梅毒的实验室检测与技术规范..
梅毒实验室检验PPT
样本处理
将采集的血液样本进行离心，分离出血清，用于后续的实验 检测。
实验操作步骤
抗原检测
利用酶联免疫吸附试验（ELISA）或化学发光法等检测血清中的梅毒螺旋体抗原。
抗体检测
通过检测血清中的特异性抗体来判断是否感染梅毒，常用方法包括快速血浆反应素试验（RPR） 和梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）。
血清学检测
总结词
血清学检测是通过检测患者血清中的特异性抗体，用于诊断和监测梅毒的方法。
详细描述
血清学检测包括非螺旋体抗原试验和螺旋体抗原试验。非螺旋体抗原试验包括快速血浆反应素试验（RPR）等， 用于初筛和疗效观察；螺旋体抗原试验包括梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）等，用于确诊和滴度测定。血清 学检测具有较高的敏感性和特异性，适用于大多数梅毒病例的检测。
$number {01} 汇报人：可编辑
2024-01-11
梅毒实验室检验
目录
• 梅毒概述 • 梅毒实验室检验方法 • 实验室检验流程 • 实验室检验注意事项 • 实验室检验的应用与价值
01 梅毒概述
总结词
梅毒是一种由苍白（梅毒）螺旋体引起的慢性系统性性传播疾病，主要通过性接触 传播。
详细描述
鉴别诊断
与其他性传播疾病的鉴别 诊断，如淋病、尖锐湿疣 等。
在流行病学调查中的应用
流行病学调查
通过大规模的实验室检验，了解 梅毒的流行趋势和传播情况。
追踪传染源
通过检验患者的血液样本，追踪 传染源，防止疾病进一步传播。
在预防控制中的作用与价值
预防控制策略制定
基于实验室检验的数据， 制定和调整预防控制策略 。
性病实验室梅毒SOP
目的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。
适用范围：性病实验室工作人员责任人：实验操作者1、标本的采集与处理1.1标本采集的基本要求1.1.1操作应规范化。
1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。
1.2梅毒标本采集梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。
1.2.1血液1.2.1.1血清标本根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。
也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。
溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。
1.2.1.2血浆标本根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。
血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。
1.2.1.3末梢全血消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。
一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。
收集滴出的血液，立即用于检测。
1.2.2皮损部位组织液1.2.2.1用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。
1.2.2.2用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。
1.2.3淋巴液无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。
梅毒的实验室检测与技术规范课件.
梅毒的实验室检测与技术规范课件.一、教学内容本节课我们将学习《梅毒的实验室检测与技术规范》的相关内容。
主要涉及教材第十二章，详细内容包括梅毒的病原学、实验室检测方法、技术规范及质量控制。
二、教学目标1. 了解梅毒的病原学特点，掌握梅毒实验室检测的基本方法。
2. 学习梅毒实验室检测的技术规范，提高实验操作技能。
3. 掌握梅毒实验室检测的质量控制要点，确保实验结果的准确性。
三、教学难点与重点教学难点：梅毒实验室检测技术规范及质量控制。
教学重点：梅毒实验室检测方法及其操作要点。
四、教具与学具准备1. 教具：多媒体课件、实验室检测设备模型、实验操作视频。
2. 学具：教材、笔记本、实验操作手册。
