高效液相色谱使用详细操作步骤

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waters超高效液相色谱仪操作步骤

第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。

2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。

3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。

第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。

2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。

第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。

具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。

2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。

3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。

4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。

5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。

第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。

2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。

3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。

第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。

2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。

3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。

通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。

第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。

这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。

高效液相色谱仪的操作步骤

高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。

它利用液体流动相和固定相之间的相互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。

本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。

1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。

检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配制是否准确。

2. 样品制备根据需要分析的物质，准备好待测样品。

样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。

3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。

等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。

4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。

包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。

5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。

通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。

6. 校正进行色谱柱的校正。

校正过程包括流量校正、波长校正等。

通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。

7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升至毫升的量级。

确保样品的注射量稳定和准确。

8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。

在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。

9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。

根据检测器的信号，可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。

10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。

通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的定量分析。

11. 关机分析结束后，关闭高效液相色谱仪的电源开关，并进行必要的清洗和维护工作。

确保仪器的正常运行，并延长其使用寿命。

总结：高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。

高效液相色谱法操作步骤

高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。

溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。

超声脱气30分钟以上。

2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。

有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。

4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。

5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。

6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。

7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。

分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。

8. 设计走样方法。

9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。

高效液相色谱仪操作说明书

高效液相色谱仪操作说明书一、引言高效液相色谱仪（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物医药、环境监测等领域的分析仪器。

本操作说明书旨在帮助用户正确有效地操作HPLC仪器，以获得准确可靠的分析结果。

二、仪器概述1. 主要组成：HPLC仪器主要包括进样系统、色谱柱、流动相装置、检测器及数据分析系统等组成部分。

2. 基本原理：HPLC利用流动相在高压下通过色谱柱，样品分离后再由检测器进行检测和信号记录，通过数据分析系统生成分离效果图谱或定量结果。

三、操作步骤1. 准备工作a) 确保仪器电源已接通，并检查各部分连接是否牢固。

b) 打开相关软件并进行系统初始化。

c) 根据待分析样品的特性，选择适宜的色谱柱和流动相。

2. 进样系统操作a) 将待测样品通过合适的方法制备成溶液。

b) 打开进样系统的相关开关，将样品通过进样针注入进样口。

c) 调整进样量和进样速度，确保样品完全被进样器吸取。

3. 色谱柱操作a) 将色谱柱连接到系统中，并确保连接处密封良好。

b) 根据样品性质选择合适的流动相和梯度条件，设置柱温以提高分离效果。

c) 在柱前和柱后设置适当的减压阀，调节流量和压力，确保色谱柱正常运行。

4. 流动相装置操作a) 根据检测要求准备合适的流动相溶液。

b) 将流动相溶液通过流动相装置输送至色谱柱，确保流速和流量稳定。

5. 检测器操作a) 打开检测器并进行相关参数设置，如波长选择、灵敏度调节等。

b) 将流经色谱柱的样品原液通过检测器进行检测，并记录信号。

6. 数据分析与结果生成a) 使用相应的数据分析软件，导入检测到的信号数据。

b) 根据需求进行峰面积积分、峰高浓度定量等相关数据分析。

c) 生成分析图谱或报告，并保存结果。

四、故障排除在操作过程中，可能会遇到一些故障情况，以下列举一些常见故障及其排除方法：1. 柱堵塞：检查柱前和柱后的减压阀是否打开和调整流量。

2. 波峰异常：检查流动相和检测器参数设置是否正确。

3. 信号丢失：检查进样系统是否正常工作，检查柱连接是否存在泄漏。

hplc高效液相色谱仪使用方法

hplc高效液相色谱仪使用方法HPLC高效液相色谱仪是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于药物、环境、食品、化妆品等领域。

