进行分析，这样就可以同时检测异烟肼和利福平耐药性。

我们采用PCR-SSCP银染法直接检测临床分离株和临床痰标本中结核分支杆菌rpoB基因和KatG基因突变，现将结果报告如下：【总页数】2页(P1352-1353)【作者】宋阳;韩中波;于宏波【作者单位】吉林省中医院,检验科,吉林,长春130000;吉林市结核病防治研究所,检验科,吉林,吉林132011;吉林省中医院,检验科,吉林,长春130000【正文语种】中文【中图分类】R4【相关文献】1.中国部分地区结核分支杆菌耐利福平、异烟肼和链酶素耐药基因的检测 [J], 包洪;于庭;印璞;刘爱忠;张吉平2.基因芯片方法快速检测MDR-TB及利福平和异烟肼耐药基因的研究 [J], 张海英;高会霞;许怡3.结核分支杆菌利福平和链霉素耐药基因的快速检测 [J], 张小刚;何秀云;陈红兵;李书琳;张永胜;张晓娟4.不同引物标记物在显色法芯片检测结核分支杆菌利福平和异烟肼耐药基因中应用比较 [J], 郭乃洲;王万相;严爱华;马达;周步全;景奉香5.应用等位基因特异性扩增法快速检测结核分支杆菌对利福平的耐药性 [J], 范小勇;徐帆洪;胡忠义;赵春女;李忠明;郭盛淇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。