五、教学过程1. 实践情景引入（5分钟）通过展示梅毒病例，让学生了解梅毒的危害，引出梅毒实验室检测的重要性。
2. 理论讲解（15分钟）讲解梅毒病原学特点、实验室检测方法、技术规范及质量控制。
3. 例题讲解（10分钟）分析梅毒实验室检测中常见的问题，讲解解决方法。
4. 随堂练习（10分钟）（1）梅毒实验室检测的主要方法有哪些？（2）简述梅毒实验室检测技术规范要点。
（3）如何进行梅毒实验室检测的质量控制？5. 实验操作演示（20分钟）播放实验操作视频，让学生了解实验操作流程。
6. 课堂小结（5分钟）六、板书设计1. 梅毒的实验室检测方法血清学检测病原学检测分子生物学检测2. 梅毒实验室检测技术规范样本处理试剂选择操作流程结果判断3. 梅毒实验室检测质量控制严格遵循操作规程试剂质量控制设备维护与校准结果复核七、作业设计1. 作业题目：（1）简述梅毒实验室检测的常用方法及其优缺点。
（2）根据梅毒实验室检测技术规范，设计一份实验操作流程。
（3）分析梅毒实验室检测中可能出现的误差，并提出相应的质量控制措施。
2. 答案：（2）结合教材和实验操作手册，自行设计。
八、课后反思及拓展延伸1. 反思：本节课学生对梅毒实验室检测方法及操作流程的掌握程度，以及实验操作中的注意事项。
梅毒血清学检测的操作规范
检测操作
血清分离
抗凝处理：加入抗凝剂如肝 素钠
离心分离：将血液样本放入 离心机中，以一定速度离心
采集静脉血：使用无菌注射 器抽取静脉血
分离血清：将离心后的血液 分为血清和血细胞两部分
抗原检测的原理
抗原检测
抗原检测的方法
抗原检测的注意事项
抗原检测的结果解释
抗体检测
采集样本：采 集静脉血液样 本，确保样本
一次性使用的针头、针管、玻片等物品，应按照医疗废物处理。 检测过程中产生的废弃标本，应按照生物安全要求进行高压灭菌或化学消毒处理。
检测过程中产生的废弃试剂、缓冲液等，应按照实验室废弃物处理规定进行分类处理。
检测结束后，应对实验室进行全面清洁和消毒，确保环境安全。
感谢您的耐心观看
汇报人：
频率：每周至少进行一次室内质控，并记录相关数据
室间质评
定义：室间质评是指实验室与其他实验室之间对相同或相似项目进行比较和评价
目的：提高实验室检测结果的准确性和可靠性
实施方式：通过参加权威机构组织的室间质评活动，对实验室的检测能力进行评估和 验证
意义：帮助实验室发现存在的问题和不足，及时采取措施进行改进，提高实验室的整 体水平
假阴性结果：可 能由于窗口期、 检测方法等原因 导致，需要结合 临床判断
注意事项
生物安全防护
实验室布局与设施：合理规划实验室空间，确保空 气流通，使用专用实验台和防护服
单击此处输入你的正文，请阐述观点
废弃物处理：正确处理实验废弃物，防止交叉感染 和环境污染
单击此处输入你的正文，请阐述观点
严格遵守实验室操作规程，确保实验结果的准确性 和可靠性
静脉血：采集肘静脉血
采集部位
梅毒血清学检测操作规范
实验室应保持整洁、 干燥、通风良好， 定期进行消毒和清 洁工作。
实验室废弃物应按 照医疗废物处理规 定进行分类、存放 和处置。
实验室应建立安全 管理制度，对工作 人员进行安全培训 和考核，确保实验 室安全运行。
正确处理医疗废物和废液
医疗废物分类：感染性废物、病理性废物、损伤性废物、药物性废物和化学性废物 医疗废物处理：使用专用容器收集，及时送往医疗废物处理中心 废液处理：使用专用容器收集，加入消毒剂后，按照医疗废物处理方式处理 注意事项：避免医疗废物和废液对环境和人体造成危害
穿刺：用采血针穿刺静脉，轻轻回 抽，使血液流入采血管
止血：用止血带压迫穿刺部位，止 血后取下止血带
记录：记录采血时间、部位、样本 量等信息
标记样本并记录相关信息
标记样本：在采 集样本时，需要 使用唯一标识符 对样本进行标记， 确保每个样本的 唯一性和可追溯 性
记录相关信息： 在采集样本时， 需要记录与样本 相关的信息，如 患者姓名、性别、 年龄、采集时间、 采集部位等，以 便后续的检测和 分析
样本容器：采集 的样本需要存放 在适当的容器中， 容器需要保持清 洁、干燥，并使 用适当的标签进 行标识
样本保存：采集 的样本需要按照 规定的温度和时 间进行保存，以 确保样本的稳定 性和可靠性
保证样本质量和安全
采集前准备：确保采集器具无菌、干燥、密封 采集方法：选择合适的采集部位，避免污染 采集时间：在合适的时间段内采集，避免影响结果 样本保存：低温保存，避免细菌繁殖
记录和文档管理
记录检测过程和结果
记录检测过程：详细记录检测的操作步骤、试剂使用、仪器校准等信息 记录检测结果：准确记录每个样本的检测结果，包括阴阳性、滴度等数据 记录保存：将检测记录妥善保存，以便后续查阅和审核 记录规范：遵循统一的记录规范，确保记录清晰、准确、完整