下面将详细介绍HPLC高效液相色谱仪的使用方法。

一、仪器准备：1.检查仪器的状态，确认各个部件是否正常运行，如高压泵、进样器、检测器等。

2.开机预热：打开主机电源，按照仪器操作手册上的指示，进行仪器的预热操作。

一般要求预热时间为30分钟到1小时。

二、工作站设置：1.打开工作站软件，点击新建分析方法。

根据分析需求选择不同的方法类型，如梯度洗脱、等温洗脱等。

2.设置流动相组成：根据分析物的性质和目标，选择合适的流动相，并设置其浓度和比例。

可以通过试错法或者文献参考来确定最佳流动相组成。

3.设置进样器参数：选择合适的进样方式，如全自动进样、微量进样等。

设置进样量和进样速度，根据分析物的浓度、检测器灵敏度等因素进行调整。

4.设置检测器参数：选择合适的检测器类型和波长。

一般情况下，紫外检测器是最常用的检测器，波长选择通常在200-400nm之间。

5.设置柱温：根据分析物的性质和目标，选择合适的柱温。

柱温对分离性能和分析速度有着明显的影响。

三、样品处理：1.样品制备：根据分析目标和方法要求，对样品进行处理，包括固相萃取、溶解、过滤等。

2.进样器设置：将样品注入进样器，确保进样量与方法要求相符。

3.进样：点击工作站软件上的进样按钮，开始进行进样。

进样过程中要确保无气泡进入柱。

四、开展分析：1.开始分析：点击工作站软件上的开始按钮，运行分析方法。

监控色谱图，观察峰的形状和分离度。

根据需要可以对分析方法进行优化，如调整流速、洗脱程序等。

2.数据处理：完成分析后，保存并导出色谱图和数据。

进行数据处理和结果分析。

五、仪器维护：1.使用完毕后，关闭泵和检测器，将柱中流动相完全排空，以免柱内残留物引起污染。

2.保养柱：每次使用后，要清洗柱和重新平衡柱。

柱的清洗和保养要根据具体的柱类型和使用情况进行。

3.保持仪器干燥和清洁：定期清洁仪器，尤其是注射器、透射比色噪声汇丰牌等易受污染的部件，以保证仪器的正常运行。

高效液相色谱仪的操作流程和注意事项

高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言：高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。

掌握正确的操作流程和注意事项，对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。

下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。

一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作。

首先，检查仪器是否正常工作，例如电源是否正常接通，各个模块是否连接牢固等。

其次，确保色谱柱处于良好的工作状态，即没有泄漏和堵塞等问题。

最后，根据需要，选择合适的检测器，并校准相应的参数。

二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。

首先，根据样品的性质选择合适的溶剂体系，并将样品完全溶解。

其次，为了提高分析的准确性，通常需要对样品进行预处理，例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。

