新生儿溶血病检测操作规程

新生儿溶血病检测操作规程

一、项目名称、检验方法名称

1．项目名称：新生儿溶血病检测（包括直接抗人球蛋白试验、游离试验和放散试验三项）2．检验方法名称：柱凝集

二、方法学原理

该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。

三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物

1．试剂卡品牌：美国强生奥索

2．代号：BioVue －poly Cassettes

3．包装规格：

400卡/箱试剂卡(707300);100卡/箱试剂卡(707350)

4．试剂成分：

抗人球蛋白(lgG,C3b/C3d)检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.

成分描述

第1～6柱：抗人球蛋白、抗-lgG、-C3d;多特异性抗－lgG(兔)

抗－C3b(鼠单克隆)(克隆F7G3) 抗－C3d(鼠单克隆)(克隆C4C7) FD＆C1＃蓝色染料

FD＆C5＃黄色染料

5．试剂的储存与效期：

储存条件：2～25℃环境保存。请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。并

且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。

效期：试剂盒上有记载

四、仪器品牌、型号

BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器

五、样本的采集与准备：

在采集标本前对病人/献血者无特殊要求。含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。标本采

集后应尽快进行检测。如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。

六、试剂准备：

抗人球蛋白(IgG,C3b/C3d)检测卡为即用型产品。试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。

试剂卡经过运输颠簸后，需倒置一下，然后重新离心以备用。请勿使用有气泡的，有断层的，

液面在玻璃珠以下的试剂卡。

七、具体操作步骤

✧离心新生儿血浆样本（3000转/分离心5分钟），将血浆全部吸出，用于做游离抗体检测；压

积细胞用于做放散试验；

✧将压积细胞打散，然后用生理盐水将细胞洗涤三遍，最后用等量的生理盐水悬浮压积红细胞，

制成新生儿红细胞悬液（浓度为50%）备用；

✧热放散液制备：

将新生儿红细胞悬液置于56℃水浴箱中加热放散，轻摇1分钟混匀细胞后，加盖

置水浴中9分钟，迅速以3000转/分（即1000g的离心力）离心3分钟，取上清，

即为放散液；

✧直接抗人球蛋白试验：

i.取20ul新生儿压积红细胞，加1ml生理盐水混匀，制成1.5%的红细胞悬液；

ii.取AHG卡，在一孔中加入1.5%的红细胞悬液20ul；

iii.离心5分钟，判定结果；

注意：DAT阴性，不一定意味着红细胞上没有吸附抗体，放散试验依然要做。

✧游离试验和放散试验：

目的：检测血浆中的游离抗体和放散液中的抗体；

材料：浓度为1.5%的标准A、B、O红细胞悬液；AHG卡；

取AHG卡一张，依次加入以下物质：

✧

✧离心5分钟。

✧读取并记录反应强度。

✧BioVue结果判读：

⏹阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果，表明红细胞表面存在相应的抗原。

无论是否发生凝集，溶血的存在视为阳性结果

⏹阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集是阴性结果，表明红细胞表面不存在

相应抗原

⏹溶血会导致玻璃珠上方呈浅粉色或红色。部分溶血时，有可能出现或没有凝集

存在

⏹4＋反应：红细胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一个环形带

⏹3＋反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠床的上半部分

⏹2＋反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量的细胞

⏹1＋反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量

的细胞

⏹0.5＋反应：大部分凝集的红细胞穿过玻璃珠，在柱的底部形成一个间断的（不

平整的）红细胞聚集带，聚集带上方有少量凝集的红细胞

⏹0阴性：所有红细胞均穿过玻璃珠，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带

八、操作注意事项

1.不适宜的存储条件可能会影响产品质量。注意：每个试剂盒卡的架子外面都贴有一个圆形的温控指示点，如指示点圆圈内为蓝色，说明试剂卡曾被暴露在可能影响产品质量的温度环境中。使用这些试剂卡时可能出现假阴性的检测结果。请勿使用这样的试剂卡。

2.请勿使用超过效期的试剂卡。

3.卡中液体试剂的冷冻或蒸发都有可能影响未凝集红细胞通过玻璃珠而到达微柱的底部。

4.请勿使用表面破损的试剂卡或微柱内试剂液面低于玻璃珠介质或褪色的试剂卡。

5.不恰当的使用启封装置或将插有启封装置的试剂卡坠落会在加样时引起交叉污染。

6.不恰当的技术操作会导致错误结果，具体可能的原因如下：

●未使用本规程中推荐的红细胞浓度。

●实验过程中的辅助材料发生微生物污染。

●使用了含有某种特殊成份的标本（阻碍了红细胞自由穿过微柱中的介质）。

●采用了严重溶血的标本（可能影响结果判读）。

7.异常结果可能由以下原因造成：

●纤维蛋白或颗粒状物质，如血清和血浆中的凝块。

●样品红细胞洗涤部完全。

●反应物与抗人球试剂在柱中发生混合。

●红细胞粘附在反应腔的管壁上。

●气泡阻碍了未凝集红细胞的通过。