第十四章 维生素类药物的分析

测定方法
第四步：求标示量
测定含量
单位质量1g 对应的效价
A 100 E11c%m
L
D
换算因子
E1% 1cm
标示量%
W 标示量
100%
效价占单位质
W
量的百分比
效价占单位样品 质量的百分比
效价（IU
/
g）(样)
E% 1cm (样 )
换算因子
经过变形可得下式
测定方法
第四步：求标示量
标
示量％＝ W
第一节 VitA
2.UV
最大吸收 峰向长波 方向移动：
红移
维生素A
Vit A3
Vit A
去水维 生素A
3.TLC：三氯化锑显色，磷钼酸显色
维生素A的测定 ChP收载三种
三、含量测定
UV
HPLC法
三氯化锑法
三、含量测定
UV 维生素A常混有杂质，包括多种异 构体，氧化降解产物，合成中间体， 副产物等以及常用稀释油类。都有 紫外吸收，干扰测定。
H3C
CH3
9
CH3
7
8
6
5 4
CH3
3
1CH2OR
2
CH3
维生素A的分析
维生素A
具有一个共轭多烯醇侧链的 环已烯，具有多个异构体
H3C
CH3
9
CH3
7
8
6
5 4
CH3
3
1CH2OH
2
CH3
维生素A醇 （Retinol)
维生素A的分析
维生素A
具有一个共轭多烯醇侧链的 环已烯，具有多个异构体
H3C
作用而使反应不能进行
O
CH2 O C R SbCl5
Notice
CH2
[SbCl5 RCOO] CH2
第一节 VitA
2.UV
维生素A在无水乙 醇盐酸溶液中溶解, 立即进行UV扫描, 在360nm处有一 最大吸收峰.如1. 水浴加热30s,迅速 冷却,此过程发生 脱水反应,扫描时
出现三个吸收峰
Vit A3 Vit A
第一法——等波长差法 VitA醋酸酯
A
A1
A2
A3
Aλ1
Aλ2
Aλ3
经过一系列变换,得出下式
A λ1(校 正 后 ) αA1 βA 2 γA 3
通过实验求出A1、A2、A3，
再用纯品求出K1、K2，再转换
X2 X1 X3
λ2 λ1 λ3
316 328 340
A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)
调节,体内不能合成,须从食物中摄取。
维生素类药物的分析 维生素
从化学结构上来讲，维生素类均属于 有机化合物，但并非同一类化合物。
醇 酯酸 胺 酚 醛 各具有不同的理化性 质和生理作用
按溶解度分
类别
脂溶性
水溶性
名称
Vit A Vit D Vit E Vit K Vit B1 Vit B2 Vit B6 Vit B12 Vit H Vit C
物特性来进行分析
Contents
主要讲解
Vitamins
A
B1 C
D E
维生素A的分析
维生素A
是一种不饱和脂肪醇，在自然 界中主要来源于鲛类海鱼肝脏 中提取的脂肪油（鱼肝油）。
具有多种异构体，有不 同的名称，其中活性最 好的是维生素A1，也是
通常所指的维生素A
维生素A的分析
维生素A
具有一个共轭多烯醇侧链的 环已烯，具有多个异构体
维生素A的分析
维生素A
具有一个共轭多烯醇侧链的 环已烯，具有多个异构体
H3C
CH3
9
CH3
7
8
6
5 4
CH3
3
1CH2OH
2
CH3
去氢维生素A （A2 dehydroretinol)
维生素A的分析
维生素A
具有一个共轭多烯醇侧链的 环已烯，具有多个异构体
H3C
CH3
9
CH3
7
8
6
5 4
CH3
3
2
CH2
A 325
B. 若(A300/A325)> 0.73色谱法纯化后再测
A325不校正 A=A325校正
测定方法
应用示例一 VitAD胶丸中VitA的含量测定