梅毒的实验室检测与技术规范课件
事故处理
如发生意外事故，应立即报告实验室负责人，采 取相应的处理措施，如清洗伤口、消毒环境等。
CHAPTER 05
梅毒实验室检测结果分析与 解读
检测结果判定原则
明确检测原理
01
了解和掌握梅毒检测的基本原理和方法，包括抗原抗体反应、
梅毒的实验室检测与 技术规范课件
目录
• 概述 • 梅毒的实验室检测技术 • 梅毒实验室规范化操作流程 • 梅毒实验室技术规范与标准操作规程 • 梅毒实验室检测结果分析与解读 • 梅毒实验室检测新技术与发展趋势
CHAPTER 01
概述
定义与背景
梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢 性传染病，可累及全身器官。
基于免疫学技术的检测方法改进与创新
化学发光免疫分析
该技术结合了化学发光和免疫分 析的优点，具有高灵敏度、宽线 性范围和良好的稳定性，已广泛 应用于梅毒血清学检测。
酶联免疫吸附试验
该技术利用酶催化底物反应产生 光信号，从而实现对梅毒抗体的 定量检测，具有操作简便、成本 低等优点。
基于生物信息学在梅毒诊断中的应用前景
合理布局实验室空间，设置独立 的阳性血清和脑脊液检测区域，
以避免交叉污染。
实验器材
使用一次性实验器材，如注射器 、吸管、离心管等，避免交叉感
染。
实验人员
实验人员应接受专业培训，熟悉 梅毒检测的原理、操作流程和质
量控制要求。
标准操作规程
1 2
样本采集
采集血液样本时，应使用真空采血管，避免直接 接触血液。采集脑脊液样本时，应使用无菌穿刺 技术。
血清学筛查
血清学确证
使用酶联免疫吸附试验（ELISA）等血清学 方法筛查患者血清中的梅毒抗体。
梅毒的实验室检测与技术规范课件.
梅毒的实验室检测与技术规范课件.一、教学内容本节课的内容主要围绕梅毒的实验室检测与技术规范展开，涉及的教材章节为《临床微生物学》第十二章第二节。
详细内容包括梅毒病原学、实验室检测方法、检测技术规范及质量控制要点。
二、教学目标1. 理解梅毒病原学特点，掌握梅毒实验室检测方法。
2. 掌握梅毒实验室检测技术规范和质量控制要点，提高检测准确性和安全性。
3. 培养学生实际操作能力，提高实验室检测技能。
三、教学难点与重点教学难点：梅毒实验室检测技术规范和质量控制要点。
教学重点：梅毒病原学特点、实验室检测方法及其操作技巧。
四、教具与学具准备1. 教具：梅毒病原体模型、显微镜、投影仪、PPT课件。
2. 学具：实验服、手套、口罩、消毒剂、检测仪器、试剂。
五、教学过程1. 导入：通过介绍梅毒的危害性，引出梅毒实验室检测的重要性。
2. 理论讲解：（1）梅毒病原学特点；（2）梅毒实验室检测方法：暗视野显微镜检查、免疫学检测、分子生物学检测等；（3）梅毒实验室检测技术规范和质量控制要点。
3. 实践操作：（1）示范操作：教师演示梅毒实验室检测方法，讲解操作技巧；（2）学生分组练习：学生分组进行实验操作，教师巡回指导；（3）实验结果分析：分析实验结果，讨论检测准确性及可能存在的问题。
4. 例题讲解：讲解梅毒实验室检测中常见的实际问题，分析原因和解决方法。
5. 随堂练习：设计梅毒实验室检测的相关题目，巩固所学知识。
六、板书设计1. 梅毒病原学特点2. 梅毒实验室检测方法暗视野显微镜检查免疫学检测分子生物学检测3. 梅毒实验室检测技术规范和质量控制要点七、作业设计1. 作业题目：（1）简述梅毒病原学特点及其检测方法。
（2）论述梅毒实验室检测技术规范和质量控制要点。
2. 答案：八、课后反思及拓展延伸2. 拓展延伸：引导学生关注梅毒实验室检测新技术、新方法的研究进展，提高学术素养。
重点和难点解析1. 梅毒实验室检测技术规范和质量控制要点2. 实验操作技巧及结果分析3. 作业设计中的论述题详细补充和说明：一、梅毒实验室检测技术规范和质量控制要点1. 样本采集：确保采集的样本具有代表性、及时性和无菌性，避免样本污染和降解。
浅谈梅毒螺旋体实验室检查标本的采集与规范操作
浅谈梅毒螺旋体实验室检查标本的采集与规范操作梅毒螺旋体又称苍白密螺旋体苍白亚种，是导致人类患梅毒疾病的病原体，也是以人为唯一宿主的少见病原体。
在临床慢性性传播疾病中，梅毒是常见病种之一，对人类健康的危害性也较为严重。
临床根据感染途径的不同，将梅毒分为先天性梅毒及获得性梅毒，先天性梅毒是梅毒螺旋体通过孕妇的胎盘垂直传播给胎儿，致使胎儿发生感染；获得性梅毒则主要通过性接触传播感染，极少数情况下接吻、哺乳及接触带有梅毒螺旋体的分泌物也可发生感染。
临床根据梅毒患者病程的不同，又将获得性梅毒分为三期，即Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期梅毒。