最后，将样品装入进样瓶中，根据仪器的要求设定进样量。

三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。

在选择流动相时，需要考虑样品的性质以及分析的目的。

常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。

在选择后，需要准备流动相，并进行除气处理以去除气泡。

此外，还要注意流动相的质量，例如pH值、浓度等。

四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。

根据分析的目的和样品的性质，需要设置合适的参数，例如流速、温度、梯度等。

在设置前，需要根据样品性质选择合适的色谱柱，并设定相应的温度以优化分离效果。

此外，还需要根据检测器的要求设定相应的参数。

五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时，需要进行数据采集和结果分析。

首先，确保数据采集系统正常工作，并根据仪器的要求进行设定。

其次，启动数据采集并进行监控，及时记录实验过程中的各项指标。

最后，对采集的数据进行处理和分析，例如峰面积的计算、峰形的分析等。

注意事项：1. 严格按照操作流程进行操作，避免任意更改设置。

高效液相色谱仪操作步骤

高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。

b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。

c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。

d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。

e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。

2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。

b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。

3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。

b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。

4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。

b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。

5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。

一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。

b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。

c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。

6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。

b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。

c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。

7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。

b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。

c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。

8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。

b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。

高效液相色谱仪使用说明

高效液相色谱仪使用说明1.准备工作-确保仪器处于良好的工作状态，包括液相泵、进样器、检测器等。

-检查液相系统的压力，确保其正常运转，防止发生泄漏。

-配制样品溶液，根据实验要求合理选择溶剂，并进行适当的预处理（如过滤、稀释等）。

2.仪器开机-打开HPLC主机电源，并等待其自检完成。

-检查HPLC控制软件是否正常运行，确保能够与仪器进行连接。

-点击仪器上的电源按钮，启动液相泵和检测器。

3.参数设置-在HPLC控制软件上设置分离柱类型、柱温、流速、梯度时间等参数，根据具体分析需求进行调整。

-设置进样器类型、进样量、进样方式等参数。

对于自动进样器，可以根据需求选择自动取样量和进样模式（如全自动、自动稀释等）。

4.样品进样-将样品注射器浸入样品溶液中，吸取适量的溶液。

-将注射器插入进样器，并按照设定的参数进行进样。

-如果使用自动进样器，将样品放置在样品托盘上，设置好进样量和进样模式，然后启动自动进样程序。

5.进行分离-点击HPLC控制软件上的“运行”按钮，启动色谱分离程序。

-观察检测器的信号和色谱图，确保分离效果良好。

-如有需要，可以对实时结果进行记录，以便后续的数据分析和处理。

6.清洗仪器-在实验结束后，关闭色谱柱，避免柱材料干燥堵塞。

-关闭液相泵和检测器，将废液排空。

-按照要求进行液相系统的清洗和保养，包括冲洗柱子、清洗进样器、检测器等。

7.数据处理-将HPLC分析得到的数据导出到计算机中。

-使用相关的数据处理软件进行数据处理和分析，如峰面积计算、定量分析、质谱图的解释等。

-如有需要，可以生成报告或结果图表，以备后续参考。

注意事项：-严格按照操作规程操作仪器，避免操作失误导致意外事故和数据异常。

-定期维护和保养仪器，确保其长期有效运行。

-注意安全使用有毒、易燃、易爆的溶剂和试剂，如有需要应采取相应的安全措施。

-遵守实验室规章制度，切勿滥用仪器，保证仪器的正常使用和他人使用的权益。

总结起来，高效液相色谱仪的使用说明主要包括准备工作、仪器开机、参数设置、样品进样、分离操作、仪器清洗和数据处理。

高效液相色谱十大步骤

高效液相色谱十大步骤
1.样品准备：将待测样品制备成合适的溶液，通常需要进行提取、纯化或稀释等处理。

2.色谱柱选择：根据待测化合物的特性选择合适的色谱柱，如
反相色谱柱、离子交换色谱柱等。

3.溶剂选择：根据待测化合物的亲水性或疏水性选择合适的溶剂，以保证化合物在柱上有足够的保留时间。

4.样品注入：使用自动进样器或手动注射器将样品注入色谱柱。

5.溶剂梯度：设定一定的梯度条件，根据溶剂极性的变化来分
离不同化合物。

6.检测器选择：根据待测化合物的特性选择合适的检测器，如
紫外检测器、荧光检测器等。

7.梯度程序设定：根据待测化合物的特性设定合适的梯度程序，如流速、溶剂比例等。

8.流速调控：根据实际需要调整色谱柱的流速，以控制分离的
时间和峰形。

9.峰识别和定量：根据峰的保留时间、峰面积或高度来识别和
定量待测化合物。

10.数据分析和报告：对得到的数据进行分析处理，生成色谱图和报告，对结果进行解释和总结。

高效液相色谱仪操作步骤

高效液相色谱仪操作步骤高效液相色谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3)．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4)．进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。

冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。

6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。

点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

7)．设计走样方法。

点击file，选取se-lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。

若需建立一个新的方法，点击new method。

选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。

选完后，点击protocol。

一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

8)．进样和进样后操作。

选定走样方法，点击start。

进样，所有的样品均需过滤。

方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。

全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。

10)．填写登记本，由负责人签字。

注意事项：11)．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。

脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

12)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

13)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。

14)．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。

高效液相色谱的使用流程

高效液相色谱的使用流程简介高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种用于分离、鉴定和定量化分析化学物质的常用技术。

本文将介绍高效液相色谱的使用流程。

使用流程1.准备工作–检查仪器：确保HPLC仪器处于正常工作状态，检查进样器、流动相泵、柱温箱和检测器等部件。

–准备试剂：根据需要，准备好所需的溶剂、标样溶液和样品溶液，并确保它们纯净、稳定且符合实验要求。

–校准仪器：进行必要的仪器校准，包括流速校准、进样器校准和检测器校准等。

2.设置分离条件–选择合适的柱：根据需要选择合适的固定相柱，例如反相柱、离子交换柱或手性柱等。

–设置流速：根据柱的要求和分离物的性质，设置合适的流速，一般为0.5-2.0 mL/min。

–选择合适的流动相：根据待分离物的性质，选择合适的流动相体系，包括溶剂和缓冲液等。

–设置柱温：根据实验要求和分离物的性质，设置适当的柱温，一般常温即可。

–设置检测器：选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器或质谱检测器，根据需要设置检测器的波长、激发波长等参数。