精密称取本品(规格10,000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量 0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至50ml量瓶中，用环己烷 稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中，用 环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波 长为328nm，并在下列波长处测得吸收度如下，计算Vit A的标 示量百分含量。
A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)
◊ A 328 (校 正) - A 328 1 0 0% 3%,3%
A 328
◊ A 328 (校 正) - A 328 1 0 0% 1 5%,3%
A 328
◊ A 328 (校 正) - A 328 1 0 0% 1 5%,3%
VitA醇
310 325 334
测定方法 具体步骤
一、基本步骤
第一步：选择A （A328 或A328(校正后)） 测定A
选择依据——所选A值中杂质的干扰已基本消除
第二步：求
Ε
% 1c m
A %
1cm(样)
规 定
C (%) L 第三步：求效价（每克供试品所含维生素A的国际单位数）
效 价 （IU / g）(样) E%1cm(样) 换 算 因 数
A 328
A328不校正 A=A328校正
第二法
测定方法
三、第二法——VitA alcohol 皂化法 6/7法
① 样品前处理
酯
水解 OH-
乙醚提取VA醇，洗涤，过滤 蒸去醚
异丙醇溶解残渣
在 300，310，325，334nm处分别测Ai
② λmax应为325nm。
若λmax不在323～327nm之间，则供试品中杂质含量过 高，改为色谱法将未皂化部分纯化后进行测定。
1
CH3
去水维生素A （A3 anhydroretinol)
第一节 VitA
CH3
CH39
CH3
75
CH3
3
1
CH2OR
8642
CH3
R= H
O
Retinol (Vit A alcohol)
R= C CH3 O
VA acetate
2-Cis Neovitamin Aa R= 4-Cis Neovitamin Ab 2,4-dicis Neovitamin Ac 6-Cis Isovitamin Aa
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药物分析
第十四章 维生素类药物的分析
维生素类药物的分析
维生素
通俗来讲，即维持生命的物质，是维持人 体生命活动必须的一类有机物质，也是保 持人体健康的重要活性物质。维生素在体 内的含量很少，但不可或缺。
维持人类机体正常代谢功能所必须的一类 活性物质,主要用于机体的能量转移和代谢
A=A328校正
测定方法
标示量%
A
328校正
1
9
0
0
平均丸重
100
C(g /100ml) 标示量
0.6 3 7 1 9 0 0 0.1287 2 1 100
A
A1
A2
A3
Aλ1
Aλ2
Aλ3
设：
A λ1 A λ2
K1
A λ1 A λ3
K2
已知
Aλ1=A1-X1=A1-(mλ1+C)
Aλ2=A2-X2=A2-(mλ2+C)
X2
X1 X3
λ2 λ1 Baidu Nhomakorabea3
nm
316 328 340
Aλ3=A3-X3=A3-(mλ3+C) Y=mX+C
第一节 VitA 波长为ChP2015药典规定
325 1600 1830
Vit A alcohol
λmax(nm)
Ε
% 1c m
换算因子
326.5 1755 1900
325 1820 1830
测定方法
第四步：求标示量(百分)
标
示量％＝ W
A D 100
1900 W L标示量
100％
Why?