由于梅毒螺旋体在不含有活体细胞的培养基中无法完成生长繁殖，梅毒的诊断主要依赖于临床标本中的病原体直接检查和血清学诊断，检查方法的选择主要取决于患者的临床表现和标本类型，即检查方法的选择因梅毒患者的病程、取材部位的不同而异。
潜伏期梅毒患者临床症状、体征不明显，多采集血液标本检测梅毒抗体或反应素为主要手段；Ⅰ期梅毒(又称为硬下疳期)患者，外生殖器易形成硬结、溃疡，溃疡部位渗出液中含有大量的梅毒螺旋体，此阶段的感染性较强，用暗视野显微镜容易查见梅毒螺旋体，此期多采集硬下疳渗出液，用暗视野显微镜直接查找运动活泼的梅毒螺旋体活体或镀银染色光学显微镜查找梅毒螺旋体死体为实验室常用检查手段，Ⅰ期梅毒末期，也可以采集患者的血液标本检测梅毒螺旋体抗体或是反应素；Ⅱ期梅毒患者，往往全身皮肤、粘膜出现梅毒疹和淋巴结肿大，其中含有较多梅毒螺旋体，有较强的传染性，血清学反应几乎100%为阳性，此期以采集血液标本检测梅毒抗体或反应素为主，也可采集患者皮损渗液或局部淋巴结抽出液于暗视野显微镜下查找梅毒螺旋体；Ⅲ期梅毒患者，由于病程较长，病变可波及全身组织、器官，其基本损害为慢性肉芽肿和局部组织坏死，皮肤、肝、脾和骨骼常被累及，甚至侵害中枢神经系统而引起神经性梅毒，此期患者的梅毒血清学反应常为阳性，多采集患者血液、脑脊液标本做梅毒血清学检测。
梅毒血清学检测的操作规范
TPPA操作步骤
试剂准备：恢复室温 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液 加至微量反应板孔内，第1孔100μL，第2～4 孔各25μL 样本稀释：取血清25μL加至第1孔，混匀后 取25μL至第2孔，混匀后取25μL至第3孔，混 匀后取25μL至第4孔，混匀后弃去25μL 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25μL，第4孔 加致敏 颗粒25μL 混合：将反应板置振荡器振荡30秒 反应：孵育2h观察结果
TPPA结果判读
观察第3孔，不出现凝集为有效试验
TPPA结果判断
观察凝集反应强度：分级如下
4+~3+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠
2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环
1+： 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环
±：颗粒模糊覆盖，边缘有明显的小环
一：颗粒紧密沉积孔底中央或形成一小点
50.0
-
50.0
抗原悬液(ul) 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7
非梅毒螺旋体抗原检测意义
早期梅毒硬下疳出现1~2周后，血清学可 呈阳性 梅毒患者经治疗后血清滴度可下降并转 阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发 或再感染的指征 为什么要做定量检测？
滴度常与病情活动相关，滴度改变4倍具有 临床意义
梅毒血清试验假阳性因素：
技术性
标本的污染 溶血 操作失误 患者有其他疾病，使梅毒血清试验出现阳性 生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物 学假阳性
梅毒的实验室检查
2014-10-8
梅毒（TP）生物学特性
1、小而纤细的螺旋状微生物，长5～20um,粗细﹤0.2um
2、有6～12个规则的螺旋基本结构为一原生质的圆柱体， 为两层膜所围绕。 3、螺旋整齐、数目固定、折光性强，较其他螺旋体亮， 运动缓慢而有规律，有三种运动方式：围绕其长轴旋 转运动；伸缩其螺旋间距离移动；弯曲扭动如蛇行。 4、人是梅毒螺旋体的唯一自然宿主，梅毒螺旋体不能在 体外培养繁殖，最适生存温度是37℃，离开人体很快 死亡，煮沸、干燥、肥皂水以及一般的消毒剂如双氧 水、酒精等很容易将其杀灭。
微生物形态 规则螺旋体 一端/两端钩状，菌体成8、S或C形 在暗视野显微镜下运动活泼 G-, Fontana镀银染色,染成棕褐色
3
• 形态与 染色
暗视野显微镜下观察
4
梅 毒 螺 旋 体
Histopathology showing Treponema pallidum spirochetes in testis of experimentally infected rabbit. Modified Steiner silver stain.