3.进样与分析–进样方式：根据需求和样品性质，选择适合的进样方式，包括自动进样器、手动进样器或固相萃取柱等。

–进样量：根据样品的浓度和分析要求，设置合适的进样量，一般范围为1-20 μL。

–开始分析：点击软件界面上的“开始”按钮，启动HPLC运行，此时仪器开始运行，进行样品分离和检测。

–数据记录：在分离过程中，系统会实时记录和显示数据，包括峰面积、保留时间和峰高等结果。

4.数据分析与解读–峰面积计算：根据检测器记录的峰面积数据，通过内置的计算公式，计算出目标化合物的峰面积。

–保留时间测定：根据检测器记录的保留时间数据，可以获得目标化合物的保留时间，用于鉴定和定量分析。

–峰高测定：根据峰高数据，可以了解化合物的峰高大小，用于比较不同样品或条件下的分离结果。

–结果解读：根据数据分析结果，判断样品中所含化合物种类和含量，并与已知标准进行对比验证。

岛津高效液相操作说明

岛津高效液相操作说明
岛津高效液相操作说明
一、操作前准备工作：
1.确保设备正常工作：检查岛津高效液相色谱仪是否通电，检查流路是否正常连接，检查色谱柱是否正确安装。

2.准备样品：根据实验需要，准备好待测样品，并按照实验要求进行预处理。

3.准备标准品：如果需要进行定量分析，需要准备好相应的标准品，并进行适当稀释。

二、操作步骤：
1.打开岛津高效液相色谱仪的软件，登录账号并选择相应的方法。

2.检查流路：通过软件控制液相泵进行流路平衡，确保流路中无气泡，并达到稳定状态。

3.样品进样：将待测样品注入进样器中，设置进样量和注射速度。

4.色谱柱选择和设置：根据分析需要选择合适的色谱柱，并进行相关参数的设置，如柱温、流速等。

5.启动色谱仪：在软件中启动按钮，开始进行色谱分析。

6.数据采集：监控色谱图，记录峰面积、保留时间等相关数据，并保存到电脑中。

7.数据分析：根据实验目的，进行数据处理和计算，并相应的报告。

附件：
本文档所涉及的附件包括：
- 岛津高效液相色谱仪操作手册
- 岛津高效液相色谱仪维护手册
法律名词及注释：
1.高效液相色谱仪：一种分析仪器，用于分离和分析液体样品中的各种成分。