测定方法
第四步：求标示量
这是因为标示量是以 效价的形式存在的
C C15H31 VA palmitate
Vit A1 H2 Vit A2
Vit A1 去H2O Vit A3
第一节 VitA
二、主要性质
➢ 溶解性:与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意 混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。 ➢ 不稳定性：含有多个不饱和键，性质不稳定，易被 被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，特别是 在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活。 ➢ 紫外吸收：共轭多烯醇侧链结构，在325-328nm 之间有最大吸收，可用于鉴别 ➢ 与三氯化锑呈色:三氯甲烷+三氯化锑=不稳定的蓝 色
测定方法
1IU=0.344μg Vit A 醋酸酯
1gVit A 醋酸酯=106 μg/0.344 (μg/IU) =2.907×106IU
Vit A 醋酸酯换算因子=2.907×106 IU/1530 =1900
溶剂
环己烷 异丙醇
Vit A acetate
λmax(nm)
Ε
% 1c m
换算因子
327.5 1530 1900
测量吸光度
若λmax不在326～329nm之间，则不能用本法测定，改 为第二法
③ 计算 A ，选择A A328nm
测定方法
λ(nm)
300
316
328
340
360
Aλ/A328nm 0.555 0.907
1
0.811 0.299
A. 若【(Aλ/A328nm)-规定值】≤ (±0.02) —— A328不校正 B. 若【(Aλ/A328nm)-规定值】 有超过 (±0.02)者
1
0.811 0.299
A
0.009 -0.014 0.000 0.023 0.045
A328校正 3.5 2 2A328 A316 A340 3.522 0.663 0.592 0.553 0.637
A328 (校正) A328 1 0 0 3.9 2% (1 5% ~ 3%) A 328
nm
第一节 VitA 波长为ChP2015药典规定
第二法——等吸收比法
A A2
A1 A3
Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1
EM FM λ3 λ1 K DL FL λ3 λ2
Aλ2
Aλ1 Aλ3
A325(校正)
D E
=6.815A325-2.555A310-4.260A334
L
F M
λ2 λ1 λ3 nm
③ 计算
A300 A325
，选择A
测定方法
A. 若(A300/A325)≤ 0.73
A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334
◊ A 325 (校 正) - A 325 1 0 0% 3%,3%
A 325
◊ A 325 (校 正) - A 325 1 0 0% 3%,3%
A D 100
1900 W L标示量
100％
这是因为标示量是以 效价的形式存在的
测定方法
A值的选择
判断
二、第一法——纯度高的VitA acetate 合成 Vit A
天然鱼肝油
① S 环己烷 9～15IU / ml 溶 液
分 别 于300、316、328、340、360nm 处 测Ai
② λmax应为328nm。
第一节 VitA 二、鉴别试验
1.三氯化锑反应(Carr-Price反应)
Vit A SbCl3
蓝色
CHCl3(无水无醇)
紫红色
O CH2 O C R SbCl5
书上的 有点小
错误
CH2
[SbCl5 RCOO] CH2
第一节 VitA 二、鉴别试验
反应应在无水无醇条件下进行。因为水可
使三氯化锑水解，而乙醇可以使碳正离子
咋办呢？
请用三点校正法！
第一节 VitA
维生素A在325-328nm的波 长范围内具有最大吸收，其 最大吸收峰的位置随溶剂的
不同而异。如下：
溶剂
环己烷 异丙醇
Vit A acetate
λmax(nm)
Ε
% 1c m
换算因子
327.5 1530 1900
325 1600 1830
Vit A alcohol
λmax(nm)
Ε
% 1c m
换算因子
326.5 1755 1900
325 1820 1830
应用三点校正法时要注意
第一节 VitA
测定原理
杂质的吸收在310~
A
340 nm波长范围内呈一
条直线，且随波长的增
大吸收度减小；（假设）
物质对光的吸收具有加
和性。（真理）
nm
第一节 VitA
第一法——等波长差法 VitA醋酸酯
λ(nm) A
300 0.374
316 0.592
328 0.663
340 0.553
360 0.228
测定方法
λ(nm)
300
316
328
340
360
Ai
0.374 0.592 0.663 0.553 0.228
Ai/A328 0.564 0.893 1.000 0.834 0.344
A规定
0.555 0.907
CH3
9
CH3
7
8
6
5 4
CH3
3
1CH2OOCCH3
2
CH3
维生素A醋酸酯 （Vitamin A Acetate)
维生素A的分析
维生素A
具有一个共轭多烯醇侧链的 环已烯，具有多个异构体
H3C
CH3
9
CH3
7
8
6
5 4
CH3
3
1CH2OOCC15H31
2
CH3
维生素A棕榈酸酯 （Vitamin A Palmitate)
每日所需(mg)
主要作用
1
抗干眼病，VA缺乏症
0.025
佝偻病，骨软化症
间歇性跛行
1
抗出血维生素
1.5
周围神经炎
2
核黄素缺乏症
3
VB6依赖综合症、缺乏症
0.005
恶性贫血、神经系统疾病
0.25
生物素酶缺乏
60
VC缺乏、酸化尿
维生素类药物的分析方法
生物 法
微生 物法
化学 法
物理化 学法
都是依据药物的化学 结构、理化性质与生