CDC/Dr. Edwin P. Ewing, Jr. epe1@cdc .gov epe1@cdc.
梅毒螺旋体，Fontana镀银染色
5
传播途径
• 梅毒患者的皮肤、粘膜中含梅毒螺旋体，未患 病者在与梅毒患者的性接触中， 皮肤或粘膜若 有细微破损则可得病。 • 获得性梅毒 （后天）早期梅毒病人是传染源， 95%是通过不洁性交传染，少数通过接吻， 握 手、输血、接触污染的内衣湿毛巾、茶杯、烟 斗、哺乳、尿布等传染。 • 胎儿梅毒（先天 ）：孕妇体内螺旋体，一般在 妊娠3—4月通过胎盘感染婴儿。A3（TPຫໍສະໝຸດ A）梅 毒 检 测 流 程 图
梅毒的实验室检查与技术规范
梅毒的实验室检查与技术规范概述梅毒（syphilis）是一种由螺旋体梅毒螺旋体（Treponema pallidum）引起的性传播疾病。
梅毒的及时检测和确诊对于治疗及防止梅毒的传播至关重要。
本文将探讨梅毒的实验室检查方法和相关的技术规范。
实验室检查方法血清学检测血清学检测是梅毒的首选检测方法，常用的血清学检测方法包括非梅毒螺旋体凝集试验（non-treponemal tests）和梅毒螺旋体特异性试验（treponemal tests）。
非梅毒螺旋体凝集试验包括梅毒螺旋体血清检测（VDRL）和荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验（FTA-ABS）。
这些试验通过检测抗体反应来判断是否感染梅毒，并可评估感染程度。
梅毒螺旋体特异性试验主要包括T. pallidum颗粒凝集试验（TP-PA）和ELISA试验。
这些试验可以进一步证实梅毒感染，并对阳性样本进行确认。
分子生物学检测分子生物学检测方法可以直接检测梅毒螺旋体的基因组或其特异性基因片段。
常见的分子生物学检测方法包括聚合酶链式反应（PCR）和DNA杂交试验。
PCR技术可在早期感染时检测到梅毒螺旋体的DNA，具有高度敏感性和特异性。
DNA杂交试验主要用于检测神经梅毒，可检测到T. pallidum在脑脊髓液中的存在。
细菌学检测细菌学检测是直接观察样本中是否存在活动的梅毒螺旋体。
常用的细菌学检测方法有暗视野显微镜检查、苏木精-伊红染色和螺旋体培养。
在显微镜下观察暗视野试验时，活动的梅毒螺旋体会显示出旋转的运动。
苏木精-伊红染色可以染出梅毒螺旋体的形态。
螺旋体培养可以将梅毒螺旋体培养出来，但是需要较长的培养周期，并且并非常规检测方法。
技术规范为确保梅毒实验室检查结果的准确性和可靠性，以下是一些常见的技术规范：1.实验室人员需接受充分的培训，熟悉各项检测方法和技术操作流程，并按照操作规程执行。
2.所有试剂和材料必须符合质量管理规范，并保持良好的保存和标识。
3.实验室必须建立完善的质量控制体系，包括使用标准品进行日常质控、参加外部质控项目以及进行内部质量评估。
梅毒检测技术规范介绍20130627
中国疾病预防控制中心性病控制中心 中国医学科学院皮肤病研究所 尹跃平 研究员
2013年06月27日 海南海口
主要内容
问题及概述
实验室检测注意事项及临床意义
梅毒实验室检测策略探讨
Hale Waihona Puke 问题-1下列哪些说法是错的？
① ② ③
一旦感染梅毒，TPPA常终身阳性
TPPA可用于疗效判断 梅毒孕妇所生婴儿RPR和TPPA检测结果阳性可诊断 为胎传梅毒
抗原抗体凝集
TPPA试验结果判读
敏感性
4+： 粒子光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠 3+： 粒子光滑覆盖大部分底 2+：粒子光滑聚集覆盖孔底，周围有一细胞环 病期 临床试验a 一 期 100 二 期 100 隐 性 100 特异性
美国CDC
88
100
100
95
1+： 粒子光滑集聚覆概孔底，周围有一明显细胞环 ±： 粒子沉集孔底，中央形成一小点 –： 粒子紧密沉积孔底中央
率% 15.0 33.3 28.5
人数 10 28 19
率% 16.1 17.0 12.5
合 计
6282
6.3
4
合 计
310
1751
20
399
6.5
22.8
5
62
5/20
15.5
A类场所：卡拉OK酒吧、舞厅、茶吧、星级
宾馆
B类场所：发廊、按摩房、美容房、洗头房、
足疗房、路边酒店等
C类场所：站街女、出租屋、工棚女
（此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心龚向东教授）
11
我国梅毒流行现状-高危人群感染率
梅毒的实验室检测技术
、
病 原 学 检 测 法
主要 包 括 暗视 野 显 微 镜 检 查 和 镀 银 染 色 检 查 两 种 方 法 。
一
下可呈假阴性 ； 另一方面 ， 自身免疫性疾 病 、 妊娠等情况 可导
致Ｒ Ｐ Ｒ、 Ｔ Ｒ Ｕ Ｓ Ｔ出 现 假 阳性 。 由 于 Ｒ Ｐ Ｒ和 Ｔ Ｒ Ｕ Ｓ Ｔ存 在
一
定的假 阳性或假阴性结果 ， 分析该试验 结果时应充分 考虑
以上 干 扰 因素 。Ｒ Ｐ Ｒ或 Ｔ Ｒ Ｕ Ｓ Ｔ 阳性 的患 者 往 往 是 梅 毒 现 症
中华实验平 口 ｌ 临 床感染病杂志 （ 电子版） ２ ０ １ ３ 年２ 月第７ 卷 第１ 期Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｊ Ｅ ｘ ｐ Ｃ ａ ｉ ｎＩ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ Ｄ ｉ ｓ（ Ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ） ， Ｆ ｅ ｂ ｎ ｍ ￣２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ ｌ ７， Ｎ ｏ ． １