2.进样器：色谱仪中用于将样品注入流路的装置。

3.色谱柱：色谱仪中用于分离样品成分的装置，通常为长而细的柱子，内部填充有一定的分离介质。

4.保留时间：样品在色谱柱中停留的时间，用于标识不同物质的特征。

高效液相操作规程

高效液相操作规程一、目的本操作规程旨在规范高效液相色谱（HPLC）的使用流程，确保实验的准确性和重复性，同时保障操作人员的安全。

二、适用范围本规程适用于所有使用高效液相色谱仪进行分析的实验室人员。

三、操作步骤1. 准备工作a. 确保所有使用的试剂纯度符合要求，且无污染。

b. 检查并清洁色谱柱，保证无残留物影响分析结果。

c. 根据实验要求准备流动相，并调整至适当比例。

2. 仪器开机a. 打开电源，预热仪器至工作温度。

b. 检查并确保所有管道连接正确无漏液现象。

c. 启动色谱软件，进行系统自检。

3. 样品准备a. 根据实验要求，准确称量并溶解样品。

b. 通过适当方式（如过滤或离心）去除样品中的不溶物。

4. 样品注射a. 使用适当的注射器抽取样品。

b. 打开注射口，准确注射样品，然后封闭注射口。

5. 分析运行a. 根据实验方法设置流动相流速、柱温等参数。

b. 启动分析程序，实时监控色谱图谱。

c. 记录并保存分析数据。

6. 结束操作a. 关闭分析程序，停止流动相输送。

b. 清洗系统，包括色谱柱和注射器。

c. 关闭仪器电源，清理工作台面。

四、注意事项1. 在操作过程中应穿戴适当的实验室防护装备。

2. 避免直接接触有毒或腐蚀性的试剂和样品。

3. 定期对仪器进行维护和校准，确保分析结果的准确性。

4. 遇到任何异常情况，应立即停止操作并报告给实验室负责人。

五、安全措施1. 熟悉并遵守实验室安全规程。

2. 操作过程中应使用防护眼镜、实验服和手套。

3. 对于易挥发或有毒溶剂，应在通风良好的环境下操作。

4. 紧急情况下，立即启动紧急冲淋设备，并寻求医疗救助。

六、记录与报告1. 记录所有操作参数和样品分析结果。

2. 对于任何偏离标准操作的情况，应详细记录并报告。

3. 定期对操作记录进行审核，以优化操作流程和提高分析质量。

高效液相色谱仪操作流程

高效液相色谱仪操作流程高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于分离、检测和定量分析化合物的分析仪器。

本文将介绍HPLC的操作流程。

1. 仪器准备在进行HPLC分析前，首先需要对仪器进行准备。

确保仪器处于正常工作状态，检查各个部件的连接是否紧固，必要时更换液相色谱柱。

接下来，检查并设置流动相（溶剂）系统、进样系统和检测器等参数，并验证仪器的漏水性能。

2. 样品准备样品的准备对HPLC分析结果的准确性和可靠性至关重要。

首先，将待分析的样品溶解在适宜的溶剂中，并在必要时进行稀释。

确保样品中无杂质和悬浮物，并使用过滤器过滤掉可能的固体颗粒。

3. 进样进样是将样品引入HPLC系统的过程。

通常使用自动进样器或手动进样器。

使用自动进样器时，将样品放置到样品盒中，设置合适的进样量和进样速度。

使用手动进样器时，使用微量注射器将样品吸取并快速注射到进样口。

4. 色谱柱选择根据待分析的化合物性质和分析要求，选择合适的液相色谱柱。

色谱柱的选择包括柱材、柱内直径和柱长度等参数。

确保色谱柱的品质良好并处于适当的工作状态。

5. 流动相系统流动相系统用于将样品带入色谱柱并实现化合物的分离。

设置合适的流动相组成和流量，确保流动相的质量和稳定性。

调整流率以达到较好的分离效果，并避免柱干燥和色谱峰形变。

6. 检测器选择与设置根据分析需要选择合适的检测器。

常见的检测器包括紫外可见检测器、荧光检测器和电化学检测器等。

根据需要进行检测器的波长设置和信号增益调整，并确保检测器的灵敏度和稳定性。

7. 数据处理与结果解读HPLC分析生成的数据需要进行处理和解读。

通常使用色谱数据处理软件进行峰面积计算、色谱峰图绘制和质量分析等操作。

根据实验目的和分析要求，对分析结果进行解读和统计分析，并生成相关报告和图表。

总结：使用HPLC进行分析需要按照一定的操作流程进行操作，包括仪器准备、样品准备、进样、色谱柱选择、流动相系统设置、检测器选择与设置以及数据处理与结果解读等步骤。

