一片叶子的成长史1

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状态良好的不定芽作为不
定芽伸长的材料
试剂 Sucrose(g/L) MS(g/L) NAA（mg/L） BAP（mg/L） pH Agar（g/L） 5.8 6
0.5mg/L 0.5mg/L
5.8 6
Total(L)
1
1
6、不定根诱导（再分化）
切取已伸长至３～４ｃｍ、生长
状态良好的不定芽作为不定根诱
导的材料，直立插入不定根诱导 培养基中，于相同条件下培养３
Medium No.
试剂 Sucrose(g/L) MS(g/L) NAA（mg/L） BAP（mg/L） pH Agar（g/L）
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E、 加入琼脂放入微波炉溶解；
F、培养基的分装和高压灭菌，条件：101.3kPa，121℃时保持15-20分钟即可； G 、需要加入激素的培养基，在高压灭菌后冷却到合适温度再加入。 2、培养条件：温 度 ２５℃、每天光照时间１６ｈ。
3、样本的采集与处理
准备器材：剪刀、镊子、保鲜袋、手套
样本处理：
A、将苗木上的侧芽（约３～４ｃｍ）切下； 2、用１％次氯酸钠溶液浸泡、消毒１５分
（一）生长素类
生理作用：促进细胞伸长和细胞分裂，形成愈伤组织（2,4-D） ；促
进生根（IBA） ；促进植物性别分化；防止落花、落果、促进无
籽果实的形成；与细胞分裂素配合共同诱导不定芽的分化、侧芽
的萌发与生长，诱导胚状体的产生。
种类:IAA（吲哚乙酸）、NAA（萘乙酸）、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙 酸）、IBA（吲哚丁酸）。 药性: 2，4-D> NAA = IBA >IAA 溶解性：一般溶于95%酒精或0.1mol/LNaOH中。用量在0.01-5mg/L。
6、不定根诱导
7、再生植株的移栽和炼苗
二、植物组织培养的技术基础
1、基础培养基的配制 A、准备器材：烧杯、量筒、药匙、三角瓶（平底试管）、天平、pH计、锡 纸、镊子 试剂：蔗糖、琼脂、MS培养基、0.1M KOH、0.1M HCl、蒸馏水
B、计算培养基各成分用量并称量；
C、溶解MS培养基和蔗糖并定容。； D、pH的调整（5.8）；
2、分类 （一）依不同培养材料分为：
1、愈伤组织培养
愈伤组织：植物组织培养过程中，在人 工培养基上由外植体的表面细胞恢复分裂 能力而形成的一团无序的薄壁细胞。 2、悬浮细胞培养 4、原生质体培养 3、器官培养 5、分生组织培养
（二）依培养介质不同分为液体培养和固 体培养
3、原理-植物细胞全能性
植物细胞全能性：指任何具有完 整细胞核的植物细胞（不论是性 细胞还是体细胞）都具有全套的 遗传信息，在离体培养情况下， 这些信息仍能进行表达而产生一 个独立完整的植物个体。
（二）细胞分裂素类
生理作用：促进细胞分裂与扩大，可使茎增粗，而抑制茎伸长；
诱导芽的分化，促进侧芽萌发与生长。
种类：6BA（6-苄腺嘌呤）、KT（糠基腺嘌呤）、ZT （玉米
素）、2ip（异戊烯基腺嘌呤）、激动素（呋喃氨基嘌呤）
等。常用的是6－BA和KT。其与生长素配合使用控制器官的 分化。 溶解性:溶于0.5 或 1mol/L HCL或稀薄的NaOH中。用量为0.110mg/L。
Medium No. 试剂 Sucrose(g/L) MS(g/L) pH Agar（g/L） Total(L)
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钟；
B、无菌水５次洗净后，直立扦插于添加３ ％蔗糖的 ＭＳ基本培养基上培养；
C、每隔１ 个 月以同样的方法继 代 １次。
取连续继代６个月以上的无菌苗叶片为材 料。
4、愈伤组织和不定芽诱导（脱分化）
取无菌苗顶部的前４对叶，切 取叶基部５ｍｍ 长度的叶片作 为外植体 在培养箱中培养３０ｄ后，观 察愈伤组织和不定芽的生长状 态
分化的细胞在一定 条件下，可以转变 Medium 为胚性细胞，重新 No. 获得分裂能力。 Phfree
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◆ ◆
绿 叶 的 “ 凤 凰 涅 坛
植物组织培养
——以康乃馨“白雪公主”组培为例
一 、植物组织培养的基本概念
二、植物组织培养的具体实验操作流程
一 、植物组织培养的基本概念
1.植物组织培养的定义
2.植物组织培养的分类
3.植物组织培养的原理
4.营养成分
5.植物生长调节物质
1、定义 植物组织培养：离体的植物细胞、组织、器官以及 原生质体在适宜的光照、温度、湿度等环境条件下被 培养在含多种养分的无菌培养基中使其增殖、生长、 发育而形成完整的植株的过程。 外植体：指活植物体上切取下来以进行培养的那部 分组织或器官。