感染者 ， 其滴 度随着临床 症状 的好 转 而逐渐 下降 ， 故可 以作 为疗效观察 、 随访 和了解有无复发 的指标 。 ２ ．梅毒螺旋体抗 原血 清试 验 ： 梅毒 螺旋 体抗 原血 清试 验 的原理是梅毒螺旋体 抗原 能与 血清或 血浆 中的特异 性梅 毒螺旋体抗体发生 特异抗 原抗 体反应 ， 用 以检测 相应抗 体 。 常用的有 梅毒螺旋体 明胶颗粒凝 集试 验 （ ｔ ｒ ｅ ｐ ｏ ｎ ｅ ｍ ａ ｐ ａ ｌ ｌ ｉ ｄ ｕ ｍ ｐ ａ ｒ ｔ ｉ ｃ ｌ ｅ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ， Ｔ Ｐ Ｐ Ａ） 、 梅 毒螺 旋体 血球 凝 集试 验 （ ｔ ｒ ｅ ｐ ｏ ｎ ｅ ｍ ａ ｐ ａ ｌ ｌ ｉ ｄ ｕ ｍ ｈ ｅ ｍ ａ ｇ ｇ ｌ ｕ ｔ ｉ ｎ ａ ｔ ｉ ０ ｎ ， Ｔ Ｐ Ｈ Ａ） 、 荧 光梅毒螺 旋体抗 体吸 收
梅毒的实验室检查
梅毒血清反应的假阴性
• 1． 一期梅毒硬下疳：一般硬下疳 出现2-3周，机体才出现反应素，故 早期血清反应常呈阴性。
• 2． 感染梅毒立即治疗或晚期梅毒： 由于血清反应素低，出现阴性。
• 3． 二期梅毒假阴性；不到1%的二 期梅毒患者其未稀释的血清VDRL试 验呈阴性或弱阳性反应，而在高度 稀释后反而为阳性，即前带现象 （Prozone phenomenon），这是血 清中抗心磷脂抗体过多，抑制阳性 反应的结果。 • 4． 技术操作或抗原敏感性低出现 血清试验阴性。
• TP-ELISA利用酶的放大系统，提高 了检测灵敏度，甚至可以比TPPA能 更早地检测出梅毒螺旋体特异性抗 体。在梅毒螺旋体特异性抗体和非 特异性抗体中，特异性IgM抗体最早 出现，感染梅毒螺旋体后，机体启 动体液免疫即可产生；抗心磷脂抗 体是当组织被破坏释放心磷脂后才 产生。
• 梅毒螺旋体特异性IgG抗体出现时间 较晚，可终身存在，因此，TPELISA或TPPA阳性无法判断是初次感 染还是既往感染。抗心磷脂抗体可 在梅毒治愈后消失，用TRUST能判断 是新近感染还是既往感染。
• 感染梅毒后，心磷脂抗体出现晚于 特异性螺旋体抗体，晚期梅毒时此 类抗体又部分转阴。有报道，三期 梅毒病人非梅毒螺旋体抗原试验仅 有71%仍为阳性，而梅毒螺旋体抗体 检测几乎均为阳性。 • 因此，非梅毒螺旋体抗原试验不适 于诊断一、三期梅毒，潜伏期梅毒 也不敏感，而且有急慢性的生物学 假阳性和假阴性反应。
• 血清学试验用作先天性梅毒的辅助诊 断，其首要问题是将无症状感染婴儿 从非感染婴儿区别开来，这些婴儿的 母亲梅毒血清试验阳性，困难在于不 能将母亲体液免疫反应同婴儿的抗体 反应相区别，因为母亲的IgG可传递 给胎儿。另外由于IgG终身存在，所 以很难评价治疗结果。血清学诊断常 常又存在着假阳性。
性病实验室梅毒SOP
目的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。
适用范围：性病实验室工作人员责任人：实验操作者1、标本的采集与处理1.1标本采集的基本要求1.1.1操作应规范化。
1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。
1.2梅毒标本采集梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。
1.2.1血液1.2.1.1血清标本根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。
也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。
溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。
1.2.1.2血浆标本根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。
血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。
1.2.1.3末梢全血消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。
一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。
收集滴出的血液，立即用于检测。
1.2.2皮损部位组织液1.2.2.1用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。
1.2.2.2用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。
1.2.3淋巴液无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。
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②生物学假阳性
– 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒 血清试验出现阳性
某些疾病：结核、疟疾、肝病、红斑狼疮、流感、肺炎、类风 湿性关节炎、风湿性心脏病、风疹、系统性硬化症等，疾病发 展过程中释放心磷脂到血液中呈假阳性。老年人。 生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物学假阳性。
梅毒假阳性反应的处理
技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的 假阳性反应，经过重复试验即可除外。 对生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA） 等试验进行排除。