简述下高效液相色谱仪的操作全流程

高效液相色谱仪的操作全流程一、实验准备阶段1. 配置流动相：高效液相色谱仪的操作首先需要配置好所需的流动相。

流动相是液相色谱中推动样品组分在色谱柱上移动并分离的溶剂或溶剂混合物。

配置流动相时，应注意所使用的溶剂不能对实验或设备造成影响或损害，如堵塞或腐蚀。

同时，流动相必须经过滤和脱气处理，以避免气泡对实验结果的影响。

在更换流动相时，还需要保证两种溶剂的互溶性，如不互溶，则需要使用一种中间溶剂进行过渡。

2. 冲洗和平衡色谱柱及仪器：在配置好流动相后，需要对仪器及色谱柱进行冲洗和平衡。

这是为了确保仪器压力正常，基线稳定，以及色谱柱的填料处于最佳状态。

冲洗和平衡的过程中，应使用与实验流动相相同的溶剂，并设定适当的流速和压力。

3. 样品处理：在进样前，样品需要经过必要的净化处理。

这包括通过0.45um以下的微孔滤膜过滤，确保样品是澄清溶液。

过滤后的样品应装入合适的液相色谱样品瓶中待用。

二、样品运行阶段1. 设置方法参数：根据实验需要，在仪器的控制软件中设置或调用相应的参数。

这些参数包括流速、流动相组成、进样量、柱温、检测波长等。

这些参数的设定将直接影响色谱分离的效果和实验结果的准确性。

2. 编辑进样序列表：根据样品信息，编辑进样序列表。

进样序列表应包含每个样品的名称、进样量、进样次数等信息。

编辑完成后，保存并运行序列方法以分析样品并得到数据。

三、数据分析阶段色谱得到的原始数据为色谱图，色谱图上的每个峰代表一个组分。

需要对色谱峰进行积分处理，获得峰面积。

峰面积的大小与组分的浓度成正比，因此可以用来定量计算组分的浓度。

根据实验需要，可以使用不同的方法进行定量计算，如外标法、内标法、面积百分比法等。

此外，仪器还可以得到光谱或质谱信息，通过这些信息可以获得定性信息，如组分的结构、分子式等。

四、实验结束阶段1. 冲洗色谱柱：在实验结束后，应使用高有机相/水相冲洗柱子以清除残留的样品和杂质。

冲洗时，应注意纯相的比例不要超过95%，以避免对色谱柱造成损害。

高效液相色谱（HPLC）操作规程

高效液相色谱（HPLC）操作规程一操作1.准备工作⑴流动相的准备应根据实验选择合适的流动相，所有流动相原则上应选择HPLC级别，水应选择超纯水，并应保持新鲜。

所有流动相在进行实验前应经过相应的脱气处理，脱气时间应根据流动相的量相应增加，但一般超声脱气不应少于20min。

在实验过程中应保证足够的流动相，流动相的量与流速、洗脱时间等有关，应根据具体情况进行准备。

⑵样品的准备对于待测的样品，在进样之前应经过滤膜过滤，根据样品的不同选择不同种类、不同直径的滤膜。

2. 排气打开purge阀，键入stop→prime，直到无气泡停止stop。

B泵同样操作。

关闭purge阀。

3. 开机打开电脑主机和显示器，点击Galaxie，进入工作站。

选择系统，点击Agilent HPLC.点击overview，可观察仪器各部分状态。

打开泵及检测器的电源。

二分析方法建立1.进入工作站系统界面。

点击数据，文件→新建→方法，出现视窗，点击前进即可。

键入方法名和相应描述→点击ok后出现方法文档。

2.210的设定点击控制→210图标→Elution。

选择流动相A和B的种类。

Compressibility、Pressure Constant以及Refill Time属于内置参数无需设定。

设置A、B流动相的比例，通过改变B的比例设定。

如需梯度洗脱，则根据方法对Equilibrium Time 和Hold Time进行设定。

点击Misscellaneous。

Start Mode选择Inject Trigger on Pump A。

End of Sequence 选择Leave Pump on。

210设定结束。

3.325的设定点击325图标，选择Signal。

其中Detector Bunch Rate建议设置成2（10Hz），Noise Monitor Length建议设定成64，Response Time建议设定0.5。