体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培
养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例 比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用
再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养
基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。
度以及较高的光强并进行自养， 分钟，移栽至盛有土壤基质的花盆中。
必须要有一个逐步锻炼和适应的 B、土壤基质的配比为珍珠岩∶营养土＝
１∶１。
过程。这个过程叫驯化或炼苗。
C、移栽后用透明 的塑料杯 罩 住幼苗以 保
持水分。在遮阴下培养７ｄ左右，待再生 幼苗完全成活去掉塑料杯，转移至光照条 件下培养。
悬浮培养
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பைடு நூலகம்
试剂 Sucrose(g/L) MS(g/L) NAA（mg/L） TDZ（mg/L） BAP（mg/L） pH Agar（g/L） 5.8 6 15 2.21
0.5mg/L 0.5mg/L 0.5mg/L
5.8 6
Total(L)
1
1
5、不定芽伸长（再分化）
将诱导培养３０ｄ、生长
脱分化以后的分生 细胞在一定条件下 重新分化为各种类 Medium No. 型的细胞。
MS培养基
• MS是人名Murashige and Skoog的缩写。 • MS培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织 生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、 贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS固
1．维生素类：硫氨素（VB1）、烟酸（VB3）、吡多醇（VB6）泛酸、叶酸等。
2．氨基酸： 甘氨酸(2-3mg/L), 丝氨酸、 水解酪蛋白（CH)、水解乳蛋白（LH)(3002000mg／L),促进胚状体或不定芽的分化。 3．添加物：大多含氨基酸、激素、酶等的复杂化合物。
(1)椰乳(CM):CM是椰子的液体胚乳，一般使用浓度在10％-20％；
薄壁细胞
• 薄壁细胞是多数植物体内数目最多的细胞，成熟后继续存活，只有很薄的初生壁，没有次
生壁，一般为直径近乎相等的多面体，但也可以分化为星芒、分枝以及臂状等。薄壁细胞
的功能很多，如贮存营养物质、进行光合作用和需氧呼吸等。 • • • • • • • 基本薄壁组织 同化薄壁组织 贮藏薄壁组织 贮水薄壁组织 通气薄壁组织 轴向薄壁组织 吸收薄壁组织
（三）赤霉素类—GA3 生理作用：诱导茎的细胞伸长生长；促进开花；打破 休眠；对生长素和分裂素的活性有增效作 用。 溶解性：溶于水中不稳定，不耐热，应采用过滤灭菌 法加入，或用95%酒精溶解再用水定容配成母 液。
二、植物组织培养的具体实验操作流
程 1、基础培养基的配制 2、培养条件 3、样本的采集与处理 4、愈伤组织和不定芽诱导 5、不定芽伸长
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５ｄ，观察不定根分化情况。
0.1mg/L 0.5mg/L
5.8 6
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Total(L)
1
1
7、再生植株的移栽和炼苗 A、将已生根的再生幼苗用镊子从培养基中
轻轻拔出，用毛笔在流水下将根部粘附的
试管苗为了适应移栽后的较低湿 培养基洗净后，放入生根粉溶液中浸泡五
4、营养成分
（一）大量元素（0.5mmol/L以上）
碳（C）、氮(N)、磷(P)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)和硫(S)等元素。
（二）微量元素（0.5mmol/L以下） 铁(Fe)、铜(Cu)、钼(Mo)、锌(Zn)、钠(Na)、锰(Mn)、钴(Co)、 硼(B)和碘(I)等。
（三）有机营养
(2)香蕉:用量为100-200g/L，主要应用于兰花的组织培养中，缓冲pH,促进发育；
(3)马铃薯:用量为150-200g/L，具壮苗的作用； (4)酵母提取液(YE):用量约0.5％；麦芽提取液（ME)，用量为0.0l％—0.5％； 苹果汁、蕃茄汁(TJ)、柑桔汁等。
5、植物生长调节物质——植物激素