实验酪氨酸酶动力学
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管号 1 2 3 4 L－多巴浓度 （mM） A0 A1 ΔA（A1- A0） V（mM/min）
5
利用双倒数作图法，横坐标为1/S，纵坐标为1/v，分别求出 Vmax和Km。
管反应开始时A0和X秒钟后的A1。
管号 1 2 3 4 5 15mM L－多巴 (ml) 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 磷酸缓冲液 （ml） 2.77 2.67 2.57 2.47 2.37 酪氨酸酶（ml） 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03
每管反应体系仍为3ml。
记录数据于下表：
Km值测定: 双倒数作图法
【实验方法】
（一）酶反应初速度的测定：---酶反应时间的确定
在比色杯中，按下表依次加入试剂： L-多巴（mL） 磷酸缓冲液（mL） 酪氨酸酶（mL）
注：酪氨酸酶 5U/l
1 1.97 0.03
加入酶液后立即混匀，并每隔15秒读取475nm处的吸光值。
各时刻的吸光值记录在下表：
时刻（秒） A 时刻（秒） A
0
15 30 45 60 75 90
135
150 165 180 195 210 225
105
120
240
255
绘制产物浓度C-Time 反应曲线，观察酶反应初速wk.baidu.com，确定 酶反应时间。一般在30~120秒左右。
（二）米式常数的测定：
在比色杯中，采用已确定的酶反应时间X，分别记录各
【目的和要求】
1. 学会测定酶反应速度的基本方法。 2.掌握测定米氏常数Km值的原理和方法。
【实验原理】
酪氨酸酶催化的反应为：
475nm
一、酶活力测定— 酶反应初速度的测定:
常用单位时间内、产物的浓度增加量表示。
Product Concentration
A =εC d
: 3600 M-1cm-1 d: 1cm
确定酶反 应时间！
Time
v= dC /dt
二、 底物浓度[S]对酶反应速度：
Vmax [S] v K m [S]
零级反应
混合级反应
½ Vmax
一级反应
Km
Effect of substrate concentration on the initial velocity of an enzyme-catalyzed reaction.
5
利用双倒数作图法，横坐标为1/S，纵坐标为1/v，分别求出 Vmax和Km。
管反应开始时A0和X秒钟后的A1。
管号 1 2 3 4 5 15mM L－多巴 (ml) 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 磷酸缓冲液 （ml） 2.77 2.67 2.57 2.47 2.37 酪氨酸酶（ml） 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03
每管反应体系仍为3ml。
记录数据于下表：
Km值测定: 双倒数作图法
【实验方法】
（一）酶反应初速度的测定：---酶反应时间的确定
在比色杯中，按下表依次加入试剂： L-多巴（mL） 磷酸缓冲液（mL） 酪氨酸酶（mL）
注：酪氨酸酶 5U/l
1 1.97 0.03
加入酶液后立即混匀，并每隔15秒读取475nm处的吸光值。
各时刻的吸光值记录在下表：
时刻（秒） A 时刻（秒） A
0
15 30 45 60 75 90
135
150 165 180 195 210 225
105
120
240
255
绘制产物浓度C-Time 反应曲线，观察酶反应初速wk.baidu.com，确定 酶反应时间。一般在30~120秒左右。
（二）米式常数的测定：
在比色杯中，采用已确定的酶反应时间X，分别记录各
【目的和要求】
1. 学会测定酶反应速度的基本方法。 2.掌握测定米氏常数Km值的原理和方法。
【实验原理】
酪氨酸酶催化的反应为：
475nm
一、酶活力测定— 酶反应初速度的测定:
常用单位时间内、产物的浓度增加量表示。
Product Concentration
A =εC d
: 3600 M-1cm-1 d: 1cm
确定酶反 应时间！
Time
v= dC /dt
二、 底物浓度[S]对酶反应速度：
Vmax [S] v K m [S]
零级反应
混合级反应
½ Vmax
一级反应
Km
Effect of substrate concentration on the initial velocity of an enzyme-catalyzed reaction.