根据方法设定相应波长。

高效液相色谱仪操作流程

高效液相色谱仪操作流程高效液相色谱仪操作流程1、准备工作：（1）校准：在使用高效液相色谱仪之前，应先进行校准，以保证测定结果的准确性。

校准时要使用一系列标准物质，以便检验仪器的性能和精密度。

常用的校准模式有线性校准、多项式校准和外部校准等。

（2）柱温控制：所有的分析柱都有一定的温度要求，高效液相色谱仪的温度控制精度要求比较高，因此需要进行柱温控制。

（3）泵调试：泵是气液色谱系统中最重要的部件，也是最容易发生故障的部件。

使用前，应检查泵的抽真空度、流量稳定性等性能，以保证测定的精度和准确性。

（4）色谱柱稳定性检查：色谱柱的稳定性是检测的重要因素，影响到测定结果的准确性和精度。

在使用之前，应检查柱内各部分的稳定性，以确保其能够按照设定的条件正常工作。

2、色谱柱装载：（1）清洗色谱柱：色谱柱在使用前必须进行清洗，以去除柱内可能存在的有机物，并保证柱内液体的稳定性。

（2）安装色谱柱：色谱柱的安装是非常重要的，因为不正确的安装会影响测定结果的准确性。

色谱柱的安装应紧固，确保柱的稳定性，避免柱管损坏。

（3）组装液体系统：液体系统的组装包括柱头部、柱底部、负压调节器等，组装时应确保所有部件的密封性，以免出现压力泄漏等情况。

3、液相色谱仪系统调试：（1）开机：首先将高效液相色谱仪通电，根据用户手册按步骤启动计算机系统，以及液相色谱仪的电子控制系统。

（2）程序设定：根据实际检测要求，设定相应的程序参数，包括柱温、梯度曲线、进样量、采集时间等。

（3）样品进样：根据实际检测要求，将样品按要求的体积加入样品管中，然后将样品管放入色谱柱内，以开始检测。

4、色谱检测：（1）检测：将样品按照设定的梯度曲线进行移动，并根据程序参数进行数据采集和处理。

（2）分析数据：根据所采集的数据，可以分析出样品中各种成分的含量、比例等信息，从而得出测定结果。

（3）打印报告：将测定结果打印出来，以便查看和记录。

5、清洁：（1）清洁柱头部：在使用完毕后，应及时清洗柱头部，以免柱头部的污染影响下一次测定的准确性。

高效液相色谱使用方法

高效液相色谱使用方法一、流动相准备将流动相按比例混合，注意混合的流动相必须相互溶解，最好能将流动相混合在一起，若相互溶解性不好，可分成两种。

流动相配好后，将管路放入，注意不要将瓶口密封。

二、开机首先将真空泵打开，待泵的指示灯由黄变绿打；打开600泵开关，按Direct键，进入操作菜单。

三、抽气抽取管路A液体：先将注射器旋转插入，将旋钮由Run转至 Draw,抽液，完成后将旋钮由Draw至Run，再将注射器旋转取下，反复1-2次，抽至管路内无气泡。

抽取管路B液体：在泵操作菜单上将B设为100%，给0.2ml/min的流速，听到泵转换的声音后，将流速设为0，以抽取管路A的步骤进行抽气。

四、调节流动相比例与流速在泵操作菜单上设定流动相比例，并以0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml/min的速度逐步升高流速，每次间隔3-5分钟。

五、2410示差检测器的使用1、打开2410示差检测器开关2、调整检测器内、外温度3、实验前一天晚上，使用“purge”状态平衡过夜，若第二天还要做实验，结束工作后不关机，节省第二天的平衡时间，保持0.2ml/min的流速。

六、2487紫外检测器的使用1、打开2487示差检测器开关，机器自动进入自检过程，约需7分钟。

2、设置检测波长3、预热30分钟左右，即可注样测定。

试验四、番茄内源激素高效液相色谱法测定一、样品准备取新鲜番茄根、茎、叶5克左右，液氮冷冻，放入冰箱储存。

配80％甲醇，冰箱冷冻。

二、提取样品放入预冷研钵，加l0ml 80％的冰冻甲醇研磨至匀浆，转入小烧杯中，再用甲醇清洗研钵2次，每次l0ml，转入小烧杯中。

小烧杯放入冰箱(0～4℃)冷藏14小时以上。

三、过滤取出用漏斗滤纸过滤，并用10m180％甲醇清洗残渣，合并滤液；如果提取液中沉淀物或色素多，则用10000g离心l0~12min，上清液转入冻干瓶中。

四、浓缩将冻干瓶中的液体用减压蒸干机蒸干(至瓶中液体结冰)，然后用2m1 80％的甲醇冲洗，如果有浑浊物，再次用离心机12000g离心l0min，倒入带有刻度的试管中，为保证试管中的液体有5ml左右，将不足5ml的试管中再加入一些甲醇。