前带现象
指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度 的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临 床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现
在早期梅毒、神经梅毒和先天梅毒等诊断，以及螺旋体现
症感染和既往感染鉴别诊断中具有一定的价值
可应用于梅毒螺旋体的耐药性监测、菌株流行病学分型。
第五章 实验室生物安全
梅毒的生物危害 梅毒螺旋体属第三类病原微生物，一般情况下对人、动物或者环 境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，
试验特点
原理和成分与试验相同
血清不需要灭活 不需要显微镜观测结果 可作定量试验 有现成的试剂盒携带方便 操作简单 价格便宜
操作要点
1. 仪器：水平旋转仪。 2. 定性实验
加样：吸取50ul血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内 加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原 反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟，立即在亮光下观察结果 稀释夜准备：在圈内加入50uL生理盐水
梅毒实验室检测策略选择
根据目的选择检测方法及检测策略。 可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试 验。
以临床诊断为目的检测策略一
以临床诊断为目的检测策略二
策略一和策略二比较
第三章 梅毒体病原学检测
检测方法 • 暗视野显微镜检查
• 镀银染色检查
第四章 梅毒核酸检测
可对血浆、血清、皮损部位组织液、淋巴穿刺液及脑脊液 等标本的梅毒螺旋体核酸检测
质量评价
考评组织单位根据PT考核结果、职能工作评价结果及对部 分实验室现场评价情况，汇总各实验室的最终考评结果， 上报相关机构。
考评单位应将考评得分及扣分原因反馈各参评实验室，以
适当的方式在适当范围内公开发布考评结果。为合格者颁
发合格证书。
小结
1、非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性往往是梅毒现 症感染者，临床上即可开展治疗。 2、非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量试验可作为疗 效观察的指标。 3、完善操作的标准化，杜绝有个人特点的操作。 4、根据目的选择检测方法及检测策略。可采用任何 一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。 5、临床上采用两种方法同时检测，可以快速诊断梅
效观察、判愈、复发或再感染的指征。
• 为什么要做定量检测？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义
一期梅毒1年后转为阴性
二期梅毒2年后转为阴性。
晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年
后约50%病人血清反应仍为阳性。
TRUST结果解释示意图
假阳性问题
假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性 ①技术性假阳性
第一章 样品的采集和处理
• 血清、血浆、全血及脑脊液: 梅毒血清学检测或核酸检测 • 皮损部位组织液、淋巴穿刺液: 梅毒病原体检测或核酸检测。
梅毒血清学试验适用范围
第二章 梅毒血清学检测
检测目的: 临床诊断、血液筛查、流行病学监测
• 以临床诊断为目的的检测是为了确定梅毒感染的状况。
• 以血液筛查为目的的检测是为了防止梅毒的经血传播。 • 以流行病学监测为目的的检测是为了调查梅毒血清学 感染率和发病率。
检测方法和试剂的选择
用于临床诊断的检测方法应使用经国家食品药品监督
管理局注册批准的试剂，应选择敏感性高、特异性好的试
剂。性病参比实验室和省级性病中心实验室应定期组织开
展梅毒诊断试剂的临床质量评价和新方法与技术的评估。
质量评价
所有梅毒检测实验室应参加外部质量评价 省级中心实验室应参加国家级职能工作考核和PT 其他实验室应参加省级职能工作考核和PT。
梅毒概述（二）
一期梅毒
硬下疳和(或)腹股沟淋巴结肿大 二期梅毒
可有一期梅毒史，病期在2年以内有多形性皮疹、扁平湿疣等 三期（晚期）梅毒 可有一期或二期梅毒史，病期在2年以上 皮肤黏膜损害等，包括神经梅毒、心血管梅毒 隐性（潜伏）梅毒 早期：病期在2年以内；晚期：病期在2年以上。无任何梅毒性的症状和体征 胎传（先天）梅毒 早期：在2岁前发生；晚期：在2岁以后发病。胎传隐性梅毒：无临床表现
毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。
TPPA结果解释示意图
梅毒血清学试验结果解释
梅毒检测技术规范简介
全国梅毒检测技术规范
第一章 梅毒检测样品的采集和处理 第二章 梅毒血清学检测 第三章 梅毒病原体显微镜检测 第四章 梅毒病原体核酸检测 第五章 实验室生物安全 第六章 梅毒检测实验室质量管理
粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可
见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。
TPPA是目前WHO认可的梅毒抗原血清学试验的 “金标准”，常用于新方法、新试剂评价的参照 标准。
TPPA(TPHA)试验原理示意图
梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义
一般情况下，一旦梅毒患者梅毒螺旋体抗原血清试验呈阳 性，即使经过正规有效治疗治，仍将终身阳性。所以 TPPA等试验不能作为疗效观察的指标。 作为非梅毒螺旋体抗原血清试验初筛阳性标本的确证试验。 TPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅
梅毒概述（三）
疑似病例、确证病例诊断依据： 病史 症状 实验室检查 梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义
梅毒实验室检测技术
• 病原学检测 • 血清学检测
梅毒血清学检测方法
梅毒血清学检测分类
(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验
（非特异性梅毒抗体）
(2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验
（特异性梅毒抗体）两类方法。
是有有效治疗和预防方法的致病微生物
梅毒相关检测的生物安全级别 为了保证安全，对临床和现场未知样本的梅毒血清学检测应在符
合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的实验室中进行。如有艾滋病
检测实验室，可以在艾滋病抗体检测实验室中进行。
第六章 实验室质量管理
质量保证 质量评估 试剂评价
质量保证
3. 定量试验
（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。
加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐
水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性试验。
非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断
RPR
TRUST
非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义
早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。
经治疗后血清滴度可下降并转阴性，故可作为疗
ห้องสมุดไป่ตู้
为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验
原理
人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一 种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体 在3周-4周产生类脂质抗体（反应素）。主要是IgM和IgG 混合抗体。 抗体的作用 无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反 应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至 转为阴性。
毒，使病人能够得到及时治疗。
梅毒的实验室检查与技术规范
朱穗兰
2013年3月2日
主要内容
梅毒概述 梅毒血清学检测方法 梅毒检测技术规范
梅毒概述（一）
性接触是主要的传染途径 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 随着病期的延长，传染性越来越小 到感染后2年，通过性接触一般无传染性 母婴传播 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者， 虽已无性传播（病期>2年），但妊娠时仍可传染给胎儿, 病期越长，传染性越小;
了阳性的结果，该现象称为前带现象。
处理：将血清稀释后再进行试验。
耐血清性（血清固定）
指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时 期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治 疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。
梅毒螺旋体抗原血清学试验
梅毒螺旋体抗原血清学试验方法
梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT)
荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）
化学发光免疫分析法（CLIA）
梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）
TPPA
TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒，此致敏颗
临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测法？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验
所有非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗原基本成分都是一样 方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） （3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似